菌種的選育和保存

菌種的選育和保存演示文稿現(xiàn)在是1頁\一共有68頁\編輯于星期日（優(yōu)選）菌種的選育和保存現(xiàn)在是2頁\一共有68頁\編輯于星期日制種：選取改良合適的菌種發(fā)酵：繁殖得到大量的菌體提?。簭木w中提取抗生素現(xiàn)在是3頁\一共有68頁\編輯于星期日

菌種選育理論與技術利用工業(yè)微生物發(fā)酵生產(chǎn)的過程中，決定生產(chǎn)水平高低最主要的有三個方面的因素：生產(chǎn)菌種，發(fā)酵工藝和后提取工藝。其中最重要的是生產(chǎn)菌種。菌種選育的最初目的是改良菌種的特性，使其符合工業(yè)生產(chǎn)的要求?，F(xiàn)在是4頁\一共有68頁\編輯于星期日產(chǎn)生抗生素的優(yōu)良菌種應具備條件1.產(chǎn)量高；2.生長快；3.性能穩(wěn)定；4.容易培養(yǎng)?，F(xiàn)在是5頁\一共有68頁\編輯于星期日菌種選育：根據(jù)菌種自然變異而進行的自然選育，以及用人工方法引起菌種變異或形成新的雜種，再按照工業(yè)生產(chǎn)的要求用隨機方法或理性化方法進行篩選，獲得目的變種。第一節(jié)菌種選育現(xiàn)在是6頁\一共有68頁\編輯于星期日菌種選育的目的現(xiàn)在是7頁\一共有68頁\編輯于星期日遺傳—DNA的半保留復制，保持物種的相對穩(wěn)定性變異—DNA4種核苷酸堿基的化學結構、順序或數(shù)目發(fā)生變化，導致生物體表型的改變，通常稱為基因突變，這種表型改變可穩(wěn)定地一代一代傳遞下去。促使新性狀的產(chǎn)生、獲得新的優(yōu)良品種一、微生物的遺傳和變異

現(xiàn)在是8頁\一共有68頁\編輯于星期日遺傳型變異：在遺傳物質(zhì)水平上發(fā)生了改變，從而引起某些相應性狀發(fā)生改變的特性

變異性表型變異：微生物在生活條件發(fā)生改變時，發(fā)生暫時的形態(tài)、生理等特性的改變，但隨著環(huán)境條件的復原，它們又恢復了原有的特性遺傳變異：1、突變

2、重組突變：1、自發(fā)突變（10-7）

2、誘發(fā)突變（10-4），為育種主要手段。現(xiàn)在是9頁\一共有68頁\編輯于星期日（一）基因突變基因突變是指遺傳物質(zhì)（DNA）中的核苷酸發(fā)生了穩(wěn)定的可遺傳的變化，主要包括點突變和染色體畸變兩大類。

1、點突變是由于DNA鏈上的一對或少數(shù)幾對堿基發(fā)生改變引起的。

2、染色體畸變是指DNA大段變化（損傷）的現(xiàn)象，主要包括染色體結構上的變化和染色體數(shù)目的變化。（二）基因重組

指兩個或多個不同性狀個體的遺傳基因轉移到一個體細胞內(nèi)，經(jīng)重新組合后，造成菌種變異，形成新的遺傳型個體。

現(xiàn)在是10頁\一共有68頁\編輯于星期日二、菌種選育的意義1、提高單位產(chǎn)量和改進產(chǎn)品質(zhì)量青霉素發(fā)酵：2g/ml→250g/ml→1000g/ml→70000g/ml1928年1943年1945年現(xiàn)在產(chǎn)黃色色素的原始菌種產(chǎn)黃青霉WisQ-176，產(chǎn)生黃色色素，提煉過程中難以去除，影響產(chǎn)品質(zhì)量，在菌種選育過程中獲得無色素突變型菌株，解決了產(chǎn)品質(zhì)量問題?，F(xiàn)在是11頁\一共有68頁\編輯于星期日2、改變菌種的某些遺傳性狀，使之更適合于工業(yè)生產(chǎn)如選育抗噬菌體的菌株、能利用廉價的發(fā)酵原料或需氧量較小的菌株、改變菌種代謝產(chǎn)物的組成配比等。現(xiàn)在是12頁\一共有68頁\編輯于星期日二、菌種選育的經(jīng)典方法

1、自然選育是一種純種選育的方法。它利用微生物在一定條件下產(chǎn)生自發(fā)突變的原理，通過分離，篩選排除衰變型菌落，從中選擇維持原有生產(chǎn)水平的菌株。自發(fā)突變機制：自發(fā)突變產(chǎn)生原因：1、多因素低劑量長期綜合誘變的結果；2、自然界存在低濃度的誘變物質(zhì)；3、微生物自身產(chǎn)生的誘變物質(zhì)（咖啡堿、過氧化氫等）4、堿基互變異構效應?，F(xiàn)在是13頁\一共有68頁\編輯于星期日二、菌種選育的經(jīng)典方法:自然選育特點：（1）能純化、復壯菌種，穩(wěn)定生產(chǎn)，提高平均生產(chǎn)水平。（2）難以選育高產(chǎn)突變菌株，不能使生產(chǎn)水平大幅度提高?，F(xiàn)在是14頁\一共有68頁\編輯于星期日2、誘變育種誘變育種是指人工有意識地將生物體暴露于物理的、化學的或生物的一種或多種誘變因子中，促使生物體發(fā)生突變，進而從突變體中篩選具有優(yōu)良性狀的突變株的過程。特點：與自然選育比較，由于引進了誘變劑處理，因而加速了菌種突變的頻率，擴大了變異的幅度，從而提高了獲得優(yōu)良特性的突變株的幾率。現(xiàn)在是15頁\一共有68頁\編輯于星期日

物理誘變劑：紫外線、x射線、Y射線、快中子、β射線、超聲波、激光誘變劑化學誘變劑：氮芥、乙烯亞胺、硫酸二乙酯、甲基磺酸乙酯、亞硝基胍、亞硝基甲基脲、亞硝酸生物誘變劑：噬菌體、轉座因子現(xiàn)在是16頁\一共有68頁\編輯于星期日形成胸腺嘧啶二聚體，影響DNA復制物理誘變劑CTAGGATCCTAGGATC紫外線現(xiàn)在是17頁\一共有68頁\編輯于星期日是一些能和DNA起作用，改變其結構，從而引起遺傳變異的化學物質(zhì)。如烷化劑、亞硝基類化合物，堿基類似物（5-溴尿嘧啶），吖啶類化合物。烷化鳥嘌呤與胸腺嘧啶錯誤配對化學誘變劑現(xiàn)在是18頁\一共有68頁\編輯于星期日1).烷化劑一類重要的誘變劑，可引起堿基的錯誤配對而引起的多種類型突變，如轉換、顛換、缺失和移碼誘變，以及染色體畸變。使用最為廣泛的是亞硝基胍（NTG）和乙基磺酸乙酯（EMS），主要因為它們殺死率相對較低，而獲得的突變頻率較高。2).嵌合劑常用有啞啶類染料、溴乙錠、ICR等化合物。能引起移碼突變?，F(xiàn)在是19頁\一共有68頁\編輯于星期日3).堿基類似物分子結構與DNA上的堿基相似的化合物稱為堿基類似物。如5-溴尿嘧啶（5-BU）、6-氨基嘌呤等。這些化合物干擾了DNA分子內(nèi)酮式與烯醇式的平衡。它們摻入DNA分子，使其出現(xiàn)烯醇的比例增加。分別形成AT向GC和GC向AT的轉換。4).亞硝酸主要是通過氧化脫氨基作用脫去DNA堿基上的氨基，如C氧化脫氨基成為U，A脫氨成為次黃嘌呤等?，F(xiàn)在是20頁\一共有68頁\編輯于星期日現(xiàn)在是21頁\一共有68頁\編輯于星期日5).抗生素絲裂霉素C、放線菌素D等抗癌抗生素作用于DNA合成，從而干擾細胞正常分裂。3、生物誘變劑噬菌體：溶源性噬菌體是一種遺傳信息的傳遞者，因而人們把噬菌體看作是一種誘變劑。在選育抗噬菌體菌種時，噬菌體顯示出明顯的誘變效應。轉座因子：轉座因子是一類能夠轉移位置的遺傳因子?，F(xiàn)在是22頁\一共有68頁\編輯于星期日誘變劑的選擇及影響誘變效果的因素（一）、誘變劑的選擇誘變劑作用：1、提高突變頻率；2、擴大變異產(chǎn)生的幅度。合適劑量：凡是既能增加變異幅度，又能促使變異向正突變范圍移動的劑量就是合適的劑量。一般認為高劑量（致死率在90%以上）引起的變異范圍大，變株比較多，適用于單位產(chǎn)量較低的菌株，而長期用于工業(yè)生產(chǎn)經(jīng)過多次誘變選育的菌株，則宜用中等劑量（致死率為70%~80%），甚至更低。并且一般認為低劑量可以提高正變率?，F(xiàn)在是23頁\一共有68頁\編輯于星期日（二）影響誘變效果的因素1、選擇合適的出發(fā)菌株即用來育種的原始菌株，多采用生產(chǎn)能力高，具有良好性狀的菌株作為親本。用作誘變的出發(fā)菌株必須產(chǎn)量高，生長速度快，營養(yǎng)要求低，產(chǎn)生孢子多，對誘變劑的敏感性大，變異幅度大。現(xiàn)在是24頁\一共有68頁\編輯于星期日2、采用分散狀態(tài)的孢子懸浮液處理誘變劑所處理的微生物一般要求呈懸浮狀態(tài)，并使細胞盡量處于分散狀態(tài)。有利于細胞均勻接觸誘變劑，也可以部分避免出現(xiàn)不純菌落。3、采用單核細胞處理誘變劑所處理的細胞中的細胞核愈少愈好，最好是處理單核細胞（用玻璃珠打散）。如處理霉菌或放線菌，則盡量采用孢子進行處理。如是芽孢桿菌，則處理芽孢。4、注意微生物的生理狀態(tài)一般對數(shù)期的細菌對誘變最為敏感。讓霉菌或放線菌的分生孢子稍稍萌發(fā)，可以提高誘變效果?，F(xiàn)在是25頁\一共有68頁\編輯于星期日5、適宜的誘變方法兩種或多種誘變劑先后使用；同一誘變劑重復使用；兩種或多種誘變劑同時使用。誘變劑的復合處理常常呈現(xiàn)一定的協(xié)同效應。同時,抗生素產(chǎn)量是數(shù)量性狀,是微效多基因作用的結果,即抗生素的增產(chǎn)是一種累積效應。因此,這種復合誘變應多次循環(huán)進行,誘變效果會更理想。現(xiàn)在是26頁\一共有68頁\編輯于星期日四、突變株的篩選1、隨機篩選指菌種經(jīng)過誘變處理后，僅憑經(jīng)驗隨機篩選菌落。（1）肉眼觀察法排除低產(chǎn)菌落：經(jīng)驗性（2）瓊脂塊法排除低產(chǎn)菌落：春日霉素的篩選，提高效率，穩(wěn)定性差（3）直接搖瓶篩選法：準確性高，但工作量大，效率低現(xiàn)在是27頁\一共有68頁\編輯于星期日肉眼觀察法排除低產(chǎn)菌落：比如，在四環(huán)素突變株篩選過程中人們發(fā)現(xiàn)，突變株的菌落形態(tài)與四環(huán)素發(fā)酵效價之間存在有一定的對應關系。即菌落呈圓形或梅花形、表面粗糙、孢子鼠灰色或深灰色、孢子量大、豐滿且菌落較小的突變株,往往是發(fā)酵效價得以提高的表現(xiàn)。

現(xiàn)在是28頁\一共有68頁\編輯于星期日又如在康樂霉素C產(chǎn)生菌在紫外線處理過程中發(fā)現(xiàn)了自然分離過程中沒有的形態(tài)變異,對各種菌落形態(tài)與產(chǎn)量的正變關系進行了統(tǒng)計(以抑菌圈比出發(fā)實驗菌株的抑菌圈大10%以上的菌株為正變菌株)。菌落形態(tài)有草帽型、饅頭型、中間開花型及小菌落。草帽型是最常見的,而中間開花的與之形態(tài)相近,只不過草帽型中間是一個尖,而開花型中間裂開花。小菌落是紫外處理出現(xiàn)的少量菌落,而自然分離中未發(fā)現(xiàn)。草帽型有穩(wěn)定的高正變率。現(xiàn)在是29頁\一共有68頁\編輯于星期日2、半理性化篩選隨著人們對抗生素生物合成途徑及代謝調(diào)控機制的了解不斷深入，產(chǎn)生了推理選育技術。指運用遺傳學、生物化學的原理，根據(jù)產(chǎn)物已知的或可能的生物合成途徑、代謝調(diào)控機制和產(chǎn)物分子結構來進行設計和采用一些篩選方法，以打破微生物原有的代謝調(diào)控機制，獲得能大量形成產(chǎn)物的高產(chǎn)突變株的篩選方法。現(xiàn)在是30頁\一共有68頁\編輯于星期日如氯霉素的生物合成過程中，芳基胺合成酶為關鍵酶，當氯霉素濃度到達100u/ml時，可完全抑制該酶的合成。因此，可以考慮選育解除終端產(chǎn)物反饋調(diào)節(jié)的突變株。類似還有：新生霉素影響產(chǎn)生菌的琥珀酸脫氫酶活力、制霉菌素影響醛縮酶活力，瑞斯托霉素影響磷酸甘油醛脫氫酶活力等?，F(xiàn)在是31頁\一共有68頁\編輯于星期日在青霉素發(fā)酵過程中加入苯乙酸或苯氧乙酸作為前體，分別能合成青霉素G和V。但培養(yǎng)基中過量的前體有較強毒性，且可抑制終產(chǎn)物生物合成。選育對毒性前體的抗性突變株，可消除反饋抑制作用。又如氯化物是灰黃霉素發(fā)酵前體，選用耐氯化物的變株，提高灰黃霉素產(chǎn)量?，F(xiàn)在是32頁\一共有68頁\編輯于星期日三、現(xiàn)代菌種選育技術1、雜交育種：

指兩個基因型不同的菌株通過接合使遺傳物質(zhì)重新組合，再從中分離，篩選出具有新性狀的菌株。優(yōu)點：能集中位于不同品種中的優(yōu)良性狀。缺點：只能利用已有的基因組，并不能產(chǎn)生新的基因。雜交進程緩慢，過程繁瑣?，F(xiàn)在是33頁\一共有68頁\編輯于星期日2、原生質(zhì)體融合

用脫壁酶處理將微生物細胞壁除去，制成原生質(zhì)體，再用融合劑（如聚乙二醇）促進原生質(zhì)體發(fā)生融合，從而獲得融合子，這一技術叫原生質(zhì)體融合。

細胞（A+B—）

細胞（A—B+）

脫壁處理

脫壁處理

原生質(zhì)體（A+B—）

原生質(zhì)體（A—B+）

混合

加融合劑

原生質(zhì)體融合

涂平板（原生質(zhì)體再生）

形成菌落

檢出重組子菌落（A+B+）

現(xiàn)在是34頁\一共有68頁\編輯于星期日3、基因工程（基因拼接技術或DNA重組技術）是指按照人的意志，將某一生物體(供體)的遺傳信息在體外經(jīng)人工與載體相接(重組)，構成重組DNA分子，然后轉入另一生物體(受體)細胞中，使被引進的外源DNA片段在后者內(nèi)部得以表達和遺傳。現(xiàn)在是35頁\一共有68頁\編輯于星期日自20世紀，80年代以來，對鏈霉素抗生素產(chǎn)生菌分子遺傳學的研究取得較大進展。對多種抗生素的生物合成基因進行了不同程度的研究。比如：1、增加限速酶基因拷貝數(shù)，提高菌種生產(chǎn)能力限速步驟：在抗生素合成過程中，某些步驟對整個生物合成是至關重要的。限速酶：控制限速步驟的酶叫限速酶，通過增加限速酶基因的劑量，可能會緩解限速酶引起的“瓶頸”效應。如構建基因工程菌，將編碼限速酶的基因克隆至載體，轉化生產(chǎn)菌株，可篩得高產(chǎn)菌株?，F(xiàn)在是36頁\一共有68頁\編輯于星期日2、引入抗性基因和調(diào)節(jié)基因，增加抗生素單位產(chǎn)量許多抗生素生物合成基因經(jīng)常與菌種對自身抗生素耐藥基因連鎖存在，因此可利用高拷貝質(zhì)粒的基因劑量，提高菌種對自身抗生素的抗性，可提高抗生素產(chǎn)量。另外，調(diào)節(jié)基因在抗生素的生物合成中也起很重要的作用，增加正調(diào)節(jié)基因的拷貝數(shù)也能大幅度地提高次級代謝物的合成能力。現(xiàn)在是37頁\一共有68頁\編輯于星期日3、引入血紅蛋白基因，改善微生物的工業(yè)狀況70年代末在專性好氧菌透明顫菌(Vit-reoscilla)中發(fā)現(xiàn)了血紅蛋白(VHb),這是迄今在原核生物中發(fā)現(xiàn)的唯一一種血紅蛋白。對VHb的功能研究表明,它作為一個氧氣攜帶者,能促進氧氣擴散到細胞末端氧化酶上,使細胞在貧氧狀態(tài)下也能很好地生長。現(xiàn)在是38頁\一共有68頁\編輯于星期日可將Vgb通過質(zhì)粒轉入變青鏈霉菌和天藍色鏈霉菌中,在限氧條件下不僅使菌體生長量增加,還使其放線紫紅素產(chǎn)量提高。也可將Vgb引入產(chǎn)黃頂頭孢霉菌及產(chǎn)黃青霉菌中,限氧時VHb在前者的表達量較高,而且頭孢菌素C的產(chǎn)量比對照菌株提高5倍。但這些實驗僅在“限氧”這個特定條件下進行，而在工業(yè)發(fā)酵上，它的表達量很低，沒有顯示出產(chǎn)量增加優(yōu)勢，還有待進一步深入研究?，F(xiàn)在是39頁\一共有68頁\編輯于星期日菌種的退化

退化：連續(xù)傳代基因突變

環(huán)境不良污染雜菌生產(chǎn)能力下降抵抗不良環(huán)境條件能力減弱現(xiàn)在是40頁\一共有68頁\編輯于星期日第二節(jié)菌種保藏

定義：將有用的微生物以特定培養(yǎng)形態(tài)在特定的環(huán)境條件下存放，以保持菌種的存活、純粹和遺傳性狀的穩(wěn)定。條件及原理：

1.

低營養(yǎng)

2.

干燥

3.隔氧

4.低溫降低代謝速率或使細胞處于休眠狀態(tài)現(xiàn)在是41頁\一共有68頁\編輯于星期日一、定期移植保藏法

（斜面低溫保藏法）1．原理制造低溫環(huán)境，降低菌種的新陳代謝活動能力。2、方法將菌種接種于所要求的培養(yǎng)基上、置最適溫度下培養(yǎng)，待得到健壯的菌體后，放在4℃左右，濕度小于70％的條件下保藏．每間隔一定時間重新移植培養(yǎng)1次。現(xiàn)在是42頁\一共有68頁\編輯于星期日3、特點（1）此法廣泛適用于各大類微生物菌種的短期保藏，一般可保存1～6個月左右。（2）優(yōu)點：簡便易行，容易推廣，存活率高；缺點：菌株仍有一定程度的代謝活動能力，保藏期短，傳代次數(shù)多，菌種較容易發(fā)生變異和被污染?，F(xiàn)在是43頁\一共有68頁\編輯于星期日（二）石蠟油封藏法1、原理用液體石蠟防止或減少培養(yǎng)基內(nèi)水分蒸發(fā)，隔絕培養(yǎng)物與氧的接觸，降低微生物的代謝活動，推遲細胞老化，延長保存時間。2、方法在無菌條件下，將滅過菌并已蒸發(fā)掉水分的液體石蠟倒入培養(yǎng)成熟的菌種斜面上，石蠟油層高出斜面頂端1cm，使培養(yǎng)物與空氣隔絕，加膠塞并用固體石蠟封口后，垂直放在室溫或4℃冰箱內(nèi)保藏?，F(xiàn)在是44頁\一共有68頁\編輯于星期日3、特點（1）此法廣泛適用于各大類微生物菌種的中期保藏，一般可保存1～2年左右。石蠟油管的轉接和搬運不方便。（2）不適用于保藏某些能分解烴類的菌種?，F(xiàn)在是45頁\一共有68頁\編輯于星期日三、砂土管保藏法1、原理低溫、干燥、隔氧和無營養(yǎng)物2、方法將砂與土分別洗凈、烘干、過篩，按一定比例分裝于小試管中，砂土的高度約1cm，121℃蒸汽滅菌1～1.5h，間歇滅菌3次。50℃烘干后經(jīng)檢查無誤后備用。將待保藏的菌株制成菌懸液或孢子懸液滴入砂土管中，放線菌和霉菌也可直接刮下孢子與載體混勻，而后置于干燥器中抽真空約2～4h，用火焰熔封管口（或用石蠟封口），置于干燥器中，在室溫或4℃冰箱內(nèi)保藏?，F(xiàn)在是46頁\一共有68頁\編輯于星期日3、特點（1）適用于產(chǎn)孢子的微生物及形成芽孢的細菌，對于一些對干燥敏感的細菌及酵母則不適用。（2）保藏期較長，約1～10年。效果較好，且微生物移接方便，經(jīng)濟簡便。現(xiàn)在是47頁\一共有68頁\編輯于星期日四、麩皮保藏法1、原理以麩皮作載體，吸附接入的孢子，然后在低溫干燥條件下保存。2、方法將麩皮與水以一定的比例拌勻，裝量為試管體積2/5，濕熱滅菌后經(jīng)冷卻，接入新鮮培養(yǎng)的菌種，適溫培養(yǎng)至孢子長成。將試管置于盛有氯化鈣等干燥劑的干燥器中，于室溫下干燥數(shù)日后移入低溫下保藏；干燥后也可將試管用火焰熔封，再保藏，則效果更好?，F(xiàn)在是48頁\一共有68頁\編輯于星期日3、特點（1）此法適用于產(chǎn)孢子的霉菌和某些放線菌，保藏期在1年以上。（2）操作簡單、經(jīng)濟實惠，工廠較多采用?，F(xiàn)在是49頁\一共有68頁\編輯于星期日五、冷凍真空干燥保藏法（凍干法）1、原理在較低的溫度下（一15℃以下），快速地將細胞凍結，并且保持細胞完整，然后在真空中使水分升華。經(jīng)過冷凍干燥的微生物的生長和代謝活動處于極低水平，不易發(fā)生變異或死亡，因此菌種可以保存很長時間。2、方法將準備保存的新鮮斜面菌種，在無菌條件下，裝入滅菌的保護劑（常用脫脂牛奶和血清），制成菌懸液，再用無菌帶橡皮頭的滴管將菌懸液分裝到準備好的安瓿管中，-35℃下預凍15min一2h，然后進行真空干燥，最后將試管真空熔封，低溫避光保存?，F(xiàn)在是50頁\一共有68頁\編輯于星期日3、特點（1）此法適用于各大類微生物。（2）此法的主要保藏措施是低溫、干燥、缺氧、有保護劑，保藏期一般長達5～15年，存活率高，變異率低，是目前被廣泛采用的一種較理想的保藏方法。（3）該法操作比較煩瑣，技術要求較高，且需要凍干機等設備?，F(xiàn)在是51頁\一共有68頁\編輯于星期日六、液氮超低溫保藏法1、原理微生物在－130℃的低溫下，所有的代謝活動暫時停止而生命延續(xù)，微生物菌種得以長期保存。可通過加入保護劑來降低細胞內(nèi)溶液的冰點，減少冰晶對細胞的傷害。

2、方法取合適的培養(yǎng)物，以5～10％的甘油或二甲亞砜制成孢子懸液或菌懸液。將此懸液注入無菌的安瓿管或聚丙烯小管內(nèi)，密封，在液氮超低溫（－196℃）下保藏?，F(xiàn)在是52頁\一共有68頁\編輯于星期日3、特點（1）適用于各種微生物菌種的保藏。（2）保藏期一般可達到15年以上，是目前公認的最有效的菌種長期保藏技術之一。（3）優(yōu)點：操作簡便、高效，且可使用各種培養(yǎng)形式的微生物進行保藏。缺點：需購置超低溫液氮設備，且液氮消耗較多，操作費用較高?，F(xiàn)在是53頁\一共有68頁\編輯于星期日菌種保藏機構的簡介菌種是一個國家的重要生物資源，所以菌種保藏是一項重要的菌物學工作。隨著科技的進步和生產(chǎn)的發(fā)展，對菌物資源的利用正在不斷擴大，所以菌種保藏工作顯得更加重要。為此，在一些發(fā)達國家都設有相應的菌種保藏機構。其任務是廣泛收集實驗室和生產(chǎn)菌種，將它們妥善保藏，使之達到不死、不衰、不亂和便于研究、交換、使用的目的?，F(xiàn)在是54頁\一共有68頁\編輯于星期日菌種保藏機構ATCC（美國典型菌種保藏中心）CMCC(中國醫(yī)學微生物菌種保藏管理中心)NBRC(日本技術評價研究所生物資源中心)現(xiàn)在是55頁\一共有68頁\編輯于星期日第五節(jié)生產(chǎn)菌種的擴大培養(yǎng)（種子制備）一、定義種子制備是抗生素發(fā)酵生產(chǎn)的第一道工序。種子制備：利用生產(chǎn)菌種，在一定的條件下，經(jīng)過擴大繁殖，成為具有一定質(zhì)量和數(shù)量的純種，供給抗生素生產(chǎn)使用。種子制備：是指將保存在砂土管、冷凍干燥管中處于休眠狀態(tài)的生產(chǎn)菌種接入試管斜面活化后，在經(jīng)過扁瓶或搖瓶及種子罐逐級放大培養(yǎng)而獲得一定數(shù)量和質(zhì)量的純種過程。這些純種培養(yǎng)物稱為種子。現(xiàn)在是56頁\一共有68頁\編輯于星期日第五節(jié)生產(chǎn)菌種的擴大培養(yǎng)（種子制備）一、定義種子制備：是指將保存在砂土管、冷凍干燥管中處于休眠狀態(tài)的生產(chǎn)菌種接入試管斜面活化后，在經(jīng)過扁瓶或搖瓶及種子罐逐級放大培養(yǎng)而獲得一定數(shù)量和質(zhì)量的純種過程。這些純種培養(yǎng)物稱為種子?，F(xiàn)在是57頁\一共有68頁\編輯于星期日作為種子的準則：

菌種細胞的生長活力強，移種至發(fā)酵罐后能迅速生長，遲緩期短；生理形狀穩(wěn)定；菌體總量及濃度能滿足大容量發(fā)酵罐的要求；無雜菌污染；保持穩(wěn)定的生產(chǎn)能力。

現(xiàn)在是58頁\一共有68頁\編輯于星期日

包括三個過程：1、孢子制備：生產(chǎn)大量孢子2、搖瓶種子制備：生產(chǎn)大量種子菌絲某些抗生素產(chǎn)生菌的孢子發(fā)芽和菌絲繁殖速度較緩慢，為了縮短種子罐培養(yǎng)周期和穩(wěn)定種子質(zhì)量，將孢子經(jīng)搖瓶培養(yǎng)成菌絲后再進罐，這就是所謂的搖瓶種子。3、種子罐種子制備種子制備是指孢于懸浮液或搖瓶種子接人種子罐后，在罐中繁殖成為大量菌絲的過程，從而縮短發(fā)酵罐繁殖苗絲的時間，增加合成抗生素的時間，種子罐種子經(jīng)移植到發(fā)酵罐后，進一步繁越并產(chǎn)生抗生索。二、種子的制備過程現(xiàn)在是59頁\一共有68頁\編輯于星期日二、種子的制備過程現(xiàn)在是60頁\一共有68頁\編輯于星期日1、實驗室種子制備實驗室種子的制備一般采用兩種方式：孢子進罐法、搖瓶菌絲進罐法孢子進罐法對于產(chǎn)孢子能力強的及孢子發(fā)芽、生長繁殖快的菌種可以采用固體培養(yǎng)基培養(yǎng)孢子，孢子可直接作為種子罐的種子，這樣操作簡便，不易污染雜菌。如：細菌、霉菌、一些放線菌（四環(huán)素、土霉素產(chǎn)生菌）等菌種現(xiàn)在是61頁\一共有6