無菌和環(huán)氧乙烷殘留量檢測

提要1.慣用滅菌方法3.微生物檢驗基礎(chǔ)知識4.醫(yī)療器械無菌檢驗2.環(huán)氧乙烷殘留量無菌和環(huán)氧乙烷殘留量檢測第1頁慣用滅菌方法滅菌方法：物理方法干熱滅菌濕熱滅菌射線滅菌濾過滅菌化學(xué)方法氣體滅菌藥液滅菌無菌和環(huán)氧乙烷殘留量檢測第2頁干熱滅菌法干熱滅菌法可用于能耐受較高溫度，卻不宜被蒸汽穿透、或者易被濕熱破壞物品滅菌。分類：火焰滅菌法：是將待滅菌物品直接置于火焰中燒灼進行滅菌方法，滅菌快速、可靠、簡便。適合用于：耐火焰材質(zhì)物品如金屬、玻璃用具或容器及瓷器等滅菌干熱空氣滅菌法：是將待滅菌物品置于高溫干熱空氣中滅菌方法，需要長時間高熱環(huán)境才能到達滅菌效果。適合用于：耐高溫材質(zhì)物品（玻璃、金屬制品等）及耐高溫、不允許濕氣穿透油脂類和粉末化學(xué)藥品。干熱空氣滅菌慣用：135～145℃滅菌3～5h；160～170℃滅菌2～4h；180～200℃滅菌0.5～1h。無菌和環(huán)氧乙烷殘留量檢測第3頁濕熱滅菌法

濕熱滅菌法是經(jīng)過熱蒸汽或沸水使細菌蛋白質(zhì)變性而殺滅微生物方法。分類:煮沸滅菌流通蒸汽滅菌熱壓滅菌適合用于：耐高溫、耐高壓蒸氣物品。金屬或玻璃容器及用具、瓷器、橡膠塞、膜濾器等均能采取此法。慣用條件（溫度、蒸氣表壓與時間）為：115℃（67kPa），30min；121℃（97kPa），20min；126℃（139kPa），15min。影響濕熱滅菌原因有：細菌種類與數(shù)量器械（被滅菌物）性質(zhì)滅菌溫度、壓力與時間

無菌和環(huán)氧乙烷殘留量檢測第4頁射線滅菌法慣用有：輻射滅菌法：原理是射線可直接破壞細菌DNA，造成微生物死亡。輻射滅菌特點是不升高滅菌產(chǎn)品溫度，穿透性強。適合用于：羊腸線、高分子材料等醫(yī)療器械滅菌。紫外線滅菌法：是利用紫外線作用于菌體核酸蛋白促使其變性，同時空氣受紫外線照射后產(chǎn)生微量臭氧，從而起共同殺菌作用。紫外光波長190-350nm之間，其中波長為260nm左右，對微生物生物效應(yīng)最大。適合用于：無菌室、一些工作區(qū)空氣滅菌、物體表面滅菌。微波滅菌法：采取頻率300MHz～300kMHz電磁波照射產(chǎn)生熱能殺滅微生物方法。無菌和環(huán)氧乙烷殘留量檢測第5頁紫外線照射滅菌時注意問題紫外線殺菌力，隨使用時間增加而減退，普通使用時間到達額定時間70％時應(yīng)更換紫外線燈管，以確保殺菌效果。紫外線燈平均壽命普通為h。紫外線殺菌作用隨菌種不一樣而不一樣，殺霉菌照射量要比殺桿菌大40~50倍。紫外線照射通常按相對濕度為60％基礎(chǔ)設(shè)計，室內(nèi)濕度增加時，照射量應(yīng)對應(yīng)增加。紫外線滅菌效果與照射時間長短相關(guān)，這需要經(jīng)過驗證來確定照射時間。紫外照射燈安裝形式及高度，應(yīng)依據(jù)實際情況，參考使用說明決定無菌和環(huán)氧乙烷殘留量檢測第6頁濾過除菌法

濾過除菌法：指用濾過方法除去活或死微生物方法，是一個機械除菌方法，供除菌用濾器，要求能有效地從溶液中除凈微生物，溶液能順暢地經(jīng)過，輕易清洗，操作簡便。適合用于：對熱不穩(wěn)定藥品溶液、氣體、水等除菌。慣用除菌濾器（應(yīng)在無菌操條件下進行）：0.22μm或0.3μm微孔濾膜G6垂熔玻璃濾器無菌和環(huán)氧乙烷殘留量檢測第7頁化學(xué)滅菌法

氣體滅菌法：指用化學(xué)藥品氣體或蒸氣殺滅微生物方法。慣用氣態(tài)殺菌劑：為環(huán)氧乙烷、甲醛、丙二醇、臭氧、乳酸、過氧乙酸等。

藥液滅菌法:

藥液滅菌法利用藥液殺滅微生物方法。慣用有0.1%～0.2%苯扎溴銨溶液，75%乙醇、2%煤酚皂溶液、1%聚維酮碘溶液等。

無菌和環(huán)氧乙烷殘留量檢測第8頁小結(jié)高壓蒸汽滅菌:

工作服、口罩、稀釋液等，置高壓殺菌鍋內(nèi)，普通采取121℃滅菌半小時,不一樣培養(yǎng)基有不一樣要求,應(yīng)分別處理。火焰滅菌：接種針、接種環(huán)等可直接火焰滅菌。高溫干燥滅菌：各種玻璃器皿、注射器、吸管等，置于燥箱中160℃滅菌2小時。普通消毒:

無菌室內(nèi)凳、工作臺、試管架、天平、待檢物容器或包裝均無法進行滅菌，必須用其它方法進行消毒處理，可采取適當消毒液擦拭消毒，工作人員手也用此法進行消毒?？諝庀荆洪_啟紫外燈照射30—60分鐘即可。

無菌和環(huán)氧乙烷殘留量檢測第9頁提要

1.慣用滅菌方法3.微生物檢驗基礎(chǔ)知識4.醫(yī)療器械無菌檢驗

2.環(huán)氧乙烷殘留量無菌和環(huán)氧乙烷殘留量檢測第10頁環(huán)氧乙烷滅菌相關(guān)知識環(huán)氧乙烷滅菌利用環(huán)氧乙烷在常溫下為氣態(tài)，蒸汽壓較大，對滅菌物品穿透性強，能夠穿透微孔而到達物品深部，環(huán)氧乙烷是一個非?；顫姕缇鷦瑲⒕芰娗覐V泛，有很強穿透能力，適合于包裝物品滅菌，對物品損壞輕微，且費用較低?，F(xiàn)大部分醫(yī)療器械生產(chǎn)企業(yè)采取此種方法滅菌。環(huán)氧乙烷能夠高效地對醫(yī)療產(chǎn)品進行滅菌，在殺滅微生物同時醫(yī)療產(chǎn)品上環(huán)氧乙烷殘留也會對使用者和患者身體帶來一定毒害。其毒性包含兩個方面：一為環(huán)氧乙烷本身毒性。經(jīng)過呼吸器官吸入體內(nèi)刺激呼吸道，引發(fā)惡心、嘔吐、頭昏、頭痛、嗜睡等癥狀。嚴重者可引發(fā)肺水腫；經(jīng)過皮膚、粘膜接觸后，引發(fā)紅腫、水泡及血泡，嚴重者可出現(xiàn)局部皮膚燒傷及粘膜組織灼傷，造成毛發(fā)脫落；超量進入人體血液內(nèi)，可致紅細胞溶解，補體滅活和凝血酶破壞引發(fā)全身性溶血。二是滅菌后生成物毒性。環(huán)氧乙烷與氯元素接觸產(chǎn)生毒性很大氯醇，與水接觸形成乙二醇，對環(huán)境和種植物生產(chǎn)起到很大破壞作用。無菌和環(huán)氧乙烷殘留量檢測第11頁環(huán)氧乙烷滅菌相關(guān)知識醫(yī)療器械產(chǎn)品如采取環(huán)氧乙烷滅菌，應(yīng)由有資格人員負責(zé)設(shè)備維護滅菌確實認和常規(guī)控制及產(chǎn)品放行工作。應(yīng)不停提升各類人員對環(huán)氧乙烷殘留量造成健康風(fēng)險意識，首先經(jīng)環(huán)氧乙烷滅菌醫(yī)療器械必須按要求進行解析，即紙塑包裝滅菌后解析7天，全塑包裝滅菌后解析14天，并經(jīng)檢測確定器械上環(huán)氧乙烷殘留量小于10μg/g后出廠；其次經(jīng)環(huán)氧乙烷滅菌醫(yī)療器械應(yīng)采取透氣性好，有利于消除殘留環(huán)氧乙烷紙塑包裝，以最大程度地降低環(huán)氧乙烷殘留，降低器械使用風(fēng)險；第三體積越大，環(huán)氧乙烷含量絕對就越高；對于醫(yī)用敷料、無紡布、合成醫(yī)用乳膠手套等對環(huán)氧乙烷氣體有很強吸附性，吸附在這類產(chǎn)品上殘留量極難徹底解析，所以對這類產(chǎn)品，不應(yīng)選取環(huán)氧乙烷滅菌。無菌和環(huán)氧乙烷殘留量檢測第12頁環(huán)氧乙烷殘留量測定方法氣相色譜法比色分析法原理：環(huán)氧乙烷在酸性條件下水解成乙二醇，乙二醇經(jīng)高碘酸氧化生成甲醛，甲醛與品紅-亞硫酸試液反應(yīng)產(chǎn)生紫紅色化合物，經(jīng)過比色法分析可求得環(huán)氧乙烷含量。所用試劑：高碘酸，硫代硫酸鈉，無水亞硫酸鈉，堿性品紅，鹽酸，乙二醇等浸提方法：分模擬使用浸提法和極限浸提法。模擬使用浸提法：用0.1mol/L鹽酸作為浸提介質(zhì),整個或部分與人體接觸器械在37℃(人體溫度)浸提,不直接與人體接觸器械在25℃(室溫)浸提.浸提時間應(yīng)考慮在推薦或預(yù)期使用最為嚴格時間條件下進行,但不短于1h.浸提表面為器械與藥液或血液接觸表面.極限浸提法:取樣品上有代表性部位,截為5mm長碎塊,稱取2.0g置于容器中,加0.1mol/L鹽酸10ml,室溫放置1h,作為供試液;對于容器類樣品,可加0.1mol/L鹽酸至公稱容量,在37℃±1℃下恒溫1h.無菌和環(huán)氧乙烷殘留量檢測第13頁環(huán)氧乙烷殘留量試驗步驟繪制標準曲線：取5支納氏比色管，分別準確加入0.1mol/L鹽酸2ml,再準確加入0.5m、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml乙二醇標準溶液。另取一支納氏比色管，準確加入0.1mol/L鹽酸2ml作為空白對照。于上述各管中分別加入高碘酸溶液（5g/L)0.4ml，搖勻，放1h，然后分別滴加硫代硫酸鈉溶液（10g/L）至出現(xiàn)黃色恰好消失。再分別加入品紅-亞硫酸試液0.2ml，用蒸餾水稀釋到10ml，搖勻，35℃～37℃條件下放置1h,于560nm波優(yōu)點以空白液作參比，測定吸光度。繪制吸光度-體積標準曲線。試驗方法：準確量取供試液2.0ml于納氏比色管中，按上面步驟操作，以測得吸光度從標準曲線上查得試液對應(yīng)體積。、無菌和環(huán)氧乙烷殘留量檢測第14頁提要

1.慣用滅菌方法

3.微生物檢驗基礎(chǔ)知識4.醫(yī)療器械無菌檢驗2.環(huán)氧乙烷殘留量無菌和環(huán)氧乙烷殘留量檢測第15頁微生物檢驗基礎(chǔ)知識

無菌技術(shù)：是指在微生物試驗工作中，控制或預(yù)防各類微生物污染及其干擾一系列操作方法和相關(guān)辦法，其中包含無菌環(huán)境設(shè)施、無菌試驗器材以及無菌操作。無菌環(huán)境設(shè)施

無菌室使用與管理要求超凈工作臺使用與管理要求生物安全柜無菌試驗器材無菌操作：概念：是指在無菌環(huán)境條件下，在對無菌制品或無菌器械進行檢驗過程中，能預(yù)防微生物污染與干擾一個常規(guī)操作方法。注意事項。無菌和環(huán)氧乙烷殘留量檢測第16頁提要

1.慣用滅菌方法2.環(huán)氧乙烷殘留量

4.醫(yī)療器械無菌檢驗3.微生物檢驗基礎(chǔ)知識無菌和環(huán)氧乙烷殘留量檢測第17頁醫(yī)療器械無菌檢驗引用標準中華人民共和國藥典版ＧＢ/Ｔ１４２３３．２－２００５醫(yī)用輸液．輸血．注射器具檢驗方法第２部分：生物學(xué)試驗方法無菌和環(huán)氧乙烷殘留量檢測第18頁無菌檢驗法定義中華人民共和國藥典版：無菌檢驗法系用于檢驗藥典要求無菌藥品，醫(yī)療器具，原料，輔料及其它品種是否無菌一個方法．ＧＢ/Ｔ１４２３３．２－２００５：本試驗系將醫(yī)療器械或其浸提液接種于培養(yǎng)基內(nèi)，以檢驗供試品是否有細菌和真菌污染．無菌和環(huán)氧乙烷殘留量檢測第19頁無菌檢驗方式直接接種法薄膜過濾法無菌和環(huán)氧乙烷殘留量檢測第20頁主要設(shè)備超凈工作臺恒溫培養(yǎng)箱恒溫水浴箱壓力蒸汽滅菌器電熱干燥箱光學(xué)顯微鏡無菌和環(huán)氧乙烷殘留量檢測第21頁主要器具試管及試管架酒精燈75％乙醇棉滅菌刻度吸管(1ml)滅菌平皿（9cm）錐形瓶三角燒瓶滅菌剪刀、鑷子等無菌和環(huán)氧乙烷殘留量檢測第22頁主要培養(yǎng)基流體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基改良馬丁培養(yǎng)基營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基無菌和環(huán)氧乙烷殘留量檢測第23頁稀釋液、沖洗液及其制備方法

無菌氯化鈉溶液：質(zhì)量濃度為9g/L無菌氯化鈉溶液蛋白胨水溶液（0.1％）制備方法：取蛋白胨1.0g，加水1000ml，微溫溶解，濾清，調(diào)整pH值至7.1±0.2，分裝，滅菌。

pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液制備方法：取磷酸二氫鉀3.56g、磷酸氫二鈉7.23g、氯化鈉4.30g、蛋白胨1.0g，加水1000ml，微溫溶解，濾清，分裝，滅菌無菌和環(huán)氧乙烷殘留量檢測第24頁培養(yǎng)基要求用于培養(yǎng)需（厭）氣菌和真菌培養(yǎng)基制備、培養(yǎng)基靈敏度檢驗及其它各項要求應(yīng)符合《中國藥典（二部）》附錄中《無菌檢驗法》要求。培養(yǎng)基可按藥典處方制備，也可使用按該處方生產(chǎn)符合要求脫水培養(yǎng)基。制備后應(yīng)采取驗證合格滅菌程序滅菌。制備好培養(yǎng)基應(yīng)保留在2~25℃、避光環(huán)境。培養(yǎng)基若保留于非密閉容器中，普通在三周內(nèi)使用;若保留于密閉容器中，普通可在一年內(nèi)使用。無菌和環(huán)氧乙烷殘留量檢測第25頁培養(yǎng)基無菌和環(huán)氧乙烷殘留量檢測第26頁靈敏度試驗菌種金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌銅綠假單胞菌生孢梭菌白色念珠菌黑曲霉ＣＭＣＣ:中國醫(yī)學(xué)細菌保藏管理中心無菌和環(huán)氧乙烷殘留量檢測第27頁器具滅菌與供試液接觸全部器具應(yīng)采取可靠方法滅菌，通常置壓力蒸氣滅菌器內(nèi)121℃30min，或置電熱干燥箱內(nèi)160℃2h。無菌和環(huán)氧乙烷殘留量檢測第28頁無菌室菌落數(shù)要求無菌室操作臺或超凈工作臺局部應(yīng)符合潔凈度100級單向流空氣區(qū)域要求。無菌室在消毒處理完成后，應(yīng)檢驗空氣中菌落數(shù)。方法：取直徑約90mm培養(yǎng)皿，無菌操作注入融化營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基約20mL，在30℃～35℃培養(yǎng)48h證實無菌后，取3只培養(yǎng)皿在無菌室操作臺或超凈工作臺平均位置打開上蓋，暴露30min后蓋好，置30℃～35℃培養(yǎng)48h后取出檢驗，3只雙碟上生長菌落數(shù)平均不得超出1個.無菌試驗過程中應(yīng)檢驗空氣中菌落數(shù)，方法同上。在試驗開始進行時打開平皿蓋，至試驗結(jié)束蓋好照上法培養(yǎng)，應(yīng)符合上述要求。無菌和環(huán)氧乙烷殘留量檢測第29頁陽性對照應(yīng)依據(jù)供試品特征選擇陽性對照菌：無抑菌作用及抗革蘭陽性菌為主供試品，以金黃色葡萄球菌為對照菌；抗革蘭陰性菌為主供試品以大腸埃希氏菌為對照菌；抗厭氧菌供試品，以生孢梭菌為對照菌；抗真菌供試品，以白色念珠菌為對照菌。陽性對照試驗菌液制備同培養(yǎng)基靈敏度檢驗（大腸埃希氏菌液制備同培養(yǎng)基靈敏度檢驗中金黃色葡萄球菌）加菌量小于100cfu，供試品用量同供試品無菌檢驗每份培養(yǎng)基接種樣品量。陽性對照管培養(yǎng)48～72小時應(yīng)生長良好。<無菌和環(huán)氧乙烷殘留量檢測第30頁供試品數(shù)量同一批號最少3個~11個單位供試品。批出廠產(chǎn)品最少檢驗數(shù)量：≤１００個：１０％或４個（取較大者）１００<Ｎ≤５００：１０件>５００：２％或２０件（取較少者）無菌和環(huán)氧乙烷殘留量檢測第31頁上市抽驗樣品（液體制劑）最少檢驗量≤1全量201＜V＜5半量105≤V＜202ml1020≤V＜505ml1050≤V＜10010ml1050≤V＜100（靜脈給藥）半量10100≤V＜500半量6V≥500500ml6無菌和環(huán)氧乙烷殘留量檢測第32頁上市抽驗樣品（固體制劑）最少檢驗量

M≤50mg全量2050mg＜M＜300mg半量10300mg≤M＜5g150mg10M≥5g500mg10外科用敷料棉花及紗布取100mg或1cm×3cm10縫合線、一次性醫(yī)用材料整個材料20帶導(dǎo)管一次性醫(yī)療器具（如輸液袋）10其它醫(yī)療器具整個器具（切碎或拆散開）20無菌和環(huán)氧乙烷殘留量檢測第33頁備注每種培養(yǎng)基各接種10支供試品。假如醫(yī)用器械體積過大，培養(yǎng)基用量可在ml以上，將其完全浸沒。無菌和環(huán)氧乙烷殘留量檢測第34頁供試液制備及接種制備及接種優(yōu)先采取將供試品或其有代表性各部分直接投放入培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)。如供試品不宜直接投放，可按以下方法制備供試液，應(yīng)使介質(zhì)充分洗提供試品浸提表面。管類器具：按管內(nèi)表面積每10cm2流過管內(nèi)腔1mL浸提介質(zhì)，流量約為10ml/min;容器類器具：容器內(nèi)已裝有液體或直接抽取容器內(nèi)液體為供試液;空容器按容器內(nèi)表面積每10cm2加入浸提介質(zhì)1ml，振搖數(shù)次。實體類器具：實體類器具按表面積每10cm2加入加入浸提介質(zhì)1ml，振搖數(shù)次。供試液制備應(yīng)按無菌操作法進行，在制備后2h內(nèi)使用。無菌和環(huán)氧乙烷殘留量檢測第35頁