血細胞分析儀

血細胞分析儀第1頁/共67頁教學(xué)目標1、掌握血細胞分析儀的庫爾特原理2、掌握白細胞、紅細胞、血小板直方圖的臨床意義。3、了解血細胞分析儀的質(zhì)量控制第2頁/共67頁教學(xué)重點、難點教學(xué)重點：

1、血細胞分析儀電阻抗原理

2、細胞直方圖的分析教學(xué)難點：細胞直方圖的分析第3頁/共67頁授課內(nèi)容概述血細胞分析儀檢測原理血細胞分析儀類型血細胞分析儀檢測項目血細胞直方圖第4頁/共67頁1.顯微鏡計數(shù)：

原理簡單、方便實用比較費時費力、影響因素較多。2.

血液分析儀檢測項目多速度快精度高信息含量大易標準化、規(guī)范化

概述第5頁/共67頁血液分析儀發(fā)明者庫爾特先生35歲的美國人庫爾特發(fā)明了粒子計數(shù)技術(shù)；50年代初期，血細胞計數(shù)儀開始應(yīng)用于臨床?？萍紴槿祟惤】捣?wù)，熱心社會公益事業(yè)。庫爾特先生1913-1998第6頁/共67頁COULTER：全自動細胞分析儀第7頁/共67頁COULTER：細胞分析儀第8頁/共67頁

第一臺細胞計數(shù)儀瓶瓶罐罐+管道+電極+示波器第9頁/共67頁庫爾特（美國通用電氣公司員工）在上海工作時所拍照第10頁/共67頁血細胞分析發(fā)展史1.1953年美國Coulter公司研制成功第一臺電阻抗是血細胞分析儀；2.六十年代已普遍應(yīng)用到臨床，當時可檢測RBC、Hb、WBC、MCV、MCH、MCHC等項目；3．七十年代，增加了PLT；4．七十年代末至八十年代開發(fā)了DC及RDW及MPV等新項目；5．九十年代以來，RET、NRBC、淋巴細胞亞群分析等指標。第11頁/共67頁現(xiàn)代分析儀進展1．自動化程度越來越高；2．提供參數(shù)越來越多；3．精密度越來越高；4．速度越來越快；5．越來越注重環(huán)保；6．質(zhì)控功能得到加強；7．智能化程度越來越高。第12頁/共67頁一血液分析儀檢測原理血液分析儀檢測原理大致分為兩類：①電阻抗法（庫爾特原理）②光散射法（其中電阻抗法是血液分析儀的設(shè)計基礎(chǔ)）血液分析儀主要能完成兩大功能：①細胞計數(shù)功能②細胞分類功能

第13頁/共67頁（一）電阻抗法原理（庫爾特原理）1庫爾特原理庫爾特原理是利用電阻抗法測量細胞的數(shù)量和體積。其內(nèi)容為：血細胞是電的不良導(dǎo)體，當一個細胞通過計數(shù)小孔時，會導(dǎo)致小孔兩端電阻的變化，將其轉(zhuǎn)化成脈沖，感應(yīng)器通過檢測脈沖的數(shù)量及大小，從而計算出通過小孔的細胞數(shù)量及體積。第14頁/共67頁

2庫爾特原理圖

細胞計數(shù)池中，小孔內(nèi)外兩個電極和稀釋液構(gòu)成一個電流回路，在負壓作用下，細胞通過小孔，電極能感應(yīng)到一個瞬間的電阻變化，并將其轉(zhuǎn)換成脈沖，脈沖的數(shù)量代表細胞數(shù)量，脈沖大小反映細胞體積大小。脈沖檢測器第15頁/共67頁3電阻抗法儀器的主要組成電阻抗法儀器的主要組成包括：信號發(fā)生器（脈沖檢測器）放大器（微伏放大為伏級的脈沖信號）閾值調(diào)節(jié)（計數(shù)不同細胞有不同閾值）甄別器（除去假脈沖信號）整形器（波形調(diào)整為標準一致的平頂波）計數(shù)系統(tǒng)（不同脈沖區(qū)分出不同細胞并計數(shù)）第16頁/共67頁紅細胞直方圖

紅細胞計數(shù)和血細胞比容測定與白細胞計數(shù)相似。100200300400(fl)%第17頁/共67頁WBC直方圖第18頁/共67頁血小板直方圖隨紅細胞在一個系統(tǒng)中進行檢測。直方圖在2～28fl（不同儀器不一）。

102030(fl)%第19頁/共67頁（二）白細胞系檢測原理1.電阻抗法

標本單個白細胞按體積大小分類溶血素稀釋液電阻抗法淋巴細胞單個核細胞中性粒細胞第20頁/共67頁

儀器將體積為35～450fL的血細胞，分為256個通道（channel）。每個通道：1.64fl。根據(jù)細胞大小，分別置于不同的通道中，顯示血細胞體積分布直方圖(Histogram)。

第21頁/共67頁

白細胞檢測原理

根據(jù)電阻抗的原理，不同體積白細胞(35-450)fL產(chǎn)生脈沖大小的明顯差異而區(qū)分相應(yīng)的三群細胞：

35—90f1160fl以上90～160f1第22頁/共67頁經(jīng)溶血素處理脫水后，血細胞體積大小發(fā)生了變化?。。∫约毎挠行纬煞肿鳛榧毎拇笮〉谝蝗海?5～90fl）小細胞區(qū)：淋巴細胞（體積最?。５诙海?0～160fl）單個核細胞區(qū)，（中間細胞）：單核細胞、嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞、原始、幼稚細胞、異常細胞等。第三群（160fl以上）大細胞區(qū)：嗜中性粒細胞（體積最大）。第23頁/共67頁（二）光散射法血液分析儀檢測原理光散射法組合應(yīng)用電學(xué)、光學(xué)、細胞化學(xué)多項技術(shù)檢測血液細胞，可得出較準確的細胞計數(shù)和分類計數(shù)的結(jié)果。這些測試原理的改進主要體現(xiàn)在對白細胞分類部分的改進，即電阻抗法的白細胞三分群發(fā)展為多項技術(shù)對白細胞五分類。第24頁/共67頁1、白細胞檢測

（1）容量、電導(dǎo)、光散射（volume，conductivity，scatter,VCS）法原理細胞體積技術(shù)（測量細胞大小）電導(dǎo)性技術(shù)（測量細胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)）光散射技術(shù)（測量細胞形態(tài)、細胞核和細胞顆粒）。第25頁/共67頁

體積電導(dǎo)光散射第26頁/共67頁VCS可顯示3種細胞散點圖DF1（體積值和散射光值）DF2（體積值和電導(dǎo)值）DF3（體積值和電導(dǎo)值）第27頁/共67頁（2）電阻抗與射頻法（能透入細胞內(nèi)，測量核的大小及顆粒的多少）。RF:射頻電流細胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)信息DC:直流電細胞大小的信息第28頁/共67頁

（3）激光與細胞化學(xué)法過氧化物酶檢測通道嗜堿性粒細胞/分葉核檢測通道。

第29頁/共67頁（4）多角度偏振光散射（multi-anglepolarizedscatterseparationofwhitecell,MAPSS）法

0°：前角光散射（1°～3°），可粗略測定細胞大小。

10°：狹角光散射（7°～11°），可測定細胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)相對特征。

90°：垂直光散射（70°～110°），測定細胞核分葉情況。

90°：消偏振光散射（70°～110°），區(qū)分嗜酸性粒細胞與其他細胞。

第30頁/共67頁第31頁/共67頁1．紅細胞計數(shù)（RBC）和紅細胞比積（Hct）

1）RBC原理（脈沖數(shù)的多少）

2）Hct/PCV原理（脈沖的高度與疊加）

3）白細胞數(shù)的干擾

4）紅細胞體積分布直方圖100200flRBC（三）紅細胞測試原理第32頁/共67頁紅細胞檢測原理

紅細胞計數(shù)和血細胞比容測定與白細胞計數(shù)相似。100200300400(fl)%正態(tài)分布,峰頂在82~96fl第33頁/共67頁

電阻抗法檢測紅細胞要注意白細胞增高干擾：稀釋血液中含有白細胞，正常時，血液紅細胞與白細胞的比例約為500：1～1000：l，因此，白細胞因素可忽略不計。當病理情況下，如白血病時，白細胞數(shù)明顯增高，同時又伴有貧血時，使所得紅細胞參數(shù)可產(chǎn)生明顯誤差。第34頁/共67頁2.血紅蛋白測定原理第35頁/共67頁有關(guān)溶血劑ICSH推薦的HICN法：最大吸收峰在

540nm。血紅蛋白衍生物是HICN，試劑反應(yīng)時間長，5分鐘，不適合全自動儀器。另外，氰化血紅蛋白（CN-HB）：試劑成分氰化鉀（劇毒）。2非氰化溶血劑（如SDS-HB）：

SDS-HB與HICH-HB吸收光譜相似。第36頁/共67頁(四)血小板檢測原理

根據(jù)電阻抗法，血小板隨紅細胞在一個系統(tǒng)中進行檢測，在紅細胞／血小板計數(shù)池中計數(shù)2fl～30fl的顆粒。

第37頁/共67頁血小板檢測原理血小板計數(shù)（platelet,PLT）：隨紅細胞在一個系統(tǒng)中進行檢測。直方圖在2～30fl（不同儀器不一）。

102030(fl)%呈偏態(tài)，峰頂5~10fl第38頁/共67頁血細胞分析儀工作流程第39頁/共67頁二、血細胞分析儀類型

（一）單純電阻抗法三分群血液分析儀特點

(1)檢測參數(shù)：約20項左右。

(2)白細胞分類：只能對白細胞進行三分群。

(3)直方圖：3種直方圖。

(4)報警功能：以文字和(或)圖標提示異常檢測結(jié)果的信息。

第40頁/共67頁血液細胞分析儀

第41頁/共67頁

（二）綜合光學(xué)和電學(xué)等技術(shù)血液分析儀特點(1)檢測參數(shù)：約20至40項左右(2)白細胞分類：能對白細胞進行五分類。(3)直方圖和散點圖：3種直方圖和散點圖。(4)報警功能：以文字和(或)圖標顯示異常檢測結(jié)果的信息。注意：各類型血液分析儀不具備識別異常細胞形態(tài)的能力，故不能完全代替鏡檢。第42頁/共67頁第43頁/共67頁（三）全自動多功能血細胞分析儀檢測速度為每小時110－150份標本工作模式：CBCCBC+DIFFCBC+NRBCCBC+DIFF+NRBCCBC+RETCBC+DIFF+RETCBC+DIFF+NRBC+RET第44頁/共67頁三檢測參數(shù)

血液分析儀一般能檢測20余項參數(shù)，功能較全的儀器最多的能檢測40余項參數(shù)。常見血液分析檢測報告的術(shù)語及英文縮寫詞。見下表：第45頁/共67頁血液細胞分析儀

第46頁/共67頁第47頁/共67頁紅細胞體積分布寬度RDW概念

外周血紅細胞體積大小異質(zhì)性，用變異系數(shù)來表示（CV）參考值

11.6%～15.0%第48頁/共67頁臨床意義：（1）缺鐵性貧血（IDA）早期診斷和療效觀察95%以上的IDA和RDW均異常（2）鑒別IDA和輕型β-地中海貧血均為小細胞低色素貧血，前者RDW增高；后者RDW基本正常。（3）MCV/RDW貧血分類法有助于貧血的形態(tài)學(xué)分類4）用于貧血病因?qū)W鑒別診斷：腎性貧血RDW正常；肝性貧血RDW增高第49頁/共67頁

鑒別缺鐵性貧血和β-珠蛋白生成障礙性貧血

1）共同點：小細胞性貧血，峰左移。

2）鑒別點：

a．RDW增高，峰底寬

b．RDW正常，峰底窄

bNfl100200a第50頁/共67頁根據(jù)MCV、RDW進行貧血形態(tài)學(xué)分類

第51頁/共67頁（一）．細胞直方圖的應(yīng)用

1．WBC直方圖/及“分類”計數(shù)

1）初步估計細胞群體的變化

2）技術(shù)因素或病理變化400100200300400fl100200300flfl分析儀各項參數(shù)及直方圖臨床意義第52頁/共67頁1、白細胞直方圖正常白細胞直方圖異常白細胞直方圖第53頁/共67頁紅細胞直方圖概念正常紅細胞主要分布在50-200fl。正常直方圖上可見兩個細胞群體：50-125fl區(qū)域有一個幾乎兩側(cè)對稱、較狹窄的正態(tài)分布曲線第54頁/共67頁100200fl2．RBC體積直方圖要注意觀察圖形峰的位置、峰底的寬度、峰頂?shù)男螤罴坝袩o雙峰現(xiàn)象。

1）缺鐵性貧血

2）輕型β－Hb合成障礙

3）鐵粒幼細胞性貧血

4）葉酸缺乏的巨幼細胞性貧血

5）其他第55頁/共67頁紅細胞直方圖（1）正常紅細胞分布：50～200fl（2）異常紅細胞直方圖第56頁/共67頁

血小板直方圖

電阻抗法在2-30fl范圍內(nèi)分析PLT，但大多數(shù)在2-15fl范圍，正常血小板直方圖，呈現(xiàn)左偏態(tài)分布。第57頁/共67頁

當血小板計數(shù)和血小板體積直方圖呈現(xiàn)異?，F(xiàn)象時，均應(yīng)檢查血液是否有血小板凝聚和微小血塊，必要時作血涂片檢查，觀察是否有小紅細胞、紅細胞碎片或大血小板增多現(xiàn)象。2030fl10第58頁/共67頁3、血小板直方圖正常血小板直方圖呈左偏態(tài)分布：2～30fl分布，主要在2～15fl。

異常血小板直方圖第59頁/共67頁MPV的變化：鑒別血小板減少

①PLT↓而MPV↑：Plt破壞增多（如DIC、ITP等）②PLT↓而MPV↓：M增生不良、AIDS、M纖維化、再障、M瘤、白血病化療、敗血