RH血型專題知識(shí)專家講座

Rh（D）血型判定及

臨床輸血策略RH血型專題知識(shí)專家講座第1頁RH血型研究歷史

19世紀(jì)40年代發(fā)覺了人類紅細(xì)胞RH血型19世紀(jì)60年代,發(fā)覺了RH血型不合有效治療方法19世紀(jì)80年代,成功分離了RH蛋白19世紀(jì)90年代,認(rèn)識(shí)了RH基因結(jié)構(gòu)20世紀(jì)90年代,清楚了RHD和RHCE氨基酸序列RH血型專題知識(shí)專家講座第2頁RH血型系統(tǒng)發(fā)覺1940年,發(fā)覺多數(shù)人紅細(xì)胞上有一個(gè)血型抗原物質(zhì),與恒河猴（Rhesusmonkey)紅細(xì)胞抗原物質(zhì)是相同.1940年還發(fā)覺,三例ABO血型相同，同種輸血后卻發(fā)生了嚴(yán)重輸血反應(yīng).同一年，一名O型孕婦產(chǎn)后大出血，輸入O型丈夫血液后發(fā)生了溶血性輸血反應(yīng)，這是人類因?yàn)槿焉锂a(chǎn)生同種免疫作用第一例匯報(bào)這就表明除ABO血型系統(tǒng)外,還存在另外血型系統(tǒng).RH血型專題知識(shí)專家講座第3頁RH血型系統(tǒng)命名“Rh”是依據(jù)恒河猴英語單詞前兩位字母而由來我們現(xiàn)在通常把紅細(xì)胞上含有D抗原稱為RH陽性，而不含有D抗原稱為RH陰性RH系統(tǒng)還有C、c、E、e四種抗原，也有用1、2、3、4、5來表示，D+紅細(xì)胞有用RH1表示，而D-細(xì)胞用RH-1來表示，對應(yīng)等位基因用R1和R-1來表示RH血型專題知識(shí)專家講座第4頁RH血型意義臨床意義很大!RH陰性個(gè)體在亞洲漢族人當(dāng)中很稀有，比率為0.3%左右，在歐美等白種人中，百分比較高為15%左右。RH血型不合輸血,有可能產(chǎn)生危及生命溶血性輸血反應(yīng)，胎、母RH血型不合妊娠有可能發(fā)生新生兒溶血病，嚴(yán)重者可造成新生兒死亡,或是使胎兒死于子宮內(nèi)。RH血型檢驗(yàn)和ABO血型同等主要，已被列為血型常規(guī)檢驗(yàn)之一。RH血型專題知識(shí)專家講座第5頁RH血型是怎樣遺傳?RH(-)基因是隱性基因。當(dāng)RH陽性父母都帶有RH陰性基因，且同時(shí)遺傳給后代時(shí)，其后代即表現(xiàn)為RH陰性。當(dāng)雙親中有一人是RH(-)時(shí)，其兒女為RH(-)機(jī)會(huì)增大。RH血型專題知識(shí)專家講座第6頁RHD(-)有何意義?正常RHD陰性者，血漿中不含抗-D抗體，所以當(dāng)RHD陰性人第一次輸入RHD陽性血液時(shí)，不會(huì)發(fā)生凝集反應(yīng)，但此時(shí)RHD陰性者卻會(huì)因?yàn)楦鞣N免疫而產(chǎn)生抗D抗體，當(dāng)再次輸入RHD陽性血液時(shí)，就可能發(fā)生嚴(yán)重輸血反應(yīng)甚至造成死亡。RHD陰性婦女懷有RH陽性胎兒，胎兒紅細(xì)胞就會(huì)刺激母體產(chǎn)生抗-D抗體，當(dāng)再次懷有RHD陽性胎兒時(shí)，能夠造成新生兒溶血性貧血而死亡。RH血型專題知識(shí)專家講座第7頁RHD(-)者怎樣自我保護(hù)?RHD陰性者普通情況下盡可能防止輸入RHD陽性血液，必須輸注相同RH陰性血，以免因?yàn)镽HD血型不合而發(fā)生輸血反應(yīng)。80%RHD陰性病人在輸入200ml陽性紅細(xì)胞后，在2-5個(gè)月后，血漿中可檢測到抗體。RHD陰性婦女應(yīng)注意婚后防止流產(chǎn)，確保第一胎正常分娩，以防發(fā)生RH新生兒溶血病。有資料統(tǒng)計(jì)14.3%屢次妊娠D陰性孕婦產(chǎn)生抗-D抗體，造成新生兒溶血病。RH血型專題知識(shí)專家講座第8頁血站為RHD(-)者做哪些工作?常年在數(shù)以萬計(jì)供血人群中篩選RHD(-)供者。對有流產(chǎn)史RH陰性婦女，在妊娠早期做一些關(guān)于RH血型系統(tǒng)產(chǎn)前免疫檢驗(yàn)。一旦發(fā)生RH新生兒溶血病，馬上用RH陰性同型血液進(jìn)行換血治療，挽救新生兒生命。RH血型專題知識(shí)專家講座第9頁關(guān)于RhD表型1.RhD陽性中國漢族：約99.7%白人：約85%2.RhD陰性中國漢族：約0.03%白人：約15%3.弱D（WeakD)4.部分D（PartialD)5.Del型現(xiàn)今稱謂：DVariant（D變異型）RH血型專題知識(shí)專家講座第10頁弱D型(WeakD)血清學(xué)表現(xiàn)為鹽水介質(zhì)陰性,IAT檢測為陽性.D抗原數(shù)量降低,但抗原表位數(shù)目基本不變.Ｄ抗原質(zhì)量不變．堿基突變形成，改變氨基酸位于細(xì)胞膜層中間或細(xì)胞膜層內(nèi)．RH血型專題知識(shí)專家講座第11頁部分D(PartialD)紅細(xì)胞缺乏一些（部份）ＲＨＤ抗原表位．與正常Ｄ抗原相比，抗原質(zhì)量發(fā)生了改變.(正常紅細(xì)胞上Ｄ抗原包含３０個(gè)表位）形成原因：Ｄ基因單或多核苷酸堿基取代、ＲＨＤ－ＣＥ雜交基因。所改變氨基酸位于ＲＨ抗原分子細(xì)胞膜外部分．.RH血型專題知識(shí)專家講座第12頁部分Ｄ危險(xiǎn)性許多部分Ｄ紅細(xì)胞與抗－Ｄ直接反應(yīng)，但有些需要用ＩＡＴ才能判定，細(xì)胞反應(yīng)強(qiáng)度不一樣，取決于試劑制造商．部分Ｄ個(gè)體是能夠產(chǎn)生抗－Ｄ，所以必須接收Ｄ－血液，在日常工作中許多部分Ｄ都被定為Ｄ＋，往往在產(chǎn)生抗體以后才被發(fā)覺．RH血型專題知識(shí)專家講座第13頁DEL型(D放散型)鹽水介質(zhì)陰性,IAT檢測陰性,但吸收放散試驗(yàn)陽性.紅細(xì)胞上D抗原數(shù)目比弱Ｄ還要少,紅細(xì)胞上D抗原質(zhì)量也有改變一些ＤＥＬ型紅細(xì)胞Ｄ抗原缺失一些表位，能夠產(chǎn)生抗Ｄ抗體．.第九外顯子堿基突變形成.RH血型專題知識(shí)專家講座第14頁經(jīng)典Ｄ抗原密度比較抗原型別紅細(xì)胞上Ｄ抗原數(shù)正常Ｄ陽性個(gè)體10.000-30.000部分Ｄ型個(gè)體８３００WeakD型個(gè)體３０－６０００DEL型個(gè)體＜３０RH血型專題知識(shí)專家講座第15頁各種試驗(yàn)對應(yīng)試劑血型血清學(xué)分子生物學(xué)單克隆抗-DPCR試劑盒（商品化）IgMIgG自行設(shè)計(jì)引物（難度大）IgM+IgG多克隆抗-D

怎樣用？何時(shí)用？能處理什么？D抗原檢測方法RH血型專題知識(shí)專家講座第16頁RHD血型判定流程鹽水介質(zhì)檢測陽性陰性抗人球蛋白介質(zhì)陽性陰性陽性加做直抗試驗(yàn)吸收放散試驗(yàn)陰性放散試驗(yàn)再次定型陽性陰性DelPCR-SSP受檢標(biāo)本W(wǎng)eakD/PartialD測序RH血型專題知識(shí)專家講座第17頁RHD基因進(jìn)化RHAGRHceRHce和RHce復(fù)制體RHCE基因和RHD基因RH血型專題知識(shí)專家講座第18頁RHD基因進(jìn)化RHD基因祖先基因是Rh相關(guān)糖蛋白基因(RHAG基因),該蛋白有一條N多糖鏈.RHAG和RHD、RHCE有38%同源性，在紅細(xì)胞上含有相同拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)，由位于6號(hào)染色體上單個(gè)基因編碼。RHAG不含有多態(tài)性，所以它不攜帶血型抗原，不過它對RHD和RHCE定向到膜上有主要作用。沒有RHAG，RHCE和RHD都不能表示到紅細(xì)胞膜上.在紅系分化中先表示RHAG,然后表示RHCE,再表示RHD.RHAG基因首先復(fù)制形成Rhce基因,第二次復(fù)制發(fā)生在同一染色體短臂,形成“Rhce復(fù)制體”,隨即Rhce基因和其復(fù)制體沿不一樣路徑進(jìn)化,最終形成現(xiàn)今人類RHD基因,而RHce基因經(jīng)過突變或與RHD基因發(fā)生交換形成常見RhceRHcERHCeRHCE基因.RH血型專題知識(shí)專家講座第19頁RhD基因結(jié)構(gòu)RH基因結(jié)構(gòu)當(dāng)前已確定:位于染色體1p34.3-36.1,主要由RHD和RHCE兩個(gè)基因組成.這兩個(gè)基因3,端相對,相隔約有3萬bp.在它們之間為小膜蛋白1基因(SMP1),即SMP1基因.在RHD基因兩側(cè)各有一段約9000bp側(cè)翼序列片段,稱為RH盒子(Rhesusbox)序列,5端為上游R盒子(Upstream),長9142bp,3端為下游R盒子(DownstreamRhesusbox),長為9145bp,上下游盒子方向相同,與RHD基因一致.RHD和RHCE基因各由10個(gè)外顯子組成,二者有43個(gè)堿基有差異,其中第1、2、8外顯子序列基本一致，所以絕大多數(shù)RHD基因測定中，引物選擇擴(kuò)增RHD基因3-7以及9-10外顯子。通常只有D抗原陽性個(gè)體擁有一或二條RHD基因，而D陰性個(gè)體則缺失RHD基因，RHD陰性個(gè)體RHD基因缺失發(fā)生在上下游盒子之間，并形式一個(gè)融合（HybridRhesusbox)。RH血型專題知識(shí)專家講座第20頁RHD基因locusRH血型專題知識(shí)專家講座第21頁RHＤ和ＲＨＣＥ基因結(jié)構(gòu)圖1p36.11RH血型專題知識(shí)專家講座第22頁RHD等位基因形成基因缺失：RHD基因完全缺失形成RHD(-)單倍體；基因交換：因?yàn)镽HD基因和RHCE基因在RH座位上方向相反，二個(gè)同源基因之間發(fā)生交換機(jī)率增大，通常RHCE基因?yàn)楣┱呋?，RHD為受者基因；堿基變異：包含突變、缺失、mRNA拼接位點(diǎn)變異等。RH血型專題知識(shí)專家講座第23頁近幾年研究發(fā)覺D基因結(jié)構(gòu)存在種族差異,RhD(-)白種人中,D基因是完全缺失.在黑人中,RHD（-）個(gè)體，D基因卻完整存在，66%D基因在第3內(nèi)含子和第4外顯子之間有37bp插入片斷，造成了抗原不表示。黃種人中RhD(-)個(gè)體表現(xiàn)出顯著多態(tài)性.RH血型專題知識(shí)專家講座第24頁黃種人D基因多態(tài)性D基因完全缺失(10個(gè)外顯子全部缺失)造成了D抗原不表示.D基因部分缺失,(有兩邊缺失和中間缺失)造成D抗原不表示.D基因完整存在,(堿基突變),造成D抗原不表示.RH血型專題知識(shí)專家講座第25頁RHD基因陽性、D抗原陰性等位基因

基因交換形成融合等位基因RH血型專題知識(shí)專家講座第26頁RHD基因陽性、D抗原陰性等位基因

堿基變異形成等位基因RH血型專題知識(shí)專家講座第27頁Del等位基因

RH血型專題知識(shí)專家講座第28頁AllDELallelesareassociatedwithCeRH血型專題知識(shí)專家講座第29頁RhDel型基因變異K409K又叫1227A,指第九外顯子最終一個(gè)基因G>A突變，也是第九外顯子與第九內(nèi)含子拼接位點(diǎn)堿基突變，即使４０９位置氨基酸末改變，不過剪接點(diǎn)突變造成產(chǎn)生了不正常Ｄ抗原．RH血型專題知識(shí)專家講座第30頁弱D等位基因（５０種）RH血型專題知識(shí)專家講座第31頁部分D等位基因RH血型專題知識(shí)專家講座第32頁

中國人RhD分子背景RH血型專題知識(shí)專家講座第33頁中國人RhD分子背景D陽性個(gè)體RHD基因與在其它民族中報(bào)道正常RHD基因序列相同；真實(shí)D陰性中國人中以RHD-CE(2-9)-D2等位基因?yàn)橹鳎嚷蕿?0.5%；同時(shí)還存在比率不低個(gè)體因堿基變異造成RHD基因ORF錯(cuò)位，造成正常D抗原不能表示。在真實(shí)D陰性中國人中RHD基因總陽性率為15.8%RH血型專題知識(shí)專家講座第34頁中國人RhD分子背景中國人Del個(gè)體主要攜帶RHD1227A等位基因(K409K)。該等位基因是Genbank收錄第一個(gè)Del等位基因(GenBank統(tǒng)計(jì)AF390110)，但也是中國人中唯一發(fā)覺Del等位基因，而在歐洲人中除RHD1227A等位基因外，還觀察到另外幾個(gè)Del等位基因弱D表型個(gè)體當(dāng)前發(fā)覺主要是弱D15型、還發(fā)覺了2例RHD1227A等位基因攜帶者；部分D表型觀察到DVa(Hus)和DVIIII型。

RH血型專題知識(shí)專家講座第35頁中國人RHD等位基因RH血型專題知識(shí)專家講座第36頁RHD基因分型技術(shù)應(yīng)用血清學(xué)定型結(jié)果難以判定,為了預(yù)防一些弱D被誤定為RH-,用分子生物學(xué)檢測作為輔助伎倆；D抗原弱陽性個(gè)體弱D型或部分D型別判定；經(jīng)過羊水預(yù)測胎兒D表型；慢性屢次輸血患者、大量輸血患者、同種免疫或本身免疫溶血性貧血患者、以及紅細(xì)胞直接抗球蛋白試驗(yàn)陽性患者D抗原表型檢測和糾正；對于中國人，判定Del表型RH血型專題知識(shí)專家講座第37頁RH血型專題知識(shí)專家講座第38頁中國人RHD未來研究方向

真實(shí)D陰性個(gè)體RHD基因序列研究，深入了解產(chǎn)生中國人D抗原陰性特征分子機(jī)制，發(fā)覺更多RHD等位基因：D抗原弱表現(xiàn)型個(gè)體分子背景研究，用以了解中國人弱D和部分D表型常見型及頻率。當(dāng)前在中國人中觀察到弱D型是弱Ｄ１５型和二種部分D型，而國際上報(bào)道弱D型確有很各種，而不一樣分子機(jī)制形成其它部分D表型也很多．RH血型專題知識(shí)專家講座第39頁中國人RHD未來研究方向相關(guān)Del研究，Del在中國人中比率非常高，綜合近幾年文件，在經(jīng)IAT確認(rèn)D陰性群體中平均為28.1%。盡管當(dāng)前國家沒有要求DEL型血液不能供給給臨床,不過從理論上來講,DEL型是有可能刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體。稀有血型分子生物學(xué)研究和調(diào)查。RH血型專題知識(shí)專家講座第40頁1.RhD陽性/陰性，同型輸注2.D變異型輸血2.1弱D圍產(chǎn)期婦女被誤定為D-，而給予了無須要RHD免疫球蛋白，一樣是無害2.2弱D血液被誤定為D-,而輸注給了D-患者，要注意，盡管弱D抗原免疫原性較弱，但也可能使D-者致敏2.3弱D1.2.3型產(chǎn)生抗-