中藥質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)模式

中藥質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)模式第一頁(yè)，共43頁(yè)。1中藥質(zhì)控現(xiàn)狀

中藥質(zhì)量控制根本目標(biāo)：保證中藥安全有效。而中藥質(zhì)控的現(xiàn)行目標(biāo)：保證中藥材或制劑的一致性和穩(wěn)定性。目前中藥內(nèi)在質(zhì)量控制模式基本上是“惟成分論”，即通過(guò)對(duì)個(gè)別指標(biāo)性成分進(jìn)行定性或/和定量分析來(lái)實(shí)現(xiàn)質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)。

第二頁(yè)，共43頁(yè)。中藥與化學(xué)藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的根本區(qū)別:

化學(xué)藥品：分子結(jié)構(gòu)清楚，構(gòu)效關(guān)系明確，鑒別、檢查、含量測(cè)定可以直接作為療效評(píng)價(jià)的指標(biāo)。中藥：在中醫(yī)理論指導(dǎo)下，尤其是復(fù)方制劑，檢測(cè)任何一種活性成分均不能體現(xiàn)其整體療效?，F(xiàn)行中藥質(zhì)量控制的基本模式是參照國(guó)外植物藥的質(zhì)量控制方法，借鑒化學(xué)藥品質(zhì)量控制的模式建立的。

1中藥質(zhì)控現(xiàn)狀

第三頁(yè)，共43頁(yè)。1中藥質(zhì)控現(xiàn)狀中藥化學(xué)指紋圖譜技術(shù)對(duì)中藥質(zhì)量控制有一定的促進(jìn)作用，但中藥化學(xué)成分變化因素較為復(fù)雜，選擇合理的指紋信息難度較大，其重現(xiàn)性、耐受性及譜效關(guān)系等還有待深入研究。中藥化學(xué)指紋圖譜實(shí)質(zhì)上是中藥部分成分的“化學(xué)條碼”，與安全性、有效性關(guān)聯(lián)意義不大。第四頁(yè)，共43頁(yè)。1中藥質(zhì)控現(xiàn)狀如冬蟲(chóng)夏草測(cè)定腺苷含量、板藍(lán)根檢測(cè)精氨酸,既不是其主要有效成分,也不是其專屬性成分,對(duì)其中藥質(zhì)量控制幾乎沒(méi)有實(shí)際意義。即使是檢測(cè)有效成分,往往量效關(guān)系不明顯：如人參的人參總皂苷：人參(主根)約含2%,

人參須約含5%,

人參葉可達(dá)10%。第五頁(yè)，共43頁(yè)。1中藥質(zhì)控現(xiàn)狀大部分中藥的有效成分仍未得以闡明。據(jù)統(tǒng)計(jì)，《中國(guó)藥典》2005年版(一部)共收載中藥材(含飲片和提取物)572種，其中只有60%有過(guò)化學(xué)成分研究報(bào)道，約20%進(jìn)行過(guò)較系統(tǒng)的化學(xué)成分研究，至今已闡明其有效成分的品種不到5%。第六頁(yè)，共43頁(yè)。1中藥質(zhì)控現(xiàn)狀中藥個(gè)別或部分指標(biāo)性成分一致性和穩(wěn)定性≠制劑質(zhì)量一致性和穩(wěn)定性≠臨床上安全性和有效性！第七頁(yè)，共43頁(yè)。2中藥質(zhì)控方向目前中藥質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)的主要手段（《中國(guó)藥典》2005年版一部基本上是用這兩種方法）：形性檢測(cè)法＋化學(xué)檢測(cè)法質(zhì)控策略探索：多元化中藥質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)模式

形性檢測(cè)＋化學(xué)檢測(cè)＋生物檢測(cè)（三位一體）第八頁(yè)，共43頁(yè)。2中藥質(zhì)控方向中藥質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)的方法可以簡(jiǎn)單概括為：形性檢測(cè)法、化學(xué)檢測(cè)法、生物檢測(cè)法。形性檢測(cè)主要指以藥材的形狀、大小、顏色、氣味、表面特征、質(zhì)地、斷面等表觀性狀來(lái)判別藥材的種類和真?zhèn)危?duì)部分藥材輔以簡(jiǎn)單的理化試驗(yàn)。第九頁(yè)，共43頁(yè)。2中藥質(zhì)控方向化學(xué)檢測(cè)主要是利用藥材所含化學(xué)成分的某些物理性質(zhì)或化學(xué)反應(yīng)來(lái)對(duì)中藥進(jìn)行定性和定量分析，一般可用于含不同化學(xué)成分的性狀相似而又無(wú)明顯顯微特征的藥材。生物檢測(cè)是利用生物體包括整體動(dòng)物、離體組織、器官、細(xì)胞和微生物等評(píng)估藥物生物活性(包括藥效和毒性)的一種方法。第十頁(yè)，共43頁(yè)。中藥質(zhì)控方向

2.1形性檢測(cè)

從主觀性和模糊性（趨向）組織形態(tài)特征三維化、可視化、定量化。

突破傳統(tǒng)的二維平面局限，借助計(jì)算機(jī)圖形學(xué)、計(jì)算機(jī)三維重建、體視學(xué)和圖像分析系統(tǒng)等手段，將生藥組織形態(tài)學(xué)研究推向三維化、可視化、定量化。第十一頁(yè)，共43頁(yè)?！皵?shù)字可視化中藥”技術(shù)（中藥計(jì)算機(jī)三維重建與顯示技術(shù)）（中藥計(jì)算機(jī)三維仿真技術(shù)）組織連續(xù)切片圖形量化得到深度信息（將物體不同切片上的二維圖像按照切片的空間位置關(guān)系依次疊加排列而組成物體的三維數(shù)據(jù)；再利用計(jì)算機(jī)圖像處理技術(shù)、圖形生成理論及視覺(jué)心理學(xué)原理，在二維平面上形成直觀地顯示出具有生動(dòng)性和立體感的三維圖像。第十二頁(yè)，共43頁(yè)?！皵?shù)字可視化中藥”技術(shù)應(yīng)用全方位刻畫(huà)中藥材形態(tài)結(jié)構(gòu)、甄別道地與非道地藥材等提供三維立體動(dòng)態(tài)的鑒定技術(shù)和圖像資料；形象生動(dòng)地再現(xiàn)中藥和植物的外觀和微觀的立體結(jié)構(gòu)；形象生動(dòng)地再現(xiàn)中藥和植物的外觀和微觀的立體結(jié)構(gòu)以及組織細(xì)胞的空間關(guān)系，有助于揭示植物和中藥材的生長(zhǎng)發(fā)育規(guī)律、次生代謝產(chǎn)物積累分布動(dòng)態(tài)、中藥材品質(zhì)變化規(guī)律等。第十三頁(yè)，共43頁(yè)。比如，可以從不同來(lái)源、不同產(chǎn)地（道地）、不同規(guī)格（三七多少頭的、人參多少支的）、導(dǎo)管的長(zhǎng)度、木質(zhì)化的藥材木質(zhì)化的程度、油細(xì)胞的大小多少、淀粉粒的多少等等，分析出藥材的質(zhì)量，使過(guò)去經(jīng)驗(yàn)鑒別的東西變成了形象化的東西。第十四頁(yè)，共43頁(yè)。2中藥質(zhì)控方向

2.1形性檢測(cè)不同種類不同產(chǎn)地的姜黃屬植物葉：供試材料處理:撕取表皮制片。其中每份材料選取3－5片葉子,每片葉子撕取上下表皮各5－10個(gè)視野。一般在葉片中部中脈附近撕取表皮組織。觀測(cè)：上表皮氣孔，下表皮氣孔；上表皮副衛(wèi)細(xì)胞，下表皮副衛(wèi)細(xì)胞；上表皮細(xì)胞，下表皮細(xì)胞。第十五頁(yè)，共43頁(yè)。2中藥質(zhì)控方向

2.1形性檢測(cè)

圖像分析操作:①圖像采集,將制片置于配有CCD攝像機(jī)的顯微鏡下觀察采樣②圖像預(yù)處理,包括編輯、輪廓修飾、灰度變換、邏輯運(yùn)算和二值化操作等,以便獲得清晰完整的目標(biāo)灰度圖像;③參數(shù)測(cè)定,包括面數(shù)密度(個(gè)/mm2)、截面積(μm2)、周長(zhǎng)(μm)、最大直徑(μm)、長(zhǎng)寬比、圓形度、圓球度等參數(shù)。④數(shù)據(jù)倍數(shù)轉(zhuǎn)換,求出目標(biāo)實(shí)際大小值和密度值;⑤采用系統(tǒng)聚類分析和主成分分析進(jìn)行模式識(shí)別處理。第十六頁(yè)，共43頁(yè)?！按笮　北碚鳎杭?xì)胞直徑、面積、體積、體密度，平均間距等；“質(zhì)地”表征：細(xì)胞體積、密度、壁厚，纖維和石細(xì)胞密度等；“粉性”表征：淀粉粒和木質(zhì)化細(xì)胞的數(shù)密度、體密度、體積等；“油性”表征：油細(xì)胞數(shù)密度、體密度、油滴面積、體積等)。

例如第十七頁(yè)，共43頁(yè)。2中藥質(zhì)控方向

2.1形性檢測(cè)大小、密度和形狀因子（3大類參數(shù)）體視學(xué)原理計(jì)算機(jī)圖像技術(shù)組織細(xì)胞顯微圖像的形態(tài)特征

數(shù)值分類歸納出其形態(tài)學(xué)特征

建立分類鑒定譜系圖第十八頁(yè)，共43頁(yè)。2中藥質(zhì)控方向

2.2化學(xué)檢測(cè)

采用HPLC、MS、NMR、IR、UV、GC、CE等及其聯(lián)用技術(shù)進(jìn)行化學(xué)指紋圖譜定性和有效成分或指標(biāo)成分定量，結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)、人工智能等技術(shù)建立中藥化學(xué)質(zhì)量模式識(shí)別系統(tǒng)，表征中藥化學(xué)組分群特征優(yōu)勢(shì)：a檢測(cè)中藥材及其產(chǎn)品的真?zhèn)危?/p>

b區(qū)分藥材的不同部位；

d追蹤制劑的工藝過(guò)程及某些化學(xué)成分的變化；

c監(jiān)測(cè)原料與成品之間、成品批間質(zhì)量的穩(wěn)定性、一致性。

第十九頁(yè)，共43頁(yè)。2中藥質(zhì)控方向

2.3生物檢測(cè)生物檢測(cè)

將生物檢測(cè)方法引入中藥質(zhì)量控制與評(píng)價(jià)體系，不僅可以輔助鑒定真?zhèn)蝺?yōu)劣，又可不同程度地關(guān)聯(lián)安全性和有效性，尤其在無(wú)法對(duì)中藥中未知復(fù)雜成分用成分檢控的方法控制其質(zhì)量時(shí)，更顯其優(yōu)越性。第二十頁(yè)，共43頁(yè)。2中藥質(zhì)控方向

2.3生物檢測(cè)生物效價(jià)檢測(cè)：是指在嚴(yán)格控制的試驗(yàn)條件下，通過(guò)比較標(biāo)準(zhǔn)品和供試品對(duì)生物體或離體器官與組織的特定生物效應(yīng)，從而評(píng)價(jià)和控制供試品的質(zhì)量或活性。適用于結(jié)構(gòu)復(fù)雜或理化方法不能測(cè)定其含量、或者理化測(cè)定不能反映其臨床生物活性的藥物。第二十一頁(yè)，共43頁(yè)。2中藥質(zhì)控方向

2.3生物檢測(cè)中國(guó)藥典2005采用了生物效價(jià)檢測(cè)方法控制水蛭質(zhì)量，本品每1g含抗凝血酶活性應(yīng)不低于16.0U。比濁法測(cè)定紅霉素生物效價(jià)。基于抗菌效價(jià)檢測(cè)的板藍(lán)根藥材品質(zhì)評(píng)價(jià)方法的研究。生物效價(jià)檢測(cè)研究進(jìn)展（3000字）（50%外文參考文獻(xiàn)）中藥質(zhì)量控制中的生物效價(jià)檢測(cè)的作用與進(jìn)展第二十二頁(yè)，共43頁(yè)。例：基于神經(jīng)氨酸酶活性檢測(cè)的板藍(lán)根品質(zhì)的生物評(píng)價(jià)采用流感病毒神經(jīng)氨酸酶

(NA)體外活性熒光檢測(cè)法測(cè)定板藍(lán)根的NA抑制生物活性,并建立板藍(lán)根抗病毒生物效價(jià)檢測(cè)方法。研究表明板藍(lán)根具有抑制NA的活性,IC50=(0.90±0.20)mg·mL?1(相當(dāng)于生藥),其量效曲線形狀與陽(yáng)性對(duì)照藥磷酸奧司他韋相似,提示二者對(duì)NA的抑制可能具有相同的作用方式。第二十三頁(yè)，共43頁(yè)。采用“質(zhì)反應(yīng)平行線”法設(shè)計(jì)和優(yōu)化的板藍(lán)根抗病毒生物效價(jià)檢測(cè)方法,重復(fù)性較好(RSD=5.78%),實(shí)際樣品檢測(cè)結(jié)果均能通過(guò)可靠檢驗(yàn)(偏離直線P>0.05、偏離平行P>0.05)。研究結(jié)果表明,所建立的生物效價(jià)檢測(cè)方法可以作為板藍(lán)根品質(zhì)生物評(píng)價(jià)的方法之一。第二十四頁(yè)，共43頁(yè)。

當(dāng)前,板藍(lán)根的質(zhì)量控制方法主要是依托常規(guī)性狀鑒別和精氨酸的定性檢識(shí),

該方法既難以做到客觀定量,又與板藍(lán)根的藥理活性幾無(wú)關(guān)聯(lián),也就難以保證它的臨床有效性。

生物效價(jià)檢測(cè)方法與常規(guī)鑒別方法比較不僅在結(jié)果上具有一致性,而且具有靈敏度高、重復(fù)性好、操作簡(jiǎn)單、客觀、可定量、快捷等優(yōu)點(diǎn)。本方法的建立提高了板藍(lán)根的質(zhì)量控制水平,并且能夠?yàn)榭共《绢愔兴庂|(zhì)量生物控制的研究提供參考。第二十五頁(yè)，共43頁(yè)。2中藥質(zhì)控方向

2.3生物檢測(cè)目前生物效價(jià)檢測(cè)的常用方法有：酶活力、凝集素活性、抗病毒測(cè)試、抗菌活性、抗炎活性等。這些方法的專屬性較強(qiáng)，而通用性較差，有限的實(shí)驗(yàn)條件難以同時(shí)滿足幾百甚至幾千種不同中藥及中藥制劑的質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)。另：生物熱動(dòng)力學(xué)方法第二十六頁(yè)，共43頁(yè)。2中藥質(zhì)控方向

2.3生物檢測(cè)生物效價(jià)檢測(cè)方法選取以下原則：(1)“相關(guān)性”是指所選取的檢測(cè)方法應(yīng)與藥物的功能主治或現(xiàn)代藥理作用有關(guān)，從而保證檢測(cè)結(jié)果與臨床療效的相關(guān)性；(2)“重復(fù)性”是指在嚴(yán)格規(guī)定的條件下，檢測(cè)結(jié)果應(yīng)有一定的重復(fù)性，以保證試驗(yàn)的延續(xù)性和可重復(fù)性；(3)“靈敏性”是指所選取的檢測(cè)指標(biāo)應(yīng)能客觀體現(xiàn)反應(yīng)程度隨劑量的變化而有顯著的改變；第二十七頁(yè)，共43頁(yè)。2中藥質(zhì)控方向

2.3生物檢測(cè)(4)“適用性”是指選取的檢測(cè)方法應(yīng)快速、高效、通用性好、易于推廣；(5)“定性定量”是指所選取的檢測(cè)方法最好應(yīng)具有定性鑒別(生物效應(yīng)譜)和定量分析(生物效價(jià)值)的雙重特性。第二十八頁(yè)，共43頁(yè)。2中藥質(zhì)控方向

2.3生物檢測(cè)生物效價(jià)檢測(cè)方法之一：“熱譜圖”（基于生物熱動(dòng)力學(xué)的微量熱分析方）測(cè)定不同中藥與機(jī)體相互作用的能量轉(zhuǎn)移和熱變化，將中藥內(nèi)在的藥性品質(zhì)表達(dá)為特征“指紋”——生物熱活性譜線圖(簡(jiǎn)稱“熱譜圖”或“生物效應(yīng)譜”)

，可對(duì)生物體在生長(zhǎng)代謝過(guò)程中的相關(guān)信息進(jìn)行定性、定量分析，有較強(qiáng)的專屬性、靈敏性和重現(xiàn)性，同時(shí)亦可按生物統(tǒng)計(jì)學(xué)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，屬于生物效價(jià)檢定中的量反應(yīng)。第二十九頁(yè)，共43頁(yè)。2中藥質(zhì)控方向

2.3生物檢測(cè)

生物熱動(dòng)力學(xué)方法——“熱譜圖”原理：(1)生物體的生長(zhǎng)代謝都伴有能量的轉(zhuǎn)移和熱變化，并在一定的閾值內(nèi)呈規(guī)律性波動(dòng)；(2)中藥的生物活性實(shí)質(zhì)上就是中藥藥效物質(zhì)對(duì)生物體生長(zhǎng)代謝的干預(yù)作用，這種干預(yù)作用不可避免地將影響生物體的能量轉(zhuǎn)移和產(chǎn)熱變化；第三十頁(yè)，共43頁(yè)。2中藥質(zhì)控方向

2.3生物檢測(cè)(3)通過(guò)測(cè)定能量和產(chǎn)熱的變化，可以間接地了解生物體的生長(zhǎng)代謝變化，從而判斷藥物的生物活性情況；(4)生物熱活性檢測(cè)是以體系的狀態(tài)參數(shù)為研究對(duì)象，能實(shí)時(shí)、在線、快速地刻畫(huà)機(jī)體的表觀狀態(tài)及其變化情況。第三十一頁(yè)，共43頁(yè)。2中藥質(zhì)控方向

2.3生物檢測(cè)“熱譜圖”特點(diǎn)：“普適性好”即是指對(duì)不同的研究對(duì)象(如微生物、組織、細(xì)胞、分子、基因)，均只需用：一個(gè)方法(生物熱活性測(cè)定方法)、一臺(tái)儀器(生物熱活性檢測(cè)儀)、一套指標(biāo)(生物熱譜圖和熱動(dòng)力學(xué)參數(shù))第三十二頁(yè)，共43頁(yè)。2中藥質(zhì)控方向

2.3生物檢測(cè)“實(shí)時(shí)在線”是指生物熱活性檢測(cè)儀有如多導(dǎo)生理檢測(cè)儀，可以在第一時(shí)間及時(shí)地直觀地反映生命體系的宏觀狀態(tài)變化；“靈敏、準(zhǔn)確”是指生物熱活性檢測(cè)所需的藥物樣品量少，一般是毫克級(jí)，同時(shí)由于研究對(duì)象和環(huán)境的可控性好、操作步驟簡(jiǎn)單、自動(dòng)化程度高，所以方法的精密度、重現(xiàn)性和穩(wěn)定性較好；第三十三頁(yè)，共43頁(yè)。2中藥質(zhì)控方向

2.3生物檢測(cè)“高效”是指一臺(tái)生物熱活性檢測(cè)儀可擁有8—16個(gè)檢測(cè)通道，甚至更多，可同時(shí)對(duì)多個(gè)研究對(duì)象或目標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)和分析，降低成本。第三十四頁(yè)，共43頁(yè)。中藥質(zhì)控模式

——基于道地藥材和生物效價(jià)檢測(cè)的中藥質(zhì)控模式3.1道地藥材在中藥生產(chǎn)質(zhì)量控制上的歷史和現(xiàn)實(shí)意義道地藥材來(lái)源于特定產(chǎn)地且傳統(tǒng)公認(rèn)的名優(yōu)正品藥材,是優(yōu)質(zhì)中藥材的代名詞,也是歷代中醫(yī)評(píng)價(jià)中藥材品質(zhì)的一個(gè)綜合而物質(zhì)化標(biāo)準(zhǔn)。

以道地藥材為參照物,克服了單一對(duì)照品的不足,有利于體現(xiàn)中藥多成分、多靶點(diǎn)、多環(huán)節(jié)、整合作用的特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì)。第三十五頁(yè)，共43頁(yè)。3中藥質(zhì)控模式

——基于道地藥材和生物效價(jià)檢測(cè)的中藥質(zhì)控模式3.2道地優(yōu)級(jí)藥材對(duì)照品采集和標(biāo)化的技術(shù)要求3.2.1原料的選擇應(yīng)當(dāng)選擇道地核心產(chǎn)區(qū)、主流優(yōu)良品種、優(yōu)等商品規(guī)格的品種，同時(shí)還要有嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程從根本上保證對(duì)照品原料的均一性、穩(wěn)定性、代表性和可延性。第三十六頁(yè)，共43頁(yè)。3.2.2標(biāo)化程序必須保證標(biāo)化的程序合法、方法科學(xué)。參照世界衛(wèi)生組織的有關(guān)指導(dǎo)原則，應(yīng)該在藥典委員會(huì)指導(dǎo)下，確定牽頭單位，實(shí)行多實(shí)驗(yàn)室協(xié)作標(biāo)化。第三十七頁(yè)，共43頁(yè)。3.2.3量值的溯源性

新建立的生物效價(jià)檢測(cè)方法必須按照藥典要求進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。標(biāo)化用基準(zhǔn)物質(zhì)應(yīng)與被標(biāo)物質(zhì)有相同的特性值，必須是WHO、中國(guó)藥品生物制品檢定所等法定部門(mén)制備或賦值的相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。標(biāo)定結(jié)果均應(yīng)照“生物檢定統(tǒng)計(jì)法-量反應(yīng)