天然藥化實(shí)驗(yàn)

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實(shí)驗(yàn)一天然產(chǎn)物化學(xué)成分系統(tǒng)預(yù)試驗(yàn)

天然產(chǎn)物中所含的化學(xué)成分種類很多，在深入研究之前應(yīng)首先了解其中含有哪些類型的化學(xué)成分，如生物堿、皂苷、黃酮類等等。這就需要進(jìn)行各類化學(xué)成分的系統(tǒng)定性預(yù)試驗(yàn)。或根據(jù)研究的需要進(jìn)行單項(xiàng)預(yù)試法來初步判斷。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求

掌握未知成分的天然產(chǎn)物是怎樣初步提取分離的，熟悉各主要成分的試管試驗(yàn)、沉淀反應(yīng)和紙層析、薄層層析的方法并根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果判斷含有什么類型的化學(xué)成分。二、基本原理

利用各類成分的顏色反應(yīng)和沉淀反應(yīng)，對(duì)天然產(chǎn)物的提取液進(jìn)行檢查可以初步判斷其中的化學(xué)成分。由于提取液大多數(shù)顏色較深，影響對(duì)顏色變化的觀察，可以使用薄層層析（TLC）或紙層析（PC）等方法對(duì)天然產(chǎn)物的提取液進(jìn)行初步分離，再進(jìn)一步檢查。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：

利用不同成分在各種溶劑中的溶解度的不同，一般可采用以下3種溶劑分別提取，試驗(yàn)。

1．水浸液：取中草藥粗粉5g加水60ml，在50~60℃的水浴上加熱1小時(shí)，過濾，濾液進(jìn)行下列試驗(yàn)。

檢查項(xiàng)目糖*1、酚醛縮合反應(yīng)*2、菲林試劑試劑名稱酚類鞣質(zhì)△1%FeCl8試劑△1tCl8試劑苷類或多糖*1、酚醛縮合反應(yīng)皂苷生物堿*

*2、加6NHCl酸化，加熱煮沸數(shù)分鐘，冷后仔細(xì)觀察有無絮狀沉淀*3、菲林試劑，觀察水解前后Cu2O沉淀量有無增加。*泡沫試驗(yàn)*1、碘化鉍鉀試劑*2、硅鎢酸試劑在試管進(jìn)行，△在濾紙或硅膠CMC-Na薄層板上進(jìn)行，下同。

?糖鑒定

（1）α-萘酚-硫酸試劑（Molish反應(yīng)）檢查還原糖。溶液I：10％α-萘酚乙醇溶液。溶液II：硫酸。

取1ml樣品的稀乙醇溶液或水溶液，加入溶液I2滴～3滴，混勻，沿試管壁緩緩加入少量溶液II，二液面交界處產(chǎn)生紫紅色環(huán)為陽性反應(yīng)。（2）斐林試劑檢查還原糖。

溶液I：6．93g結(jié)晶硫酸銅溶于100ml水中。溶液II：34．6g酒石酸鉀鈉、10g氫氧化鈉溶于100ml水中。

取1ml樣品熱水提取液，加入4滴～5滴用時(shí)配制的溶液I、II等量混合液，在沸水浴中加熱數(shù)分鐘，產(chǎn)生磚紅色沉淀為陽性反應(yīng)。

如檢查多糖和苷，取1ml樣品水提液，加入1m110%鹽酸溶液，在沸水浴上加熱10min，過濾，再用10％氫氧化鈉溶液調(diào)至中性，按上述方法檢查還原糖。

?酚類鑒定

（1）三氯化鐵試劑檢查酚類化合物、鞣質(zhì)1％～5％三氯化鐵水溶液或乙醇溶液，加鹽酸酸化。取1ml樣品的乙醇溶液，加入試劑1滴～2滴，顯綠、藍(lán)綠或暗紫色為陽性反應(yīng)。作色譜顯色劑用，噴灑后，顯綠或蘭色斑點(diǎn)為陽性。

2．乙醇提取液

取中草藥粗粉5g，加5~12倍量95%乙醇，在水浴上加熱回流提取1小時(shí)，過濾，濾液留2ml作（1）項(xiàng)試驗(yàn)，其余回收乙醇至無醇味，并濃縮成浸膏狀，浸膏分為二部分，一部分加少量2%HCL振搖溶過濾。分出酸液，作（2）項(xiàng)式驗(yàn)，附于濾紙上的一部分再以少量乙醇溶解，溶液作（3）項(xiàng)試驗(yàn)；另一部分浸膏以少量乙酸乙酯溶解，溶液置分液漏斗中加適量5%NaOH振搖，使酚性物質(zhì)及有機(jī)酸等轉(zhuǎn)入下層氫氧化鈉水溶液中，剩下的乙酸乙酯為中性部分，用蒸餾水洗去堿性即可備用，將乙酸乙酯液2~3ml，在水浴上蒸干，以1~2ml乙醇溶解作（4）項(xiàng)試驗(yàn)。

（1）項(xiàng)試驗(yàn)

檢查項(xiàng)目試劑名稱結(jié)果（2）項(xiàng)試驗(yàn)

檢查項(xiàng)目*酚類△1%FeCl3鞣質(zhì)△1%FeCl3生物堿1、碘化鉍鉀試劑2、硅鎢酸試劑3、苦味酸試劑**試劑名稱結(jié)果（3）項(xiàng)試驗(yàn)

檢查項(xiàng)目試劑名稱結(jié)果（4）項(xiàng)試驗(yàn)

黃酮△1、1%AlCl3試劑*蒽醌△1、10%KOH液△2、0.5%Mg(Ac)2試劑2、鹽酸鎂粉反應(yīng)檢查項(xiàng)目試劑名稱結(jié)果

3、石油醚提取液

*香豆素與萜類內(nèi)酯1、氨基安替比林—鐵氰化鉀呈色反應(yīng)取中草藥粗粉1g，加10ml石油醚（沸程60~90℃），放置2~3小時(shí)，過濾，濾液置表面皿上任其揮發(fā)，殘留物進(jìn)行下列試驗(yàn)：檢查項(xiàng)目試劑名稱結(jié)果

?黃酮類鑒定

（1）鹽酸-鎂粉試劑檢查黃酮（醇）、二氫黃酮（醇）類化合物

取1ml樣品的乙醇溶液，加入數(shù)毫克鎂粉，滴加數(shù)滴鹽酸，必要時(shí)水浴上微熱，顯紅-紫色為陽性反應(yīng)。（2）三氯化鋁試劑檢查有鄰二酚羥基或3-羥基、4-酮基或5-羥基、4-酮基的黃酮類化合物1％三氯化鋁乙醇溶液或5％三氯化鋁乙醇溶液。

噴灑前、后將薄層板置日光下和紫外光燈下觀察，呈黃色或黃綠色熒光為陽性反應(yīng)，也可在濾紙上或試管中進(jìn)行。

（3）醋酸鎂試劑檢查黃酮類，二氫黃酮類化合物，及羥基蒽醌類衍生物1％醋酸鎂甲醇溶液。

在濾紙或薄層板上，點(diǎn)1滴樣品醇溶液，揮去醇后，點(diǎn)1滴試劑于樣品斑點(diǎn)邊緣，加熱干燥，于紫外燈下觀察，黃酮類顯黃色熒光，二氫黃酮類呈天藍(lán)色熒光。顯橙紅色為大黃素型蒽醌，顯紫色為茜草型蒽醌。

?生物堿鑒定試劑

（1）改良碘化鉍鉀試劑（生物堿通用顯色劑）

溶液I：0.85g次硝酸鉍溶于10ml冰醋酸，加水40ml。溶液II：8g碘化鉀溶于20ml水中。溶液I和II等量混合，于棕色瓶中可以保存較長時(shí)間。目前市場上有碘化鉍鉀試劑可供直接配制：7.3g碘化鉍鉀、冰醋酸10ml加水60ml。

取1m1樣品的稀酸溶液加1滴～2滴試劑，產(chǎn)生桔紅色渾濁或沉淀為陽性反應(yīng)。如作薄層色譜顯色劑，取混合液1m1、醋酸2ml、水10ml混合即得。噴灑后呈桔紅色斑點(diǎn)為陽性反應(yīng)（2）苦味酸試劑（生物堿通用沉淀試劑）苦味酸1g溶于100ml水中。

取1ml樣品中性溶液，加入試劑1滴～2滴，產(chǎn)生黃色晶形沉淀。（3）硅鎢酸試劑（生物堿通用沉淀試劑）

1g硅鎢酸溶于20ml水中，加10％鹽酸使成pH2左右。

取1ml樣品的稀酸溶液，加入1滴～2滴試劑，產(chǎn)生白色至褐色沉淀為陽性反應(yīng)。四、藥品試劑：

*甾體或三萜類1、醋酐－濃硫酸試驗(yàn)揮發(fā)油和油酯石油醚提取液滴于濾紙片上，觀察有無油斑并在加熱后能否發(fā)揮中藥飲片每組每種8克?生物堿試劑

（1）碘化鉍鉀(Dragendorff)試劑：出現(xiàn)桔紅色或黃色沉淀。

（2）苦味酸(Hager)試劑，樣品液需調(diào)至中性后加試劑，出現(xiàn)黃色晶形沉淀。

（3）硅鎢酸(Bertrand)試劑：出現(xiàn)淡黃色或灰白色沉淀，在薄層板上應(yīng)時(shí)，加熱后出現(xiàn)黑色斑點(diǎn)。?酚類、鞣質(zhì)試劑

1tCl3水或乙醇試劑：墨綠色沉淀?氨基酸、蛋白質(zhì)試劑茚三酮(Ninnydrin)試劑?糖、多糖和苷試劑

（1）Molish試劑（液面交界處紫紅色環(huán)）：α-萘酚試劑（2）菲林反應(yīng)(Fehling試劑)（磚紅色沉淀）溶液Ⅰ：69.3克結(jié)晶硫酸銅溶于1000毫升水中。

溶液Ⅱ：349克灑石酸鉀鈉及氫氧化鈉100克，溶于1000毫升水中。皂苷試劑濃硫酸試劑黃酮類試劑鹽酸—鎂粉試劑醋酸鎂反應(yīng)1%三氯化鋁乙醇液香豆素試劑1%三氯化鐵水溶液

Gibb氏反應(yīng)：4-氨基安替比林-鐵氰化鉀(Emerson)4、玻璃儀器：（每2人或3人一組，每組一套）(1)試管10個(gè)，滴管2個(gè)，玻棒1支

（2）100ml圓底燒瓶一個(gè)，250ml圓底燒瓶一個(gè)，25cm球型或蛇型冷凝管一個(gè)，有機(jī)溶劑蒸餾回收裝置1套，50ml燒杯3個(gè)，25ml具塞錐形瓶（3）有孔白瓷板1個(gè)（4）濾紙，乳膠管、藥勺

儀器：（1）普通天平（2）分析天平（3）電水浴鍋五、思考題

實(shí)驗(yàn)二蘆丁的提取、分離及鑒定

一、目的要求

1．以蘆丁為實(shí)例學(xué)習(xí)黃酮類成分的提取分離方法。2．掌握用黃酮苷水解制取黃酮苷元的方法。3．了解黃酮類化合物的一般性質(zhì)。

二、基本原理

槐米系豆科屬植物槐樹SopHorajaponica.L.的花蕾，歷來作為止血藥，治療痔瘡、子宮出血、吐血、鼻出血，并有清肝瀉火，治療肝熱目赤，頭痛眩暈的功能。其主要化學(xué)成分為蕓香苷（蘆?。?，含量高達(dá)12％～20％，蕓香苷廣泛存在于植物中，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)含有蕓香苷的植物高達(dá)70種以上，尤以槐米和喬麥中含量最高。藥理實(shí)驗(yàn)證明蕓香苷有調(diào)節(jié)毛細(xì)血管滲透作用，臨床上用作毛細(xì)血管性止血藥，常作為高血壓癥的輔助用藥。

槐米中主要成分的物理性質(zhì)1．蕓香苷（蘆丁，rutin）：C27H30O16?3H2O，淡黃色針狀結(jié)晶，mpl74℃～178℃，無水物為188℃～190℃。溶解度：冷水中1：8000，熱水中l(wèi)：200，冷乙醇中1：300，熱乙醇中1：30，冷吡啶中1：12，微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、氯仿、石油醚等溶劑。易溶于堿液，呈黃色，酸化后又析出，可溶于硫酸和鹽酸，呈棕黃色，加水稀釋又析出。UV?EtOHmaxnm：259，299sh，359。

2．槲皮素（quercetin）：C15H10O7?2H2O，黃色結(jié)晶，mp313℃～314℃，無水物為316℃。溶解度：冷乙醇中1：290，沸乙醇中1：23，可溶于甲醇、乙酸乙酯、吡啶、丙酮等溶劑，不溶于水、乙醚、苯、氯仿、石油醚。UV?EtOHmaxnm：255，269sh，301sh，370。

OHHOO葡萄糖-鼠李糖OHOHO

蕓香苷（蘆丁，rutin）

1．蕓香苷分子中具有酚羥基，顯弱酸性，在堿水中成鹽增大溶解能力，用堿水為溶劑煮沸提取，提取液加酸酸化后又成為游離的蕓香苷而析出。利用蕓香苷對(duì)冷水和熱水的溶解度相差懸殊的特性進(jìn)行精制。

2．黃酮苷可通過酸水解得到