結(jié)核γ干擾素釋放試驗在結(jié)核病診斷中的價值

結(jié)核γ干擾素釋放試驗在結(jié)核病診斷中的價值

Summary：目的探究結(jié)核γ干擾素釋放試驗在結(jié)核病診斷中的價值。方法：選取2020年1月-2022年4月期間來我院進(jìn)行結(jié)核診治的患者120名，他們在院分別進(jìn)行TB-DNA、IGRA和X-PERT檢測，通過收集數(shù)據(jù)，比較這三種檢測結(jié)果的靈敏度和特異度。結(jié)果：對于結(jié)核患者檢測而言，TB-DNA,IGRA法和X-PERT法目前均仍是三種十分實用有效的結(jié)核檢測診斷方法，具備診斷特異性極強、靈敏度高等特點，其中IGRE檢測方法在靈敏度優(yōu)于TB-DNA，與x-pert相比無差異。Keys：TB-DNA法，IGRA法；X-PERT法，特異度；靈敏度Abstract:ObjectiveToexploreThevalueoftuberculosisgammainterferonreleasetestinthediagnosisoftuberculosis.MethodsfromJanuary2020toApril2022,morethan120TBpatientsweredetected,whichweretestedbyTB-DNA，IGRAandX-pert.Thedetectionspecificityandsensitivityofthelaboratoryofourhospitalwerecompared.Results:forthedetectionofTBpatients,TB-DNA,IGRAandX-Pertarestillthreeverypractical,effectiveandsafedetectionmethods.Theyhavethecharacteristicsofextremelystrongspecificityandhighsensitivity.ThesensitivityofIGRAarebetterthanTB-DNA,butnodifferencewithX-Pert.Keywords:TB-DNA；IGRA；X-Pert；specificity；sensitivity結(jié)核病主要由一種慢性或嚴(yán)重多型性結(jié)核桿菌造成的全身性高致傳染性疾病，據(jù)調(diào)查研究分析，美國是全球結(jié)核病暴發(fā)流行疫情影響最大國。目前我國，MTB累計感染到結(jié)核病的病人總死亡人數(shù)超過了約為5.5億，據(jù)每年統(tǒng)計結(jié)核病新發(fā)病例大約有930,000例，占到全球總病例的10%左右。在結(jié)核病的早期診斷中，結(jié)核菌素試驗和細(xì)菌培養(yǎng)是常用的初篩手段，但由于我國是卡介苗的接種大國，PPD試驗假陽性率高，需要借助其他檢測手段來進(jìn)行驗證，造成病人負(fù)擔(dān)加重和醫(yī)療資源的浪費。而細(xì)菌培養(yǎng)更是因為周期長，假陰性率高，很難滿足臨床要求。因此，在防治結(jié)核病方面，尋找一種更簡單、更快捷、更精確的檢測技術(shù)，是防治中國結(jié)核病的流行和傳播的關(guān)鍵[2]。1.材料與方法1.1研究對象選取2020年1月－2022年4月期間收治結(jié)核病患者120例，分別進(jìn)行了TB-DNA、IGRA、X-PERT檢測，所有參與本次實驗的患者均無艾滋等免疫相關(guān)疾病，并知悉并同意本次實驗開展，簽署知情同意書。1.2方法此次的檢驗工作過程雙方當(dāng)事人都同意需要事先征得現(xiàn)場所有臨床患者家屬知情或同意配合后進(jìn)行，所有送檢的臨床患者家屬都表示分別確認(rèn)將被接受以下3種檢測組法來進(jìn)行臨床檢測，室溫消化具體的工作及步驟的安排說明如下：①TB-DNA檢測：標(biāo)本類型為：口痰、肺泡灌洗液、胸腹水等。若口痰和支氣管灌洗液粘稠，用4%NaOH常溫液化過夜。核酸提取使用西安天隆科技有限公司的快速核酸提取試劑，按照說明書操作要求配套使用該公司半自動核酸提取儀。最后采用熒光PCR定性檢測標(biāo)本中TB-DNA。擴增試劑盒使用達(dá)安基因的TB-DNA試劑盒，操作過程中應(yīng)嚴(yán)格遵守說明書。結(jié)果以擴增曲線CT值作為判斷依據(jù)。②IGRA檢測，標(biāo)本類型為肝素抗凝的全血，使用萬泰凱瑞的結(jié)核分枝桿菌特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)檢測試劑盒，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，結(jié)果以發(fā)光儀光學(xué)系統(tǒng)測定樣本相對發(fā)光強度，與標(biāo)準(zhǔn)曲線相比較，計算出的相應(yīng)抗原濃度表示。③GeneX-Pert檢測：巢式實時熒光定量PCR。標(biāo)本類型和處理與TB-DNA類似，使用美國Cepheid公司的XpertMTB/RIF試劑盒，定性檢測標(biāo)本結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群DNA和利福平耐藥相關(guān)基因，結(jié)果以目的基因擴增曲線CT值作為判斷依據(jù)。1.3統(tǒng)計學(xué)處理統(tǒng)計學(xué)的研究與方法：數(shù)據(jù)可采用SPSS19.0軟件來進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析；靈敏度，特異度計數(shù)資料以（%）表示，采用配對X2檢驗，P值<0.05即為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。2.結(jié)果三種檢測方法的工作完成后，將檢測結(jié)果進(jìn)行比較，靈敏度方面，TB-DNA為76.72%，IGRA為90.52%，X-PERT為94.83%；特異度方面，三種檢測手段均為100%，靈敏度配對X2檢驗比較TB-DNA與IGRA和X-PERT均有差異（P=0.004<0.05）,而IGRA和X-PERT無差異（P=0.208>0.05）,如表1:表1三種檢測方法結(jié)果比較（僅對靈敏度進(jìn)行X2檢驗）TB-DNAIGRAX-PERT-+-+-+病患-404040病患+2789151056110靈敏度76.72%90.52%94.83%特異度100%100%100%X28.056P值0.004(<0.05)X21.587P值0.208(>0.05)結(jié)論結(jié)核病是一種對人類健康造成極大威脅的主要傳染病。根據(jù)統(tǒng)計，每十萬人中有459人患有活動性結(jié)核病[5]，目前，隨著年齡的增長，加上人口老化，活動性結(jié)核病的診斷變得越來越困難。目前臨床上常規(guī)的痰液病原學(xué)檢查，由于結(jié)核分枝桿菌的培養(yǎng)周期比較長，在目前的醫(yī)學(xué)技術(shù)水平下，其陽性檢出率并不高。在實驗室診斷中，除典型的排菌者外，結(jié)核分枝桿菌有時很難被檢測到，在日常診斷中，只有利用各種技術(shù)，直接或間接地找到結(jié)核分枝桿菌感染的證據(jù)，才能夠給臨床提供有價值的線索。近年來，IGRA、TB-DNA等技術(shù)在診斷結(jié)核病方面一直是專家和學(xué)者關(guān)注的焦點，目前國際上已有20多個國家和組織將其作為結(jié)核病診斷的方法在指南中發(fā)布[7]。結(jié)核菌感染的免疫反應(yīng)主要是細(xì)胞免疫，因此，在結(jié)核菌感染患者體內(nèi)存在結(jié)核菌抗原致敏的T淋巴細(xì)胞。當(dāng)這些T淋巴細(xì)胞抗原再次受到結(jié)核特異性抗原刺激時，活化的效應(yīng)T淋巴細(xì)胞就會產(chǎn)生IFNY等細(xì)胞因子，通過檢測培養(yǎng)上清液中FNY含量，可以推測體內(nèi)是否存在結(jié)核特異性T細(xì)胞，從而輔助診斷患者是否存在結(jié)核分枝桿菌感染。由于TB-IGRA采用的刺激劑ESAT-6和CFP10在所有結(jié)核分枝桿菌及致病性牛分枝桿菌中特異表達(dá)，而在卡介苗和大多數(shù)非結(jié)核分枝桿菌中不表達(dá)，所以TB-IGRA所用刺激劑與卡介苗菌株沒有交叉反應(yīng)，IGRA在卡介苗廣泛接種地區(qū)具有較低的假陽性率并且與結(jié)核病的高危因素具有較高的相關(guān)性，因此，該法在作為卡介苗接種大國的我國有較高的應(yīng)用價值。同時，有研究表明IGRA對不同部位的結(jié)核感染診斷沒有器官特異性。且采用外周血標(biāo)本進(jìn)行檢測，不接觸活菌，減少了人員感染的風(fēng)險，使用全自動化學(xué)發(fā)光儀器進(jìn)行檢測，減少了人為的干擾因素，使試驗更加標(biāo)準(zhǔn)化。本研究表明3種方法TB-DNA、IGRA、X-PERT在檢測結(jié)核病患者的特異度上沒有差異（均為100%），這可能與標(biāo)本數(shù)量較少有一定關(guān)系，但他們在靈敏度上的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。TB-DNA為76.72%，IGRA為90.52%，X-PERT為94.83%，X2檢驗比較TB-DNA與IGRA和X-PERT有差異（P=0.004<0.05）,而IGRA和X-PERT無差異（P=0.208>0.05），按理說X-PERT靈敏度最高，應(yīng)該是最好的，但其檢測結(jié)果依賴標(biāo)本中的細(xì)菌載量，可靠的結(jié)果依賴正確的標(biāo)本采集和處理，致使X-PERT的臨床應(yīng)用受到一定的限制，且儀器成本高，人員培養(yǎng)難度大，實驗過程復(fù)雜等等一系列因素。使其難以在基層醫(yī)院推行。IGRA有較高的靈敏度和特異度，測試時間短、速度快、準(zhǔn)確性高且使用外周血標(biāo)本進(jìn)行檢測，對于診斷隱匿性結(jié)核感染有其獨特的優(yōu)勢，對檢查依從性差的兒童結(jié)核病感染的診斷有較高的價值。TB-DNA檢測雖然價格親民，但檢測靈敏度相對稍低，且該方法很大程度上受到標(biāo)本質(zhì)量的制約。而傳統(tǒng)痰涂片檢測受到各種因素的影響，一些排菌患者還是不能夠被準(zhǔn)確診斷。結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)周期長，尤其是對身患結(jié)核且有癥狀的患者，等培養(yǎng)及鑒定結(jié)果出來后，患者不但病情加重，而且也被延誤了治療時機。綜上所述，隨著各種先進(jìn)技術(shù)用于結(jié)核病的診斷，結(jié)核病會越來越早地被確診，也可以經(jīng)過大樣本的研究，進(jìn)行一些檢測項目的優(yōu)化組合，使患者早治療，心理和精神負(fù)擔(dān)得到減輕。對于結(jié)核患者檢測而言，TB-DNA,IGRA法和X-PERT法目前均證明是一種十分成熟有效實用的結(jié)核病檢測治療方法，具備臨床特異性極強、靈敏度高等特點，其中以IGRA探針的診斷特異性好和臨床靈敏度高，還可以有效地防止卡介苗的假陽性檢測，對活動性結(jié)核病的診斷有很高的參考意義，值得我們在我國臨床應(yīng)用上加以推廣使用。建議臨床醫(yī)生可以在IGRA陽性的情況下，采用TB-DNA來進(jìn)一步確認(rèn)是否為活動性結(jié)核，尤其是對癥狀和體征不典型的患者，一方面提高了診斷準(zhǔn)確度，另一方面也減少了誤診和漏診的概率。Reference：[1]劉書邑，黃美穎.γ干擾素釋放試驗在兒童結(jié)核病診斷中的價值[J].黔南民族醫(yī)專學(xué)報，2020,33(02):122-124.[2]雷丹，陳羽，王功茴，劉興會，劉權(quán)賢，劉梅.γ干擾素釋放試驗和結(jié)核菌素皮膚試驗對活動性結(jié)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