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人白細(xì)胞介素13(interleukin13,IL-13)是近年來發(fā)現(xiàn)的一種細(xì)胞因子,是造血因子的新成員,具有調(diào)節(jié)B淋巴細(xì)胞及單核細(xì)胞、抑制HIV、促 方法對(duì)IL-13工程菌進(jìn)行了細(xì)胞破碎實(shí)驗(yàn),并系統(tǒng)地了pH、溫進(jìn)一步地研究以包涵體形式存在于工程菌內(nèi)地目標(biāo)產(chǎn)物分離純化新方法打下Interleukin(IL-13)isarecentlydescriedproteinandamemberofthefamilyofhematopoietics.ItisaproteininvitromodulatorofBlymphocyteandmonocytefunctions.Recently,itwasreportedthatitalsocouldinhibittheHIVreplicationinmonocyteandregulateproliferationanddifferentiationofprimitivehematopoieticsprogenitorcells.Inthisstudy,wetrydisruptingJM109cellsbymeansofultrasonicandchemicalosmosis,primarilytestingthefunctionsofpH,temperature,time,chemicalreagentandsoon,andachievinganoptimalprocessofcelldisruptionandinclusionsolution.Inaddition,wecarryonthepartitionofGST-IL-13byaqueoustwo-phasesystemandcarefullychecktheeffectsofthemainprocessingparameters.:IL-13,inclusion,celldisruption,aqueoustwo-phase, 第一章前 發(fā)展生化“下游”技術(shù)的意 1.2工程蛋白質(zhì)分離純化的原 現(xiàn)有白細(xì)胞介素-13的分離純化方 蛋白質(zhì)分離純化的方 的立項(xiàng)背景及研究?jī)?nèi) 第二章實(shí)驗(yàn)材料與方 概 實(shí)驗(yàn)材料與方 第三章實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討 GST-IL-13的誘導(dǎo)培 GST-IL-13總含量的測(cè) 化學(xué)破 GS雙水相萃取的研 第四章結(jié)論與展 結(jié) 對(duì)進(jìn)一步研究的展 參考文 致 附 第一章發(fā)展生化“下游”技術(shù)的意現(xiàn)物技術(shù)的迅猛發(fā)展使世界發(fā)生了日新月異的變化。迄今為止,人1.2工程蛋白質(zhì)分離純化的原實(shí)現(xiàn)工程蛋白質(zhì)分離純化的高效率、高純度和低成本必須做到以下幾點(diǎn):Prokopakis的改進(jìn)。具體規(guī)則如下:④盡可能地將高效的步驟放面⑤把操作最的步驟放在最后[1,2]現(xiàn)有白細(xì)胞介素-13的分離1993,Mckenzie13(IL-13)的名字,此后,人們IL-13(TF-1)的增殖,直接誘導(dǎo)原始造血前體細(xì)胞(Lin-Sca-1+)的增殖及分化;誘導(dǎo)B細(xì)胞表達(dá)類抗原和CD23,并存進(jìn)其增殖及分泌Ig;抑制HIV單核細(xì)胞中的,并具有第二章實(shí)驗(yàn)材料與方法概 主要從IL-13地分離純化入手,將傳統(tǒng)的細(xì)胞破碎和雙水相萃?。ㄟx擇PEG鹽系統(tǒng))用于IL-13的提純。實(shí)驗(yàn)材料與方2.2.31按事先計(jì)算,取一定量的PEG母液、鹽母液核細(xì)胞碎片固體(4000r/min離心收集),用NaOH或鹽酸調(diào)節(jié)pHGST-IL-13g
第三章實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論GST-IL-13GST-IL-13總含量的化學(xué)破pHpH3.8。pH的作用主要是影響蛋白質(zhì)的電離平衡,從而影響到其融解性。JM109菌的細(xì)胞壁蛋白在微堿性師的融解性較高,同時(shí)這知道,pH8.0左右為宜。GST-IL-GST-IL- 總蛋蛋白蛋白質(zhì)濃度/g·mL-10 3.8pH雙水相萃取的研本文分別了PEG600,PEG1540,PEG4000,PEG6000與不同的鹽(硫酸IL-13和細(xì)胞碎片的分布規(guī)律。PEGABCD蛋白收率;第四章結(jié)論與展望結(jié)⑴通過正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),對(duì)化學(xué)滲透法破碎JM109菌的各影響因素進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)7.0mol/L,TritonX-1000.5%,pH為8.0對(duì)進(jìn)一步研究的本實(shí)驗(yàn)對(duì)工程菌JM109中以包涵體形式存在的外源融合蛋白GST-IL-13進(jìn)行了細(xì)胞破碎(超聲波法、化學(xué)滲透法)、包涵體融解、雙水相萃取等方面⑴目標(biāo)產(chǎn)物GST-IL-13⑵目標(biāo)產(chǎn)物GST-IL-13的酶切和折疊復(fù)性實(shí)驗(yàn),盡可能地提高酶切效率和⑶切割后的IL-13通過對(duì)GST-IL-13分離純化系統(tǒng)的研究,可為用工程菌大量生產(chǎn)[1]主編.無機(jī)化工工藝學(xué).:化學(xué)工業(yè)[2]、貝建中.PAD功能介紹.:中國金融[3].論石油價(jià)格與石油工業(yè)發(fā)展.世界石油經(jīng)濟(jì)[4].大慶地區(qū)經(jīng)濟(jì)發(fā)展戰(zhàn)略研究.哈爾濱工業(yè)大學(xué). .世界石油市場(chǎng)發(fā)展趨勢(shì)預(yù)測(cè). 發(fā)展
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