2.2.1 動物細(xì)胞培養(yǎng)

專題2.2動物細(xì)胞工程2.2.1動物細(xì)胞培養(yǎng)動物細(xì)胞工程其中，動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是其他動物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)。動物細(xì)胞工程

常用的技術(shù)手段動物細(xì)胞培養(yǎng)動物細(xì)胞核移植動物細(xì)胞融合生產(chǎn)單克隆抗體2.2.1動物細(xì)胞培養(yǎng)2.2.1動物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)2.2.1動物細(xì)胞培養(yǎng)教學(xué)目標(biāo)新課標(biāo)要求簡述動物細(xì)胞培養(yǎng)的過程、條件及應(yīng)用。簡述通過動物體細(xì)胞核移植技術(shù)克隆動物的過程和應(yīng)用前景。教學(xué)重點(diǎn)動物細(xì)胞培養(yǎng)的過程及條件。用動物體細(xì)胞核移植技術(shù)克隆動物的過程。教學(xué)難點(diǎn)用動物體細(xì)胞核移植技術(shù)克隆動物的過程。2.2.1動物細(xì)胞培養(yǎng)

資料：燒傷病人的治療通常是取燒傷病人的健康皮膚進(jìn)行自體移植，但對于大面積燒傷病人來講，健康皮膚很有限，請同學(xué)們想一想如何來治療該病人？取該患者的皮膚進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),獲得足量的細(xì)胞后再移植。2.2.1動物細(xì)胞培養(yǎng)一、動物細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)合圖2-16，閱讀P44最后一段至P46第一段結(jié)束。1、找出關(guān)鍵詞并理解它們的含義。2、敘述動物細(xì)胞培養(yǎng)的過程。細(xì)胞貼壁細(xì)胞的接觸抑制原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細(xì)胞懸液3、動物細(xì)胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個體？不能，動物細(xì)胞培養(yǎng)只能使細(xì)胞數(shù)目增多。動物細(xì)胞培養(yǎng)的目的是獲得細(xì)胞或細(xì)胞產(chǎn)品。2.2.1動物細(xì)胞培養(yǎng)一、動物細(xì)胞培養(yǎng)1.概念：動物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動物機(jī)體內(nèi)取出相關(guān)的組織，將它分散成單個細(xì)胞，然后，放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長和增殖。原理：細(xì)胞增殖目的：獲得細(xì)胞或細(xì)胞產(chǎn)品。2.過程：2.2.1動物細(xì)胞培養(yǎng)動物胚胎或幼齡動物的組織、器官剪碎組織分散成單個細(xì)胞細(xì)胞懸液10~50代細(xì)胞發(fā)生癌變無限傳代培養(yǎng)液胰蛋白酶或膠原蛋白酶原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)不死性細(xì)胞繼續(xù)傳代培養(yǎng)（第1代細(xì)胞到第10代細(xì)胞）2.2.1動物細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞的生長特性●細(xì)胞貼壁：懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細(xì)胞貼壁。

要求：培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿的內(nèi)表面光滑、無毒、易于貼附?！窦?xì)胞的接觸抑制：當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸時，細(xì)胞就會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。2.2.1動物細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞貼壁2.2.1動物細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)器皿返回2.2.1動物細(xì)胞培養(yǎng)動物胚胎或幼齡動物的組織、器官細(xì)胞懸浮液（原代細(xì)胞）10代細(xì)胞40~50代細(xì)胞無限增殖傳代培養(yǎng)單個細(xì)胞加培養(yǎng)液原代培養(yǎng)胰蛋白酶剪碎細(xì)胞株細(xì)胞系原代培養(yǎng)：第1代細(xì)胞傳至10代左右傳代培養(yǎng)：將原代細(xì)胞從培養(yǎng)瓶中取出，分裝到兩個或兩個以上的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。細(xì)胞株：10到40、50代的細(xì)胞，遺傳物質(zhì)沒發(fā)生改變。細(xì)胞系：超過50代的細(xì)胞，遺傳物質(zhì)發(fā)生改變，失去接觸抑制，可無限增殖。過程點(diǎn)撥：等同于癌細(xì)胞2.2.1動物細(xì)胞培養(yǎng)尋根問底1.進(jìn)行動物細(xì)胞傳代培養(yǎng)時用胰蛋白酶分散細(xì)胞，說明細(xì)胞間的物質(zhì)主要是什么成分？用胃蛋白酶行嗎？

細(xì)胞間的成分主要是蛋白質(zhì)。

不行，胃蛋白酶適宜的PH約為2，當(dāng)PH>6時，胃蛋白酶就會失去活性，而胰蛋白酶適宜PH為7.2---8.4，多數(shù)動物細(xì)胞培養(yǎng)的適宜PH為7.2---7.4。胃蛋白酶在此環(huán)境中沒有活性，胰蛋白酶在此環(huán)境中活性較高，因此胰蛋白酶適宜用于細(xì)胞培養(yǎng)時的消化。

2.胰蛋白酶真的不會把細(xì)胞消化掉嗎？為什么？

細(xì)胞膜成分：磷脂和蛋白質(zhì)

長時間的作用也會消化細(xì)胞膜蛋白，對細(xì)胞有損傷作用。

因此必須控制好胰蛋白酶的消化時間。3.目前使用的或冷凍保存的正常細(xì)胞為幾代以內(nèi)的？

10代以內(nèi)，以保持細(xì)胞正常的二倍體核型。2.2.1動物細(xì)胞培養(yǎng)5、為什么培養(yǎng)前要將組織細(xì)胞分散成單個細(xì)胞？6、動物細(xì)胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個體？成塊組織不利于培養(yǎng)，分散了并制成細(xì)胞懸濁液，利于細(xì)胞與培養(yǎng)液充分接觸，利于培養(yǎng)。不能，動物細(xì)胞培養(yǎng)只能使細(xì)胞數(shù)目增多。動物細(xì)胞培養(yǎng)的目的是獲得細(xì)胞或細(xì)胞產(chǎn)品。4、為什么選用動物胚胎或幼齡個體的器官或組織做動物細(xì)胞培養(yǎng)材料？分化程度低,分裂和增殖旺盛，易培養(yǎng)思考2.2.1動物細(xì)胞培養(yǎng)二、動物細(xì)胞培養(yǎng)條件1、無菌、無毒的環(huán)境2、營養(yǎng)

3、溫度和PH

溫度36.5+0.5度，pH7.2～7.44、氣體環(huán)境

O2和CO2（95%空氣和5%CO2）維持培養(yǎng)液的PH培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進(jìn)行無菌處理措施：培養(yǎng)液中加一定量的抗生素。葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、微量元素、促生長因子（維生素、激素等）和

動物血清較植物組織培養(yǎng)基，動物細(xì)胞培養(yǎng)液的獨(dú)特之處？①液體培養(yǎng)基②成分中有動物血清等2.2.1動物細(xì)胞培養(yǎng)想一想為什么對動物細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)時要添加血清？血清中含有蛋白質(zhì)、氨基酸、葡萄糖、激素等，其中蛋白質(zhì)為白蛋白和球蛋白；氨基酸有多種，是細(xì)胞合成蛋白質(zhì)的基本成分，有些動物細(xì)胞不能合成，必須由培養(yǎng)液提供；激素有胰島素、生長激素等促進(jìn)細(xì)胞的生長、增殖、貼附，還有很多未知的促細(xì)胞生長因子等其他活性物質(zhì)。因此，細(xì)胞培養(yǎng)要保證細(xì)胞能順利生長和繁殖，一般要添加10%----20%的血清。2.2.1動物細(xì)胞培養(yǎng)三、動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用1.生產(chǎn)蛋白生物制品：病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等2.基因工程技術(shù)中的受體細(xì)胞。3.用于檢測有毒物質(zhì)。4.培養(yǎng)正?；虿∽兊募?xì)胞，用于生理、病理、藥理等方面的研究。可用于健康細(xì)胞的培養(yǎng)，如獲得大量自身的皮膚細(xì)胞，用于植皮；用于篩選抗癌藥物等，為治療和預(yù)防疾病提供理論依據(jù)2.2.1動物細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞的全能性細(xì)胞株、細(xì)胞系植物體或組織培養(yǎng)結(jié)果獲得細(xì)胞或細(xì)胞產(chǎn)物快速繁殖、培育無病毒植株等培養(yǎng)目的葡萄糖、動物血清蔗糖、植物激素培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質(zhì)細(xì)胞增殖原理動物細(xì)胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項目植物細(xì)胞和動物細(xì)胞培養(yǎng)的比較2.2.1動物細(xì)胞培養(yǎng)

1、在動物細(xì)胞培養(yǎng)過程中遺傳物質(zhì)發(fā)生改變的細(xì)胞（）

A．細(xì)胞系B．細(xì)胞株C．原代細(xì)胞D．傳代細(xì)胞

2、動物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是-----（）A.動物細(xì)胞融合B.單克隆抗體C.胚胎移植D.動物細(xì)胞培養(yǎng)

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3.動物細(xì)胞培養(yǎng)與植物細(xì)胞培養(yǎng)的重要區(qū)別在于----（）A.培養(yǎng)基不同；B.動物細(xì)胞培養(yǎng)不需要在無菌條件下進(jìn)行；