細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

普通復(fù)式光學(xué)顯微鏡（lightmicroscope）雙目顯微鏡目前一頁\總數(shù)四十二頁\編于二十一點正置顯微鏡倒置顯微鏡目前二頁\總數(shù)四十二頁\編于二十一點相差顯微鏡（phase-contrastmicroscope）（光程差或相位差轉(zhuǎn)變?yōu)檎穹?，相差板）微分干涉顯微鏡（differential-interferencemicroscope）（厚度差轉(zhuǎn)變?yōu)槊靼挡睿辉黾訕悠贩床?，立體感強）目前三頁\總數(shù)四十二頁\編于二十一點熒光顯微鏡（fluorescencemicroscope）目前四頁\總數(shù)四十二頁\編于二十一點熒光顯微鏡及其照片目前五頁\總數(shù)四十二頁\編于二十一點黏著斑蛋白細(xì)胞骨架目前六頁\總數(shù)四十二頁\編于二十一點激光共聚焦原理激光共聚焦顯微鏡（laserscanningconfocalmicroscope）目前七頁\總數(shù)四十二頁\編于二十一點激光共聚焦顯微鏡及其顯微圖像目前八頁\總數(shù)四十二頁\編于二十一點黏著斑蛋白細(xì)胞骨架（應(yīng)力纖維）共定位分析目前九頁\總數(shù)四十二頁\編于二十一點暗視野成像原理顯微鏡的暗視野功能目前十頁\總數(shù)四十二頁\編于二十一點(A)明視野顯微術(shù)；(B)相差顯微術(shù)；(C)微分干涉顯微術(shù)；(D)暗視野顯微術(shù)目前十一頁\總數(shù)四十二頁\編于二十一點熒光漂白恢復(fù)技術(shù)（fluorescencerecoveryafterphotobleaching,FRAP）目前十二頁\總數(shù)四十二頁\編于二十一點熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)（fluorescenceresonanceenergytransfer,FRET）目前十三頁\總數(shù)四十二頁\編于二十一點1）電鏡基本知識和結(jié)構(gòu)（波長小于0.1nm）2）樣品制備（超薄切片，負(fù)染色，冰凍蝕刻，三維重構(gòu)，掃描）3）電鏡種類掃描電子顯微鏡透射電子顯微鏡掃描隧道顯微鏡和原子力顯微鏡2.1.2電子顯微鏡技術(shù)目前十四頁\總數(shù)四十二頁\編于二十一點透射電鏡及其圖像目前十五頁\總數(shù)四十二頁\編于二十一點透射電鏡照片目前十六頁\總數(shù)四十二頁\編于二十一點免疫電鏡照片目前十七頁\總數(shù)四十二頁\編于二十一點掃描電鏡及其圖像目前十八頁\總數(shù)四十二頁\編于二十一點掃描電鏡照片目前十九頁\總數(shù)四十二頁\編于二十一點冰凍蝕刻技術(shù)目前二十頁\總數(shù)四十二頁\編于二十一點冰凍蝕刻電鏡技術(shù)照片目前二十一頁\總數(shù)四十二頁\編于二十一點負(fù)染色電鏡技術(shù)照片目前二十二頁\總數(shù)四十二頁\編于二十一點2.2.1高速、超速和梯度密度離心分離各種細(xì)胞器、生物大分子及其復(fù)合物2.2細(xì)胞組分的分析方法目前二十三頁\總數(shù)四十二頁\編于二十一點差速離心密度梯度離心目前二十四頁\總數(shù)四十二頁\編于二十一點差速離心過程目前二十五頁\總數(shù)四十二頁\編于二十一點2.2.2細(xì)胞內(nèi)核酸、蛋白質(zhì)、酶、糖類、脂類的顯色DNA：福爾根（Feulgen）反應(yīng)－－紫紅色多糖類：PAS反應(yīng)－－黃色脂肪：蘇丹III－－紅色蛋白質(zhì)：米倫（Millon）－－紅色2.2.3特異抗原的定性與定位免疫熒光免疫電鏡免疫沉淀Westernblotting目前二十六頁\總數(shù)四十二頁\編于二十一點2.2.5特異核酸標(biāo)記技術(shù)InsituhybridizationNorthernblot(RNA);Southernblot(DNA)2.2.4放射性標(biāo)記生物大分子的合成和動態(tài)3H（DNA合成）35S（蛋白質(zhì)合成）14C（碳水化合物合成）32P（核酸合成）定性、定位、半定量研究（標(biāo)記，自顯影）32P（14天）,14C（5760年）,3H（12年）,35S（87天）,131I（8）目前二十七頁\總數(shù)四十二頁\編于二十一點原位雜交技術(shù)目前二十八頁\總數(shù)四十二頁\編于二十一點2.2.6定量細(xì)胞化學(xué)技術(shù)2.2.7細(xì)胞內(nèi)大分子的分離與分析柱層析、分子篩、免疫吸附、免疫沉淀等方法分離蛋白質(zhì)組分及復(fù)合物（交聯(lián)和變性）顯微分光光度術(shù)（紫外顯微分光光度儀、可見光顯微分光光度染色）流式細(xì)胞儀目前二十九頁\總數(shù)四十二頁\編于二十一點蛋白質(zhì)電泳分析目前三十頁\總數(shù)四十二頁\編于二十一點流式細(xì)胞術(shù)目前三十一頁\總數(shù)四十二頁\編于二十一點2.3細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞工程與顯微操作技術(shù)2.3.1細(xì)胞培養(yǎng)

1）植物細(xì)胞（單倍體細(xì)胞培養(yǎng)，原生質(zhì)體培養(yǎng)，體細(xì)胞培養(yǎng)）

2）動物細(xì)胞（原代細(xì)胞培養(yǎng)，永生細(xì)胞系）

3）非細(xì)胞體系（DNA復(fù)制，RNA轉(zhuǎn)錄，蛋白質(zhì)合成，高爾基體的膜泡運輸，細(xì)胞核裝配等）細(xì)胞提取物，細(xì)胞核提取物目前三十二頁\總數(shù)四十二頁\編于二十一點植物組織培養(yǎng)動物細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞的克隆目前三十三頁\總數(shù)四十二頁\編于二十一點2.3.2細(xì)胞工程1）細(xì)胞融合與雜交植物細(xì)胞先去壁；融合方式：仙臺病毒或聚乙二醇介導(dǎo)，電融合等同核融合細(xì)胞，異核融合細(xì)胞，染色體丟失

2）單克隆抗體技術(shù)2.3.3顯微操作技術(shù)1975年英國科學(xué)家MilsteinandKohler,1984年獲諾貝爾獎B淋巴細(xì)胞+小鼠骨髓瘤轉(zhuǎn)移細(xì)胞核、細(xì)胞器、基因等2.3.4轉(zhuǎn)基因、基因沉默、基因敲除、模式生物等目前三十四頁\總數(shù)四十二頁\編于二十一點轉(zhuǎn)基因技術(shù)目前三十五頁\總數(shù)四十二頁\編于二十一點顯微操作儀目前三十六頁\總數(shù)四十二頁\編于二十一點顯微操作示意圖目前三十七頁\總數(shù)四十二頁\編于二十一點目前三十八頁\總數(shù)四十二頁\編于二十一點MarioCapecchi(Late1980s)(UniversityofUtah)embryonicstemcellsininnercellmassastargetcells1/104cellsundergoaprocessofhomologousrecombination.基因敲除技術(shù)目前三十九頁\總數(shù)四十二頁\編于二十一點2.4細(xì)胞生物學(xué)研究的模式生物病毒（轉(zhuǎn)基因載體）細(xì)菌（大腸桿菌作為基因工程菌株）酵母（真核表達(dá)載體，基因功能分析）線蟲（1000個左右細(xì)胞構(gòu)成）黏菌（同步化材料）蛙（卵細(xì)胞大，易操作）果蠅（遺傳背景清楚，表型易掌握）斑馬魚（胚胎發(fā)育研究的好材料）小鼠（與人更接近）目前四十頁\總數(shù)四十二頁\編于二十一點學(xué)生報告題目：

1，轉(zhuǎn)基因技術(shù)及其應(yīng)用；2，細(xì)胞工程技術(shù)在生產(chǎn)實踐中的應(yīng)用；3，基因敲除技術(shù)及其應(yīng)用；4，模式生物線蟲及其在細(xì)胞生物學(xué)研究中的應(yīng)用；5，模式生物斑馬魚及其在細(xì)胞生物學(xué)研究中的應(yīng)用；

按學(xué)號分組，按組確定題目，每個組確定一名組長并委派一個報