革蘭染色法細(xì)菌的特殊染色法

革蘭染色法細(xì)菌的特殊染色法第1頁(yè)/共14頁(yè)實(shí)驗(yàn)一革蘭染色法、細(xì)菌的特殊染色法

第2頁(yè)/共14頁(yè)實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆占?xì)菌革蘭染色的原理與方法掌握細(xì)菌芽孢染色的基本原理與方法熟悉普通光學(xué)顯微鏡的油鏡使用與保養(yǎng)

第3頁(yè)/共14頁(yè)實(shí)驗(yàn)原理革蘭染色法的簡(jiǎn)介革蘭染色法是細(xì)菌學(xué)中最廣泛使用的一種鑒別染色法。由丹麥醫(yī)師ChristianGram創(chuàng)立。方法是先將細(xì)菌用結(jié)晶紫染色，加媒染劑（增加染料和細(xì)胞的親和力）后，用脫色劑（乙醇和丙酮）脫色，再用復(fù)染劑染色。第4頁(yè)/共14頁(yè)實(shí)驗(yàn)原理革蘭染色法的原理一般認(rèn)為革蘭陽(yáng)性菌的細(xì)胞壁較厚，肽聚糖含量高，且交聯(lián)度大，脂類含量少，經(jīng)95%乙醇脫色時(shí)，肽聚糖層的孔徑變小，通透性降低，與細(xì)胞結(jié)合的結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物不容易被脫掉，因此細(xì)胞仍保留初染時(shí)的顏色。而革蘭陰性菌的細(xì)胞壁較薄，脂類含量較高，肽聚糖含量較低，乙醇脫色時(shí)溶解外層類脂質(zhì)，增加了細(xì)胞壁的通透性，使初染的結(jié)晶紫和碘的復(fù)合物易于滲出，細(xì)胞被脫色，經(jīng)復(fù)染之后，又染上了復(fù)染的顏色。第5頁(yè)/共14頁(yè)實(shí)驗(yàn)原理芽孢染色法的原理芽孢具有厚而致密的壁，折光性強(qiáng)，通透性低，不易著色，用一般染色法只能使菌體著色而芽孢不著色。芽孢染色法都基于同一個(gè)原則，即除了使用著色力強(qiáng)的染料外，還需要加熱或延長(zhǎng)染色時(shí)間等，促進(jìn)標(biāo)本著色。然后使菌體脫色而芽孢上的染料仍然保留。經(jīng)復(fù)染之后，菌體和芽孢呈不同的顏色。第6頁(yè)/共14頁(yè)實(shí)驗(yàn)材料-菌株金黃色葡萄球菌（209P）18-20h斜面大腸桿菌18-20h斜面枯草芽孢桿菌20-24h斜面第7頁(yè)/共14頁(yè)實(shí)驗(yàn)材料-試劑蒸餾水結(jié)晶紫盧戈碘液95%乙醇番紅花紅孔雀綠第8頁(yè)/共14頁(yè)實(shí)驗(yàn)步驟革蘭染色法涂片干燥固定初染（結(jié)晶紫1分鐘）水洗媒染（碘液1分鐘內(nèi)換2-3次）水洗脫色（95%乙醇20-30秒）水洗復(fù)染（番紅花紅5分鐘）水洗吸水紙吸干鏡檢第9頁(yè)/共14頁(yè)實(shí)驗(yàn)步驟芽孢染色法涂片干燥固定初染（孔雀綠20分鐘）水洗復(fù)染（番紅花紅5分鐘）水洗吸水紙吸干鏡檢第10頁(yè)/共14頁(yè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果第11頁(yè)/共14頁(yè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果第12頁(yè)/共14頁(yè)