生化復(fù)習(xí)大禮包習(xí)題課一

liguofuHowMuchAlanineIsPresentastheCompletelyUnchargedSpecies?AtapHequaltotheisoelectricpointofalanine,thenetchargeonalanineiszero.twostructurescanbedrawnthathaveanetchargeofzero,butthepredominantformofalanineatitspIiszwitterionic.WhyisalaninepredominantlyzwitterionicratherthancompletelyunchargedatitspI?(b)WhatfractionofalanineisinthecompletelyunchargedformatitspI?Justifyyourassumptions.liguofuHenderson-Hasselbachequationliguofuliguofu2.有一蛋白質(zhì)粗提液，已知其包含的蛋白成分及其某些性質(zhì)如下表，請(qǐng)簡(jiǎn)要寫出純化α-半乳糖苷酶的合理實(shí)驗(yàn)步驟。蛋白質(zhì)鹽析的飽和硫酸氨濃度MW(kDa)pI145%383.7280%224.8365%145.3420%756.8530%559.5α-半乳糖苷酶45%1155.3liguofu（1）30％硫酸銨沉淀，離心取上清，上清中主要蛋白為protein1、2、3和α-半乳糖苷酶；（2）45％硫酸銨沉淀，離心去上清留沉淀，沉淀中主要蛋白為protein1和α-半乳糖苷酶；（3）溶解沉淀，脫鹽，濃縮，凝膠過濾層析，收集最先流出組分，主要蛋白為α-半乳糖苷酶；（4）將步驟3得到的樣品（pH7）進(jìn)行離子交換層析（陰離子交換樹脂，NaCl梯度洗脫）；（5）對(duì)步驟4得到的各組分進(jìn)行SDS變性電泳，根據(jù)分子量鑒定各組分及純度。如有必要可重復(fù)3/4如沒有步驟1扣1分，步驟3和4顛倒扣1分liguofu3.有一純化的未知蛋白，非變性分子篩層析測(cè)定其分子量為240kDa，在有5M的尿素的條件下層析測(cè)定分子量為60kDa；還原性SDS顯示兩條帶，其相對(duì)遷移率如下圖所示（標(biāo)準(zhǔn)蛋白的分子量分別為15、20、30、40、50kDa）。請(qǐng)根據(jù)以上結(jié)果分析描述該蛋白的結(jié)構(gòu)。liguofu非變性分子篩層析蛋白質(zhì)亞基不分開，因此蛋白整體的分子量是240kDa；第二次層析用了5M的尿素，亞基分離，亞基的分子量是60kDa.因此結(jié)論是：蛋白由4個(gè)相同的亞基（或部分）構(gòu)成（240kDa=4×60kDa）。根據(jù)SDS電泳相對(duì)遷移率作圖大致估算，只出現(xiàn)了約2，500Da和3，500Da兩條帶（不需要計(jì)算，從圖上大概估算就行），這說明在層析中得到的60kDa的亞基是由二硫鍵連著的一大一小兩條多肽鏈構(gòu)成。因此，這個(gè)蛋白的結(jié)構(gòu)為：2500Da多肽鏈與3500Da多肽鏈通過二硫鍵相連構(gòu)成一個(gè)單位，再由4個(gè)這樣的單位（單位間沒有二硫鍵）構(gòu)成這個(gè)蛋白。liguofu4.假定某蛋白分子量為180kDa，其一級(jí)結(jié)構(gòu)可能是直線式的也可能是閉環(huán)式的.請(qǐng)分析是否有可能的簡(jiǎn)單的合理方法加以鑒別?將多肽作適當(dāng)變性，用羧肽酶水解多肽，然后以原樣品做對(duì)照進(jìn)行SDS電泳，若水解樣品無條帶或明顯比原樣品條帶小，則說明多肽一級(jí)結(jié)構(gòu)為直線型，否則可能為環(huán)形也可能為線性（因?yàn)闃悠凡荒鼙凰?，還可能其C末端是Pro或Arg或Lys）；(2)嘗試合適的蛋白水解酶水解（一次可能達(dá)不