第13章厭氧性細(xì)菌

第13章厭氧性細(xì)菌第一頁，共99頁。厭氧性細(xì)菌anaerobicbacteria第13章

中華醫(yī)學(xué)會臨床微生物學(xué)組(1~4屆)全國委員《中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)全書》主編北華大學(xué)臨床微生物學(xué)教授海南醫(yī)學(xué)院特聘教授

李影林2010年10月

第二頁，共99頁。掌握破傷風(fēng)芽胞梭菌形態(tài)染色特點(diǎn)、致病性、特異性防治；產(chǎn)氣莢膜芽胞梭菌形態(tài)染色特性、致病物質(zhì)及所致疾病氣性壞疽的發(fā)病條件及防治原則；肉毒芽胞梭菌的致病性和防治原則。熟悉厭氧菌的種類與分布、厭氧菌感染的特點(diǎn)，厭氧芽胞桿菌屬的共同特點(diǎn)，產(chǎn)氣莢膜芽胞梭菌的微生物學(xué)檢查，無芽胞厭氧菌的微生物學(xué)檢查原則。了解厭氧培養(yǎng)原則，破傷風(fēng)芽胞梭菌的免疫學(xué)及微生物學(xué)檢查，肉毒芽胞梭菌的生物學(xué)性狀。目的要求第三頁，共99頁。概述1.概念:厭氧菌是指一大群要求在降低氧壓的條件下才能生長，而不能在含有10%CO2（空氣中含18%氧氣）的固體培養(yǎng)基表面生長的革蘭陽性球菌、桿菌和革蘭陰性球菌、桿菌的總稱。2.分類

根據(jù)厭氧的程度可分為2種:(1)極度厭氧菌（extremeoxygensensitiveanaerobes,EOSA）系指一些要求在低于0.5%氧氣條件下才能生長，在空氣中暴露10min即死亡的細(xì)菌。特點(diǎn)：甚難分離與培養(yǎng)。如：月形單胞菌和丁酸弧菌。人類糞便中的厭氧菌絕大多數(shù)為極度厭氧菌。(2)中度厭氧菌（moderateanaerobes）系指能在2%～8%（平均3%）的氧分壓環(huán)境中生長。在空氣中暴露60～90min尚能存活的細(xì)菌。一般對人致病的厭氧菌（如脆弱類桿菌、產(chǎn)氣莢膜芽胞梭菌）大多屬于此類。分布第四頁，共99頁。厭氧性細(xì)菌根據(jù)芽胞的有無可分為兩大類：（1）厭氧芽胞梭菌：（共１57種）多為腐物寄生菌，少數(shù)對人致病，如破傷風(fēng)芽胞梭菌，產(chǎn)氣莢膜芽胞梭菌，肉毒芽胞梭菌等，引起外源性感染。（2）無芽胞厭氧菌（G+、G-球菌與桿菌）：（共２１９種）多為人體正常菌群成員?？膳c需氧菌、兼性厭氧應(yīng)共同存在于口腔、腸道、上呼吸道、泌尿生殖道等，可為條件致病菌，如雙歧脆弱類桿菌等——內(nèi)源性感染第五頁，共99頁。厭氧芽胞梭菌無芽胞厭氧菌染色感染類型致病因素臨床感染比例機(jī)體條件

常見疾病類型治療預(yù)防常見菌種兩類厭氧菌的主要區(qū)別

G+G+或G-

外源性感染為主內(nèi)源性感染為主外毒素為主，毒性強(qiáng)內(nèi)毒素及侵襲因素，毒性弱

10% 90% 關(guān)系不明顯機(jī)體免疫功能下降多見外傷感染、食物中毒，各部位炎癥，膿腫，敗血癥臨床癥狀特殊無特殊癥狀抗毒素治療為主抗菌治療為主抗毒素緊急預(yù)防、類毒素預(yù)防增強(qiáng)機(jī)體抵抗力

破傷風(fēng)芽胞梭菌、產(chǎn)氣莢膜芽條件致病菌胞梭菌、肉毒芽胞梭菌、艱難梭菌如雙歧脆弱類桿菌等

第六頁，共99頁。第七頁，共99頁。

分布

１.自然界厭氧菌的分布廣泛，土壤、沼澤、湖泊、海洋、污水、食物以及人和動物體都有它的存在。２.人體幾種重要的厭O2菌種類及其在正常人體內(nèi)的分布

第八頁，共99頁。（５）皮膚上占優(yōu)勢的厭O2菌是座瘡丙酸桿菌。

第九頁，共99頁。厭氧芽胞梭菌clostridium第一節(jié)第十頁，共99頁。①G+兩端鈍圓的芽胞桿菌，除產(chǎn)氣莢膜梭菌外，芽胞均大于菌體的寬度，有周鞭毛、無莢膜，根據(jù)芽胞的形狀和位置有鑒別意義。②嚴(yán)格厭氧（中度厭氧）

③芽胞對外界環(huán)境抵抗力強(qiáng)（高溫、干燥、消毒劑）。進(jìn)行消毒滅菌時應(yīng)注意?、苣墚a(chǎn)生多種強(qiáng)烈的外毒素和侵襲性酶，毒性強(qiáng)烈，致病性強(qiáng)，都可脫毒制成類毒素來預(yù)防。

共同特點(diǎn)第十一頁，共99頁。破傷風(fēng)芽胞梭菌（C.tetani）

——引起破傷風(fēng)的病原菌產(chǎn)氣莢膜芽胞梭菌（C.perfringens）

——引起氣性壞疽的病原菌

肉毒芽胞梭菌（Clostridiumbotulinum）

——引起食物中毒主要致病菌：艱難芽胞梭菌（C.difficile）

引起抗生素相關(guān)性腹瀉偽膜性腸炎第十二頁，共99頁。無芽胞厭氧菌感染多呈慢性過程，臨床上如見有以下特征的感染時，應(yīng)考慮是無芽胞厭氧菌的感染。（1）發(fā)生在口腔、鼻竇、鼻咽部、胸腹、盆腔、腦內(nèi)、幽門會陰附近的炎癥、膿腫及其他深部膿腫。（2）用常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)（-）的敗血癥、感染性心內(nèi)膜炎，膿毒性血栓性靜脈炎等。（3）分泌物或膿腫穿刺液帶血性，或呈黑色或乳白色混濁，有惡臭，有時有氣體。（4）分泌物直接涂片可見細(xì)菌，但普通培養(yǎng)法無細(xì)菌生長。（5）使用氨基糖甙類抗生素如慶大，鏈霉素，卡那等長期治療無效。感染特征第十三頁，共99頁。中等大的細(xì)長桿狀，兩端鈍圓。有周身鞭毛，無莢膜，芽胞正圓形，位于菌體頂端，比菌體粗，呈鼓槌狀，為本菌典型特征，G+菌，形成芽胞后易形成G-。一、破傷風(fēng)梭菌形態(tài)染色細(xì)長桿菌（4～8μm×0.3～0.5μm）周鞭毛，幼齡運(yùn)動很活躍。特殊菌形鼓槌樣，端立芽胞要記牢。第十四頁，共99頁。生化反應(yīng)：不活躍。抵抗力：繁殖體抵抗力與一般細(xì)菌相似，芽胞抵抗力很強(qiáng)。對青霉素敏感。培養(yǎng)特性：專性厭氧pH7.0～7.537℃最適。

營養(yǎng)要求不高，普通瓊脂即可生長。

典型菌落：葡萄糖血液瓊脂平板：菌落菲薄，呈不規(guī)則的交織的絲狀，有時呈分葉狀、地圖狀或小蜘蛛狀等爬行狀，不規(guī)則的菌落。菌落透明有光澤。菌落周圍有輕度β溶血區(qū)。

庖肉培養(yǎng)基：肉湯混濁，因能產(chǎn)生甲基硫醇，故有腐敗臭味，肉渣開始變黑，部分消化產(chǎn)生少量氣體。

無特殊鑒別意義。第十五頁，共99頁。梭梭第十六頁，共99頁。發(fā)病條件：傷口的厭氧微環(huán)境

1.

窄而深的傷口，伴有泥土等雜物混入；2.大面積創(chuàng)傷，壞死組織多，局部組織缺血；3.同時有其他需氧或兼性厭氧菌感染。

致病性和免疫性第十七頁，共99頁。致病物質(zhì)：強(qiáng)烈外毒素

1.破傷風(fēng)痙攣毒素（tetanospasmin）:（1）化學(xué)組成：多肽，分子量為150kDa。（2）結(jié)構(gòu)：由兩條肽鏈（A、B）借二硫鍵結(jié)合而成。從菌體釋被蛋白酶A

（輕鏈）：分子量50kDa，為毒性部分。放的毒素切割B（重鏈）：分子量100kDa，具有結(jié)合神經(jīng)細(xì)胞和轉(zhuǎn)運(yùn)毒素分子的作用。

兩條鏈分開則無生物學(xué)活性，重新組合又恢復(fù)其作用。（3）特點(diǎn)①為神經(jīng)毒素。毒素對脊髓前角細(xì)胞和腦干細(xì)胞有高度親和力，與N節(jié)苷脂一旦結(jié)合后不易被抗毒素中和，破壞其正常抑制性調(diào)節(jié)功能。②毒性非常強(qiáng)烈，僅次于肉毒毒素。③性質(zhì)不穩(wěn)定為蛋白質(zhì)，可被腸道蛋白酶破壞。光、熱、酸、鹼、酒精（70%）均可破壞。對干燥抵抗力較強(qiáng)④經(jīng)甲醛處理可脫毒變成類毒素第十八頁，共99頁。重鏈的羧基端具有識別、結(jié)合與N肌肉結(jié)合點(diǎn)處，運(yùn)動N元外胞質(zhì)膜上的受體的作用促使毒素進(jìn)入細(xì)胞及由細(xì)胞膜形成的小泡中小泡從外周N末梢沿N軸突逆行向上運(yùn)動N通過跨突觸運(yùn)動元細(xì)胞體小泡從運(yùn)動N元進(jìn)入傳入神經(jīng)末梢進(jìn)入中樞重鏈的氨基端的介導(dǎo)神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生膜的轉(zhuǎn)位使輕鏈進(jìn)入胞質(zhì)。輕鏈（為鋅內(nèi)肽酶）可裂解儲存有抑制性N介質(zhì)（γ–氨基丁酸、甘氨酸）小泡上的膜蛋白特異性肽鍵小泡膜蛋白發(fā)生改變阻止抑制性N介質(zhì)的釋放致使肌肉活動的興奮與抑制失調(diào)導(dǎo)致屈肌、伸肌同時發(fā)生強(qiáng)烈收縮骨骼肌出現(xiàn)強(qiáng)烈痙攣。②破傷風(fēng)溶血毒素：作用尚不清楚（4）致病機(jī)理①破傷風(fēng)痙攣毒素第十九頁，共99頁。乙酰膽堿乙酰膽堿受體松弛的肌肉肌肉收縮神經(jīng)興奮第二十頁，共99頁。神經(jīng)刺激肌肉收縮乙酰膽堿乙酰膽堿受體肌肉收縮抑制性介質(zhì)破傷風(fēng)外毒素抑制性中間神經(jīng)元破傷風(fēng)痙攣毒素封閉了抑制性中間神經(jīng)元的抑制性介質(zhì)的釋放第二十一頁，共99頁。破傷風(fēng)毒素作用方式第二十二頁，共99頁。所致疾病：破傷風(fēng)經(jīng)一定潛伏期（平均1-2W），局部肌群抽搐，軀干和四肢肌肉強(qiáng)直性痙攣，全身肌肉強(qiáng)直收縮，角弓反張，呼吸衰竭和窒息致死，病死率高。外傷性破傷風(fēng)：多見于戰(zhàn)傷和創(chuàng)傷感染新生兒破傷風(fēng)（臍風(fēng)）：由于斷臍不潔引起，在發(fā)展中國家多見。臨床癥狀：第二十三頁，共99頁。第二十四頁，共99頁。第二十五頁，共99頁。第二十六頁，共99頁。免疫性體液免疫為主，主要是抗毒素的中和作用。由于破傷風(fēng)痙攣毒素毒性很強(qiáng)，極少量毒素即可致人死亡，病后不易獲得牢固免疫力。微生物學(xué)檢查臨床癥狀典型，一般無需進(jìn)行微生物學(xué)檢查。第二十七頁，共99頁。防治原則（1）正確處理傷口及清創(chuàng)擴(kuò)創(chuàng)，是重要的預(yù)防措施。（2）人工主動免疫：注射類毒素，尤其對軍人、兒童、易受傷人群計(jì)劃免疫，兒童用DPT（白百破三聯(lián)疫苗）（3）人工被動免疫：破傷風(fēng)抗毒素（telanusantitoxin，TAT），用于緊急預(yù)防（TAT1500—3000U），創(chuàng)傷嚴(yán)重者劑量加倍。注射TAT預(yù)防時最好同時給以類毒素作主動免疫（類+抗）治療原則：早期、足量應(yīng)用抗毒素，用前做皮試。若皮試（+）可采用脫敏療法或用人抗破傷風(fēng)Ig。青霉素抗菌、鎮(zhèn)靜解痙藥第二十八頁，共99頁。二、產(chǎn)氣莢膜芽胞梭菌G+

粗大桿菌，芽胞呈橢圓形，中或次極端。體內(nèi)不形成芽胞，可形成明顯的莢膜。形態(tài)染色G+粗大桿菌。粗大桿菌無鞭毛，單雙短鏈有芽胞。人畜體內(nèi)有莢膜，中偏卵圓小芽胞。

第二十九頁，共99頁。產(chǎn)氣莢膜梭菌革蘭染色

第三十頁，共99頁。（1）厭氧，要求不嚴(yán)格，微氧環(huán)境也能生長。（2）營養(yǎng)要求不高。含糖培養(yǎng)基發(fā)育最佳，無糖發(fā)育不良，但有利于形成芽胞。（3）繁殖迅速：通常培養(yǎng)2h在液體培養(yǎng)基深層即有明顯生長，4～6h后出現(xiàn)表面生長。（4）庖肉培養(yǎng)基：混濁生長，產(chǎn)生氣體，肉渣呈粉紅色，不被消化。

培養(yǎng)特性（5）牛乳培養(yǎng)基——“洶涌發(fā)酵”現(xiàn)象，這是本菌的特點(diǎn)。產(chǎn)氣莢膜梭菌在牛乳培養(yǎng)基中，經(jīng)37℃6h培養(yǎng)后，由于本菌迅速分解牛乳中的乳糖⊕，產(chǎn)生大量的酸將酪蛋白凝固，同時產(chǎn)生大量氣體，又將凝固的酪蛋白沖散，形成分散的海綿樣碎塊，來勢頗為洶猛，稱為其他厭氧菌所沒有的獨(dú)特的“洶涌發(fā)酵”現(xiàn)象。

第三十一頁，共99頁。（6）血平板：多數(shù)菌株有雙層溶血。內(nèi)環(huán)為β-溶血（完全溶血）是由于θ毒素的作用；外環(huán)為α-溶血（不完全溶血）是由于α毒素所致。什么叫Nagler反應(yīng)？（7）卵黃瓊脂平板：菌落周圍出現(xiàn)乳白色混濁圈，是由于此菌產(chǎn)生的卵磷脂酶（α毒素）分解卵黃中的卵磷脂，這一現(xiàn)象稱為Nagler反應(yīng)?？杀惶禺惖目寡逅泻?。第三十二頁，共99頁。卵黃瓊脂平板：菌落周圍有乳白色混濁圈——Nagler反應(yīng)，為毒素分解卵黃中卵磷脂所致。第三十三頁，共99頁。產(chǎn)氣莢膜梭菌菌落特征

（厭氧血平板，雙溶血環(huán)）第三十四頁，共99頁。生化反應(yīng)：十分活躍，可分解多種糖類，液化明膠，H2S（+）庖肉培基：肉渣呈粉紅色，產(chǎn)生大量氣體。牛乳培基：洶涌發(fā)酵（stromyfermentation）生化反應(yīng)在鑒別本菌上無特殊意義。第三十五頁，共99頁。第三十六頁，共99頁。產(chǎn)氣莢膜梭菌洶涌發(fā)酵現(xiàn)象

（右為未接種管）第三十七頁，共99頁。分型——根據(jù)產(chǎn)生外毒素性質(zhì)不同分6型（A～F）A型——?dú)庑詨木?、食物中毒C型——壞死性腸炎其他——動物腹瀉，腸炎第三十八頁，共99頁。致病性1.發(fā)病條件：與破傷風(fēng)類似2.致病物質(zhì)：強(qiáng)烈的外毒素（共12種）和毒性酶類，其中似毒素最為重要（卵磷脂酶）①毒素（卵磷脂酶）——?dú)庑詨木宜劳龅闹饕颌诙舅兀z原酶、明膠酶）壞死作用③毒素（透明質(zhì)酸酶）④毒素（DNA酶）這些毒素和酶協(xié)同作用，使組織溶解、壞死、產(chǎn)氣、水腫，以致病變迅速蔓延并出現(xiàn)全身中毒癥狀，此外還有些能產(chǎn)生腸毒素。第三十九頁，共99頁。所致疾病氣性壞疽：潛伏期短，僅為8～48h，細(xì)菌在局部繁殖，產(chǎn)生多種毒素及侵襲性酶，造成病變部位水腫，水氣夾雜，觸摸有“捻發(fā)感”，并產(chǎn)生惡臭，疼痛劇烈，蔓延迅速，如不及時搶救，可因毒血癥死亡.

食物中毒：某些菌株能產(chǎn)生腸毒素，食入被污染的食物，引起食物中毒，其中毒機(jī)理類似霍亂腸毒素

壞死性腸炎：C型菌株引起，罕見.第四十頁，共99頁。

指端氣性壞疽第四十一頁，共99頁。氣性壞疽第四十二頁，共99頁。微生物學(xué)檢查標(biāo)本：傷口深部取材直接涂片鏡檢：G+有莢膜大桿菌，伴其他雜菌分離培養(yǎng)與鑒定：血平板、庖肉培基、牛乳培基動物試驗(yàn)：小鼠或家兔“泡沫肝”氣性壞疽發(fā)展急劇，感染嚴(yán)重，應(yīng)盡早作出確實(shí)的細(xì)菌學(xué)報告，及早治療第四十三頁，共99頁。防治原則（1）早期徹底清創(chuàng)，局部用H2O2沖洗、濕敷，消除厭氧微環(huán)（2）對感染局部應(yīng)盡早施行手術(shù)，切除并消除感染和壞死組織，必要時須截肢以防病變擴(kuò)散。（3）注射氣性壞疽多價抗菌素血清+大劑量PG等抗菌藥物。（4）高壓氧艙療法。第四十四頁，共99頁。三、肉毒芽胞梭菌

形態(tài)染色（1）G+兩端鈍圓的短粗桿菌，常單獨(dú)或成雙存在，有時亦可成短鏈狀。（2）周鞭毛，能運(yùn)動，無莢膜。（3）芽胞為橢圓形，位于菌體的次末端，較菌體大，呈湯匙狀或網(wǎng)球拍狀。第四十五頁，共99頁。肉毒梭菌革蘭染色第四十六頁，共99頁。肉毒梭菌芽胞染色第四十七頁，共99頁。2．培養(yǎng)特點(diǎn)

（1）專性厭氧（2）對pH甚為敏感，只可在中性或弱堿性（pH7.2）的培養(yǎng)基中生長。（3）營養(yǎng)要求不高。

（4）血平板：菌落較大，邊緣皺折，有β-溶血。（5）庖肉培養(yǎng)基：消化肉渣，使之變黑，有腐敗惡臭。第四十八頁，共99頁。肉毒梭菌菌落特征（厭氧血平板）第四十九頁，共99頁。3．生化反應(yīng)：對鑒定本菌意義不大。4．抵抗力（1）肉毒芽胞梭菌的芽胞抵抗力很強(qiáng)。

（2）肉毒毒素的抵抗力比破傷風(fēng)痙攣毒素強(qiáng)。

第五十頁，共99頁?？乖约胺中?/p>

1.

根據(jù)遺傳特性，目前可分為４組。Ⅰ、Ⅱ組可引起人類疾病，以Ⅰ組多見。

2.根據(jù)產(chǎn)生毒素的Ag性可分為8型：A、B、C、C、D、E、F、G，最主要的型別為Ａ、Ｂ和Ｅ，Ｆ型偶見，我國以A最常見。第五十一頁，共99頁。（3）與破傷風(fēng)痙攣毒素的主要區(qū)別

破傷風(fēng)痙攣毒素肉毒毒素1.腸道蛋白酶易破壞不易破壞2.對熱敏感敏感65℃30min破壞耐熱3.對酸不耐受，易破壞耐酸4.作用機(jī)理沿N軸突上行，留在N肌肉接頭處直接作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的腦神經(jīng)核和外周神經(jīng)-肌肉神經(jīng)接頭處及自主神經(jīng)末梢5.編碼由質(zhì)粒編碼C、D型由噬菌體編碼其他型由染色體編碼第五十二頁，共99頁。致病性致病物質(zhì)：肉毒毒素（1）化學(xué)組成：是簡單蛋白質(zhì)，由19種氨基酸組成。（2）特點(diǎn)：①為嗜神經(jīng)毒。②毒性強(qiáng)烈③毒性作用及機(jī)理：肉毒梭菌是細(xì)菌死亡后，游離出無毒的前體毒素，經(jīng)腸道中胰蛋白酶或細(xì)菌產(chǎn)生的蛋白酶作用后解離出有毒的肉毒毒素。

主要作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的腦神經(jīng)核和外周神經(jīng)-肌肉神經(jīng)接頭處及自主神經(jīng)末梢，阻礙了膽堿能神經(jīng)末梢傳遞介質(zhì)（乙酰膽堿）的釋放，導(dǎo)致肌肉麻痹。④對酸、熱、蛋白酶的抵抗力較強(qiáng)。第五十三頁，共99頁。

阻礙Ach釋放，影響神經(jīng)沖動的傳遞，引起肌肉弛緩型麻痹致病機(jī)制神經(jīng)興奮乙酰膽堿乙酰膽堿受體肌肉松弛神經(jīng)乙酰膽堿乙酰膽堿受體肌肉松弛肉毒毒素阻礙乙酰膽鹼釋放第五十四頁，共99頁。所致疾病1.食物中毒：與其他食物中毒不同，胃腸道癥狀少見，主要為運(yùn)動神經(jīng)末梢麻痹。表現(xiàn)為頭痛、頭暈、肌肉麻痹，嚴(yán)重者可死于呼吸困難與衰竭。2.創(chuàng)傷感染中毒：傷口污染芽胞，局部厭氧環(huán)境繁殖，釋放肉毒毒素，導(dǎo)致機(jī)體肉毒中毒。3.嬰兒肉毒?。阂娪?歲以下嬰兒。表現(xiàn)為便秘、吸乳無力、吞咽困難、眼瞼下垂、全身肌張力降低，可因呼吸麻痹而死亡。第五十五頁，共99頁。微生物學(xué)檢查法1.分離培養(yǎng)與鑒定：在懷疑為嬰兒肉毒病的糞便中檢出此菌，并證實(shí)可產(chǎn)生毒素則診斷意義較大。2.毒素檢測：動物試驗(yàn)小鼠腹腔注射，觀察發(fā)病情況懷疑食物+鹽水注射小鼠發(fā)病死亡離心取上清注射小鼠

小鼠存活加熱100℃10ｍｉｎ

加抗毒素注射小鼠

小鼠存活

第五十六頁，共99頁。3．檢驗(yàn)方法（1）標(biāo)本的直接檢查——意義不大。因本菌靠肉毒毒素致病。（2）分離培養(yǎng)

第五十七頁，共99頁。（3）毒素測定

①

定性試驗(yàn)

②

毒素型別的鑒定反向間接血凝

B.中和試驗(yàn)

此外，ELISA雙抗體夾心法

第五十八頁，共99頁。防治原則加強(qiáng)食品衛(wèi)生管理。及早做出診斷，迅速注射A、B、E三型多價抗毒素，加強(qiáng)護(hù)理與對癥治療。第五十九頁，共99頁。

四、艱難芽胞梭菌（C.difficile）

1．形態(tài)與染色（1）G+粗長桿菌，2d后有轉(zhuǎn)陰性的趨勢。（2）分為能運(yùn)動（周鞭毛）和不能運(yùn)動兩種類型。無莢膜，芽胞為圓形或長方形，起初（48h）位于菌體近端，隨著成熟逐漸移向頂端。

(一)生物學(xué)性狀艱難梭菌革蘭染色艱難梭菌革蘭染色第六十頁，共99頁。2．培養(yǎng)特點(diǎn)：（1）嚴(yán)格專性厭氧。（2）血瓊脂、牛心腦浸液瓊脂及果糖瓊脂（CCFA）平板

菌落直徑3～5mm，圓形、淡黃色、無光澤、不透明，中央呈臍狀凹陷，表面粗糙（毛玻璃狀），邊緣呈粗絲狀或齒狀。在暗處，紫外線照射，發(fā)生金黃色熒光。血平板上不溶血，紫外線照射出現(xiàn)黃綠色熒光。（3）經(jīng)肉湯培養(yǎng)2d以上，菌體有自溶現(xiàn)象。

艱難梭菌菌落特征（厭氧血平板）

第六十一頁，共99頁。艱難梭菌菌落特征（CCFA平板）第六十二頁，共99頁。3．生化反應(yīng)

（1）可發(fā)酵葡萄糖、甘露醇、果糖產(chǎn)酸。（2）不分解乳糖、麥芽糖與蔗糖。（3）不分解蛋白質(zhì)。不產(chǎn)生吲哚和H2S，不凝固牛乳。硝酸鹽還原-。（4）水解七葉苷、液化明膠。（5）不產(chǎn)生卵磷脂酶及脂肪酶。（6）揮發(fā)性代謝產(chǎn)物主要有少量乙酸、異丁酸、異戊酸、戊酸、丁酸和異已酸。第六十三頁，共99頁。（二）微生物學(xué)檢查法

1．標(biāo)本的采集

2．檢驗(yàn)方法

（1）直接涂片→Gram染色檢查→鏡檢。

（2）分離培養(yǎng)在CCFA上菌落特征明顯，即在紫外線照射下能發(fā)出金黃色熒光——可作為鑒定本菌的重要依據(jù)。（3）毒素測定①細(xì)胞毒性試驗(yàn)②家兔腸袢試驗(yàn)

③致死試驗(yàn)

第六十四頁，共99頁。（三）致病性

艱難芽胞梭菌為腸道正常菌群成員。當(dāng)長期使用有抗藥性的藥物（如氯林可霉素）后，引起菌群失調(diào)，耐藥的艱難芽胞梭菌可大量繁殖而致病。1．致病因素（1）A毒素——腸毒素。

（2）B毒素——細(xì)胞毒素。2．所致疾病（1）偽膜性腸炎。

（2）腎盂腎炎、腦膜炎、腹腔及陰道感染。（3）菌血癥和氣性壞疽等。

第六十五頁，共99頁。艱難梭菌致偽膜性腸炎第六十六頁，共99頁。第二節(jié)無芽胞厭氧菌G-桿菌：脆弱類桿菌等，較多見，在臨床分離的厭氧菌中占70％～80%。G+桿菌：雙岐桿菌屬等，多為腸道皮膚正常菌群，因侵入其他非寄居部位而致病。G+球菌：消化鏈球菌屬等G-球菌種類無芽胞厭氧菌的種類繁多，生物學(xué)特性各異！第六十七頁，共99頁。無芽胞厭氧菌感染多呈慢性過程，臨床上如見有以下特征的感染時，應(yīng)考慮是無芽胞厭氧菌的感染。（1）發(fā)生在口腔、鼻竇、鼻咽部、胸腹、盆腔、腦內(nèi)、幽門會陰附近的炎癥、膿腫及其他深部膿腫。（2）用常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)（-）的敗血癥、感染性心內(nèi)膜炎，膿毒性血栓性靜脈炎等。（3）分泌物或膿腫穿刺液帶血性，或呈黑色或乳白色混濁，有惡臭，有時有氣體。（4）分泌物直接涂片可見細(xì)菌，但普通培養(yǎng)法無細(xì)菌生長。（5）使用氨基糖甙類抗生素如慶大，鏈霉素，卡那等長期治療無效。感染特征第六十八頁，共99頁。致病性發(fā)病條件：本類細(xì)菌屬條件致病菌，是內(nèi)源性感染致病，其發(fā)病條件應(yīng)引起各科醫(yī)生注意①由于機(jī)械或病理損傷②局部形成厭氧微環(huán)境③正常菌群失調(diào)④抗體免疫力減退第六十九頁，共99頁。

不同細(xì)菌的致病物質(zhì)不同，如莢膜、菌毛、膠原酶、IgA分解酶、DNA酶、透明質(zhì)酸酶等。G-菌也有內(nèi)毒素，但脂質(zhì)A較少。

無特定病型，大多為化膿感染，形成局部炎癥，膿腫，組織壞死，也可侵入血流造成敗血癥，感染部位可遍及全身，其中以腹腔、盆腔感染較多見。致病物質(zhì)所致疾病第七十頁，共99頁。微生物學(xué)檢查法1、標(biāo)本采集：注意①避免正常菌群的污染，應(yīng)自正常無菌的部位采集。②應(yīng)床邊采樣。③標(biāo)本采集后宜立即排除空氣后無菌接種于特制的厭氧標(biāo)本瓶中迅速送檢并要求立即接種于適當(dāng)?shù)呐嗷?、直接涂片鏡檢3、分離標(biāo)本與鑒定第七十一頁，共99頁。防治原則1、預(yù)防原則：主要是避免正常菌群侵入中不應(yīng)存在的部位，以及防止局部出現(xiàn)厭氧的微環(huán)境，如外科清創(chuàng)引流。2、治療藥物：PG、氯林可霉素、頭孢菌素、滅滴靈。對氨基糖甙類不敏感

由于無芽胞厭氧菌感染常與其他需氧或兼性厭氧菌混合感染，治療選藥時應(yīng)全面考慮3、支持療法第七十二頁，共99頁。

厭氧性球菌與臨床感染有關(guān)的G+消化球菌屬消化鏈球菌屬G-韋榮球菌屬第七十三頁，共99頁。（一）生物學(xué)性狀1．形態(tài)與染色：G+成雙、成堆或短鏈排列。一、消化球菌屬（Peptococcus）目前只有一個種——黑色消化球菌（Peptococcusniger）黑色消化球菌革蘭染色第七十四頁，共99頁。2．培養(yǎng)特點(diǎn)（1）厭氧、生長緩慢，2～4d才見菌落。（2）生長特點(diǎn)。①血平板黑色、不溶血的小菌落。接觸空氣后色變淺，傳代后黑色消失。②含血清的硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基/庖肉培養(yǎng)基：產(chǎn)黑色素。第七十五頁，共99頁。（三）抵抗力對青霉素、紅霉素、氯霉素、潔霉素、四環(huán)素及滅滴靈敏感。

第七十六頁，共99頁。本菌通常寄居于人的體表及與外界相通的腔道中，是人體正常菌群的成員之一。在臨床上可引起人體各部組織和器官的感染。而且經(jīng)常與其他細(xì)菌混合感染。如腹腔感染、肝膿腫、外陰、陰道及盆腔感染，肺部和胸膜感染、顱內(nèi)感染以及皮膚和軟組織感染等。本菌也可從闌尾炎、膀胱炎、腹膜炎以及產(chǎn)后敗血癥的血中分離出來。

（四）致病性第七十七頁，共99頁。二、消化鏈球菌屬（Peptostreptococcus）

（一）分類包括：以下九個種。厭氧消化鏈球菌（P.anarobius）不解糖消化鏈球菌（P.asaccharolyticus）吲哚消化鏈球菌(P.indolicus)大消化鏈球菌(P.magnus)微小消化鏈球菌(P.micros)普氏消化鏈球菌（P.prevotii）產(chǎn)生消化鏈球菌

（P.productus）四聯(lián)消化鏈球菌

（P.tetradius）天芥菜春還原消化鏈球菌第七十八頁，共99頁。（二）生物學(xué)性狀

1．形態(tài)與染色：G+球形或卵圓形，大小不等，常成雙或短鏈排列，易變G-。無鞭毛。厭氧消化鏈球菌革蘭染色

第七十九頁，共99頁。2．培養(yǎng)特點(diǎn)（1）專性厭氧，最適生長溫度35～37℃pH7～7.5。（2）營養(yǎng)要求較高：需羊血或血清培養(yǎng)基才能生長。（3）血平板灰白色、凸起、不透明、邊緣整齊的小菌落，一般不溶血.

（4）硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基：呈顆粒狀沉淀生長。

第八十頁，共99頁。在含硫培養(yǎng)基（如硫乙醇酸鈉培養(yǎng)基）生化反應(yīng)較明顯。葡萄糖+，乳糖-，水解膽汁-，七葉苷-，吲哚-，尿素酶-，還原硝酸鹽-。4．抵抗力：對多聚茴香磺酸鈉（SPS）特別敏感。3．生化反應(yīng)：不活潑。第八十一頁，共99頁。對多聚茴香磺酸鈉（SPS）特別敏感。4．抵抗力第八十二頁，共99頁。（三）致病性

在臨床標(biāo)本中，本屬菌中的厭氧消化鏈球菌最為多見。消化鏈球菌可引起人體各部組織和器官感染，同時又以混合感染為多見。如腹腔感染、肝膿腫，外陰、陰道及盆腔感染、肺部感染和胸膜感染，口腔感染、顱內(nèi)感染以及皮膚和軟組織感染等。厭氧消化鏈球菌可與金黃色葡萄球菌或溶血性鏈球菌協(xié)同引起嚴(yán)重的創(chuàng)傷感染，即厭氧鏈球菌肌炎。本菌引起的細(xì)菌性心內(nèi)膜炎，其原發(fā)病灶為口腔、牙周和尿道感染而引起。第八十三頁，共99頁。革蘭陰性無芽胞厭氧桿菌

第八十四頁，共99頁。類桿菌屬（Bacteroides）

（一）分類根據(jù)《Bergy’s鑒定細(xì)菌學(xué)手冊》（1994）第九版記載，類桿菌屬列為群6，現(xiàn)有18個種。以脆弱類桿菌最常見。其次為多形類桿菌、普通類桿菌和吉氏類桿菌。代表菌——脆弱類桿菌（B.fragilis)。第八十五頁，共99頁。（二）生物學(xué)性狀1．形成與染色（1）G-0.5～0.8×1.5～4.5μm菌端鈍圓，兩極濃染中間有不著色部分。（2）固體培養(yǎng)基上形態(tài)典型；在含糖液體培養(yǎng)基或陳舊培養(yǎng)物有時顯多形性，呈細(xì)長或絲狀。（3）無鞭毛，無芽胞，多數(shù)有莢膜。脆弱類桿菌革蘭染色

脆弱類桿菌膿汁標(biāo)本涂片第八十六頁，共99頁。2．培養(yǎng)特點(diǎn)（1）專性厭氧（2）氯化血紅素、維生素K1和20%膽汁，可促進(jìn)其生長。（3）厭氧血平板灰白色、圓形、微凸起、表面光滑，邊緣整齊，半透明，多數(shù)菌株，不溶血的小菌落（直徑1～3mm）。（4）膽汁七葉苷（BBE）平板生長旺盛，菌落較大，能分解七葉苷，使培養(yǎng)基呈黑色，菌落周圍有黑暈。

脆弱類桿菌菌落特征（厭氧血平板）脆弱類桿菌菌落特征（BBE平板）第八十七頁，共99頁。3．生化反應(yīng)：較弱4．抵抗力：大部分菌株對青霉素G、卡那霉素和新霉素耐藥。但95%以上菌株對氯霉素、氨芐青霉素、氧哌嗪青霉素、羧塞吩青霉素、亞胺硫霉素、甲硝唑等敏感。

第八十八頁，共99頁。（三）致病性

類桿菌常寄居于人的口腔、腸道和女性生殖道。正常菌群成員，同時也是一種條件致病菌，主要引起內(nèi)源性感染。近來研究證明某些脆弱類桿菌可產(chǎn)生腸毒素，引起女性生殖系統(tǒng)、胸腔及顱內(nèi)感染。

第八十九頁，共99頁。一、乳桿菌屬（Lactobacillus