東北農(nóng)業(yè)大學(xué)大豆所生物技術(shù)應(yīng)用進(jìn)展情況ower

東北農(nóng)業(yè)大學(xué)大豆研究所生物技術(shù)應(yīng)用研究進(jìn)展情況東北農(nóng)業(yè)大學(xué)大豆研究所中國(guó)·哈爾濱陳慶山、李文濱東北農(nóng)業(yè)大學(xué)大豆研究所生物技術(shù)研究概況大豆遺傳圖譜構(gòu)建大豆功能基因分離與鑒定抗病基因分子標(biāo)記重要農(nóng)藝性狀QTL分析大豆SMV抗病相關(guān)表達(dá)譜分析大豆功能基因轉(zhuǎn)化研究大豆資源分析一、大豆遺傳圖譜構(gòu)建1.1材料與方法群體構(gòu)建

Charleston×東農(nóng)594

F2:10

RIL154

SSR分析大豆總DNA的提取SSR引物-----SOYBASE引物擴(kuò)增數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及分析遺傳作圖Mapmaker/EXP3.0/

MapChart2.1MSD1.2研究結(jié)果——SSR引物及位點(diǎn)評(píng)價(jià)SSR引物擴(kuò)增結(jié)果分析500對(duì)----絕大多數(shù)有穩(wěn)定擴(kuò)增產(chǎn)物194對(duì)----有多態(tài)多態(tài)率為38.8%。164對(duì)----群體擴(kuò)增大多數(shù)產(chǎn)物只有一個(gè)片段，以引物名命名其座位名稱SSR位點(diǎn)在RILs株系中的分布

161SSR----整合到遺傳圖譜89（55.28%）SSR引物----符合1:1分離比72（44.72%）SSR引物---偏分離

原因：一些引物在143個(gè)RILs群體中缺失較多一些RILs位點(diǎn)雜合個(gè)數(shù)較多

>15個(gè)sat_091、satt009、satt012、satt584、satt521重組自交系材料構(gòu)建過(guò)程可能導(dǎo)致偏分離的產(chǎn)生

RIL群體遺傳結(jié)構(gòu)分析群體的遺傳結(jié)構(gòu)----各株系親本的基因型組成父母本對(duì)群體總體及各株系的遺傳貢獻(xiàn)率東農(nóng)594----平均遺傳貢獻(xiàn)率為46%，對(duì)各株系分布在14-80%

Charleston----平均遺傳貢獻(xiàn)率為53%，對(duì)各株系分布在20-86%

RILs群體株系評(píng)價(jià)各株系的多樣性指數(shù)（SHANNON）均值為4.93，分布在4.56-5.06，比較接近完全平衡時(shí)的5.04

研究結(jié)果——RIL群體株系的評(píng)價(jià)大豆遺傳圖譜NEAUSRI—GMS

1913.5cM20連鎖群161SSR標(biāo)記間平均距離為11.89cM每個(gè)連鎖群長(zhǎng)度變動(dòng)在0.4cM-309.5cM之間連鎖群上的標(biāo)記數(shù)在2-28個(gè)之間研究結(jié)果——遺傳圖譜構(gòu)建GM19-NGM20-ONEAUSRI遺傳圖譜

97/161SSR引物與國(guó)內(nèi)外對(duì)應(yīng)連鎖群上的相同引物對(duì)應(yīng)對(duì)應(yīng)引物從GM2-A2、GM13-H、GM18-M的1個(gè)到GM7-D1a12個(gè)平均配對(duì)個(gè)數(shù)為4.85個(gè)對(duì)應(yīng)個(gè)數(shù)少的連鎖群主要是本研究中SSR引物較少的幾個(gè)連鎖群與國(guó)內(nèi)外圖譜比較二、大豆功能基因分離與鑒定大豆抗病相關(guān)基因的分離與鑒定大豆其它基因的分離疫霉根腐病菌培養(yǎng)種植綏農(nóng)10接種樣品TotalRNA提取RGA擴(kuò)增與克隆RGA產(chǎn)物測(cè)序與鑒定全長(zhǎng)基因獲得――RACE方法大豆SR1基因的斑點(diǎn)雜交和Southern雜交大豆SR1的轉(zhuǎn)錄表達(dá)檢測(cè)取樣2.1.1研究方法2.1大豆抗病相關(guān)基因的分離與鑒定2.1.2研究結(jié)果—抗病基因同源序列的獲得

提取綏農(nóng)10號(hào)葉片總RNA泳道1~4分別為接種后24、36、48、60h取樣提取的綏農(nóng)10號(hào)葉片總RNART-PCR擴(kuò)增大豆抗病基因同源序列500bpM：DL2000marker，1：RT-PCR擴(kuò)增片斷，2：CKRT-PCRDegenerateoligonucleotideprimersdesignedaccordingtoNandRPS2andL6P1-P3cDNAfromSuinong101234M1228S18SRT-PCR擴(kuò)增結(jié)果目的cDNA片段的克隆及鑒定

克隆的鑒定-藍(lán)白斑篩選

1：轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌DH5α在100mg/mlAmp的LB培養(yǎng)基的生長(zhǎng)；2：未轉(zhuǎn)化的DH5α在100mg/mlAmp的LB培養(yǎng)基的生長(zhǎng)；3：未轉(zhuǎn)化的DH5α在無(wú)Amp的LB培養(yǎng)基的生長(zhǎng)

123克隆的鑒定-質(zhì)粒酶切

M11234567M2M1：λ-EcoT14Imarker；1~7：轉(zhuǎn)化后質(zhì)粒EcoRI酶切；M2：DL2000marker質(zhì)粒酶切鑒定PCR產(chǎn)物的插入

送交5個(gè)測(cè)序，有兩個(gè)通讀3.0kb500bpSR1全長(zhǎng)cDNA的獲得

5′RACE的擴(kuò)增結(jié)果——以RNEAU-1為耙序列M：DL2000marker，1：巢式PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，2：第一次PCR產(chǎn)物

900bpM12

3'RACE擴(kuò)增結(jié)果

M：λ-EcoT14Imarker，1：巢式PCR產(chǎn)物，2：第一次PCR產(chǎn)物

M122.5kb5'RACE和3'RACE與靶序列RNEAU-1的拼接

將5'RACE序列、3'RACE序列與靶序列RNEAU-1進(jìn)行了拼接，得到3574bp的拼接序列。全長(zhǎng)cDNA序列的獲得

M13.5kbM：λ-EcoT14Imarker，1：RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物

全基因榮測(cè)序3574買bp全長(zhǎng)叮cDNA惹序列341摟1bp濾的開(kāi)放孫讀碼框72bp注的5'非翻譯典區(qū)68b夏p的3'非翻譯副區(qū)20bp崖的多聚腺蘿苷酸尾73bp統(tǒng)ATG普起始密碼籮子，34紹84bp引TAA濟(jì)終止密碼奶子編碼11功37個(gè)通淚讀的蛋白構(gòu)質(zhì)氨基酸喚序列該基因續(xù)被命名獎(jiǎng)為SR1GenB蝴ank默注冊(cè)號(hào)：敲AY19病38921MAAT迫TRSL揀ASIYDV甲FLS幅FTGQDT骨RHG擇FTG勞YLYK檔ALD失DRG關(guān)IYTFI湊DDQE膜LPRGD詞EIK秘PAL肆S61DAIQ貴GSRI阻AITVLS聰QNYA緊FSTFC抬LDE妹LVT冷ILHCK拿SEGL飯LVIPV藍(lán)FYK農(nóng)VDP音SHVR賓HQK紡GSY存G121EAMA軍KHQK雕RFKANK晚EKLQ嚼KWRMAL穴QQVA亞DLSGYHF獎(jiǎng)KDG杏DA棗YEY附KFI詳QSI希VE銳QVS吼REI趣NRA181PLHV排ADYP閉VGL竭GSQV背IEVR斃KLL配DVGS醬DDVV渡HII貍GIHGMG董GLGK乞TTLAVAV此YNL事IAPH等FDE241SCFL礎(chǔ)QNVR紅EES敲NLKH夏LQSS具LLS組KLLG橋EKDI需TLT姨SWQE奮GAS賊MIQH鑼RLRR叮KKV畏LLILD僚DVDK301REQL染KAIV第GKP砌DWFG慢PGS懼RVIITTRDK惹HLL勿KYHE肺VERT疤YEV池KVLN撈HNAA梢LHL鈴LTWN帖AFKR361EKID陰PIYD棉D(zhuǎn)VL效NRVV渾TYASGLPL圖ALEVI畏GS溉NLY鳳GKT柿VAE爺WE繪SAL犯ETY階KRI享PS劑NEI犁LKI曾LQ421VSFD葛ALEE向EQQ出NVFL濱DIAC專CFK關(guān)GHEW盟TEVD犧D(zhuǎn)IF椒RALY葬GNG洞KKYH赤IGVL美VEK惜SLIK搶YNRN抵N481RGT徹VQM李HNL己IQ薪DMG徹REI任ERQ紋RS換PEE權(quán)PGK貌RK銷RLW逝SPK要DII怨QV而LKH柔NTG賣TSK兆IE施IIC清LDS余SI541SDKE矩ETVE惜WNE意NAFM貼KMEN箭LKI脫LIIR儀NGKF鐵SIG綿PNYI敗PEG喇LRVL狼EWHR嗎YPS必NCLP熄SNFD拉P601INLV索ICKL縣PDS憶SITS幟FEFH標(biāo)GSS謊KKLGHL網(wǎng)TVLNFD垃KCKF囑LTQI來(lái)PDVS扁DLPNLKEL理SFRK猶CE661SLVAVD柱DSVG稈FLNK向LKK綁LSAYGCR洋KLTSFP舉PLNLTS知LRR貨LQIS毒GCS問(wèn)SLEY條FPE布ILG竊EMV金K721IRV恐LEL驗(yàn)HDL霜PI俘KEL垂PFS矮FQN賊LI否GLS心RLY板LR雞RCR注IVQ踩LRC估SL震AMM穩(wěn)SKL讀SVF追RI蹤蝶ENC箭NKW喜HW781VESE笨EGEE壩TVG捆ALWW漸RPEF唇SAK談NCNL角CDDF溉FLT副GFKR耍FAH征VGYL抄NLSG謀NNF軍TILP服EFFK管E841LKFL辱RTLD王VSDCEH汁LQKI曬RG蔥LPP攀NLK慈DFR講AI飄NCA斥SLT驅(qū)SSS啟KS寶MLL坡NQE忽LY列EAG兵GTK夏FMF劣P901GTR侵IPE憑WFN嶄QQ據(jù)SSG略HSS蟲(chóng)SFW糧FR括NKF厘PAK宏LL山CLL漂IAP悶VSV尚PL后YSLFPPKV涼SF拒GHH菜VPY舌PKV961FIN諸GKC租QAF側(cè)WG文CHW打KQR間MME扯LD葡HTY慎IFD侮LQ嗽KLP宏FEN仍DNL隆FE公EGA汽WEE柱EWN秧HV徐EVR蹄YES贏VL1021ELES病SLIK貧GSG躬IHIF圖REEG踩SME骨EDIR擋FDDP業(yè)YLS凱SSAS泊ESR錘TEED抬IRFD鹽DPY闖LSSS柴ASES太S108旬1TEED趕IGFD科DPY偏LSSS慈ASES贏PSF晉LQTI磨ALGT暖RKF患SIAF妻FLF逼FSCF助LFYY微FGF演SCKK原FT大豆SR1基因編欄碼蛋白稻質(zhì)產(chǎn)物浴的結(jié)構(gòu)歸分析113辛7a銀aTIR瓣：紅色伴劃線區(qū)NBS：?jiǎn)嗡{(lán)色劃線那區(qū)LRR：稅黑色劃線須區(qū)HD：掘疏水結(jié)施構(gòu)域，廁也稱功責(zé)能未知梁保守結(jié)伏構(gòu)域1翻（綠色各劃線區(qū)粉）Con彈ser薪ved乎Do膚mai業(yè)n2闖:功隨能未知壯保守結(jié)怖構(gòu)域2避（粉色藝劃線區(qū)市）SR1基因的斑番點(diǎn)雜交和魄Sout毅hern閘blo夫t分析1：對(duì)照，SR1基因自準(zhǔn)身的雜認(rèn)交；2：SR1基因與綏障農(nóng)10號(hào)基因組灑的雜交121：λ-DNA/HindIII+EcoRImarker；2：陽(yáng)性對(duì)照；3-8：綏農(nóng)10基因組DNA用HindIII、BamHI、EcoRI、EcoRV、DraI和TaqI酶切后與探針的雜交

12345678大豆SR1的轉(zhuǎn)錄表穗達(dá)研究M：λ-E鄭coT乖14I左ma斗rke服r，L、R、S：分別代藍(lán)表SR1在大豆葉掛片、根和介莖中的RT-P筋CR擴(kuò)增大豆SR1的器官果特異性慘檢測(cè)接種大豆貝疫霉根腐頁(yè)病菌對(duì)SR1表達(dá)的羊影響M備L點(diǎn)R聰SM：λ-EcoT14Imarker，1：未接種時(shí)取樣的RT-PCR，2-7：接種后12、24、36、48、60、72h取樣的RT-PCR

3.5kbM1234567水楊酸慰對(duì)SR1表達(dá)的影鵲響3.5輝kbM：λ-E縣coT話14I綠ma南rke牽r，1：未噴斥灑水楊瓣酸時(shí)取沾樣的RT-街PCR，2~7：噴灑貨水楊酸遠(yuǎn)后12、24、36、38、60、72h取樣的RT-好PCRM孤1隱2宰3炒4刷5漁6猾7大豆SR1的轉(zhuǎn)錄表逃達(dá)研究綏農(nóng)1石0號(hào)基引因組的沿克隆M：λ-宿EcoT涌14I瞞mark緊er，1糾：基因組擔(dān)中的擴(kuò)增達(dá)片段以S1膠-A1抄為引物舒在綏農(nóng)豆10基貪因組中扛的擴(kuò)增基因組跑中的擴(kuò)沖增M：λ-EcoT14Imarker，1~5:重組質(zhì)粒NotI酶切轉(zhuǎn)化后重組質(zhì)粒的酶切擴(kuò)增產(chǎn)物的克隆與SR1cDN惰A序列的比吊對(duì)測(cè)序測(cè)序獲括得3972拼bp的DNA序列SR2，序列比舉對(duì)顯示SR2基因含有4個(gè)內(nèi)含咬子2.2霸大豆漆其它基請(qǐng)因的分譯離大豆抗逆齒相關(guān)基因戰(zhàn)延伸因子猾1A的分傭離研究方法抗SM云V品系競(jìng)東農(nóng)8附143SSH技伶術(shù)獲得片段RACE鋒技術(shù)得到全漲長(zhǎng)RT-P盡CR基因表達(dá)真與鑒定SOUT柳HERN黃&N耕ORTH海ERN抗逆相萄關(guān)基因看延伸因弊子1A1t齒tga觀gac半ctg宮gt慚gtc滲ttg村aa調(diào)gcc篇tgg陳aat務(wù)gg吹tgg昆tga臺(tái)ctt巨tt滿gca宴cca帳ac普tgg狂act協(xié)gac傲a冬61瞧acc索gaa灣gtt猾aa族gtc能tgt績(jī)gga結(jié)aa血tgc點(diǎn)acc拳at火gaa憤gct驢ctc鎮(zhèn)ac窄aga翅ggc撞tct雜tc命c(diǎn)cg征gtg篇at辮121桐aa敞tgt車tgg泛at棗tca魯atg竟tta暑ag靈aat疫gtt膊gct薄gt斜taa澇gga續(xù)tc畜tca焰agc死gtg珠gt刷tat缸gtt暑gcc櫻18駱1t針cga鉆act憐caa庭ag紡gat戰(zhàn)gat蒼cc豈tgc筒caa弄gga柱gg楚ctg情cta斥act顏tc炮act跳gcc芝ca奧ggt規(guī)tat仍cat義c城2館41值atg把a(bǔ)ac疤cat俱cc毫tgg協(xié)tca魂gat刃tg佳gaa室atg選gc昏tat皂gcc炭cct興gt矮tct虧tga倒ctg律cc貸aca鬼ctt趣cc持301僑ca島cat答tgc蘋(píng)tg施tca返agt軋ttg奏ct駝gaa牢ctc侍atg很ac齡caa庸gat氧tg鍛aca社ggc根gat盒ct湊ggc煎aaa平gag致36繁1c肢ttg商aga賀agg道aa鼓ccc臣aag項(xiàng)tt皮ttt皮gaa腳gaa刃tg屑gtg初atg禍ctg挨gt歡ttt什gtt叉aa芽gat青gat童tcc烏g意4急21貸acc液aaa趁ccc簡(jiǎn)at撿ggt濤ggt騙tga燭aa室ctt歌tct私ct鍬gag畝tac基ccc梳cc跨act樹(shù)tgg哀tcg僑ct駐ttg臭ctg倆tc防481畝ag摘gga艱tat籃gc抽gtc督aaa賀ctg潮tt任gct屈gtg腳gga落gt蝴cat債caa賽ga知acg歐tgg慨a(chǎn)ga括ag開(kāi)aag拾gat討cct午54灶1a森ctg叢gag撞cca艙ag有g(shù)tc爭(zhēng)acc毒aa躁ggc執(zhí)tgc武cca曲ga狐aga迫aga側(cè)agt歉ga抗atc艷gtg曬cg肺gtt稈tgg驅(qū)ttc炮a卵6帆01驗(yàn)tca怠ggg隨gat牲gt秀cgt則ttc固tta渣tg騰gtt藏aca輸at閑aaa根tgt煮tgg歇tt擾tct遇tgc較cct賊tg施tgt俱ctt傍cg文661婦tt巷tct撲agg兼ta食gct愁tgt哄ttt教tc凈gga盒cat離agt句tt鵲gaa五gtc彈tc垮cac敗cat番cat躲ct步cgc刃aac舉ttt父72更1t萍gtt攏ccc景aga致at終tgg揀gtt畏ct姨tga石tcg貝acg邪gt懇ggc紅aag橫act嫁cc趁ttt圍tat螞ca藏ttc智tgt滔ttt僑a剛7鹽81輛atg鹿tgt獲tgt綠gt決ttg枯tga克gaa駁cc壇cct倉(cāng)gat訓(xùn)ta歪cat濤ttt葡tgt刮ta眠agc機(jī)gca遠(yuǎn)gcg葛ag貪ttt是tag教gg炎841芽ct網(wǎng)ttg培ccg沈tt司gcg搜ttg遺ttg謊gt啄ttg食ctt數(shù)ctt護(hù)aa冶atg液tca裁ac堡ttt適ata免ttt踩gt攻gtt嘴caa資ttt副90偶1t成tgc女ttg枝gtt牙tg測(cè)ctt握tta天aa幟aaa蜻tca腎aat永tt目atg欺tgt蘇caa帥aa息aaa弊aaa熄aa析aaa宵aaa韻aaa左a蒸9虛61殿aaa穩(wěn)aaGenB例ank福注冊(cè)號(hào)：客AY65圣188612243648607284108132156180204228252EF-1A40S0抗逆相關(guān)塌基因延伸機(jī)因子1A

RT龜—PCR格分析三、抗病誓基因分子貪標(biāo)記3.1大豆灰亞斑病7傍號(hào)生理圈小種抗舟病基因鞭分子標(biāo)梢記東農(nóng)91據(jù)212（♀）×東農(nóng)湖967兇4（♂）F2-3感灰斑國(guó)病7號(hào)扭生理小港種抗灰斑推病7號(hào)宿生理小鈴種RAPDOPS0陶3科學(xué)通慘報(bào)，1掠998泡，12黃：23壟02-坦230落7大豆對(duì)灰平斑病菌7碑號(hào)小種抗另性的遺傳杠分析及抗糾病基因的也RAPD睬標(biāo)記8.7姨cM科學(xué)通報(bào)重，199蜜9，23棒：254老4-25裙50大豆灰斑喂病抗病基例因RAP賭D標(biāo)記的汁分子特征查及抗、感襲種質(zhì)的S她CAR標(biāo)舞記鑒定3.2練大豆灰斑借病7號(hào)生討理小種抗戀病基因分罵子標(biāo)記3.2.劇1研究櫻方法東農(nóng)4嘩056滿6（♀）×東農(nóng)4極10（♂）F2F5抗灰斑病情8個(gè)生理懸小種感灰斑病隸1號(hào)生理僅小種結(jié)合20焦02年田沖間抗性接關(guān)種鑒定結(jié)做果和20詞03年盆涼栽抗性接礦種鑒定結(jié)壤果---往--18螺6個(gè)株系材料實(shí)驗(yàn)方狠法大豆灰斑膊病菌的培爛養(yǎng)保存培養(yǎng)拉----礦FLS見(jiàn)1號(hào)小種祝、P贈(zèng)DA培養(yǎng)淡基、4℃/20天轉(zhuǎn)接培養(yǎng)---赴-平板座PDA促培養(yǎng)基申、25℃/3稍0天擴(kuò)大培養(yǎng)----蹲高粱培養(yǎng)械基、25℃/30鋤天接種培養(yǎng)濾----灰毛巾保濕挺培養(yǎng)、趕25℃/7天群體抗畢性鑒定群體種植弱、群體接涂種、病情米調(diào)查分子標(biāo)地記分析加方法DNA吩提取半、抗感績(jī)池的建強(qiáng)立、S遙SR分流析引物篩選保分析PCR反扁應(yīng)、M末apma趨ker/暑EXP3泊.0、押MapC煙hart鑄2.13.2.部2研究軟結(jié)果—群溫體抗性鑒災(zāi)定結(jié)果分膠析卡方檢驗(yàn)戰(zhàn)（χ2=淚0.92輔45）停差異不顯努著，感病捧：抗病符跪合1：1引物篩選1：抗親波；2：感扎親；3-蘋(píng)12建抗府池單株；燙13-2徹2建感池櫻單株SOY甘GPA停TR在甘小群體蒜上的多堵態(tài)性表雀現(xiàn)BSA法鵝尋找SS輕R引物/陡500個(gè)討，10個(gè)是感病株系謀的帶型與棵感親帶型賓完全一致旋，而抗病大株系中有扮9個(gè)與抗山親帶型一惠致，僅有寨一個(gè)株系該的帶型與盲抗性鑒定桃結(jié)果不符驚。連鎖分脹析Sat貴t56稻5抗病基媽因連鎖怖圖譜連鎖順舊序：Sat釣t56治5—S涌OYG苗PAT室R—Hrc堪s1—Sat皺t396連鎖距離撲：6.2孔cM—惹6.5客cM—Hrc稼s1—14獻(xiàn).7c濾M連鎖群分醒析抗FL殘S1妹號(hào)生理多小種基孩因----施SOYG貸PATR龍、S解att5陣65、S跳att3憑96位于C1連鎖已群與Mia版n研究旁的美國(guó)楚Rcs面3鍵——緩J不故同抗病基百因成簇悉分布—喉—F田、G和展JQTL初分析抗討病存在聯(lián)于各個(gè)辨連鎖群始---持-大豆只狂有D1藏b、J苦、K、隱N上無(wú)抗欲SCN認(rèn)基因位紛點(diǎn)C1連鎖歷群上有抗榨SCN潤(rùn)RACE暑2和桐14的位外點(diǎn)四、大它豆主要競(jìng)農(nóng)藝性蝴狀的Q飛TL分跑析研究方法易——性狀愉調(diào)查品質(zhì)性狀蛋白質(zhì)弱含量：株系癥混合脫瓣粒后，灣取50具克樣品兼利用P盈ert餃en8墓620衰測(cè)得，瓣用百分礦數(shù)表示業(yè)（％）油分含麥量：株系混合窯脫粒后，慶取50克椒樣品利用戀Pert的en86喚20測(cè)得環(huán)，用百分盜數(shù)表示（斃％）蛋脂總量照：一個(gè)株減系的蛋浪白質(zhì)含扇量和油兇分含量魯?shù)目偤秃?，用百終分?jǐn)?shù)表雙示（％漆）產(chǎn)量性杠狀單株莢數(shù)譜：?jiǎn)沃耆?zé)部正常默結(jié)實(shí)的滔莢數(shù)，蛛每一株臉系考種尋3株，詠計(jì)算均灰值單株粒鵲重：?jiǎn)沃耆筐捳＝Y(jié)實(shí)圍的粒數(shù)，救每一株系匹考種3株卸，計(jì)算均喬值百粒重妻：從單株正卵常結(jié)實(shí)粒把中選取大視小均勻的晴100粒集稱重，重盒復(fù)2次，察計(jì)算均值極（g）形態(tài)性狀株高：在田間闊調(diào)查時(shí)，角指從地面申到主莖頂還端生長(zhǎng)點(diǎn)千的長(zhǎng)度室內(nèi)考事種指從秤子葉節(jié)壺算起至鳥(niǎo)主莖頂畫(huà)端的實(shí)天際長(zhǎng)度詢（cm獄）生育期：自大豆播彼種出苗至返正常成熟柏時(shí)的天數(shù)存（D）分枝數(shù)：主莖上均有效分枝才數(shù)（有兩買個(gè)節(jié)以上忌并有一節(jié)擾著莢的分旅枝），分聲枝上分枝蹦計(jì)算在內(nèi)主莖節(jié)殘數(shù)：從子嫂葉節(jié)算配起，至騰主莖頂考端的實(shí)怨際節(jié)數(shù)結(jié)莢習(xí)浩性：指植演株開(kāi)花蜜結(jié)莢狀捎況，分艇無(wú)限（迷I）、舅亞有限坐（S）提、有限旁（D）耀三類花色：指花瓣層的顏色，同分紫色（沾P）、白遙色（W）秋兩類茸毛色：于成熟但時(shí)調(diào)查，償分灰色（版P）、棕佳色（B）艘兩類葉形：開(kāi)花舊盛期植胳株中上胸部第8凍-10喜節(jié)復(fù)葉苦中間小諒葉的形棄狀。分逮長(zhǎng)葉（濤L）、巴圓葉（繁R）平均葉長(zhǎng)：植株情中上部疲第8-等10節(jié)植復(fù)葉中匯間小葉世的平均團(tuán)葉長(zhǎng)（宅cm）平均葉寬：植株透中上部堅(jiān)第8-皆10節(jié)醫(yī)復(fù)葉中習(xí)間小葉咳的平均橋葉寬（膛cm）統(tǒng)計(jì)分屈析利用Wi懂ndow艱sQT單LCa當(dāng)rtog夜raph違erV絡(luò)2.0進(jìn)擴(kuò)行復(fù)合區(qū)姐間作圖掃葬描農(nóng)藝性恥狀的QT糠Ls，以篇似然比L作R（Li顫keho閑odR撞atio列）大于1冤1.5，蛛即對(duì)應(yīng)L搭OD值大雅于2.5籃作為QT坊Ls存在謙閾值利用Ma遲pCha翁rt2漿.1版本虜繪制連鎖視圖譜4.2放研究結(jié)果樓——株系出主要農(nóng)藝茫性狀分離慈情況大豆重徑要農(nóng)藝史性狀的去QTL亦分析哪——一年兩化點(diǎn)蛋白質(zhì)含戲量、油分撇含量、蛋球脂總量、隔單株莢數(shù)獵、單株粒述重、百粒稈重、結(jié)莢發(fā)習(xí)性、茸鞭毛色、葉清形、平均靜葉長(zhǎng)等幾蟲(chóng)個(gè)農(nóng)藝性遼狀指標(biāo)均貧呈正態(tài)分偶布株高、決生育期街、主莖閑節(jié)數(shù)、構(gòu)花色呈淡現(xiàn)左偏密分布分枝數(shù)頑呈現(xiàn)右序偏分布平均葉結(jié)寬則呈有現(xiàn)雙峰喂分布品質(zhì)性狀饑QTL分閘析品質(zhì)性狀QTLs連鎖群LRLOD可解釋變異加性效應(yīng)油分含量Qsoil1GM4-B223.235.0421.98%-0.43Qsoil2GM7-D1a37.828.2118.10%0.52Qsoil3GM19-N19.344.2013.17%-0.32Qsoil4GM19-N18.824.0812.73%-0.32蛋白含量Qspro1GM8-D1b11.682.535.16%-0.35Qspro2GM10-E27.075.8714.14%0.54Qspro3GM10-E23.615.1214.29%0.52Qspro4GM19-N18.674.0513.46%0.53Qspro5GM20-O12.932.8112.09%0.55蛋脂總量Qsproil1GM2-A212.002.605.56%0.22Qsproil2GM6-C227.555.9815.44%0.42Qsproil3GM6-C232.497.0516.80%0.46Qsproil4GM10-E14.823.226.62%0.24Qsproil5GM10-E14.643.186.58%0.24品質(zhì)性狀倆——油分含量Satt銷094（貌11.0裹）-Qsoi媽l1-（2織8.2）究Satt客556Sat蹦_00譽(yù)1（0容.0）葡-Qsoi準(zhǔn)l2-（7念.3）S贊at_1行14Satt銷257（查17.0棉）-Qso揉il3-（泰5.9輕）Sa季tt5詠51Satt軋551（廁5.0）唯-Qsoi業(yè)l4-（1晶8.8）著Satt末022LOD值押：Qso升il2（8.準(zhǔn)21）>Qsoi逗l1（5益.04支）>Qsoi隨l3（4.隨20）>Qsoi具l4（4坐.08豎）加性效應(yīng)頓：Qso蒼il2（0疫.52孟）>Qso贏il1（-0鍵.43）搖>Qsoi妙l3（0.設(shè)32）＝Qsoi專l4（0艱.32只）可解釋變嫌異：Qsoi童l1（21迷.98％洋）>Qsoi幸l2（18仆.10％瓜）>Qsoi衫l3（1聲3.1傳7％）雁>Qso晃il4（1安2.7莊3％）產(chǎn)量性狀其QTL分床析品質(zhì)性狀QTLs連鎖群LRLOD可解釋變異加性效應(yīng)單株莢數(shù)Qsppp1GM6-C215.973.4612.67%-6.34Qsppp2GM6-C220.864.539.52%-5.78Qsppp3GM6-C219.704.278.94%-5.19Qsppp4GM20-O15.223.308.11%-4.91單株粒重Qsswpp1GM1-A127.966.0712.56%7.10Qsswpp2GM1-A122.514.8914.32%9.22Qsswpp3GM1-A130.616.6421.06%-8.56Qsswpp4GM5-C119.384.209.63%4.67Qsswpp5GM6-C231.316.8026.28%-8.48Qsswpp6GM6-C231.016.7323.16%-8.26Qsswpp7GM19-N16.443.5715.14%-6.71百粒重Qsswph1GM1-A130.796.6814.16%-1.21Qsswph2GM1-A120.284.049.11%-0.88Qsswph3GM1-A136.757.9819.78%1.40Qsswph4GM1-A137.668.1724.76%1.52Qsswph5GM1-A117.373.777.36%-0.68Qsswph6GM3-B113.712.987.71%0.85Qsswph7GM19-N12.992.8211.84%-1.03Qsswph8GM20-O22.564.9012.33%1.17產(chǎn)量性狀俘——單株莢數(shù)Sat箏t33據(jù)4（3休3.0曉）-Qsp墳pp1-（音5.4僵）Sa營(yíng)tt0除02Satt岸002（它2.0）纏-Qsp香pp2-（2放.8）S炮at_0壇92Sat_奔092（其4.0）跪-Qsp拋pp3-（9納.0）S伏att4縮慧60Satt毀173（世12.0兆）-Qspp氏p4-（踢3.6擇）Sa壁tt5鵝81LOD值山：Qspp趴p2（4個(gè).53伯）>Qsp憲pp3（4銷.27然）>Qspp披p1（3.昏46）>Qsp王pp4（3德.30券）加性效新應(yīng)：Qspp毯p1（-6硬.34）槍>Qsp緞pp2（-煮5.7捷8）>Qsp鼻pp3（-頭5.1需9）>Qsp液pp4（-殲4.9墨1）可解釋脊變異：Qsp艇pp1（1葵2.6鼠7％）終>Qspp淘p2（9.寒52％）傻>Qsp丟pp3（8.求94％）秤>Qspp城p4（8則.11螺％）形態(tài)性盤(pán)狀QT筆L分析品質(zhì)性狀QTLs連鎖群LRLOD可解釋變異加性效應(yīng)株高Qspl1GM1-A118.454.006.75%-7.42Qspl2GM1-A118.984.129.10%-8.19Qspl3GM1-A113.602.954.94%-6.05Qspl4GM3-B142.569.2317.82%12.26Qspl5GM3-B121.524.6711.71%10.75Qspl6GM3-B119.284.187.95%9.84Qspl7GM7-D1a22.154.127.77%-6.49Qspl8GM10-E13.062.833.68%4.47分枝數(shù)Qsb1GM3-B124.855.3921.07%-0.75Qsb2GM3-B121.864.7416.34%-0.68Qsb3GM3-B132.437.0420.50%-0.84Qsb4GM6-C216.843.6521.88%-0.72Qsb5GM6-C217.063.706.02%-0.42Qsb6GM6-C216.763.647.17%-0.48Qsb7GM10-E19.104.146.04%-0.33主莖節(jié)數(shù)Qsmn1GM1-A140.278.7416.56%-1.38Qsmn2GM1-A142.549.2321.53%-1.54Qsmn3GM3-B130.786.6813.05%1.56Qsmn4GM3-B160.7213.1828.46%2.28Qsmn5GM3-B137.178.0723.21%2.34Qsmn6GM3-B114.933.247.12%1.43Qsmn7GM7-D1a22.864.967.93%-0.92品質(zhì)性狀QTLs連鎖群LRLOD可解釋變異加性效應(yīng)結(jié)莢習(xí)性Qsph1GM1-A116.863.669.32%-0.22Qsph2GM3-B119.624.2614.20%0.29Qsph3GM6-C238.048.2560.04%-0.51Qsph4GM6-C214.723.197.52%0.20花色Qsfc1GM3-B114.463.1415.49%-0.18Qsfc2GM7-D1a19.894.3211.15%-0.19Qsfc3GM7-D1a27.335.9315.57%-0.23Qsfc4GM7-D1a43.109.3518.92%0.28Qsfc5GM7-D1a30.246.5617.74%0.24Qsfc6GM7-D1a12.922.809.73%0.21Qsfc7GM10-E20.604.477.92%0.13Qsfc8GM10-E16.833.657.29%0.12Qsfc9GM10-E17.663.836.54%0.12Qsfc10GM11-F14.633.176.06%0.15茸毛色Qshc1GM1-A117.303.752.78%0.11Qshc2GM6-C228.906.277.09%-0.18Qshc3GM6-C239.578.599.50%-0.23Qshc4GM6-C236.868.0015.76%-0.28Qshc5GM6-C239.128.4911.55%-0.29Qshc6GM6-C238.308.3111.50%-0.29Qshc7GM6-C240.408.776.19%-0.18Qshc8GM6-C227.746.029.15%-0.20Qshc9GM6-C216.913.676.49%-0.16形態(tài)性殼狀QT擇L分析形態(tài)性狀毫QTL分掀析品質(zhì)性狀QTLs連鎖群LRLOD可解釋變異加性效應(yīng)茸毛色Qshc10GM6-C230.566.636.11%-0.20Qshc11GM6-C247.7110.3511.50%-0.26葉形Qsls1GM1-A177.6216.8424.39%-0.30Qsls2GM1-A135.777.767.62%-0.23Qsls3GM1-A116.443.576.22%0.35Qsls4GM1-A118.383.9912.51%0.46平均葉長(zhǎng)Qsall1GM1-A140.168.7119.64%10.35Qsall2GM1-A134.047.3912.91%8.18Qsall3GM1-A115.273.319.46%-7.02Qsall4GM4-B216.023.484.39%3.99Qsall5GM4-B213.622.964.04%3.96Qsall6GM6-C213.893.016.14%5.52平均葉寬Qsalb1GM1-A149.5710.7621.41%-15.68Qsalb2GM1-A1167.2836.3049.67%-15.35Qsalb3GM1-A1132.7728.8146.15%-14.03生育期Qsmp1GM6-C237.688.1825.85%-3.46Qsmp2GM6-C215.753.426.45%1.83Qsmp3GM7-D1a31.466.8315.30%-3.26Qsmp4GM7-D1a12.352.6812.35%2.53QTL剝分析結(jié)頓果與國(guó)毀內(nèi)外Q緞TL分做析結(jié)果供比較與國(guó)內(nèi)楊比較與國(guó)外比俘較性狀NEAUSRICASCAAS百粒重C2、D1a油分B2單株莢數(shù)C2檢出能力97/6.233/3.34/1.3連鎖群NEAUSRI國(guó)外公共圖譜A1百粒重、平均葉寬B1百粒重、株高C1單株粒重C2單株粒重、生育期N蛋白質(zhì)含量O百粒重、蛋白質(zhì)含量五、大豆瓣SMV消傅減文庫(kù)構(gòu)每建及ES槳T表達(dá)譜桂分析種植抗大遲豆花葉病培毒病品種斯8143材料一對(duì)真巧葉展開(kāi)接種花劣葉病毒各1號(hào)株慢系不接種咬花葉病心毒1號(hào)短株系每隔2濕4h取耕樣，連合續(xù)8次液氮速榜凍，-淺70℃寧冰箱保揮存?zhèn)溆?.1漠研究緊方法方法接種樣本總RN善A的提揭取取樣mRNA謠的純化DNA占污染的庫(kù)去除抑制消的減雜交嫌（SS付H）SSH擴(kuò)溉增產(chǎn)物的襖克隆SSH擴(kuò)增產(chǎn)物的純化純化產(chǎn)物與載體的連接大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備轉(zhuǎn)化與陽(yáng)性克隆的篩選測(cè)序及綠序列、恢表達(dá)譜淡分析圖1大洲豆總的R湖NA提取倦圖譜1：未傘誘導(dǎo)樣偉本的總拋RNA2：誘拉導(dǎo)樣本都的總R芳NA由圖可知際,提取的加總RNA攀完整無(wú)降歡解,適合棒下一步操獅作。大豆81些43總R喇NA的提礎(chǔ)取結(jié)果5.2自研究胃結(jié)果12大豆81日43的m泰RNA純獨(dú)化結(jié)果圖2英大豆mR梳NA的純縱化圖譜1：未誘途導(dǎo)樣本的求mRNA2：誘導(dǎo)落后樣本的抽mRNA純化的m店RNA在魂瓊脂糖凝質(zhì)膠電泳上摔為彌散狀器,紫外赴分光光度零計(jì)檢測(cè)Ａ授260/丹Ａ280閣接近2.派0,證明可poly第A質(zhì)量味較好大豆81材43誘導(dǎo)斧前后的雙寺鏈cDN翁A合成結(jié)枝果圖3具cDN歌A二鏈威合成圖孫譜1：未誘大導(dǎo)樣本的家driv逢erc合DNA鉤2：隔誘導(dǎo)后樣卡本的te雷ster錘cDN料A12M酶切結(jié)果包分析圖4米cDN道A酶切廟圖譜1：未芽經(jīng)酶切猾的te帶ste益rc擺DNA2：酶傻切后的裙tes濟(jì)ter茂cD絕NA對(duì)合成的溫test棒erc克DNA雙仰鏈用Rs月aⅠ酶切嫁,由圖可欄見(jiàn)酶切后鄙的片段小勺于未酶切戶的tes孫ter鹿cDNA汪片段,酶犁切效果較培好,可用置于下一步豆接頭連接撞。12M差異表隔達(dá)消減級(jí)效率分年析圖5姿消減后猾PCR龜擴(kuò)增圖摟譜1：差云減樣本哲的第一槍次PC勤R結(jié)果患2：未還差減樣茫本的第勿一次P趟CR結(jié)龍果3：差宣減樣本鼠的第二其次PC島R結(jié)果筆4物：未差瘋減樣本桂的第二地次PC丘R結(jié)果由圖分析擊可知,抑嗚制消減雜突交有效富黑集了誘導(dǎo)甲后大豆8攀143差榆異表達(dá)的濁cDNA任片段1234M連接轉(zhuǎn)溉化與質(zhì)鏟粒文庫(kù)趨滴度計(jì)連算上：轉(zhuǎn)訊化后大漠腸桿菌窮DH5拔α在1翁00m滔g/m棗lA飾mp的呆LB培這養(yǎng)基的適生長(zhǎng)下左：未風(fēng)轉(zhuǎn)化的D披H5α在編100m序g/ml怎Amp焦的LB培榮養(yǎng)基的生找長(zhǎng)下右：遇未化的欺DH5爬α在無(wú)度Amp頃的LB襯培養(yǎng)基淚的生長(zhǎng)序列測(cè)額定挑取陽(yáng)耳性克隆肌隨機(jī)送況交測(cè)序州——6報(bào)4個(gè)EST概s片段獻(xiàn)中最短族的為1愁36b番p，最型長(zhǎng)的6精91b身p，平回均長(zhǎng)度詠為45精6bp峽，有4登1條序丸列帶有慢pol鏈y(cè)（A設(shè)）將測(cè)序結(jié)摧果到Ge堅(jiān)nBan斬k進(jìn)行B割last吵n和Bl稿astx里比對(duì)，其坑中49個(gè)該有比較明載確的比對(duì)廢結(jié)果相關(guān)功能細(xì)胞保護(hù)機(jī)制

過(guò)氧化氫酶

錳超氧化物歧化酶

抑制病原菌生長(zhǎng)或昆蟲(chóng)發(fā)育

枯草桿菌蛋白酶抑制因子

半胱氨酸蛋白酶抑制因子

系統(tǒng)獲得性抗性相關(guān)

熱激蛋白

侶伴蛋白

細(xì)胞色素b5還原酶

伸展蛋白

二氫葉酸還原酶

查爾酮合成酶

RNA結(jié)合蛋白

絲氨酸蛋白酶

延伸因子1A

水通道蛋白

可變表面抗原蛋白

鋁誘導(dǎo)蛋白

同源基因茂種類表達(dá)譜分析相關(guān)功能信號(hào)傳導(dǎo)相關(guān)

胞質(zhì)磷酸甘油酸激酶1

傳感組氨酸激酶

Ca+傳感接受元件

β轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子Ⅰ型受體

離子通道調(diào)控蛋白

富含羥脯胺酸糖蛋白

生長(zhǎng)素下調(diào)蛋白12-2

持家基因

與蛋白質(zhì)合成相關(guān)

參與呼吸鏈

參與光合作用

與有絲分裂有關(guān)

功能不確切

硫胺素合成酶

包膜突起蛋白

?；d體蛋白硫脂酶

硫酸鹽類糖蛋白

同源基因凍種類表達(dá)譜分析六、大豆功能圓基因轉(zhuǎn)化姿研究抗牛巴氏茫桿菌性肺女炎疫苗基嘴因?qū)Υ蠖诡}遺傳轉(zhuǎn)化嘉的研究實(shí)驗(yàn)材料植物材閑料選用1題1個(gè)仰全國(guó)不籃同積溫憲帶的大宰豆主栽克品種作走為本研大究的試神材,有毯合豐2迎5、合槍豐35餅、黑農(nóng)課35、奴黑農(nóng)4滿2、東旁農(nóng)42浴、東農(nóng)蹦163誦、黑河壩99-侍120具1、綏蒸農(nóng)10傷、綏農(nóng)劑