水產(chǎn)品中泰樂菌素A殘留量的測定高效液相色譜法歡迎光臨

DB××××××—××××DB××××××—××××PAGE2PAGE1DB33浙江省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布2023-01-28實施200DB33浙江省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布2023-01-28實施2007-12-29發(fā)布水產(chǎn)品中泰樂菌素A殘留量的測定高效液相色譜法DeterminationoftylosinAresiduesinaquaticproductshighperformanceliquidchromatographyDB33/T673—2007浙江省地方標(biāo)準(zhǔn)ICS67.050X04DB33/T673—2007DB33/T673—2007PAGEIIPAGE1前言本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A為資料性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由浙江省水產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：農(nóng)業(yè)部漁業(yè)環(huán)境及水產(chǎn)品質(zhì)檢中心（舟山）、浙江海博食品。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：陳雪昌、王堅強、陳偉斌、郝云彬、鄭斌。PAGE4PAGE3水產(chǎn)品中泰樂菌素A殘留量的測定高效液相色譜法范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了水產(chǎn)品中泰樂菌素A殘留量的高效液相色譜測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于水產(chǎn)品可食部分中泰樂菌素A殘留量的測定。規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法原理樣品在堿性條件下用乙酸乙酯提取，正己烷脫脂，反相色譜柱分離，紫外檢測器檢測，外標(biāo)法定量。試劑與材料實驗用水應(yīng)符合GB/T6682中一級水標(biāo)準(zhǔn)。試劑除有實驗要求外，其余均為分析純。煌4.1蠢正己烷。圾4.播2駛乙酸乙酯。腎4.3埋乙腈躲。違4.4姿磷酸瘡：薦（85%）聽。敬4.政5吃磷酸斗二氫鉀。沿4.渣6界磷酸紡氫二鉀。冰4.蟲7遷磷酸鹽緩沖嬸液（錯pH8.0錄）：播準(zhǔn)確稱取副磷酸二氫鉀斧0.52寇g吩和磷酸氫二饞鉀什16.73膚悶g牲，加水定容葛至500高mL。旋4.請8賽流動相用磷寺酸鹽緩沖液幟（酷pH2.5復(fù)）：衡0.01底從mol/L贈，元準(zhǔn)確稱取皮1.36矮g底磷酸二氫鉀武，加適量水駝溶解，以磷鄭酸調(diào)pH為構(gòu)2.5，定斯容至100變0mL。廚4.捆9循泰樂菌素功A順標(biāo)準(zhǔn)品：純半度液﹥嫂98%。藏4.啦10島泰樂菌素帽A籮標(biāo)準(zhǔn)貯備液泉：舅準(zhǔn)確稱取冰適量的泰樂廁菌素求A本標(biāo)準(zhǔn)品，用引乙腈配制成史100m夸g/L的標(biāo)皺準(zhǔn)貯備液。汪避光冷藏保肥存，保存期負為一個月。電4.雅11童泰樂菌素翠A顆標(biāo)準(zhǔn)工作液麗：用流動相散稀釋成各質(zhì)琴量濃度的標(biāo)聯(lián)準(zhǔn)溶液樸0.10絮玻mg/L新、伶0.澤5著0漿慢mg/L句、脾1種.釣00慎更mg/L尤、2.祖00封咱mg/L走、疼5.00亮盾mg/L荒，現(xiàn)配現(xiàn)用您。儀器與設(shè)備可5.1惜浸液相色譜儀悶：配吉紫外主檢測器。濃5.2梯組織搗碎剛機。合5.瞧3淺玉均質(zhì)機堆：衡大于蘋1000渡0rpm歷。想5.脅4潤弓離心機：7猴盒000啟格rpm。叨5.徐5羽懸旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器巷。堂5.飾6判奶旋渦混勻器河。竭5.道7銀甲天平踐：喊感量丸0.01沿暢g艷和伶0.000傾1簽悶g筐。飯5易.倆8助揉pH計摘5科.墊9俯毀聚丙烯離心坐管：50m頌L、10m穴L。分析步驟孝6駕.1嫩取樣米魚去鱗、去桌皮沿背脊取母肌肉；蝦去算頭、去殼、笑去附肢，伙取紙可食部分；著蟹、中華鱉委等覆取和可食部分；末取適量破樣品旅經(jīng)組織搗碎錢機搗碎戰(zhàn)，放置伐密閉瓦容器毅-18忘堂℃套以呼下完冷凍貯存?zhèn)錉I用。霸6子.2提取棒稱取樣品議10圍妨g遠（襖精確糞至翅0.01值槍g贈）攏，滑于拋5撐0岸液m慶L臥聚丙烯離心好管中，加入處5紛象m肉L催磷酸鹽緩沖奧溶液（4.相7在）疲，蓮均質(zhì)靠30亡予s至，藝再仗加入扮25額閑m接L泊乙酸乙酯均綢質(zhì)旬30趁恩s徹，以600膠0r塊pm鞏離心5m榮in，乙酸嗚乙酯層舒移通入250戴促m鎖L階旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)厚瓶中。加入系25適杜m否L腎乙酸乙酯于雄離心管中，漢重復(fù)提取1恥次，合并乙桂酸乙酯于2牽50括節(jié)m筋L旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)嚼瓶。蠅6昂.3凈化漏將提取液于元40荒影℃誘水浴軋旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至現(xiàn)近干，加入繡1狀粘m炮L倡乙腈溶解殘辟渣后，移入惡10犧截m張L勿聚丙烯箭離心管中，射加入2牛淋m妖L鏈正己烷渦旋塵振蕩搖15s志萃取脫脂，穴7000歐r形pm諸離心5m禁in，氣棄去正己烷帶層，下層液質(zhì)體經(jīng)0.4稀5越臂μm微孔濾篩膜過濾，懇供高效液相禁色譜儀測定容。測定鍛7謎.1君美色譜條件因7裂.課1疑.鍬1英話色譜柱：O冠DS晶她C攜18職，5斑蛇μ殲m，艦4.6m次m勾鏡×熟250昏田m汁m奸或同類型號臭色譜柱。弄7勢.1怨.2賠柱溫：忘35腎江℃純。慮7.1坐.3森流動相：釣乙腈北－方磷酸鹽緩沖冊液（4.掘8娃）海=哀40促+食60銅，捧（V/V）掃。菜7.1于.4屆置流速：1辯.0光mL/mi釋n。揭7.1躬.5蔥進樣量：叮20竭玩μ灑L。營7.塵1川.6離泉檢測器波長暮：280出佩nm。秘7渣.兩2葡款標(biāo)準(zhǔn)犬曲線診制作腹取原泰樂菌素麻A皇標(biāo)準(zhǔn)稿貯備豐液獎，用做流動相豎稀釋成濃度耽為0.籠1綱0碌蓄mg/L怒、年0.晌5榜0鵲琴mg/L畜、皮1醋.粥00樸藥mg/L體、2.尖00賴傷mg/L蜜、假5酷.00鮮盟mg/L的奏標(biāo)準(zhǔn)工作液耗。分別取諷2決0繁圾μL棵進樣，以峰挑面積為縱坐洞標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)寬樣品中欄泰樂菌素禍A酸含量為橫坐叛標(biāo)，繪制棒標(biāo)準(zhǔn)鏟曲線。出7.拔3登色譜測定同取蘿樣品羅濾液小20鈴書μL門進樣，記錄置峰面積，沸保留時間為破5.2mi身n。過從咐標(biāo)準(zhǔn)劃曲線查得樣茂品提取液中荷泰樂菌素篩A蘋的含量。尿如果上機液家濃度超過線采性范圍，用榜乙腈稀釋后眉進行測試弱。計算加樣品中愛泰樂菌素秋A的含量按否公式（1）途計算。擠……………噴……………護……………呼..（1）挨式中：劃X魔——溜樣品雕中撈泰樂菌素婦A旬的含量，單豆位為毫克每勿千克（呆μ深g/g）；銷C錄——屠樣品揭溶液中蒙泰樂菌素綱A穴的累濃度惑，單位為跟毫銅克每升（頂μ靜g/救m腰L傳）；摘m廁——必樣品投質(zhì)量，單位雪為克（g）晨；胳V秋——策樣品晚溶液體積，多單位為毫升突（m馬L采）。捕注：陡檢驗結(jié)果保凱留2位有效漢數(shù)字。袋方法喇檢出限、回頃收率臨和精密度奮9.1烤雅方法檢出限興本方法檢出辣限為0.0涼5m竟g個/kg。定9.2回殘收率究在0.05刊上mg/kg同～制2.5絹膽mg/kg縣的添楊加屯濃度下的回葡收率為70她%迎