苛養(yǎng)菌的分離培養(yǎng)

苛養(yǎng)菌的分離培養(yǎng)演示文稿目前一頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)何為苛養(yǎng)菌？1.苛養(yǎng)菌主要是指對生長環(huán)境、營養(yǎng)要求較苛刻的細(xì)菌，在普通環(huán)境中不能或難以生長。

體外培養(yǎng)需添加特殊因子或其他營養(yǎng)成分。2.苛養(yǎng)菌在臨床上涉及到的主要有：嗜血桿菌屬、肺炎鏈球菌、化膿性鏈球菌、奈瑟氏菌、布拉漢氏菌、軍團(tuán)菌等

3.有一些特殊的實(shí)驗(yàn)可幫助苛養(yǎng)菌的鑒定，一些選擇性培養(yǎng)基可幫助細(xì)菌的鑒定。目前二頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)血平板培養(yǎng)基

血平板培養(yǎng)基又叫血平板，主要用于鏈球菌及其他苛養(yǎng)菌的分離、培養(yǎng)及溶血活性的檢測。主要成分：其中的蛋白胨和牛肉粉主要提供細(xì)菌生長所需要的碳源、氮源、氨基酸及維生素。氯化鈉維持培養(yǎng)基中的滲透壓，瓊脂用做凝固劑。脫纖維羊血一方面提供一些特殊的生長因子，另一方面用于觀察溶血反應(yīng)。目前三頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)A嗜血桿菌屬與人類密切相關(guān)的嗜血桿菌有8種，比較常見的是流感嗜血桿菌和副流感嗜血桿菌。流感嗜血桿菌簡稱流感桿菌，屬嗜血桿菌屬。本屬細(xì)菌因人工培養(yǎng)時(shí)必須加新鮮血液或血液成分方能生長，故名嗜血桿菌。流感嗜血桿菌是嗜血桿菌屬中最常見的對人有治病性的細(xì)菌，可引起原發(fā)性化膿性感染和呼吸道繼發(fā)感染。近年來也是社區(qū)獲得性肺炎的主要病原菌。目前四頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)流感桿菌(Hemophilusinfluenzae)是人類上呼吸道的正常菌群，以往一直被誤認(rèn)為是流行性感冒的病原菌，但實(shí)際致病范圍極廣，除引起呼吸道病變外，尚可引起腦膜炎、敗血癥、結(jié)膜炎、女性生殖道感染、蜂窩織炎等。不僅是嬰幼兒感染的常見致病菌，亦是成人感染的病原菌之一。目前五頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)1.形態(tài)與染色

流感嗜血桿菌是一群無動(dòng)力、無芽孢、呈球桿狀或多形態(tài)的革蘭陰性小桿菌。菌落為圓形、無色、透明。2.培養(yǎng)特性需氧或兼性厭氧，培養(yǎng)時(shí)需要X因子和V因子。血液中因x子經(jīng)加熱可釋放，故常用巧克力色培養(yǎng)基分離培養(yǎng)。另外金黃色葡萄球菌生長時(shí)能產(chǎn)生本菌需要的V因子，目前六頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)因此與金黃色葡萄球菌共同培養(yǎng)時(shí)，離金黃色葡萄球菌菌落近的生長好，形成衛(wèi)星現(xiàn)象。副流感只需V因子，杜克氏只需X因子。該菌的藥敏實(shí)驗(yàn)為HTM平板目前七頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)3.致病物質(zhì)和所致疾病

致病物質(zhì)主要為莢膜、菌毛與內(nèi)毒素。根據(jù)莢膜多糖，b型致病力最強(qiáng)。所致疾病分原發(fā)感染和繼發(fā)感染兩類，前者為急性化膿性感染，后者常在流感、麻疹等感染后發(fā)生，臨床有慢性支氣管炎、中耳炎、鼻竇炎等，多見于成人。目前八頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)于1930年，流感嗜血桿菌分類為兩類，即莢膜菌株及沒有莢膜的菌株。雖然已知莢膜類的乙型流感嗜血桿菌是毒性的主因之一，但感染流感嗜血桿菌的病因仍未完全清楚。它們的莢膜能幫助它們抵抗在沒有免疫的寄主體內(nèi)的吞噬作用及不觸發(fā)補(bǔ)體介導(dǎo)的裂解。沒有莢膜的菌株則較少侵略，但它們能誘發(fā)炎癥而產(chǎn)生其他病癥，如會咽炎。目前九頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)病源菌根據(jù)不同的生化反應(yīng)可分為6個(gè)生物型：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ。致病者多為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ型。根據(jù)莢膜多糖抗原性不同，可將有莢膜菌分為a、b、c、d、e和f6個(gè)血清型。b型致病力最強(qiáng)，其次為e和f。根據(jù)細(xì)菌外膜蛋白（OMP）又可分為不同的亞型。有莢膜者致病力大于無莢膜者。目前十頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)流感桿菌主要通過呼吸道在人與人之間傳播，也可通過孕婦產(chǎn)道感染。新生兒由于有來自母體的被動(dòng)免疫，故2個(gè)月內(nèi)發(fā)病率低，3個(gè)月至3歲兒童的血清抗體水平最低，此期易產(chǎn)生感染目前十一頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)杜克雷嗜血桿菌杜克雷氏嗜血桿菌的形態(tài)特點(diǎn)是短而細(xì)小，呈短棒狀，兩端較為鈍圓。長約1.5微米，寬約0.5微米。往往成雙平行排列呈雙鏈狀。大多數(shù)細(xì)菌分布在細(xì)胞外呈鏈狀排列，僅少數(shù)細(xì)菌可在細(xì)胞內(nèi)呈團(tuán)塊分布。人是它的儲存宿主。對溫度的敏感性很高，不耐熱，超過38℃時(shí)就很快死亡。干燥及65℃時(shí)均可迅速死亡。但它的耐寒性能較強(qiáng)。目前十二頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)從病灶中或培養(yǎng)菌落中取材檢查可見2個(gè)或2個(gè)以上細(xì)菌連成鎖狀有如魚群在游泳。故稱魚群狀。在淋巴腺組織切片中可見典型的連鎖桿菌。目前十三頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)杜克雷嗜血桿菌對溫度較敏感，43-44℃以上溫度則失去抵抗能力，20分鐘即可死亡。對42℃抵抗性稍強(qiáng)，但4小時(shí)死亡。在37℃中可活6-8天，10-20℃之間7-10天后可死亡，在此溫度中較大腸菌、葡萄球菌抵抗力弱，較淋球菌強(qiáng)，對寒冷抵抗力較強(qiáng)，5℃中可生存1周，凍干時(shí)可能生存1年。對干燥的抵抗性弱。在人工培養(yǎng)中溫度是發(fā)育的重要因素。目前十四頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)在19世紀(jì)以前人們把梅毒與軟性下疳混為一談。直到1889年，意大利皮膚病學(xué)家杜克雷從3例患有生殖器潰瘍的病人患部取膿性分泌物，接種到自己身上，并形成了潰瘍。他在自身患部排出的膿性分泌物中發(fā)現(xiàn)一種微生物，這種微生物特別喜歡在含有新鮮的人血或兔血的培養(yǎng)基上生長，所以被稱之為杜克雷氏嗜血桿菌。就是以后證實(shí)的軟性下疳致病菌。目前十五頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)杜克雷嗜血桿菌對X因子需要性高，不需要V因子，將純培養(yǎng)物注射入家兔可引起面部潰瘍性病灶，人感染后，不能產(chǎn)生持久免疫力。目前十六頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)B肺炎鏈球菌1.形態(tài)與染色該菌為革蘭染色陽性，菌體呈矛頭狀、成雙或短鏈狀排列的雙球菌，有毒株菌體外有化學(xué)成分為多糖的莢膜。普通染色時(shí)莢膜不著色，表現(xiàn)為菌體周圍透明環(huán)。無鞭毛，不形成芽孢，菌體衰老時(shí)可呈現(xiàn)革蘭染色陰性。目前十七頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)

2.培養(yǎng)特性和生化反應(yīng)營養(yǎng)要求及在血平板上菌落特征基本同甲型鏈球菌，培養(yǎng)時(shí)間稍久菌落中央下陷呈臍窩狀，在血清肉湯中培養(yǎng)稍久亦因細(xì)菌自溶而使渾濁的培養(yǎng)液變澄清，自溶酶可被膽汁或膽鹽等物質(zhì)活化，加速細(xì)菌溶解，故可用膽汁溶菌試驗(yàn)與甲型鏈球菌相區(qū)別。該菌通過optochin敏感實(shí)驗(yàn)得到鑒定。目前十八頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)

該菌的藥敏實(shí)驗(yàn)平板為血MH平板，放CO2環(huán)境**1ug苯唑西林紙片可用來篩選P耐藥，但須認(rèn)識到，當(dāng)OX>20mm時(shí)表明肺炎鏈球菌對P敏感，此菌往往也對其他B-內(nèi)酰胺（包括阿莫西林和多數(shù)頭孢素）抗生素敏感；如果OX<19，則需要重新檢測青霉素、頭孢霉素MIC，以確認(rèn)該菌株是否是耐藥。

許多藥物還沒有藥敏試驗(yàn)的解釋標(biāo)準(zhǔn)，不能夠提供準(zhǔn)確的、令人滿意的一些重要抗生素（如超廣譜頭孢、碳青霉烯）的藥敏試驗(yàn)結(jié)果。目前十九頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)3.致病性在化膿性球菌中，肺炎鏈球菌的致病力僅次于金黃色葡萄球菌。不同的是，到目前為止，肺炎鏈球菌極少對青霉素類抗生素產(chǎn)生耐藥性。肺炎鏈球菌主要的致病物質(zhì)是肺炎鏈球菌溶血素及莢膜。莢膜具有抗原性，是肺炎鏈球菌分型的依據(jù)。此菌可引起大葉性肺炎、腦膜炎、支氣管炎等疾病。目前二十頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)C鏈球菌1.形態(tài)與染色鏈球菌為革蘭染色陽性細(xì)菌。菌體球或卵圓形，直徑不超過2um,呈鏈狀排列。致病性鏈球菌鏈較長。無芽孢，大多數(shù)無鞭毛，幼齡菌常有莢膜。多數(shù)兼性厭氧，少數(shù)厭氧，過氧化氫酶陰性，適溫37度。營養(yǎng)要求較高，培養(yǎng)基中需加入血清、血液或腹水。在液體培養(yǎng)基中呈沉淀生長，但也有呈均勻渾濁生長（肺鏈），在固體培養(yǎng)基上形成細(xì)小、表面光滑、圓形、灰白色、半透明或不同的菌落。目前二十一頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)2.鏈球菌的生化反應(yīng)鏈球菌在普通培養(yǎng)基上生長不良a.桿菌肽敏感試驗(yàn)：A群溶血性鏈球菌對桿菌肽非常敏感，而其他群鏈球菌通常耐受，故此試驗(yàn)可對鏈球菌進(jìn)行鑒別。b.CAMP試驗(yàn)：下血平板上B群溶血性鏈球菌能產(chǎn)生CAMP因子，可促進(jìn)金黃色葡萄球b溶血素活性。目前二十二頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)3.致病性鏈球菌廣泛存在于自然界和人及動(dòng)物糞便和健康人鼻咽部，可引起人類多種疾患，A族占90%以上，猩紅熱，丹毒，新生兒敗血癥，腦膜炎，產(chǎn)引起各種化膿性炎癥，褥熱以及鏈球菌變態(tài)反應(yīng)性疾病等。目前二十三頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)D奈瑟氏菌寄生的腦膜炎奈瑟氏球菌和淋病奈瑟氏球菌是重要的致病菌，腦膜炎奈瑟氏菌是人類流行性腦脊髓膜炎的病原菌，多數(shù)菌株在初分離時(shí)有莢膜，一般通過呼吸道傳播所引起，常在冬末春初季節(jié)發(fā)病最為流行。淋病奈瑟氏菌可引起急或慢性淋菌性尿道炎、陰道炎，主要通過性接觸傳播。目前二十四頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)1.形態(tài)與染色本屬細(xì)菌為革蘭染色陰性，球形或球桿形。球菌多呈雙球菌狀排列，相鄰一側(cè)扁平或略凹呈腎狀；桿菌則較短粗，長寬相比為2:1，無鞭毛。腦膜炎奈瑟氏菌在患者腦脊液中，多位于中性粒細(xì)胞內(nèi)，形態(tài)典型。在孵育24h后的培養(yǎng)物中，常呈現(xiàn)衰退形態(tài)，菌體大小較不一致，著色亦深淺不勻。新分離菌株大多有莢膜和菌毛。目前二十五頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)2培養(yǎng)特性營養(yǎng)要求較高，需在含有血清、血液等培養(yǎng)基中方能生長，最常用的是巧克力培養(yǎng)基，專性需氧，5%CO2條件下生長更佳，最適生長溫度為37度，低于30度不生長，孵育24小時(shí)后，形成直徑1.0—1.5mm的無色、圓形、光滑、透明，似露滴狀的菌落。在血平板上不溶血，產(chǎn)生自溶酶，人工培養(yǎng)如不及時(shí)轉(zhuǎn)種，超過48h常死亡。目前二十六頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)3.檢驗(yàn)方法鑒定直接涂片檢查a.淤血斑：刺破淤血斑做血膜片，干燥固定后革蘭染色陰性雙球菌呈對排列，可初診。b.腦脊液：取腦脊液離心后沉淀物涂片同上分離培養(yǎng)將標(biāo)本直接接種于血瓊脂平板、巧克力平板，置于5-10%co2,35度培養(yǎng)24小時(shí)后可見圓形、濕潤小菌落，經(jīng)涂片證實(shí)G-雙球菌目前二十七頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)該菌鑒定主要通過氧化酶、糖類發(fā)酵和血清學(xué)試驗(yàn)以及培養(yǎng)生長特點(diǎn)進(jìn)行a.細(xì)菌染色形態(tài)b.氧化酶試驗(yàn)陽性C.觸酶試驗(yàn)陽性d.分解葡萄糖、麥芽糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣e.莢膜多糖抗原直接凝集試驗(yàn)。目前二十八頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)注意：該菌能產(chǎn)生自溶酶，易自溶，故采集時(shí)標(biāo)本不易放冰箱，應(yīng)保溫立即送檢。必要時(shí)可作雙份血清測定抗體效價(jià)的變化。目前二十九頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)淋球菌1879年，奈瑟從35例急性尿道炎、陰道炎及新生兒急性結(jié)膜炎病人的分泌物中，分離出淋病雙球菌。1885年，Bumm在人、?；蜓虻哪萄迮囵B(yǎng)基上培養(yǎng)淋球菌獲得成功目前三十頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)保溫保濕及時(shí)送檢，及時(shí)接種(30min內(nèi))，培養(yǎng)基應(yīng)孵熱后再接種。標(biāo)本取后應(yīng)立即接種于培養(yǎng)基中。國外常用的培養(yǎng)基有Thayer-Martin培養(yǎng)基及改良的Stuart運(yùn)送培養(yǎng)基。國內(nèi)也已研制成國產(chǎn)培養(yǎng)基，如加多粘菌素E(25μg/mL)的血液瓊脂或巧克力瓊脂。初代分離時(shí)應(yīng)用5%二氧化碳環(huán)境(燭缸)，培養(yǎng)溫度36℃為宜，相對濕度80%以上。培養(yǎng)24～48h觀看結(jié)果。目前三十一頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)淋球菌在多粘菌素B血液瓊脂(一種常用的培養(yǎng)基)上經(jīng)24～48小時(shí)培養(yǎng)之后，可形成圓形、凸起、濕潤、光滑、半透明或灰白色的菌落。如繼續(xù)培養(yǎng)，菌落體積增大，表面粗糙，邊緣皺縮。如表現(xiàn)為以上情況，初步判定為淋球菌陽性。目前三十二頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)形態(tài)與染色淋球菌呈卵圓形或豆形，菌體長0.6～0.88um，寬約0.58um。常成對排列，鄰近面扁平或稍凹陷，像兩粒豆子對在一起。無鞭毛，不形成芽孢。在急性感染的機(jī)體內(nèi)，其形態(tài)較典型，多位于細(xì)胞漿內(nèi)。慢性期則在細(xì)胞外。淋球菌革蘭染色陰性。目前三十三頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)首先該菌生長較慢，營養(yǎng)要求高，需要在5%CO2環(huán)境下才能生長良好----這是區(qū)別于其他奈瑟菌的前提。接下來是作氧化酶+、觸酶+，其他生化反應(yīng)采用酶法進(jìn)行，可用非發(fā)酵菌用的糖類生化管：葡萄糖（+）、麥芽糖、乳糖、蔗糖、果糖，其他須作硝還、DNA試驗(yàn)均陰性。目前三十四頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)涂片時(shí)不要用力涂擦，以防止細(xì)胞破裂和變形。涂片厚薄要合適。涂片過薄，涂片中幾乎沒有細(xì)胞，會造成假陰性;涂片過厚，脫色不易干凈，會使各種成分難以分辨。女性生殖道中有些菌如不動(dòng)桿菌等很象淋球菌，?？稍斐赏科募訇栃越Y(jié)果。咽和直腸標(biāo)本的直接涂片結(jié)果也常由于正常菌叢或各種雜菌的掩蓋而不可靠。

目前三十五頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)只有培養(yǎng)法才是金標(biāo)準(zhǔn)方法，也只有培養(yǎng)法才能獲得藥敏結(jié)果，尤其對PPNG這樣多重耐藥的淋球菌意義更大，在糖類生化管表面加液體石蠟的目的是因?yàn)榱懿∧紊且园l(fā)酵形式利用糖類，而在氧氣存在時(shí)發(fā)酵代謝受到抑制，加入石蠟則可隔離氧氣，使得細(xì)菌的發(fā)酵產(chǎn)酸現(xiàn)象更為明顯，便于觀察。目前三十六頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)再則，之所以要用非發(fā)酵菌的生化管，是因?yàn)槠渑浞街刑穷惻c蛋白胨的比例為1:0.2，細(xì)菌分解蛋白胨產(chǎn)堿較少，不足以影響代謝糖類時(shí)的產(chǎn)酸；還因?yàn)榕囵B(yǎng)基中加入了少量瓊脂可使代謝時(shí)所產(chǎn)生的酸性物質(zhì)能在局部聚積，使得顏色變化現(xiàn)象更為明顯，如此便提高生化管的靈敏度。目前三十七頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)F卡他莫拉菌革蘭氏染色顯示為陰性，故為革蘭氏陰性非發(fā)酵菌。過去一直認(rèn)為卡他莫拉菌是對人體無致病性的上呼吸道正常寄居菌。但是，近20多年的研究發(fā)現(xiàn)，該菌不僅可以引起兒童和老年人的上呼吸道感染，而且還是引起成人下呼吸道感染的主要病原菌，是兒童中耳炎、肺炎以及成人的慢性下呼吸道感染的第3位最常見致病菌，僅次于流感嗜血桿菌和肺炎鏈球菌，而且其發(fā)病率逐年增加。目前三十八頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)形態(tài)學(xué)卡他莫拉菌又稱為卡他奈瑟菌和卡他布蘭漢菌?？ㄋ谘桨?、巧克力平板等各種培養(yǎng)基上生長良好，菌落呈“冰球”狀。培養(yǎng)24h后形成灰白色、光滑、直徑1-3mm不透明、不溶血的菌落，易從培養(yǎng)上刮下培養(yǎng)48h后，形成表面干燥、不平、邊緣不整齊的菌落，如用接種環(huán)推移，整個(gè)菌落可移動(dòng)（有特殊手感）。目前三十九頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)卡他莫拉無芽孢、無鞭毛，形態(tài)上易于其他奈瑟菌屬相混淆。本菌不分解任何糖類，可產(chǎn)生氧化酶、觸酶和DNA酶。硝酸鹽還原試驗(yàn)陽性。與腦膜炎奈瑟球菌的鑒別卡他莫拉是DNA、硝酸鹽還原均為陽性。與莫拉菌屬的鑒別卡他為球菌，成雙或腎性排列，DNA陽性；而莫拉為球桿菌,DNA為陰性目前四十頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)軍團(tuán)菌軍團(tuán)菌是隱藏在空調(diào)制冷裝置中的致病菌，隨冷風(fēng)吹出浮游在空氣中，吸入人體后會出現(xiàn)上呼吸道感染及發(fā)熱的癥狀，嚴(yán)重者可導(dǎo)致呼吸衰竭和腎衰竭。軍團(tuán)菌最早是由于部隊(duì)室內(nèi)密閉作業(yè)，導(dǎo)致群體發(fā)生上呼吸道感染而得名。軍團(tuán)病是一種非常嚴(yán)重的、有時(shí)可以致命的肺炎。目前四十一頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)軍團(tuán)病是由軍團(tuán)桿菌引起，這種細(xì)菌產(chǎn)生在自然環(huán)境中，在溫水里及潮熱的地方蔓延。人工供水系統(tǒng)有時(shí)也能為軍團(tuán)桿菌的大量繁殖提供生存環(huán)境。這些系統(tǒng)包括淋浴器、礦泉池、噴泉以及空調(diào)設(shè)備的冷卻水塔。人們通常是由于呼吸了被軍團(tuán)桿菌污染的水源散發(fā)的水霧而傳染上軍團(tuán)病的。目前四十二頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)鑒定方法

細(xì)菌培養(yǎng)法軍團(tuán)菌為革蘭氏陰性桿菌，專性需氧，胞內(nèi)寄生菌。軍團(tuán)菌最初是從以軍團(tuán)菌病人肺組織感染的豚鼠中分離出來的。這種方法雖然有較高的可靠性，但非常昂貴，而且費(fèi)時(shí)費(fèi)力，不久就被平板培養(yǎng)法所取代。目前四十三頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)目前標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基為活性碳酵母浸膏瓊脂平板，也稱軍團(tuán)菌生長平板(BCYE)。接種在BCYE平板上的樣品在溫度為35-37oC，培養(yǎng)10天，在濃度為2.5%CO2的環(huán)境下培養(yǎng)更有利于軍團(tuán)菌的生長。軍團(tuán)菌的菌落通常呈白色、灰色、有熒光。軍團(tuán)菌在BCYE平板上生長而在平板和半光氨酸缺失BCYE-Cys平板上不生長目前四十四頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)血清學(xué)玻片凝集法軍團(tuán)菌感染l周左右可檢測出血清中軍團(tuán)菌特異性IgM抗體，2周左右可檢測到特異性IgG抗體?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)嗜肺軍團(tuán)菌有15個(gè)血清型。其中，嗜肺軍團(tuán)菌血清1型(Lp1)與人類疾病關(guān)系最密切，其次為血清4型(Lp4)和6型(Lp6)。目前四十五頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)布魯氏菌生物學(xué)形狀：革蘭氏陰性短小桿菌，初次分離時(shí)多呈球狀，球桿狀和卵圓形，單個(gè)分散存在，少數(shù)情況成對或短鏈狀或聚集成小團(tuán)狀排列，無芽孢，無莢膜、無鞭毛、不運(yùn)動(dòng)。革蘭染色經(jīng)常著色不佳，吉姆染色呈紫色。目前四十六頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)本菌專性需氧，初次分離培養(yǎng)時(shí)需5-10%CO2。生長緩慢，營養(yǎng)要求高，最適生長溫度為35-37度，在血瓊脂平板或肝浸液瓊脂平板上，37度養(yǎng)48h長出肉眼可見的透明、無色、光滑性小菌落。血瓊脂平板上無溶血現(xiàn)象。致病性

內(nèi)毒素是主要的致病物質(zhì)。莢膜與侵襲酶有利于細(xì)菌通過完整皮膚、粘膜進(jìn)入宿主體內(nèi)，并在機(jī)體臟器內(nèi)大量繁殖和快速擴(kuò)散入血。此外，布魯菌引起的4型超敏反應(yīng)也能參與致病。目前四十七頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)布魯菌是動(dòng)物源性疾病，感染家畜引起流產(chǎn)，畜病還可表現(xiàn)為睪丸，附睪，乳腺，子宮炎等。人感染后，主要表現(xiàn)為發(fā)熱、發(fā)冷、體弱不適、全身痛和多汗、頭痛等，還包括肝臟損害、血液系統(tǒng)、骨關(guān)節(jié)受損、男女泌尿生殖系統(tǒng)病變等。目前四十八頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)微生物學(xué)檢查：1.標(biāo)本直接革蘭染色檢查布魯菌的意義不大2.臨床上抽取血液和骨髓標(biāo)本，進(jìn)行分離培養(yǎng)。另外：病后1周后，可用試管凝集試驗(yàn)測定血清IGM抗體?？贵w效價(jià)>=1：160-320為陽性。對慢性患者可進(jìn)行補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)測IGG，一般以1:10為陽性診斷標(biāo)準(zhǔn)，可診斷慢性或曾患過布魯菌病。目前四十九頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)培養(yǎng)與鑒定在血瓊脂平板培養(yǎng)5-7天可形成灰色不溶血菌落。在固體培養(yǎng)基上菌落為無色、半透明、圓形、表面光滑、邊緣整齊、中央稍凸起，直徑為2-3mm;有時(shí)可出現(xiàn)粘液或干燥的硬皮樣菌落。液體培養(yǎng)基呈輕度渾濁有沉淀，不形成菌膜。培養(yǎng)>=30天才能報(bào)告陰性。目前五十頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)藥物敏感試驗(yàn)臨床治療首選強(qiáng)力霉素，其次復(fù)方新諾明，由于病程長，用藥時(shí)間需4-6周。藥敏試驗(yàn)可不作為臨床常規(guī)，但如需要必須采用稀釋法做MIC.目前五十一頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)β-內(nèi)酰胺酶以其主要水解對象可分為青霉素酶、頭孢菌素酶、廣譜酶、超廣譜酶。

目前五十二頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)根據(jù)生化特征或氨基酸序列的同源性第一類為頭孢菌素水解酶（Amp-C酶），產(chǎn)生菌主要系革蘭陰性菌，如假單胞菌、腸桿菌、不動(dòng)桿菌和克雷伯桿菌等，由染色體介導(dǎo)。目前五十三頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)第二類為青霉素酶和超廣譜酶，包括革蘭陽性菌的青霉素酶，質(zhì)粒介導(dǎo)的TEM和SHV酶及其衍生物組成組成的超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBLs）、羧芐青霉素酶、鄰氯青霉素酶（OXA酶）和由沙雷菌屬與腸桿菌屬產(chǎn)生的非金屬碳青霉烯酶。目前五十四頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)第三類為金屬酶，由假單胞菌屬、脆弱擬桿菌屬、產(chǎn)黃菌屬、沙雷菌屬及嗜麥芽黃單胞桿菌屬產(chǎn)生的可水解碳青霉烯抗生素的金屬酶。第四類為其他不能被克拉維酸完全抑制的青霉素酶.目前五十五頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)β酶的特殊性、動(dòng)力學(xué)參數(shù)及其基因的核苷酸序列A活性部位為絲氨酸殘基，包括多種質(zhì)粒編碼的青霉素酶，如TEM1、SHV1、ROB1或PC1酶，相對分子質(zhì)量29000。目前五十六頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)B為金屬酶(metalloenzymes)，活性部位為半胱氨酸殘基，產(chǎn)金屬酶的細(xì)菌有嗜麥芽黃桿菌(stenotrophomonasmaltophila)，氣單胞菌和脆性擬桿菌。該類為碳青霉烯酶，耐藥的抗生素包括碳青霉烯、青霉素、第一、二、三代頭孢菌素、氨曲南。目前五十七頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)C活性部位為絲氨酸殘基，相對分子質(zhì)量為39000，它的產(chǎn)生與β-酶誘導(dǎo)劑有關(guān)，歸因于調(diào)控基因突變，主要是染色體編碼的頭孢菌素酶(AmpC酶)是由染色體上一組Amp基因介導(dǎo)的。D為青霉素酶，包括OXA。

目前五十八頁\總數(shù)六十五頁\編于十七點(diǎn)超廣譜β—內(nèi)酰胺酶（ESBLs）

1．什么是ESBLs？

ESBLs是英文Extended—Spectyumβ—