季花藥培養(yǎng)-公開課

季花藥培養(yǎng)-公開課第一頁，共26頁。1、細(xì)胞分裂素和生長素使用順序不同，結(jié)果不同:使用順序?qū)嶒?yàn)結(jié)果先使用生長素，后使用細(xì)胞分裂素先使用細(xì)胞分裂素，后使用生長素同時(shí)使用有利于細(xì)胞分裂，但細(xì)胞不分化細(xì)胞既分裂也分化分化頻率加快第二頁，共26頁。生長素>細(xì)胞分裂素：生長素=細(xì)胞分裂素：

生長素<細(xì)胞分裂素：2、細(xì)胞分裂素和生長素使用比例不同，發(fā)育方向不同利于根的分化和抑制芽的形成促進(jìn)愈傷組織的生長有利于芽的分化、抑制根的形成第三頁，共26頁。大自然為我們創(chuàng)造了千姿百態(tài)的植物，許多植物都會(huì)開出鮮艷、芳香的花朵。月季牡丹導(dǎo)入新課第四頁，共26頁。百合第五頁，共26頁。你知道這些絢麗、芬芳的鮮花用人工方法是怎樣產(chǎn)生的嗎？花藥

花藥是花絲頂端膨大呈囊狀的部分，是雄蕊產(chǎn)生花粉的主要部分。第六頁，共26頁。花藥培養(yǎng)采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，把發(fā)育到一定階段的花藥，通過無菌操作技術(shù)，接種在人工培養(yǎng)基上，以改變花藥內(nèi)花粉粒的發(fā)育程序，誘導(dǎo)其分化，形成細(xì)胞團(tuán)，進(jìn)而形成愈傷組織，隨后使愈傷組織分化成完整的植株的技術(shù)。什么是花藥培養(yǎng)呢？第七頁，共26頁。課題2月季的花藥培養(yǎng)第八頁，共26頁?；ǖ慕Y(jié)構(gòu)第九頁，共26頁。閱讀：P37-38被子植物的花粉發(fā)育重點(diǎn)掌握：被子植物花粉的發(fā)育過程第十頁，共26頁。花絲花藥：囊狀結(jié)構(gòu)，內(nèi)有很多花粉2、由花粉母細(xì)胞（即小孢子母細(xì)胞）花粉，即：單倍體的生殖細(xì)胞。（一）被子植物的花粉發(fā)育1、雄蕊一、基礎(chǔ)知識(shí)減數(shù)分裂3、階段：四分體時(shí)期、單核期、雙核期第十一頁，共26頁。4、過程：減數(shù)分裂有絲分裂第十二頁，共26頁?；ǚ郏菏切℃咦幽讣?xì)胞經(jīng)過減數(shù)分裂而形成的，因此，花粉是單倍體的生殖細(xì)胞。1花粉母細(xì)胞4個(gè)小孢子減數(shù)分裂有絲分裂4個(gè)花粉管細(xì)胞核4個(gè)生殖細(xì)胞核有絲分裂8個(gè)精子過程總結(jié)：注意：精子和營養(yǎng)核的基因型相同。第十三頁，共26頁。閱讀：P38產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑重點(diǎn)掌握：花藥培養(yǎng)產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑第十四頁，共26頁。（二）產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑①②移栽花藥中的花粉胚狀體脫分化愈傷組織花藥中的花粉脫分化分化

叢芽再分化

叢芽誘導(dǎo)生根體細(xì)胞胚（胚狀體）：在組織培養(yǎng)過程中，某些細(xì)胞在形態(tài)上轉(zhuǎn)變?yōu)榕c合子發(fā)育成的胚非常相似的結(jié)構(gòu)，它的發(fā)育過程也與合子胚類似，胚芽、胚根、胚軸等結(jié)構(gòu)完整，就像一顆種子。這兩種途徑之間沒有絕對(duì)的界限，主要取決于培養(yǎng)基中激素的種類及濃度配比。第十五頁，共26頁。1、材料的選擇不同植物的誘導(dǎo)成功率不同.

同一植物的不同生理狀況也對(duì)誘導(dǎo)成功率有直接的影響.(三)、影響花藥培養(yǎng)的主要因素——材料的選擇與培養(yǎng)基的組成從花藥看：從花粉看：從花蕾看：此外，植株生長條件、材料低溫預(yù)處理、接種密度等對(duì)誘導(dǎo)成功率有一定影響。月季的初花期（五月初到五月中旬）單核期（一般來說，細(xì)胞核從中央移向細(xì)胞一側(cè)的時(shí)期，花藥培養(yǎng)成功率最高）完全未開放的第十六頁，共26頁。選擇哪個(gè)做材料？第十七頁，共26頁。答：花瓣松動(dòng)后，微生物就可能侵入到花藥，給材料的消毒帶來困難。思考為什么花瓣松動(dòng)會(huì)給材料的消毒帶來困難？第十八頁，共26頁。二、實(shí)驗(yàn)操作（一）材料的選取（二）材料的消毒（三）接種和培養(yǎng)第十九頁，共26頁。閱讀教材P39-40回答以下問題：1.如何確定花粉是否處于適宜的發(fā)育期。2.確定花粉發(fā)育時(shí)期的最常用方法是？如果某些花粉細(xì)胞核不易著色，需要采用什么方法？能將花粉細(xì)胞核染成什么顏色？3.為什么要徹底除去花絲？4.是否一直需要光照？5.什么時(shí)候把植株移栽到新的培養(yǎng)基上？6.為什么還要進(jìn)一步的鑒定和篩選？第二十頁，共26頁。（一）材料的選取1.選擇花藥一般通過鏡檢來確定其中的花粉是否處于適宜的發(fā)育期。2.最常用的方法：醋酸洋紅法（將染色體染成紅色）

焙花青—鉻礬法。某些植物的花粉細(xì)胞核不易著色，需采用焙花青—鉻礬法，這種方法能將花粉細(xì)胞核染成藍(lán)黑色。第二十一頁，共26頁。（二）材料的消毒5、無菌水沖洗3～5次

花藥的外面有花萼、花瓣保護(hù)，通常處于無菌狀態(tài)1、花蕾用體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精浸泡30秒2、無菌水清洗3、無菌吸水紙吸干花蕾表面的水分4、放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的氯化汞溶液中2～4分鐘（質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的次氯酸鈣溶液或飽和漂白粉溶液）第二十二頁，共26頁。（三）接種和培養(yǎng)1、滅菌后花蕾，要在

下除去萼片和花瓣，并立即將花藥接種到培養(yǎng)基上。3、通常每瓶接種花藥

，溫度控制在

左右，

。幼小植株形成后才

。2、在剝離花藥時(shí)，要盡量

（否則接種后，容易從受傷部位產(chǎn)生二倍體的愈傷組織），同時(shí)還要徹底

，因?yàn)榕c花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成。無菌條件不損傷花藥去除花絲7-10個(gè)25℃不需要光照需要光照4、一般經(jīng)過20-30天培養(yǎng)后，會(huì)發(fā)現(xiàn)花藥開裂，長出愈傷組織或釋放出胚狀體。將愈傷組織及時(shí)轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上，以便進(jìn)一步分化出再生植株。5、對(duì)培養(yǎng)出來的幼苗進(jìn)一步的鑒定和篩選。第二十三頁，共26頁。植物組織培養(yǎng)技術(shù)與花藥培養(yǎng)技術(shù)的比較項(xiàng)目植物組織培養(yǎng)花藥培養(yǎng)技術(shù)相同點(diǎn)不同點(diǎn)1、離體培養(yǎng)的外植體為體細(xì)胞。2、有絲分裂的過程，染色體數(shù)量不變。1、花粉是生殖細(xì)胞，得到的單倍體植株，弱小且高度不育。2、秋水仙素處理，染色體加倍，恢復(fù)正常的染色體數(shù)，為純種。離體的植物組織經(jīng)脫分化形成愈傷組織（或胚狀體），再分化（或分化）成叢芽，誘導(dǎo)出根，然后進(jìn)行移栽。第二十四頁，共26頁。基礎(chǔ)知識(shí)實(shí)驗(yàn)操作被子植物的花粉發(fā)育花粉雙核期其