培養(yǎng)物的不良表現(xiàn)及改良措施

培養(yǎng)物的不良表現(xiàn)及改良措施（初始培養(yǎng)階段）培養(yǎng)物水浸狀、變色、壞死、莖斷面附近干枯可能原因：表面殺菌劑過量，消毒時(shí)間過長(zhǎng)，外植體選用不當(dāng)（部位或時(shí)期）。改進(jìn)措施：調(diào)換其他殺菌劑或降低濃度，縮短消毒時(shí)間，試用其他部位，生長(zhǎng)初期取材。培養(yǎng)物長(zhǎng)期培養(yǎng)幾乎無反應(yīng)可能原因：基本培養(yǎng)基不適宜，生長(zhǎng)素不當(dāng)或用量不足，溫度不適宜。改進(jìn)措施：更換基本培養(yǎng)基或調(diào)整培養(yǎng)基成分，尤其是調(diào)整鹽離子濃度，增加生長(zhǎng)素用量，試用2,4-D，調(diào)整培養(yǎng)溫度。愈傷組織生長(zhǎng)過旺、疏松，后期水浸狀可能原因：激素過量，溫度偏高，無機(jī)鹽含量不當(dāng)。改進(jìn)措施：減少激素用量，適當(dāng)降低培養(yǎng)溫度，調(diào)整無機(jī)鹽（尤其是銨鹽）含量，適當(dāng)提高瓊脂用量增加培養(yǎng)基硬度。愈傷組織太緊密、平滑或突起，粗厚，生長(zhǎng)緩慢可能原因：細(xì)胞分裂素用量過多，糖濃度過高，生長(zhǎng)素過量。改進(jìn)措施：減少細(xì)胞分裂素用量，調(diào)整細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素比例，降低糖濃度。側(cè)芽不萌發(fā)，皮層過于膨大，皮孔長(zhǎng)出愈傷組織可能原因:枝條過嫩，生長(zhǎng)素、細(xì)胞分裂素用量過多。改進(jìn)措施：減少激素用量，采用較老化枝條。培養(yǎng)物的不良表現(xiàn)及改良措施（繼代培養(yǎng)階段）苗分化數(shù)量少、速度慢、分枝少、個(gè)別苗生長(zhǎng)細(xì)高可能原因：細(xì)胞分裂素用量不足，溫度偏高，光照不足。改進(jìn)措施：增加細(xì)胞分裂素用量，適當(dāng)降低溫度，改善光照，改單芽繼代為團(tuán)塊（叢芽）繼代。苗分化過多，生長(zhǎng)慢，有畸形苗，節(jié)間極短，苗叢密集，微型化可能原因：細(xì)胞分裂素用量過多，溫度不適宜。改進(jìn)措施：減少或停用細(xì)胞分裂素一段時(shí)間，調(diào)節(jié)溫度。分化率低，畸形，培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)時(shí)苗再次愈傷組織化可能原因:生長(zhǎng)素用量偏高，溫度偏高。改進(jìn)措施：減少生長(zhǎng)素用量，適當(dāng)降溫。葉粗厚變脆可能原因：生長(zhǎng)素用量偏高，或兼有細(xì)胞分裂素用量偏高。改進(jìn)措施：適當(dāng)減少激素用量，避免葉片接觸培養(yǎng)基。再生苗的葉緣、葉面等外偶有不定芽分化出來可能原因：細(xì)胞分裂素用量偏高，或表明該種植物適于該種再生方式。改進(jìn)措施：適當(dāng)減少細(xì)胞分裂素用量，或分階段地利用這一再生方式。叢生苗過于細(xì)弱，不適于生根或移栽可能原因：細(xì)胞分裂素濃度過高或赤霉素使用不當(dāng)，溫度過高，光照短，光強(qiáng)不足，久不轉(zhuǎn)移，生長(zhǎng)空間窄。改進(jìn)措施：減少細(xì)胞分裂素用量，免用赤霉素，延長(zhǎng)光照時(shí)間，增強(qiáng)光照，及時(shí)轉(zhuǎn)接，降低接種密度，更換封瓶紙的種類。幼苗淡綠，部分失綠可能原因：無機(jī)鹽含量不足，PH值不適宜，鐵、錳、鎂等缺少或比例失調(diào)，光照、溫度不適。改進(jìn)措施：針對(duì)營(yíng)養(yǎng)元素虧缺情況調(diào)整培養(yǎng)基，調(diào)好PH值，調(diào)控溫度、光照。幼苗生長(zhǎng)無力、發(fā)黃落葉、有黃葉、死苗夾于叢生苗中可能原因：瓶?jī)?nèi)氣體狀況惡化，PH值變化過大，久不轉(zhuǎn)接導(dǎo)致糖已耗盡，營(yíng)養(yǎng)元素虧缺失調(diào)，溫度不適，激素配比不當(dāng)。改進(jìn)措施：及時(shí)轉(zhuǎn)接、降低接種密度，調(diào)整激素配比和營(yíng)養(yǎng)元素濃度，改善瓶?jī)?nèi)氣體狀況，控制溫度。培養(yǎng)物的不良表現(xiàn)及改良措施（生根階段）培養(yǎng)物久不生根，基部切口沒有適宜的愈傷組織可能原因：生長(zhǎng)素種類、用量不適宜；生根部位勇氣不良；生根程序不當(dāng)；PH值不適，無機(jī)鹽濃度及配比不當(dāng)。改進(jìn)措施：改進(jìn)培養(yǎng)程序，選用適宜的生長(zhǎng)素或增加生長(zhǎng)素用量，適當(dāng)降低無機(jī)鹽濃度，改用濾紙橋液培養(yǎng)生根等。愈傷組織生長(zhǎng)過快、過大，根莖部腫脹或畸形，幾條根并聯(lián)或愈合。可能原因：生長(zhǎng)素種類不適，用量過高，或伴有細(xì)胞分裂素用量過高，生根誘導(dǎo)培養(yǎng)程序不對(duì)。改進(jìn)措施：調(diào)換生長(zhǎng)素種類或幾種生長(zhǎng)素配合使用，降低使用濃度，附加VB2或PG等減少愈傷，改變生根培養(yǎng)程序等。培養(yǎng)基的成分組織培養(yǎng)過程中，外植體生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)和生長(zhǎng)因子，主要是由培養(yǎng)基供應(yīng)的。因此，培養(yǎng)基中應(yīng)包括植物生長(zhǎng)必需的16種營(yíng)養(yǎng)元素和某些生理活性物質(zhì)。所有這些物質(zhì)，可概括為5大類：1.無機(jī)營(yíng)養(yǎng)物植物生長(zhǎng)必須的有13種元素：氮（N）、磷（P）、鉀（K）、鈣（Ca）、鎂（Mg）、硫（S）、鐵（Fe）、硼（B）、錳（Mn）、銅（Cu）、鋅（Zn）、鉬（MO）、氯（Cl）。前六種屬大量元素，后七種屬微量元素。培養(yǎng)基的各種鹽類中均含有上述這些元素。無機(jī)氮可以兩種形式供應(yīng)，即硝態(tài)氮和銨態(tài)氮。有些培養(yǎng)基以硝態(tài)氮為主，另一些以銨態(tài)氮為主，多數(shù)二者兼而有之。鐵往往以無機(jī)鐵供應(yīng)，如硫酸亞鐵，為了防止沉淀，目前皆用螯合鐵，即硫酸亞鐵加乙二胺四乙酸鈉配成。有機(jī)物質(zhì)主要有兩類：一是作為有機(jī)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，為植物細(xì)胞提供碳、氫、氧、氮等必要元素，如糖類（蔗糖、葡萄糖和果糖）、氨基酸及其酰胺類（如甘氨酸、天門冬酰胺、谷氨酰胺）；另一類是一些生理活性物質(zhì)，在植物代謝中起一定作用，如硫胺素（B1）、毗哆醇（B6）、煙酸、生物素、肌醇、單核甘酸及其堿基（如腺嘌吟等）。植物生長(zhǎng)刺激物質(zhì)主要加入植物天然的五類激素物質(zhì)及其人工合成的類似生長(zhǎng)激素物質(zhì)，如生長(zhǎng)素中常用的吲哚乙酸、萘乙酸、2,4-二氯苯氧乙酸、吲哚丁酸；細(xì)胞分裂素中常用的有激動(dòng)素、6-芐基氨基嘌吟、玉米素；赤霉素類中常用的有赤霉酸；乙烯類中常用的有乙烯和乙烯利。其他附加物這些物質(zhì)不是植物生長(zhǎng)所必需的，但對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)有益。瓊脂（agar）是固體培養(yǎng)基的必要成分，瓊脂是一種由海藻中提取的高分子碳水化合物，本身并不提供任何營(yíng)養(yǎng)。瓊脂能溶解在熱水中，成為溶膠，冷卻至40°C即凝固為固體狀凝膠。通常所說的“煮化”培養(yǎng)基，就是使瓊脂溶解于90C以上的熱水。瓊脂條的用量在6-10g/L之間，瓊脂粉的用量在3-4g/L之間若濃度太高，培養(yǎng)基就會(huì)變得很硬，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)難以擴(kuò)散到培養(yǎng)的組織中去。若濃度過低，凝固性不好。新買來的瓊脂最好先試一下它的凝固力。一般瓊脂以顏色淺、透明度好、潔凈的為上品。瓊脂的凝固能力除與原料、廠家的加工方式有關(guān)外，還與高壓滅菌時(shí)的溫度、時(shí)間、pH值等因素有關(guān)，長(zhǎng)時(shí)間的高溫會(huì)使凝固能力下降，過酸過堿加之高溫會(huì)使瓊脂發(fā)生水解，喪失凝固能力。時(shí)間過久，瓊脂變褐，也會(huì)逐漸喪失凝固能力。加入瓊脂的固體培養(yǎng)基與液體培養(yǎng)基相比優(yōu)點(diǎn)在于操作簡(jiǎn)便，通氣問題易于解決，便于經(jīng)常觀察研究等，但它也有不少缺點(diǎn)，如培養(yǎng)物與培養(yǎng)基的接觸(即吸收)面積小，各種養(yǎng)分在瓊脂中擴(kuò)散較慢，影響?zhàn)B分的充分利用，同時(shí)培養(yǎng)物排出的一些代謝廢物，聚集在吸收表面，對(duì)組織產(chǎn)生毒害作用。市售的各種瓊脂幾乎都含有雜質(zhì)，特別是Ca、Mg及其他微量元素。因此在研究植物組織或細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)問題時(shí)，則應(yīng)避免使用瓊脂?？稍谝后w培養(yǎng)基表面安放一個(gè)無菌濾紙制成的濾紙橋，然后在濾紙橋上進(jìn)行愈傷組織培養(yǎng)。其他替代物，有玻璃纖維、濾紙橋、海綿、脫脂棉、卡拉膠等，總的要求是排出的有害物質(zhì)對(duì)培養(yǎng)材料沒有影響或影響較小?；钚蕴?activecarbon)可以降低組織培養(yǎng)物的有害代謝物濃度，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)有利；?活性炭為木炭粉碎經(jīng)加工形成的粉沫結(jié)構(gòu)，它結(jié)構(gòu)疏松，孔隙大，吸水力強(qiáng)，有很強(qiáng)的吸附作用，它的顆粒大小決定著吸附能力、粒度越小，吸附能力越大。溫度低吸附力強(qiáng)，溫度高吸附力減弱，甚至解吸附。通常使用濃度為0.5—10g/L。它可以吸附非極性物質(zhì)和色素等大分子物質(zhì)，包括瓊脂中所含的雜質(zhì)，培養(yǎng)物分泌的酚、醌類物質(zhì)以及蔗糖在高壓消毒時(shí)產(chǎn)生的5—羥甲基糖醛及激素等?？股镔|(zhì)(antibiotic)，包括青霉素、鏈霉素、慶大霉素等，用量在5—20mg/L之間。添加抗生物質(zhì)可防止菌類污染，減少培養(yǎng)中材料的損失，尤其是快速繁殖中，常因污染而丟棄成百上千瓶的培養(yǎng)物，采用適當(dāng)?shù)目股乇憧晒?jié)約人力、物力和時(shí)間。尤其對(duì)大量通氣長(zhǎng)期培養(yǎng)，效果更好。對(duì)于剛感染的組織材料，可向培養(yǎng)基中注入5%—10%的抗菌素?？股馗饔衅湟志V，要加以選擇試用，也可兩種抗生素混用。但是應(yīng)當(dāng)注意抗生素對(duì)植物組織的生長(zhǎng)也有抑制作用，可能某些植物適宜用青霉素，而另一些植物卻不大適應(yīng)。值得提醒的是，在工作中不能以為有了抗菌素，而放松滅菌措施。此外，在停止抗生素使用后，往往污染率顯著上升，這可能是原來受抑制的菌類又滋生起來造成。5.其他對(duì)生長(zhǎng)有益的未知復(fù)合成分常用的為植物的天然汁液，如椰乳、酵母提取物、荸薺汁、蘋果汁、生梨汁等。他們的作用是供給一些必要的微量營(yíng)養(yǎng)成分、生理活性物質(zhì)和生長(zhǎng)激素物質(zhì)等。組織培養(yǎng)(Tissueculture)-----是指從體內(nèi)取出器官(部分)、組織和細(xì)胞，模擬體內(nèi)生理環(huán)境，在無菌、適當(dāng)溫度和一定培養(yǎng)條件下，使之生存、生長(zhǎng)，維持其正常結(jié)構(gòu)和功能的方法?？瞻着囵B(yǎng)----主要用于無菌外值體的建立階段，只含糖不加任何營(yíng)養(yǎng)元素的培養(yǎng)。初代培養(yǎng)----最初組織培養(yǎng)的階段。繼代培養(yǎng)----為了快速繁殖，不斷重復(fù)利用同一種培養(yǎng)基轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)的過程。外植體(explant)-----由活體(invivo)植物體上提取下來的，接種在培養(yǎng)基上的無菌細(xì)胞、組織、器官等。脫分化(dedifferentiation)-----將來自已分化組織的已停止分裂的細(xì)胞從植物體部分的抑制性影響下解脫出來，恢復(fù)細(xì)胞的分裂活性。再分化(redifferentiation)-----經(jīng)脫分化的組織或細(xì)胞在一定的培養(yǎng)條件下可有轉(zhuǎn)變?yōu)楦鞣N不同細(xì)胞類型的能力。愈傷組織(callus)-----在人工培養(yǎng)基上由外植體上形成的一團(tuán)無序生長(zhǎng)狀態(tài)的薄壁細(xì)胞。原球莖----主要是蘭科植物在誘導(dǎo)時(shí)，分化出的原初植物形態(tài)，具有完整植株的器官雛形，成苗容易。胚狀體-----由愈傷組織或表面形成的許多類似胚的突起，是初步分化的幼小生命體，芽根有共同的維管束，是雙極性結(jié)構(gòu)，起源于單細(xì)胞，無嵌合現(xiàn)象，結(jié)構(gòu)完整，可直接形成小植株，成苗率高，去分化難，再分化也很難。叢生芽-----由植物器官和愈傷組織發(fā)育出來的群體叢生芽苗，大多是多細(xì)胞形成，雙極性，結(jié)構(gòu)完整，可直接形成小植株，成苗率高，去分化容易，再分化中等。1、吲哚乙酸(1AA)相對(duì)分子質(zhì)量175.19，無色結(jié)晶，見光易分解，熔點(diǎn)164°C?165C.，微溶于水，易溶于乙醇、乙醚和丙酮。在堿性溶液中比較穩(wěn)定2、萘乙酸(NAA)相對(duì)分子質(zhì)量186.2,無色針狀結(jié)晶，熔點(diǎn)134.5r一135.5C，易溶于乙醇、丙酮、乙醚等。微溶于熱水，易潮解和見光易變色3、吲哚丁酸(1BA)相對(duì)分子質(zhì)量203.2,白色或微黃色結(jié)晶，稍有異臭，熔點(diǎn)為123C?125C，不溶于水，能溶于醇、醚、丙酮等有機(jī)溶劑4、6一芐基氨基嘌吟(6—BA)相對(duì)分子質(zhì)量225.2，白色針狀結(jié)晶，熔點(diǎn)230C—232C，難溶于水，可溶于堿性溶液或酸性溶液。在酸堿溶液中穩(wěn)定5、激動(dòng)素(KT)相對(duì)分子質(zhì)量215.2，白色固體，熔點(diǎn)265C?266C，能溶于強(qiáng)酸、堿溶液及水溶液，不溶于水6、毗效隆(CPP