第二章菌種與種子擴大培養(yǎng)

種與種子擴大培養(yǎng)一節(jié)微生物工業(yè)用菌種一、菌種的分離篩選1、菌種的來源Q根據(jù)資料直接向有科研單位、高等院校、LJ或菌種保藏部門索取或購買：。從大I'l然中分離篩選新的微牛物商種?！?一一―2、分離思路。新南種的分離是要從混雜的各類微生物中依照?生產(chǎn)的要求、菌種的特性.采用芥種篩選方法"快速、準確地把所需要的菌種挑選出來。?:?實驗室或生產(chǎn)用繭種狀不慎污染了雜菌，也必須重新進行分離純化。?:?仃了優(yōu)良的菌種,還要有合適的匸藝條件和合理先進的設(shè)備與之配合。H S3、新種分離與篩選的步驟。定方案：計先要代閱資料，r解所需尙種的生r培養(yǎng)特性.。釆樣：有針對性地采集樣林。。增殖：人為地通過控制養(yǎng)分或培條件，使所需菌種増殖培養(yǎng)后，在數(shù)量上占優(yōu)勢.。分離篩選：釆用選擇性培養(yǎng)基利用分離技術(shù)得到純種II的爾.。發(fā)屛性能測定：進行生產(chǎn)性能測定.這嗎特性包括形態(tài)、培養(yǎng)特征、營養(yǎng)要求、生理生化特性.發(fā)僧周期.產(chǎn)品品種和產(chǎn)最.耐受最高溫度、士長和發(fā)酵最適溫度、最適pH值、提取工藝誓.（1）采樣卷采樣對象：以采集土壤為主。?:?采樣多節(jié)：以溫度適中，雨雖不多的秋初為好。采取土壤樣品要考慮的幾個問題?上質(zhì)肥，微牛物含鼠高,特別肥沃的土壊中細菌多?放線菌少;在植物殘體枯枝落葉F的上填中較多含仃拮抗性真繭.。高地面5~20cm處的土墳通氣良好、不受陽光直射?含爾最最髙.。釆土季節(jié)以春秋兩季技好。?栗上方法：選擇適“1地點、鏟除表土、取土樣敗I?克，盛入野先準備的無iS防水紙袋中,其上記錄*土時間、地點、椚被情況等。 ；。多點采上、混合分離.町以代發(fā)每?地塊上的微生物分布平均情況 '（2）增殖培養(yǎng)的，應(yīng)殖加K雄8為書菌H養(yǎng)人的分的使始以快r冃到集凹史使￡富,物/利以要低上例仃?需鍬度用件不含常不條樣#|其中：養(yǎng)￡ k的村1111法培?右的wS的目以樣方籍的中￡產(chǎn)作多般券H用其物。質(zhì)—較,窗利以上汰WW茜況它的界源.微淘宀糸的冇器養(yǎng)物上碳等段線目頃，提培生例如油源亡6<■!果MilftJ集微比例石磯死些大含如堆從富關(guān)中占一能?過◎????無體」群利在不種而鑿?種的或這??!多通，用鼻占索利物利II八維仃小順?纖只微會集、久,氓富粉那Jt肉易淀,而分容?源.種不嘲碳長純，i一牛的種選唯常段菌?14為麻強機M卜力取制一大對費LJ '(3)培養(yǎng)分離?＞盡管通過増殖培養(yǎng)效果顯著，但還是處于微生物的混雜生長狀態(tài)Q因此還必須分離,純化。俛一步,增殖培養(yǎng)的選擇性控制條件還應(yīng)進?步應(yīng)用,而且控制得細一點,好一點。純種分肉的方法仃劃線分離法、稀釋分離法。?劃線分髙法一平板劃線法(4)篩I、I、初篩:從分離得到的大量微生物中,將日標微生物篩選出來的過程.一般釆用平板篩選.常用的初選方法:?水解IW產(chǎn)生菌的篩選：將酶的作用底物加在培養(yǎng)基中，接種后適溫培養(yǎng)，根據(jù)菌苔周圍是否產(chǎn)生水解圈篩選出水解牌產(chǎn)生菌.?拮抗菌的篩選一對峙培養(yǎng)將病原指示菌與待測菌株相對接種在平板上適溫培養(yǎng)，根據(jù)病原菌的生長情況篩選出拮抗性蘭?株.II■復篩:在初篩的基礎(chǔ)上，進一步饕定有希望菌株的生產(chǎn)能力強弱的過程.?復篩釆用揺瓶培養(yǎng)后，發(fā)酵液采用精確的分析方法進行測定??復篩過程中.要結(jié)合培養(yǎng)條件進行.培養(yǎng)條件包括3培養(yǎng)基pH值發(fā)酵溫度供氧量等.（5）菌種鑒定（5）菌種鑒定hi?:?經(jīng)典分類鑒定方法：形態(tài)特征、生理生化特征、血清學試驗等。hi?:?現(xiàn)代分類鑒定方法：遺傳特性、細胞化學組分、計算機數(shù)值分析。(6)毒性試驗<? 自然界的些微生物是在?定條件卜產(chǎn)為的，將其作為生產(chǎn)菌種應(yīng)當I?分當心，尤其與食品工業(yè)仃關(guān)的的種,更應(yīng)慎重?據(jù)仃的國家規(guī)定,微生物中除啤酒酒母、脆聯(lián)壁母、黑曲隊米曲岬和枯草桿菌作為仗用無須作毒性試撿外，其他微生物作為食用，均需通過兩年以上的毒性試驗。f|土一—'二、菌種的保藏與復壯(?)闌種的保藏1、蘭種保藏的意義歯種是從小微生物學以及生命科學研究的基本材料,將別是利用微生物進行仃美生產(chǎn)如抗生素、釵基酸、齦造等「?業(yè)，更離不開菌種。所以菌種保藏是進行牛物學研究和微生物育種匸作的重要組成部分。其任務(wù)首先是使菌種不致死亡,同時還要盡可能設(shè)法把菌種的優(yōu)良特性保持F來而不致向壞的方面轉(zhuǎn)化。2、菌種保藏的原理，歯種保藏匕要是根據(jù)齒種的生理生化特點人丄創(chuàng)造條件使佝*或菌體的生長代謝活動盡最降低,以減少箕變異。舶U通過保持培養(yǎng)基管養(yǎng)成分在最低水平缺氧狀態(tài),F燥和低溫，使菌種處F“體眠”狀態(tài)，抑制其繁殖能力。??種好的保藏方法首先應(yīng)能長期保持菌種原有的優(yōu)良性狀不變，同時還需考慮到方法本身的簡便和經(jīng)濟，以便生產(chǎn)上能推廣使用。、歯種保保的方法、歯種保保的方法勻種保祓的方法很侖.一般存下面幾辭：▲斜面冰箱保蔵法（濤母）斜面保藏是種短期、過渡的保藏方法.卅浙釁斜他按忡后.覺昆適條什卜培券到曲體我抱r?牛kl渦脂.放m冰箱保存.一般保存期為三個月到六個月.B石峭油貌存法（陳母）向培養(yǎng)成熟的著神斜血I:.倒入層火過儡的石蝸油,用fit要高出斜面一座米?然蒔".冰節(jié)中此法可通用于不能利用石錯油作碳源的細蘭、專繭、酵母等很生物的保存保存期約一年左右.

（細際防線南）（細際防線南）真空冷凍干n保威法*丨|詢常川的収邱恩的腫萬法.1基本頃理傾郵的汨坦卜（一15?！?快増飩將細組）結(jié).并Hfti特細軽：初L。部。宇中他水分升華在斷的環(huán)埼中.後牛物的4K和代謝格谷時伶H.不&發(fā)生安異?國此? 以保，njK時間.一般5年左右.tt#ft?ziaaiiK；￡?定的墳備.會求亦比較產(chǎn)格.何由丁?詼方法保祓效果好.《備＜微牛物帝適用.所以.國內(nèi)外。已絞曾財?shù)匕⒂?UH/nA的雑本操作先將微牛物制成懸浮液?卩｝與保護剤混合.然后放。山制的安瓶曾內(nèi).用低沮酒Wh婦！上,』E在低■下用真空1UH%最后將安械計必空tfLH.井低溫保載.保護劑-短釆用脫朋牛奶或血清）保護利的件川叫耗足?冷滄I怏的脫水過程中代替站合水而格定細勵成分（細?R）的構(gòu)型，防此坦因為灰菇而破壞保護劑還W以只支持作用?使微1物締松H?疋燈1仙牛奶可以高心或加熱的方法脫脂液氯超低溫保藏法（細菌，真菌）液氯超低溫保藏法（細菌，真菌）液気超低溫保臧法足近兒年才發(fā)展起來的，此法國外（2較普遍聚用.是適用范圍最廣的微生物保蔽法.尤KA些不產(chǎn)砲子的菌絲體.用只它保破方法不珅想?”川液氤保帔法11保存期期長?a原理用液気能長期保存:術(shù)種.這是因為液氮的溫度可達一196P,近近低IH新陳代謝作用停止的溫度（一130C）,所以此時蘭抻的代謝活動已停止.化學作用亦隨之消失。任操作方tt及步驟1（1）安甑管要求由1液気保｛fJ低溫狀態(tài)，所使用的安韻管需能承受大的溫差而不致于破裂.股用95料或GCI7的玻璃管?安姬竹選好后印上標記，加棉塞后滅菌.烘干后備用。（2）菌種準備及分裝因為液気法南種座經(jīng)受超低溫的冷凍過程,所以也需要保護劑?常川的保護剤為10%甘油用保護刑制備好備液后,加入準備蝦的安瓶管中.一般安瓶管的裝bi為0.2—ImL>主要菌種保藏機構(gòu)介紹種是?個國家的重要資源,世界各國都對備種極為垂視.設(shè)賞r、種專業(yè)性保城機構(gòu)，u要的倫種保拔機構(gòu)介紹如r(1)ATCCAmericanIXpeCullureCollection.Rockvil1.Maryland.U.S.A.美國標準蘭種收蔵所?美I叭4里蘭洲，羅克維爾市。(2)CSH((('oldSpringHarborLaboratory)tU.S.A冷泉港研究室，美國.M(InstituteofAppliedMicrobiology),ofTokyofJapan?日本東京大學應(yīng)用徹生物研究所，日本東京.(4)IFO(InstituteforFermentation)>Osaka>Japan>發(fā)酔研究所，日本大阪。(5)KCC(KakenChemicalCompanyLtd),Tokyo,Japano科研化學有限公司，日本東京.(NathCollectionofType(ulLurv).I.ondonInilrtl,英國倫敦.(7)MH(NationalInstitutesofHealth>.Brlhcsdn,Manland?USaA ?國立衛(wèi)生研究所，美國，馬里蘭洲，貝塞斯達.(S)NRRL(NorthernIlili/jilionRrwarchandDevckipmcntDiviMon.US.DpnrtmstofAgriculture.PsrimUSA.美國農(nóng)業(yè)部,北方開發(fā)利用研究部，美國皮奧里亜布.為了推動■種保臧事業(yè)的發(fā)R.197017月在國家翎|中國科4■主持下,君開了第次仝國商種保?1.*會議.在會上成旻廠中國徹生物蘭種保減管理委員會（CCCMS）委托中國科學院負責擔負全國蘭種保賊管理業(yè)務(wù),下設(shè)六個菌種保懺管理中心.1） 普通微生物圜種保域管理中心（CCGNC）；中國科學院微生物研究所，北京（AS）:真菌，細蘭.中國科學院武漢病毒研究所，武漢（AL-IV）:病毒.2） 農(nóng)業(yè)徹生物菌種保蔵管理中心（ACCC）;中國農(nóng)業(yè)科學院土壊肥料研究所，4）醫(yī)學做生物蘭種保酸管理中心?M（C）:4）醫(yī)學做生物蘭種保酸管理中心?M（C）:管理中心＜ci（r）:部食品發(fā)幣工業(yè)科學研究所，北京.中國件學科學院皮膚病研究所.南京＜JD）:真菌.衛(wèi)生部藥品生物制皿檢定所，北京，細曲.中國毆學科學院病毒研究所.北京,病毒- ,5） 抗生素茴種保狀管理中心（CACC）I '中圏醫(yī)學科學院抗生素研究所，北京和四川擾生素工業(yè)研究所，成都：新抗生素普種.華北藥廠抗生素研究所，石家莊，生產(chǎn)用抗生素菌神6） 獸醫(yī)微生物菌種保薩管理中心（CVCC）I農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)藥耳監(jiān)察所.北京.）（二）菌種的衰退與復壯1、菌種衰退:菌種經(jīng)過長期人匸培養(yǎng)或保藏,111「自發(fā)突變的作用而引起某些優(yōu)良特性變?nèi)趸蛳У默F(xiàn)象。"（2：而補退化的原因：?；蛲蛔?；。變異菌株性狀分離；。誘變的單商落是由一個以上抱f或細胞形成。偶落由一個泡r或單個細胞形成.仇它是多核細胞。單核抱K發(fā)生突變時,雙鏈DNAI?.僅一條鏈I?.某個位點發(fā)生變化爭連續(xù)傳代令其它因素。曲種保藏不當。生長條件不満足（培養(yǎng)堆組成、培養(yǎng)條件）3、防止菌種退化的措加/控制傳代次數(shù)＜選擇合適的培養(yǎng)條件v選擇合適的保藏方法。菌種徳定性檢査-分離復壯4、菌種復壯：使衰退的藺種更新恢復原來的優(yōu)良特性。<?復壯措施:。對L1衰退菌種配合一定培養(yǎng)條件進行單細胞分離純化S淘汰衰退的個體i選擇合適的培養(yǎng)基三、菌種選育?:?菌種選育是-門應(yīng)用科學技術(shù).其理論基礎(chǔ)是微生物遺傳學，生物化學會.而其研究目的是微生物產(chǎn)品的高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)和發(fā)展新品種為生產(chǎn)不斷地提供優(yōu)良菌種，從而促進生產(chǎn)發(fā)展。幸 H前螺種選有常采用自然選育和誘變育種筈萬法，帶仃-?定的盲目性，尚屬「經(jīng)典育種的范疇。隨著微生物學、生化遺傳學的發(fā)展,出現(xiàn)了轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導、原生質(zhì)體融合、代謝調(diào)控和基因工程等較為定向的育種方法。第二節(jié)種子擴大培養(yǎng)?:?神于擴大培養(yǎng):是指將保存在砂上管、冷凍干燥管中處「休眠狀態(tài)的生產(chǎn)爾種接入試管斜而活化后,在經(jīng)過扁瓶或搖瓶及種『罐逐級放大培養(yǎng)而獲得一定數(shù)nt和質(zhì)雖的純種過程。這些純種培養(yǎng)物稱為如s1作為種子的準則?:?惆種細胞的生長活力強，移種至發(fā)酵縦后能迅速生長，遲緩期短；。?生理性狀穩(wěn)定；?菌體總雖及濃度能滿足大容雖發(fā)酵罐的要求;。無雜菌污染；4?保持穩(wěn)定的生產(chǎn)能力。?、種子的制備過程。種K制備的過程大致可分為:w實裁室種「制備階段，生產(chǎn)車間種了制備階段■IIIIt—子.l I MglRUh1、實驗室種子的制備?:?實處室種子的制備一般采用兩種方式。對于產(chǎn)砲r?能力強的及砲尸發(fā)芽、生長繁殖快的南種砰以采用固體培弄基培養(yǎng)抱仁泡k可rt接作為種了?罐的種了,這樣操作簡便,不易污染雜知，對「產(chǎn)北!K能力不強或泡子發(fā)芽慢的南種?可以用液體培養(yǎng)法。T2、生產(chǎn)車間種子制備?:?實凝空制備的抱子或液體種子移種至種子縦擴大培養(yǎng),種子絲的培養(yǎng)基雖因不同菌種而異.flI其原則為采用易被菌利用的成分如葡萄糖、玉:米漿、磷酸鹽等,如果是需氧菌,同時還需供給足夠的無蘭空氣，并不斷攪拌,使保i（統(tǒng)）體在培養(yǎng)液中均勻分布，獲得相同的培養(yǎng)條件。（1）種子罐的作用：。主要是使拖子發(fā)芽,生長繁殖成菌（絲）體,接入發(fā)酵罐能迅速生長,達到-定的菌體量,以利于產(chǎn)物的合成。?確定種子罐級數(shù)需注意的問題，種了級數(shù)越少越好,可簡化工藝和控制,減少染菌機會。種f級數(shù)太少.接種最小,發(fā)酵時間延長,降低發(fā)酵雄的生產(chǎn)率，増加染爾機會然種了?鹹級數(shù)隨產(chǎn)物的品種及生產(chǎn)規(guī)模而定.但也與所選用工藝條件有關(guān)。如改變種子雄的培養(yǎng)條件，加速了弛了發(fā)芽及蘭體的繁玳，也可相應(yīng)地減少種了城的級數(shù)。I一、影響種子質(zhì)最的上要因素1、培養(yǎng)基?營養(yǎng)成分適合種子培養(yǎng)的需要/選擇仃利尸他子發(fā)芽和倘體生長的培養(yǎng)基；y營養(yǎng)上要易「?被蘭體直接吸收和利用；f管養(yǎng)成分要適當豐富和完全，紈源和維生索含量要高?:?營養(yǎng)成分要盡可能與發(fā)醇培養(yǎng)基相近。'羸部辨籍螺麝質(zhì)辭就的現(xiàn)象’其主。例如在四環(huán)床.頃?生產(chǎn)屮?配制產(chǎn)仰于斜面壻養(yǎng)鼎他卷霸腸㈱產(chǎn)種川濃及遍的不同。釘僱加I?原料不同如魚陳或骨腺對他子影響也不同。。諏瞬牘臨備費性警尷罐麒他「的形成.磷含批太多或太少也會影響抱J印勺質(zhì)?:?水質(zhì)的影響：地IX不同、季節(jié)?變化和水源污染，均U造成水質(zhì)波動，影響種于質(zhì)量。e菌種在同體培養(yǎng)基上可呈現(xiàn)多種不同代謝類型的蘭落,氮源品種越多,出現(xiàn)的ES謝類型的蘭落,氮源品種越多,出現(xiàn)的ES歯落類型也越多,不利「生產(chǎn)的穩(wěn)定。

。措施/培養(yǎng)基所用妹料要經(jīng)過發(fā)酵試疚合格才可使用〈嚴格控制滅爾后培券基的質(zhì)量i斜面培養(yǎng)基使用前,需在適當溫度下放徂-定時間。供生產(chǎn)用的』子培養(yǎng)基要用比較單?的敏源，作為選種或分崗用的培養(yǎng)基則采用較夏雜的仃機征源種齢種齡：一種中培養(yǎng)的清統(tǒng)體丿「始移入卜級種了撮或發(fā)醉雄時的培養(yǎng)時間。?通常種齢是以處「牛命力極旺盛的對數(shù)生長虬爾體量還未達到段大值時的培養(yǎng)時間較為合適.時間太電菌種趨「老化,生產(chǎn)能力卜降,歯體自溶:種齡太短.造成發(fā)酵前期生長緩慢。。不同繭種或同菌種匚藝條件不同.種齡是不—杵的，-股需經(jīng)過多種實驗來偷定。嗜堿性芽弛桿菌生產(chǎn)堿性蛋g12小時最好。

個接種;4是指移入的種子液體枳和接種后培養(yǎng)液體積的比例U。接種刊的大小決定于生產(chǎn)菌種在發(fā)屛冊中牛K繁疝的速度，釆用較大的接種妝可以縮短發(fā)屛H中曹釦|斂到高蟬的時間.使產(chǎn)物的形成提前到來?并可減少雜商的牛?長機會.但接種林過大或占過小.均會影響發(fā)fib過大會引起溶軾不足.影響產(chǎn)物合成:而且會的移入代謝廢物,也不經(jīng)濟：過小會延K培養(yǎng)時間,降低發(fā)醇雌的生產(chǎn)率。、溫度個通常接種％細繭1~5%,M阡曲5~10%?宓蘭7~15%.有時20-25%、溫度任何微生物的生長都需尖:仃適H的生長溫度，在此溫度范圍內(nèi)，微牛物生長繁殖域快Q溫度對多數(shù)品種斜而抱子質(zhì)量有顯著的影響。如上霉素生產(chǎn)菌種在高J37°C培養(yǎng)時,抱了接入發(fā)酵繩后出現(xiàn)糖代謝變慢，后基現(xiàn)回升提前?1W絲過卩門溶，效價降低等現(xiàn)〈象"般芥生產(chǎn)單位都嚴格控制弛子斜面的培養(yǎng)溫度.?:?培養(yǎng)基的點離『濃度對微生物牛命活動仃擬著影響。各種微生物都有自己生長與合成酶的最適pH°同?蘭種合成酶的類型與酶系組成nj隨ph的改變im產(chǎn)生不h寸程度的變化o?:?泡盛酒曲陽突變株/l：pH6.0培養(yǎng)時以產(chǎn)生a?淀粉IW為主，在pH2.4條件卜培養(yǎng)，轉(zhuǎn)向合成糖化型淀粉勤與麥芽糖酮，a?淀粉酶合成受到抑制。6、通風量在種『攏中培養(yǎng)的種子除保證供給易被利用的培養(yǎng)基外,冇足夠的通氣量可以的高種子質(zhì)雖。例如，有霉素的生產(chǎn)蘭種在制備過程中將通氣充足和不足兩種情況卜得到的種了分別接入發(fā)酵罐內(nèi),它們的發(fā)酵單位可相差1倍。但也有例外，例如上霉素生產(chǎn)菌,一級種子罐的通氣與小對發(fā)酵有利。、其它因素(1)培養(yǎng)時間?:?一般來說，衰老的來子不如年輕的抱子,因為衰老的砲了已在逐步進入發(fā)芬階段，核物質(zhì)趨F分化狀態(tài)。過「衰老的弛了會導致生產(chǎn)能力的下降。?:?措施：抱r?培養(yǎng)的時間應(yīng)該控制在抱廣量多抱子成熟、發(fā)酵產(chǎn)址正常的階段終止培養(yǎng)。(2)冷藏時間。斜面冷藏對胞子質(zhì)早的影響與與子成熟程度度關(guān)。如土霉素生產(chǎn)菌種抱『斜面培養(yǎng)4犬左右即于4，C冰箱保存,發(fā)現(xiàn)冷藏7~8天菌體細胞開始發(fā)溶。而培養(yǎng)5天以后冷藏，20天未發(fā)現(xiàn)白溶。寺冷藏時間對砲子的牛產(chǎn)能力也仃影響。例如花鏈寄素生產(chǎn)中，斜面抱了在6.C冷藏兩個月后的發(fā)酵單位比冷藏?個丿J降低18%,冷藏3個月后降低35%。(3)泡沫泡沫的大量存在,易影響微生物對溶氧的吸收降低種r罐的利用率,甚至跑液染歯等不利影響，不利于種子的培養(yǎng)。、種子質(zhì)量標準、種子質(zhì)量標準1、細胞或菌體焰菌絲形態(tài)、菌絲濃度和培養(yǎng)液外觀(色素、顆粒等)-單細胞：蘭體健壯、菌形一致、均勻整齊，仃的還要求有一定的抨列或形態(tài)：-霉菌、放線菌：繭絲粗壯、對某些染料著色力強、生氏吒盛、術(shù)絲分枝情況和內(nèi)含物情況好。2、生化指標。種子液的糖、氮,磷的含量和pH變化。3、產(chǎn)物生成量?:?在抗生素發(fā)酵中，產(chǎn)物生成址是考察種子質(zhì)屆的重要指標，因為種了液中產(chǎn)物生成量的多少間接反映種子的生產(chǎn)能力和成熟程度。4、酶活力?:?種K液中某種悔的活力，與11的產(chǎn)物的產(chǎn)代有一定的關(guān)聯(lián)。S 四、實例——啤酒酵母的擴大培養(yǎng)啤酒醉母純正與否，對啤酒發(fā)醉和啤酒質(zhì)站的影響很大。啤酒工廠生產(chǎn)使用的酵母由保存的純種酵母,經(jīng)過擴大培養(yǎng)，達到?定數(shù)辱后，供生產(chǎn)現(xiàn)場使用。每個啤酒廠都應(yīng)保存適合本廠使用的純種酵母,以保證生產(chǎn)的啤酒貝“穩(wěn)定的風格和特性。（二）擴大培養(yǎng)的兒項原則和問題（二）擴大培養(yǎng)的兒項原則和問題（一）擴培流程1、 實驗室擴大培養(yǎng)?斜面試管（原菌種）一富氏瓶或試管培養(yǎng)一巴氏版或三角瓶培養(yǎng)一卡氏罐培養(yǎng)2、 生產(chǎn)現(xiàn)場擴大培養(yǎng)?:?漢生辨培養(yǎng)一酔母擴大培養(yǎng)縦一醵母繁殖罐一發(fā)酵罐。（1）骼母擴大培養(yǎng)的關(guān)鍵在于使用優(yōu)良的位如胞出發(fā)菌。此出發(fā)慎株先經(jīng)生理特牛和生產(chǎn)性能鑒定，然后投人應(yīng)用，并呆證在擴大培養(yǎng)過程中無污染、無變異。f一步擴大后的殘留液都應(yīng)進行無污染和無變異的檢査。(2)培界前期,為了提髙酵母增殖速率,縮短培養(yǎng)時間，實驗室擴大培養(yǎng)階段，釆用酵母最適繁殖溫度25S而后每擴大一次,溫度均相應(yīng)有所降低.使酵母逐步適應(yīng)低溫發(fā)發(fā)的要求。但每次降溫幅度不能太大,以防酵母活性受到抑制。隨制培養(yǎng)溫度的降低,培養(yǎng)時間視稀釋倍數(shù)而相應(yīng)延長.例為了縮短酵母生長停滯期和縮短扁親時間，每階段擴大培證的酵母,最好在秣母對數(shù)生長期移植,具體體矗是鱗辭髓翳回降?商，死12率最低，移植后，迅速增bb，絕養(yǎng)鑑氧擴出此是培溶成與場。如因氧郵容，.母現(xiàn)