高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)

高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第1頁。專題1傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第1頁。課題1果酒和果醋的制作1.果酒制作的菌種是？其代謝類型和生殖方式是什么？菌種：酵母菌（單細(xì)胞真菌、真核生物）代謝類型：異養(yǎng)兼性厭氧性同化作用類型:異養(yǎng)異化作用類型：兼性厭氧型生殖方式：無性生殖（出芽生殖、孢子生殖、分裂生殖）2.菌種進(jìn)行有氧呼吸的目的？其反應(yīng)式是？并寫出酒精發(fā)酵的反應(yīng)式式：在有氧條件下，酵母菌進(jìn)行有氧呼吸，大量繁殖。反應(yīng)式：C6H12O6＋6O2＋6H2O→6CO2＋12H2O在無氧條件下，酵母菌能進(jìn)行酒精發(fā)酵。反應(yīng)式：C6H12O6→2C2H5OH＋2CO23.是酵母菌發(fā)酵和生長的重要條件？繁殖和發(fā)酵時(shí)應(yīng)將其控制在什么范圍內(nèi)？溫度是酵母菌發(fā)酵和生長的重要條件。200C左右最適合酵母菌繁殖，酒精發(fā)酵時(shí)一般將溫度控制在18—250C。4.什么在葡萄酒的自然發(fā)酵中其主要作用？附著在葡萄皮上的野生型酵母菌。5.為什么葡萄酒呈深紅色？在發(fā)酵過程中，隨著酒精度數(shù)的提高，紅葡萄皮的色素也進(jìn)入發(fā)酵液，使葡萄酒呈現(xiàn)深紅色。6.在發(fā)酵過程中，為什么不需要另行消毒或滅菌？在缺氧、呈酸性的發(fā)酵液中，酵母菌可以生長繁殖，而絕大多數(shù)其他微生物都因無法適應(yīng)這一環(huán)境而受到抑制。7.果醋制作的菌種是？其代謝類型和生殖方式是？菌種：醋酸菌（單細(xì)胞細(xì)菌、原核生物）代謝類型:異養(yǎng)需氧型同化作用類型：異養(yǎng)異化作用類型：需氧型生殖方式：二分裂高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第2頁。8.為什么密封不嚴(yán)的酒會(huì)變酸？在變酸的酒的表面為什么會(huì)出現(xiàn)一層白色的膜？高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第2頁。醋酸菌在有氧條件下，將乙醇氧化成醋酸。在變酸的酒的表面觀察到的菌膜就是醋酸菌在液面大量繁殖而形成的。9.為什么醋酸發(fā)酵需要充足的氧氣？醋酸菌是好氧細(xì)菌，只有當(dāng)氧氣充足時(shí)，才能進(jìn)行旺盛的生理活動(dòng)。醋酸菌對氧氣的含量特別敏感，當(dāng)進(jìn)行深層發(fā)酵時(shí)，即使只是短時(shí)間中斷通入氧氣，也會(huì)引起醋酸菌死亡。果醋制作的實(shí)驗(yàn)原理是什么？當(dāng)氧氣、糖源都充足時(shí)，醋酸菌將葡萄汁中的糖分解成醋酸；當(dāng)氧氣充足、缺少糖源時(shí)，醋酸菌將乙醇變?yōu)橐胰?，再將乙醛變?yōu)榇姿?。（反?yīng)式如下）C2H5OH＋O2→CH3COOH＋H2O11.醋酸菌的最適生長溫度為？30—350C12.制作果酒果醋的實(shí)驗(yàn)流程是什么？挑選葡萄→沖洗→榨汁→酒精發(fā)酵→果酒（→醋酸發(fā)酵→果醋）13.用帶蓋的瓶子制葡萄酒時(shí)，在發(fā)酵過程中每隔12h將瓶蓋擰松一次，目的是什么？為什么不能打開瓶蓋？放出CO2，防止CO2過多導(dǎo)致發(fā)酵瓶爆裂。不打開瓶蓋的目的：防止O2和其他雜菌進(jìn)入。14.P4頁圖1—4b的發(fā)酵裝置，充氣口、排氣口和出料口分別有什么作用？為什么排氣口要通過一個(gè)長而彎曲的膠管與瓶身連接？充氣口：在醋酸發(fā)酵時(shí)連接充氣泵進(jìn)行充氣。排氣口：排出酒精發(fā)酵時(shí)產(chǎn)生的CO2。出料口：用來取樣。與瓶身相連的長而彎曲的膠管：防止空氣中微生物的污染。15.制果酒時(shí)，充氣口應(yīng)該如何操作？制果醋呢？制果酒時(shí)，應(yīng)該關(guān)閉充氣口；制果醋時(shí)，應(yīng)將充氣口連接充氣泵進(jìn)行充氣。高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第3頁。16.沖洗葡萄的目的為？能否反復(fù)沖洗？為什么？高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第3頁。沖洗1—2遍除去污物，不能反復(fù)沖洗，防止菌種流失。17.先沖洗葡萄還是先出去枝梗？簡述原因：先沖洗，然后再除去枝梗，以避免除去枝梗時(shí)引起葡萄破損，增加被雜菌污染的機(jī)會(huì)。18.應(yīng)該從哪些方面防止發(fā)酵液被污染？榨汁機(jī)和發(fā)酵瓶要清洗干凈，且發(fā)酵瓶要用70%的酒精進(jìn)行消毒；清洗葡萄時(shí)要先清洗后除枝梗；發(fā)酵瓶排氣管用曲頸管不用直管。19.葡萄汁裝入發(fā)酵瓶中，為什么要留大約1\3的空間？①先讓酵母菌進(jìn)行有氧呼吸大量繁殖，耗盡O2后再進(jìn)行酒精發(fā)酵；②防止發(fā)酵過程中產(chǎn)生的CO2造成發(fā)酵液溢出。20.制葡萄酒時(shí)，為什么要將溫度控制在？制葡萄醋時(shí)，為什么要將溫度控制在30—350C？溫度是酵母菌生長和發(fā)酵的重要條件18—250C是酵母菌生長和繁殖的最適溫度；而醋酸菌是嗜熱菌，30—350C有利于醋酸菌的繁殖和醋酸發(fā)酵。21.檢測果汁發(fā)酵后是否有酒精產(chǎn)生，用什么來檢驗(yàn)？在什么條件下？有什么顏色變化？用重鉻酸鉀來檢驗(yàn)。在酸性條件下，重鉻酸鉀與酒精反應(yīng)呈現(xiàn)灰綠色。先在試管中加入發(fā)酵液2ｍL，再滴入物質(zhì)的量濃度為3mol/L的H2SO43滴，振蕩混勻，最后滴加常溫下飽和的重鉻酸鉀溶液3滴，振蕩試管，觀察顏色。22.為提高果酒品質(zhì)，更好地抑制其他微生物的生長，可直接在果汁中加入什么？加入人工培養(yǎng)的酵母菌。23.制作葡萄醋時(shí)為什么要適時(shí)通入空氣？醋酸菌是好氧細(xì)菌。24.果酒發(fā)酵裝置發(fā)酵后期能否產(chǎn)生大量的果醋？原因是？果酒發(fā)酵裝置發(fā)酵后期不能產(chǎn)生大量的果醋，原因是：①醋酸菌的最適生長溫度為30—350C，而醋酸菌的最適生長溫度為18—250C；②果酒發(fā)酵后期裝置內(nèi)缺氧，而醋酸菌是好氧細(xì)菌，沒有氧氣無法生活。高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第4頁。高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第4頁。課題2：腐乳的制作1.為什么腐乳經(jīng)過微生物的發(fā)酵，味道會(huì)很鮮美且易于消化和吸收？豆腐中的蛋白質(zhì)被分解成小分子的肽和氨基酸，味道鮮美，易于消化和吸收。2.多種微生物參與了腐乳的發(fā)酵，如青霉、酵母、曲霉、毛霉，其中起主要作用的是毛霉。3.毛霉（一種絲狀真菌）屬于真核（“原核”或“真核”）生物，代謝類型為異養(yǎng)需養(yǎng)型。生長迅速，具有發(fā)達(dá)的白色菌絲；以孢子生殖為主。4.豆腐長白毛是怎么回事？毛霉的白色菌絲。5.制作腐乳的原理：毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶能將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可將脂肪水解為甘油和脂肪酸。6.挑選什么樣的豆腐？理由是什么？所用豆腐的含水量為70％左右，水分過多則腐乳不易成形。含水量過低，不利于毛霉的生長繁殖。7.腐乳外部有一層致密的皮，這層皮是怎樣形成的？對人體有害嗎？作用是什么？“皮”是前期發(fā)酵時(shí)在豆腐表面上生長的菌絲（匍匐菌絲），對人體無害。它能形成腐乳的“體”，使腐乳成形。8.傳統(tǒng)生產(chǎn)腐乳的毛霉來自于哪里？現(xiàn)代工藝生產(chǎn)呢?傳統(tǒng)生產(chǎn)腐乳的毛霉來自空氣中的毛霉孢子；現(xiàn)代工藝生產(chǎn)：直接接種優(yōu)良毛霉菌種。9.在腐乳制作的過程中應(yīng)該怎么加鹽？加鹽的目的是什么？加鹽腌制：將長滿毛霉的豆腐塊分層整齊地?cái)[放在瓶中，同時(shí)逐層加鹽，隨著層數(shù)的加高而增加鹽量，接近瓶口表面的鹽要鋪厚一些。加鹽腌制的時(shí)間約為8天左右。食鹽的作用：①抑制微生物的生長，避免腐敗變質(zhì)；②析出水分，使豆腐變硬，在后期制作過程中不易酥爛。10.在腐乳制作的過程中鹽的濃度過高會(huì)導(dǎo)致什么問題？過低呢？高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第5頁。用鹽腌制時(shí)，注意控制鹽的用量：鹽的濃度過低，不足以抑制微生物的生長，可能導(dǎo)致豆腐腐敗變質(zhì)；鹽的濃度過高會(huì)影響腐乳的口味。高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第5頁。11.鹵湯由什么組成？香辛料的作用？配制鹵湯：鹵湯直接關(guān)系到腐乳的色、香、味。鹵湯是由酒及各種香辛料配制而成的。香辛料的作用：①調(diào)制腐乳的風(fēng)味；②具有防腐殺菌的作用。12.酒的含量為多少？加酒的作用有哪些？濃度過高和過低分別會(huì)導(dǎo)致什么？酒的含量一般控制在12%左右。酒的作用：①抑制微生物的生長；②使腐乳具有獨(dú)特的香味。酒精含量過高，對蛋白酶的抑制作用也越大，使腐乳成熟期延長；酒精含量過低，不足于抑制微生物生長，可能導(dǎo)致豆腐腐敗。13.腌制腐乳時(shí)，為什么要隨著豆腐層的加高而增加鹽的用量？越接近瓶口，被雜菌污染的可能性越大。14.為什么在接近瓶口的表面要將鹽鋪厚一些？防止雜菌污染。15.用來腌制腐乳的玻璃瓶可通過什么方式來處理?目的是什么？用來腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷干凈后要用沸水消毒。目的是方式雜菌污染。16.裝瓶時(shí)，要怎樣處理瓶口？裝瓶時(shí)，操作要迅速小心。整齊地?cái)[放好豆腐、加入鹵湯后，要用膠條將瓶口密封。封瓶時(shí)，最好將瓶口通過酒精燈的火焰，防止瓶口被污染。17.腐乳制作的流程：讓豆腐上長出毛霉→加鹽腌制→加鹵湯裝瓶→密封腌制18.毛霉生長溫度應(yīng)該控制在多少？為什么控制到該溫度？15～18℃，并保持一定的濕度。因?yàn)?5～18℃是毛霉生長繁殖的最適溫度。19.哪些因素可以影響腐乳的風(fēng)味？請舉例論述。①水的控制：豆腐含水量70%，含水量過高，腐乳不易成形；含水量過低，不利于毛霉的生長。②溫度的控制：15～18℃。③鹽量的控制：鹽濃度過低，不足于抑制微生物生長，高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第6頁?？赡軐?dǎo)致豆腐腐敗變質(zhì)；鹽濃度過高，會(huì)影響腐乳的口味。④酒含量的控制：酒精含量過高，腐乳成熟的時(shí)間將會(huì)延長；酒精含量過低，不足于抑制微生物生長，可能導(dǎo)致豆腐腐敗。⑤發(fā)酵時(shí)間的控制：發(fā)酵時(shí)間短，蛋白質(zhì)未完全水解，加鹽后蛋白質(zhì)變性，豆腐變硬；發(fā)酵時(shí)間過長，豆腐會(huì)軟化，不易成形。高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第6頁。課題3：泡菜的制作1、在泡菜腌制過程中，我們需要檢測什么的含量？亞硝酸鹽。制作泡菜需要什么菌種？其代謝類型是？乳酸菌（單細(xì)胞原核生物）代謝類型：異養(yǎng)厭氧型同化作用類型：異養(yǎng)異化作用類型：厭氧制作泡菜的原理是什么？在無氧條件下，乳酸菌進(jìn)行無氧呼吸將葡萄糖糖分解為乳酸，反應(yīng)式為：C6H12O6→2C3H6O34、常見的乳酸菌有哪兩類？常用于生產(chǎn)的酸奶的是什么？常見的乳酸菌有乳酸鏈球菌和乳酸桿菌。乳酸桿菌常用于生產(chǎn)酸奶。5、為什么含有抗生素的牛奶不能發(fā)酵成酸奶？抗生素能夠殺死或抑制乳酸菌的生長。亞硝酸鹽的攝入量達(dá)到多少引起中毒？多少引起死亡？達(dá)到0.3—0.5g時(shí)，會(huì)引起中毒；達(dá)到3g時(shí)會(huì)引起死亡。亞硝酸鹽會(huì)在人體內(nèi)積累嗎？會(huì)轉(zhuǎn)變成什么致癌物質(zhì)？亞硝酸鹽被吸收后隨尿液排出體外，不會(huì)再人體內(nèi)積累，但在適宜pH、溫度和一定微生物作用下會(huì)形成致癌物質(zhì)亞硝胺。8、為什么不宜多吃腌制食品？人體攝入亞硝酸鹽含量達(dá)到0.3—0.5g時(shí)，會(huì)引起中毒；達(dá)到3g時(shí)會(huì)引起死亡。并且在適宜pH、溫度和一定微生物作用下形成致癌物質(zhì)亞硝胺。高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第7頁。9、泡菜的制作流程？高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第7頁。選擇泡菜壇——選擇原料——原料處理——配制鹽水——裝壇——封壇發(fā)酵——成品10.制作泡菜時(shí)，鹽和清水的比例是多少？清水：鹽=10:111.將鹽水煮沸冷卻的目的是？煮沸的作用：一是除去水中O2，二是殺滅鹽水中的其他細(xì)菌。冷卻的目的：防止高溫殺死乳酸菌。12.為什么要向壇蓋邊緣的水槽中注滿水？以保證壇內(nèi)乳酸菌發(fā)酵所需的無氧環(huán)境。13.測定亞硝酸含量的原理是什么？測定亞硝酸鹽含量的方法是什么？測定亞硝酸鹽含量的方法是：比色法原理是：在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)后，與

N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合形成玫瑰紅色染料，與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)顯色液目測比較，估算泡菜中亞硝酸鹽含量。14.應(yīng)選擇什么樣的泡菜壇？選擇氣密性好的，以創(chuàng)造無氧環(huán)境，有利于乳酸菌發(fā)酵，防止蔬菜腐爛。15.如何檢測泡菜壇的氣密性？將壇口向上壓入水中，看壇內(nèi)有無滲水現(xiàn)象。16.腌制過程中，哪些因素會(huì)造成細(xì)菌大量繁殖，亞硝酸鹽含量增加？在泡菜的腌制過程中，要注意控制腌制的時(shí)間、溫度和食鹽的用量。溫度過高、食鹽用量過低、腌制時(shí)間過短，容易滋生細(xì)菌大量繁殖，亞硝酸鹽含量增加。①溫度：溫度過高，不利于乳酸菌生長，容易滋生雜菌，亞硝酸鹽含量增加；溫度過低，則發(fā)酵時(shí)間延長。②食鹽：食鹽用量過低，不足于抑制其他微生物的生長，容易滋生雜菌，亞硝酸鹽含量增加；食鹽用量過高，則抑制乳酸菌生長，導(dǎo)致泡菜“咸而不酸”。③腌制時(shí)間：腌制時(shí)間過短，產(chǎn)生的乳酸少，容易滋生雜菌，亞硝酸含量增加；腌制時(shí)間過長，產(chǎn)生的乳酸多，影響泡菜的風(fēng)味。17.一般在腌制幾天后，亞硝酸鹽的含量開始下降？一般在腌制10d后，亞硝酸鹽含量開始下降。高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第8頁。18.導(dǎo)致泡菜“咸而不酸”的原因是什么？食鹽用量過高，抑制了乳酸菌的生長。高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第8頁。19.在制作泡菜的過程中，有機(jī)物的干重如何變化？泡菜壇內(nèi)有機(jī)物的種類如何變化？干重減少（因?yàn)槿樗峋M(jìn)行無氧呼吸消耗葡萄糖）；有機(jī)物種類增加（因?yàn)樵谌樗岚l(fā)酵的過程中產(chǎn)生了丙酮酸等中間產(chǎn)物，及乳酸）20.為什么在泡菜制作過程中會(huì)加入陳泡菜水？增加乳酸菌的數(shù)量。21.為什么泡菜壇內(nèi)有時(shí)候會(huì)長一層白膜？你認(rèn)為這層白膜是怎樣形成的？產(chǎn)膜酵母的繁殖。酵母菌是兼性厭氧微生物，泡菜發(fā)酵液營養(yǎng)豐富，其表面氧氣含量豐富，適合酵母菌繁殖。22.檢測亞硝酸鹽含量的操作步驟依次有哪些？配制溶液——制備標(biāo)準(zhǔn)顯色液——制備樣品處理液——比色23.制備樣品處理液時(shí)，加入氫氧化鋁乳液的目的？吸附雜質(zhì)，使泡菜濾液脫色變澄清。24.畫出亞硝酸鹽含量、乳酸菌含量、乳酸含量隨時(shí)間的變化趨勢圖，并解釋其原因。乳酸菌乳酸亞硝酸鹽發(fā)酵初期少（有O2，乳酸菌活動(dòng)受到抑制）少增多（乳酸含量少，亞硝酸還原菌大量繁殖）發(fā)酵中期最多（乳酸抑制其他雜菌活動(dòng)）此時(shí)乳酸菌數(shù)量增加，雜菌數(shù)量減少的原因：乳酸菌比雜菌更耐酸增加，PH下降減少（乳酸含量增加，抑制了亞硝酸還原菌）發(fā)酵后期減少（乳酸繼續(xù)積累，PH下降，抑制了乳酸菌的活動(dòng)）繼續(xù)增多，PH繼續(xù)下降減少至相對穩(wěn)定（亞硝酸還原菌被完全抑制）乳酸含量的變化：增加PH的變化：下降乳酸菌含量的變化：先增加后減少亞硝酸鹽含量的變化：先增加后減少25.在整個(gè)泡菜制作過程中，如何防止泡菜被污染？每次取樣用具要洗凈，取樣后迅速封壇，防止泡菜被污染。高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第9頁。專題2微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第9頁。課題1微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)1.研究和應(yīng)用微生物的前提是什么？防止雜菌入侵，獲得純凈的培養(yǎng)物。2.實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)微生物需要注意哪兩方面？一方面需要為培養(yǎng)的微生物提供合適的營養(yǎng)和環(huán)境條件另一方面需要確保無處不在的其他微生物無法混入。3.什么叫做培養(yǎng)基？培養(yǎng)基：人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。4.瓊脂是什么？性質(zhì)有哪些？瓊脂是一種從紅藻中提取的多糖。瓊脂在980C以上熔化，在440C以下凝固，在常規(guī)培養(yǎng)條件下呈現(xiàn)固態(tài)。5.培養(yǎng)基的種類，按物理性質(zhì)可分為哪些？他們各自有哪些作用？培養(yǎng)基按照物理性質(zhì)可分為液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。液體培養(yǎng)基（不含凝固劑）：配制成的液體狀態(tài)的基質(zhì)。固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入凝固劑瓊脂后，制成瓊脂固體培養(yǎng)基。微生物在固體培養(yǎng)基表面生長，可以形成肉眼可見的菌落。根據(jù)菌落的特征可以判斷是哪一種菌。用途：液體培養(yǎng)基應(yīng)用于工業(yè)或生活生產(chǎn)，常用來擴(kuò)大培養(yǎng)微生物數(shù)量；固體培養(yǎng)基應(yīng)用于微生物的分離和鑒定；半固體培養(yǎng)基則常用于觀察微生物的運(yùn)動(dòng)及菌種保藏等。6.培養(yǎng)基的種類，按功能可以分為哪些？請舉例說明。按照培養(yǎng)基的用途，可將培養(yǎng)基分為選擇培養(yǎng)基和鑒定培養(yǎng)基。選擇培養(yǎng)基是指在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微生物生長，促進(jìn)所需要的微生物的生長。鑒別培養(yǎng)基是根據(jù)微生物的特點(diǎn)，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品配制而成的，用以鑒別不同類別的微生物。7.培養(yǎng)基的成分主要有哪些？水、碳源、氮源、無機(jī)鹽。高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第10頁。碳源：能為微生物的代謝提供碳元素的物質(zhì)。如CO2、NaHCO3等無機(jī)碳源；糖類、石油、花生餅等有機(jī)碳源。異養(yǎng)微生物只能利用有機(jī)碳源。單質(zhì)碳不能作為碳源。高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第10頁。氮源：能為微生物的代謝提供氮元素的物質(zhì)。如N2、NH3、NO3-、NH4+等無機(jī)氮源；蛋白質(zhì)、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨等有機(jī)氮源。只有固氮微生物才能利用N2。8.培養(yǎng)基除滿足幾種主要營養(yǎng)物質(zhì)的基礎(chǔ)上，還需要滿足什么條件？滿足微生物生長對PH、溫度、氧氣以及特殊營養(yǎng)物質(zhì)的要求。9.培養(yǎng)乳酸桿菌時(shí)，還需要在培養(yǎng)基中添加什么？霉菌呢？厭氧微生物呢？培養(yǎng)乳酸桿菌時(shí)需要在培養(yǎng)基中添加維生素；培養(yǎng)霉菌時(shí)須將培養(yǎng)基的pH調(diào)至酸性；培養(yǎng)細(xì)菌是需要將pH調(diào)至中性或微堿性；培養(yǎng)厭氧型微生物是則需要提供無氧的條件。10.牛肉膏和蛋白胨主要能提供哪些營養(yǎng)物質(zhì)？碳源和氮源。11.獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是？防止外來雜菌的入侵。12.無菌技術(shù)對實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手要進(jìn)行什么操作？清潔和消毒13.無菌技術(shù)對用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基要進(jìn)行什么操作？滅菌14.實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在什么附近進(jìn)行？酒精燈火焰15.無菌技術(shù)的目的？①防止培養(yǎng)物被污染；②防止污染環(huán)境；③避免感染操作者。16.消毒和滅菌的定義是什么？消毒指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物（不包括芽孢和孢子）。滅菌則是指使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。比較項(xiàng)理化因素的作用強(qiáng)度消滅微生物的數(shù)量芽孢和孢子能否被消滅消毒較為溫和部分生活狀態(tài)的微生物不能滅菌強(qiáng)烈全部微生物能17.實(shí)驗(yàn)室常用的消毒方法有哪些？常用的滅菌方法有哪些？消毒方法常用煮沸消毒法，巴氏消毒法（對于一些不耐高溫的液體）還有化學(xué)藥劑（如高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第11頁。酒精、氯氣、石炭酸等）消毒、紫外線消毒。高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第11頁。滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌。18.煮沸消毒法、巴氏消毒法、化學(xué)藥劑消毒、紫外線消毒法的方法操作及適用對象？方法操作適用對象煮沸消毒法1000C煮沸5—6min耐高溫的日常用品巴氏消毒法750C煮30min或在800C煮15min不耐高溫的液體，如牛奶化學(xué)藥劑消毒法酒精、氯氣、石炭酸、煤酚皂溶液等消毒液如用酒精擦拭雙手，用氯氣消毒水源紫外線消毒法紫外線照射接種室、接種箱、超凈工作臺(tái)19.灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌的方法操作及適用對象？方法操作適用對象灼燒滅菌酒精燈火焰上灼燒接種環(huán)、接種針或其他金屬用具干熱滅菌干熱滅菌箱內(nèi)，在160--1700C加熱1—2h耐高溫的、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培養(yǎng)皿）和金屬用具高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，壓力為100kPa，溫度為1210C，維持15—30min培養(yǎng)基20.高壓蒸汽滅菌為達(dá)到良好的滅菌效果，壓力為多少？溫度為多少？維持多長時(shí)間？壓力為100kPa，溫度為1210C，維持15—30min高壓蒸汽滅菌中把鍋內(nèi)的水加熱煮沸的原因是什么？排除冷空氣，水蒸氣中含有空氣時(shí)在同一溫度下所達(dá)到的壓力高于不含空氣的水蒸氣壓力，即在同一壓力下的實(shí)際溫度含空氣的蒸汽低于飽和蒸汽,達(dá)不到滅菌效果。22.紫外線消毒，在照射前噴灑什么可以加強(qiáng)消毒效果？石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液23.培養(yǎng)基丟棄前要做什么操作？為什么？滅菌，防止培養(yǎng)基上滋生細(xì)菌污染環(huán)境高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第12頁。24.配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的流程是什么？計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第12頁。25.應(yīng)該在什么時(shí)候調(diào)節(jié)PH？熔化之后、滅菌之前26.為什么稱取時(shí)動(dòng)作要迅速？牛肉膏和蛋白胨都容易吸潮27.溶化過程中不斷用玻璃棒攪拌的作用？防止瓊脂糊底而導(dǎo)致燒杯破裂28.培養(yǎng)基滅菌后，溫度要冷卻到多少左右時(shí)才能用來倒平板？用什么來估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？500C?？梢杂檬钟|摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，就可以進(jìn)行倒平板了。29.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基30.倒平板操作中，平板冷卻凝固后還需要如何操作？目的是什么？平板冷凝后，將平板倒置?？梢苑乐姑笊w上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。31.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。32.微生物的接種方法包括平板劃線法、稀釋涂布平板法、斜面接種、穿刺接種，其中最常用的是平板劃線法、稀釋涂布平板法，其核心是防止雜菌的污染，保證培養(yǎng)物的純凈度。33.用平板劃線法和稀釋涂布平板法接種的目的是：使聚集在一起的微生物分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落，以便于純化菌種。34.平板劃線法的原理是什么？平板劃線法是通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作。將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。在數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體，這就是菌落。35.平板劃線法的操作步驟？高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第13頁。①將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種環(huán)燒紅。高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第13頁。②在火焰旁冷卻接種環(huán)，并打開棉塞。③將試管口通過火焰。④將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中蘸取一環(huán)菌液。⑤將試管通過火焰，并塞上棉塞。⑥左手將皿蓋打開一條縫隙，右手將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋。注意不要?jiǎng)澠婆囵B(yǎng)皿。⑦灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一區(qū)域劃線的末端開始往第二區(qū)域內(nèi)劃線。重復(fù)以上操作，在三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線。注意不要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連。⑧將平板倒置放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。36.為什么使錐形瓶的瓶口通過火焰？防止雜菌污染37.為什么在操作的每一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束以后，仍然要灼燒，為什么？說出每一次灼燒的原因。①操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；②每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。③劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。38.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后在進(jìn)行劃線？以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種39.在做第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落。40.為什么最后一次劃線區(qū)不能與第一區(qū)相連？最后一次劃線區(qū)的細(xì)菌數(shù)目最少，不能與第一區(qū)相連，可以保證最終能得到單個(gè)細(xì)菌繁高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第14頁。殖而來的菌落。高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第14頁。41.稀釋涂布平板法的原理是什么？稀釋涂布平板法是將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落。42.用何種物質(zhì)來對菌液進(jìn)行梯度稀釋？為什么要進(jìn)行梯度稀釋？無菌水。進(jìn)行梯度稀釋的原因：菌液中的濃度高，直接培養(yǎng)很難分離得到單菌落。43.在用移液管進(jìn)行稀釋時(shí)？應(yīng)該在菌液中吹吸三次，目的是什么？使菌液與水充分混勻，從而達(dá)到稀釋的目的。44.移液管需要經(jīng)過滅菌，操作時(shí)，試管口和移液管應(yīng)在離火焰1—2cm處。45.涂布平板的操作步驟？①將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中。②取少量菌液，滴加到培養(yǎng)基表面。③將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃盡后，冷卻8～10s。④用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。46.如何檢驗(yàn)培養(yǎng)基的滅菌是否合格？將接種后的培養(yǎng)基和一個(gè)未接種的培養(yǎng)基都放入在370C恒溫箱中培養(yǎng)12h和24h。若未接種的培養(yǎng)基無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。47.培養(yǎng)時(shí)放在什么中進(jìn)行培養(yǎng)？培養(yǎng)的溫度多少？恒溫箱，370C48.如果培養(yǎng)基上觀察到了不同形態(tài)的菌落，說明了什么？說明在接種過程中受到了雜菌的污染；或者培養(yǎng)基的制備不合格。49.為了保持菌種的純凈，需要進(jìn)行菌種的保藏。對于頻繁使用的菌種采用臨時(shí)保藏法。對于需要長期保存的菌種采用甘油管藏法。50.臨時(shí)保藏法需要將菌種接種到試管的固體斜面培養(yǎng)基上，在合適的溫度下培養(yǎng)。當(dāng)菌落長成后，將試管放入4℃的冰箱中保藏。高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第15頁。51.臨時(shí)保藏法有什么缺點(diǎn)？高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第15頁。保存的時(shí)間不長，菌種容易被污染或產(chǎn)生變異。52.甘油管藏法：在3mL的甘油瓶中，裝入1mL甘油后滅菌。將1mL培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，與甘油充分混勻后，放在－20℃的冷凍箱中保存。課題2土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)1.尿素能不能直接被農(nóng)作物吸收？需要被分解成什么才可以被植物利用？尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥，尿素并不能直接被農(nóng)作物吸收。只有當(dāng)土壤中的細(xì)菌將尿素分解成氨之后，才能被植物利用。2.土壤中的細(xì)菌之所以能分解尿素，是因?yàn)槟芎铣墒裁矗客寥乐械募?xì)菌之所以能分解尿素，是因?yàn)樗鼈兡芎铣呻迕浮?.如何尋找目的菌株？在尋找目的菌株時(shí)，要根據(jù)它對生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找。4.實(shí)驗(yàn)室中微生物的篩選應(yīng)用的原理是什么？人為提供有利于目的菌株生長的條件（包括營養(yǎng)、溫度、pH等），同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長。5.為什么以尿素作為唯一氮源的培養(yǎng)基能夠選擇出分解尿素的微生物？培養(yǎng)基中尿素作為唯一氮源，只有能夠利用尿素的微生物才能夠生長。6.什么是選擇培養(yǎng)基？將允許特定種類的微生物生長，同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基，稱做選擇培養(yǎng)基。7.培養(yǎng)基中加入青霉素能分離出什么微生物？加入高濃度食鹽能分離出什么微生物？加入青霉素能分離出酵母菌和霉菌。（青霉素抑制細(xì)菌、放線菌的生長）加入高濃度食鹽能分離出金黃色葡萄球菌。高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第16頁。8.培養(yǎng)基中缺乏氮源能分離出什么微生物？缺乏有機(jī)碳源能分離出什么微生物？高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第16頁。培養(yǎng)基中不加入氮元素，可以選擇培養(yǎng)能固氮的微生物；培養(yǎng)基中不加入有機(jī)碳源可以選擇培養(yǎng)自養(yǎng)微生物；9.培養(yǎng)基中以NH3作為唯一氮源能分離出什么微生物？以石油作為唯一碳源能分離出什么微生物？以NH3作為唯一氮源能分離出硝化細(xì)菌；以石油作為唯一碳源能分離出能分解石油的微生物。10.測定微生物數(shù)量的常用方法有稀釋涂布平板法和顯微鏡直接計(jì)數(shù)法。11.常用來統(tǒng)計(jì)樣品中活菌數(shù)目的方法是什么？稀釋涂布平板法。12.為什么通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中的活菌數(shù)？（稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目的原理）當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活細(xì)菌。13.為了保證結(jié)果正確，一般選擇菌落數(shù)在什么范圍的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)？30—30014.某位同學(xué)在106濃度下涂布了一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)為230，他的結(jié)果是否合理？為什么？不合理。沒有設(shè)置重復(fù)組，結(jié)果不具有說服力。15.某位同學(xué)在同樣的濃度下涂布了三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別為21、212和256，他的結(jié)果是否合理？為什么？合理。因?yàn)樵谕粋€(gè)稀釋度下得到兩個(gè)菌落數(shù)目接近的平板，且菌落數(shù)在30—300之間。16.某位同學(xué)在同樣的濃度下涂布了三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別為21、212和256，該同學(xué)以這三個(gè)平板上菌落數(shù)的平均值163作為統(tǒng)計(jì)結(jié)果。他的結(jié)果是否合理？為什么？不合理。設(shè)置的重復(fù)組中有一組結(jié)果相差太遠(yuǎn)，且菌落數(shù)不在30—300之間。17.統(tǒng)計(jì)樣品菌落數(shù)目，為使結(jié)果具有說服力，應(yīng)設(shè)置重復(fù)組。高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第17頁。18.如何根據(jù)平板上的菌落數(shù)推測出每克樣品中的細(xì)菌數(shù)？高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第17頁。統(tǒng)計(jì)某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)，最好能統(tǒng)計(jì)3個(gè)平板，計(jì)算出平板菌落數(shù)的平均值每克樣品中的菌落數(shù)=（C/V）*M其中，C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積（ml），M代表稀釋倍數(shù).19.用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低，（實(shí)際活菌數(shù)量比測得的數(shù)量偏高）。原因是什么？因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。20.除了稀釋涂布平板法外，還有什么測定微生物數(shù)量的方法？用到什么工具？顯微鏡直接計(jì)數(shù)法，血細(xì)胞計(jì)數(shù)板。濾膜法。21.用顯微鏡直接計(jì)數(shù)法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)比活菌的實(shí)際數(shù)目高，原因是什么？顯微鏡直接計(jì)數(shù)法不能區(qū)分活菌和死菌，死菌也計(jì)數(shù)在內(nèi)。22.設(shè)置對照的目的是什么？設(shè)置對照的主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非測試因素對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。對照實(shí)驗(yàn)是指除了被測試的條件以外，其他條件都相同的實(shí)驗(yàn)，其作用是比照試驗(yàn)組，排除任何其他可能原因的干擾，證明確實(shí)是所測試的條件引起相應(yīng)的結(jié)果。23.檢驗(yàn)選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用，應(yīng)該如何設(shè)置對照？用接種了菌液的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基和接種了菌液的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行對照，在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)目應(yīng)明顯多于選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目，則說明選擇培養(yǎng)基起到了選擇作用。24.分離和計(jì)數(shù)土壤中分解尿素的細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)流程？土壤取樣→制備培養(yǎng)基→樣品的稀釋→取樣涂布→培養(yǎng)觀察→菌落計(jì)數(shù)25.土壤取樣時(shí)，為什么要鏟去表層土？土壤中的微生物，大約70%—90%是細(xì)菌。細(xì)菌適宜在酸堿度接近中性的潮濕土壤中生長，絕大多數(shù)分布在距地表3—8cm的土壤層。26.測定土壤中細(xì)菌、放線菌、真菌的數(shù)量分別選用什么稀釋倍數(shù)進(jìn)行平板培養(yǎng)？測定土壤中細(xì)菌的數(shù)量，一般選用104、105、106高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第18頁。測定放線菌的數(shù)量，一般選用103、104、105高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第18頁。

測定真菌的數(shù)量，一般選用102、103、10427.為什么分離不同的微生物要采用不同的稀釋度？因?yàn)橥寥乐懈黝愇⑸锏臄?shù)量是不同的28.細(xì)菌、放線菌、霉菌各自的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間？不同種類的微生物，往往需要不同的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間。細(xì)菌30—37℃1—2天；放線菌25—28℃5—7天；霉菌25—28℃3—4天。29.微生物培養(yǎng)時(shí)要每隔24h統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，選取什么的記錄作為結(jié)果？原因是什么？選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果。防止因培養(yǎng)時(shí)間不足而導(dǎo)致遺漏菌落的數(shù)目。30.一般來說，在一定條件下（相同培養(yǎng)基、溫度及培養(yǎng)時(shí)間），同種微生物表現(xiàn)出穩(wěn)定的菌落特征。31.菌落特征包括哪些方面？菌落的性狀、大小、隆起程度和顏色等方面32.在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)該從哪些方面注意無菌操作？（至少3點(diǎn)）①取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的信封在使用前都需要滅菌。②應(yīng)在火焰旁稱取土壤。在火焰附近將稱好的土樣倒入錐形瓶中，塞好棉塞。③在稀釋土壤溶液的過程中，每一步都要在火焰旁操作。什么是鑒別培養(yǎng)基？根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn)，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品。34.在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，會(huì)有什么顏色變化？指示劑將變紅35.為什么能通過酚紅指示劑來鑒定能分解尿素的細(xì)菌？在細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)中，細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成了氨。氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)，PH升高，酚紅指示劑將變紅。36.測定飲用水中的大腸桿菌數(shù)目可以用什么方法？濾膜法。將已知體積的水過濾后，將濾膜放在伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上，大腸桿菌的菌落呈現(xiàn)黑色。可以根據(jù)培養(yǎng)基上黑色菌落的數(shù)目，計(jì)算出水樣中大腸桿菌的數(shù)量。高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第19頁。高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第19頁。課題3分解纖維素的微生物的分離1.纖維素是由什么首尾相連而成的高分子化合物？葡萄糖2.地球上含量最豐富的多糖類物質(zhì)是什么？纖維素3.為什么纖維素能被土壤中某些微生物分解利用？因?yàn)樗鼈兡軌虍a(chǎn)生纖維素酶4.纖維素酶是一種復(fù)合酶，由哪些組分組成？纖維素酶是一種復(fù)合酶，它至少包括三種組分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶。5.纖維素是如何被纖維素酶分解成葡萄糖的？C1酶、CX酶使纖維素分解成纖維二糖，葡萄糖苷酶將纖維二糖分解成葡萄糖。6.篩選纖維素分解菌的方法是什么？剛果紅染色法。能夠通過顏色反應(yīng)直接對微生物進(jìn)行篩選7.篩選纖維素分解菌的原理是什么？通過什么現(xiàn)象來判斷有纖維素分解菌？剛果紅（簡稱CR）是一種染料，它可以與像纖維素這樣的多糖物質(zhì)形成紅色復(fù)合物，但并不和水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。當(dāng)我們在含有纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅時(shí)，剛果紅能與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物。當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅－纖維素的復(fù)合物就無法形成，培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈。這樣，我們就可以通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌。8.分離分解纖維素的微生物的實(shí)驗(yàn)流程？土壤取樣→選擇培養(yǎng)（此步是否需要，應(yīng)根據(jù)樣品中目的菌株數(shù)量的多少來確定）→梯度稀釋→將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上→挑選產(chǎn)生透明圈的菌落9.為什么要在富含纖維素的環(huán)境中尋找纖維素分解菌？由于生物與環(huán)境的相互依存關(guān)系，在富含纖維素的環(huán)境中，纖維素分解菌的含量相對提高，因此從這種土樣中獲得目的微生物的幾率要高于普通環(huán)境。10.土壤取樣時(shí)，為什么將濾紙埋在土壤中？高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第20頁。將濾紙埋在土壤中能使纖維素分解菌相對聚集，實(shí)際上是人工設(shè)置纖維素分解菌生存的適宜環(huán)境。一般應(yīng)將紙埋于深約10cm左右腐殖土壤中。高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第20頁。11.選擇培養(yǎng)的目的是什么？通過選擇培養(yǎng)增加纖維素分解菌的濃度，以確保能夠從樣品中分離到所需要的微生物。12.為什么選擇培養(yǎng)能夠“濃縮”所需的微生物？在選擇培養(yǎng)的條件下，可以使那些能夠適應(yīng)這種營養(yǎng)條件的微生物得到迅速繁殖，而那些不適應(yīng)這種營養(yǎng)條件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“濃縮”的作用。13.選擇培養(yǎng)用固體培養(yǎng)基還是液體培養(yǎng)基，為什么？液體培養(yǎng)基。液體培養(yǎng)基可以使?fàn)I養(yǎng)成分充分消耗，有利于菌種大量繁殖。14.選擇培養(yǎng)時(shí)振蕩培養(yǎng)的目的是什么？提高培養(yǎng)液中溶解氧的含量；同時(shí)使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高營養(yǎng)物質(zhì)的利用率。15.如何判斷一個(gè)培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基還是液體培養(yǎng)基？是否加入瓊脂（凝固劑）16.以纖維素作為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基可以選擇出什么微生物？為什么？可以選擇出纖維素分解菌，因?yàn)橐岳w維素作為唯一碳源，有利于纖維素分解菌生長，同時(shí)抑制其他微生物生長。17.鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基用固體培養(yǎng)基還是液體培養(yǎng)基？固體培養(yǎng)基18.剛果紅染色法有哪兩種方法？分別是如何操作的？一種是先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅進(jìn)行顏色反應(yīng)，另一種是在倒平板時(shí)就加入剛果紅。方法一：在長出菌落的培養(yǎng)基上，覆蓋質(zhì)量濃度為1mg/ml的CR溶液，10—15min后，倒去CR溶液，加入1mol/L的NaCl溶液，15min后倒掉NaCl溶液，此時(shí)，產(chǎn)生纖維素酶的菌落周圍將會(huì)出現(xiàn)透明圈。方法二：配制質(zhì)量濃度為10mg/ml的CR溶液，滅菌后，按照每200ml培養(yǎng)基加入1ml的比例加入CR溶液，混勻后倒平板。等培養(yǎng)基上長出菌落后，產(chǎn)生纖維素酶的菌落周圍將會(huì)出現(xiàn)明顯的透明圈。19.兩種剛果紅染色法中哪種方法剛果紅需要滅菌？哪種方法剛果紅不需要滅菌？高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第21頁。菌落形成后加入剛果紅，剛果紅不需要滅菌；菌落形成前倒平板時(shí)加入剛果紅，剛果紅需要滅菌。高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第21頁。20.為確定得到的是纖維素分解菌，還需要進(jìn)行什么實(shí)驗(yàn)？發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶的實(shí)驗(yàn)21.纖維素酶的發(fā)酵方法有哪兩種？液體發(fā)酵和固體發(fā)酵22.纖維素酶的測定是通過對什么物質(zhì)進(jìn)行定量測定？對纖維素酶分解纖維素后所產(chǎn)生的葡萄糖進(jìn)行定量的測定。專題4酶的研究與應(yīng)用

課題1果膠酶在

果汁生產(chǎn)中的作用

1.制作果汁需要解決哪些問題?由水果制作果汁要解決兩個(gè)主要問題：一是果肉的出汁率低，耗時(shí)長；二是榨取的果汁渾濁、黏度高，容易發(fā)生沉淀。

2.果膠酶為什么能提高果汁的出汁率并使果汁變得澄清?①果膠酶將不溶性的果膠分解成可溶性的半乳糖醛酸，使渾濁的果汁變得澄清。②果膠酶瓦解植物細(xì)胞的細(xì)胞壁和胞間層，使榨取果汁變得更加容易，提高出汁率。

3.果膠存在于哪里?

其化學(xué)性質(zhì)是什么?果膠是植物細(xì)胞壁以及胞間層的主要組成成分之一，它是由半乳糖醛酸聚合而成的一種高分子化合物，不溶于水。在果汁加工中，果膠不僅會(huì)影響出汁率，還會(huì)使果汁渾濁。

4.什么是果膠酶?如何得到果膠酶?果膠酶是一類酶總稱，包括_果膠分解酶、多聚半乳糖醛酸酶、果膠酯酶_等。果膠酶是蛋白質(zhì)，能被蛋白酶水解掉。果膠酶來源：植物、霉菌、酵母菌和細(xì)菌均能產(chǎn)生果膠酶。食品加工業(yè)中的果膠酶是由霉菌發(fā)酵生產(chǎn)的。高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第22頁。5.

什么是酶的活性?如何表示酶的活性大小?影響酶活性的因素有哪些?高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第22頁。概念：指酶催化一定化學(xué)反應(yīng)的能力。表示方法：酶活性的高低可以用在一定條件下，酶所催化的某一化學(xué)反應(yīng)的反應(yīng)速度來表示。酶反應(yīng)速度的表示方法：用單位時(shí)間內(nèi)、單位體積中反應(yīng)物的減少量或產(chǎn)物的增加量來表示。影響酶活性的因素：溫度、pH和酶的抑制劑等。①溫度:低于最適溫度時(shí)，隨著溫度的升高，酶的活性逐漸增強(qiáng);高于最適溫度后，隨著溫度升高，酶的活性迅速下降.直至完全喪失活性。果膠酶的最適溫度為45~50℃

②pH:在低于最適pH時(shí)，隨著pH的升高，酶的活性逐漸增強(qiáng);高于最適pH時(shí)，隨著pH的升高酶的活性逐漸下降，直至完全喪失活性。果膠酶的最適pH范圍為3.0~6.0。③酶的激活劑和抑制劑:能提高酶活性的物質(zhì)叫激活劑，多為離子或簡單有機(jī)化合物;加人酶的激活劑可以提高酶的活性，如NaCl可以提高果膠酶的活性。某些物質(zhì)雖然不能引起酶變性，但能使酶分子中某些必需基團(tuán)發(fā)生變化，引起酶活性下降，甚至失活，能引起這種抑制作用的物質(zhì)稱為酶的抑制劑。如Fe3+、Ca2+、Zn2+等金屬離子對果膠酶有抑制作用。6.為什么在混合蘋果泥和果膠酶之前要將果泥和酶分裝在不同的試管中恒溫處理?

可以保證底物和酶在混合時(shí)的溫度是相同的，避免了果泥和果膠酶混合時(shí)影響混合物的溫度，從而影響果膠酶活性。

7.在探究溫度和PH對酶活性的影響時(shí)，是否需要設(shè)置對照?如果需要，又該如何設(shè)置?為什么?需要設(shè)置對照實(shí)驗(yàn)，不同的溫度梯度之間或不同的pH梯度之間就可以作為對照，這種對照稱為相互對照。

8.當(dāng)探究溫度對果膠酶活性的影響時(shí)，哪個(gè)因素是自變量，哪些因素應(yīng)該保持不變?為什么?自變量：溫度(pH)；因變量：酶的活性；無關(guān)變量：果泥用量、果膠酶的濃度和用量、反應(yīng)時(shí)間、過濾時(shí)間、pH(溫度)等。9.為什么能夠通過能測定濾出的蘋果汁的體積大小來判斷果膠酶活性的高低?果膠酶將果膠分解為小分子物質(zhì)，小分子物質(zhì)可以通過濾紙，因此蘋果汁的體積大小反應(yīng)了果膠酶的催化分解果膠的能力。在不同的溫度和pH下，果膠酶的活性越大，蘋果汁的高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第23頁。體積就越大。高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第23頁。10.在探究溫度和PH對酶活性的影響的實(shí)驗(yàn)操作中，還應(yīng)注意哪些問題呢?探索溫度對酶活性影響，就要以溫度為變量設(shè)置對照實(shí)驗(yàn)，即設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)應(yīng)該是除溫度不同外，其它條件都要相同；其次，還要注意實(shí)驗(yàn)步驟的設(shè)置：試管編號→加入等量淀粉糊→加入等量淀粉酶→不同溫度下水浴相同時(shí)間→滴加碘液→觀察現(xiàn)象、得出結(jié)論．11.工業(yè)生產(chǎn)果汁與實(shí)驗(yàn)室制備果汁的主要不同點(diǎn)?大規(guī)模生產(chǎn)與實(shí)驗(yàn)室制備的主要不同點(diǎn)是：①有兩次瞬間高溫滅菌．②酶處理的時(shí)間相對較長．③有離心分離步驟和濃縮步驟．12.果膠酶與纖維素酶的比較名稱組成作用果膠酶多聚半乳糖醛酸酶、果膠分解酶、果膠將不溶性的果膠分解為可溶性的半乳糖醛酸纖維素酶C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶等C1酶、Cx酶葡萄糖苷酶纖維素→→→→→纖維二糖→→→→→葡萄糖注意：

(1)纖維素酶是一種復(fù)合酶，

而果膠酶是一類酶。二者不同，一類酶中每一種酶都能獨(dú)立揮作用，復(fù)合酶則需要各種成分共同協(xié)作完成催化作用。

(2)由于植物細(xì)胞壁的主要成分是纖維素和果膠，因此可以用纖維素酶和果膠酶去除植物細(xì)胞的細(xì)壁。

(3)由于原核生物細(xì)胞壁的主要成分是肽聚糖，真菌細(xì)胞壁的主要成分是幾丁質(zhì),因此這兩類生物的壁不能用纖維素酶和果膠酶去除。課題2探討加酶洗衣粉的洗滌效果

1.常用的酶制劑有哪四類?應(yīng)用最廣泛、效果最明顯的是?高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第24頁。常用種類：蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和纖維素酶四類。高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第24頁。應(yīng)用最廣泛、效果最明顯的種類是：堿性蛋白酶和堿性脂肪酶。

2.加酶洗衣粉為什么可以減少環(huán)境污染?加酶洗衣粉降低了表面活性劑和三聚磷酸鈉的用量，使洗滌劑朝低磷無磷的方向發(fā)展，減少對環(huán)境的污染。普通洗衣粉中含有磷，含磷污水的排放可能導(dǎo)致微生物和藻類的大量繁殖，造成水體的污染(富營養(yǎng)化)。

3.衣物的奶漬、油漬等是如何被加酶洗衣粉去除的呢?脂肪酶可以將脂肪分解成甘油和脂肪酸，蛋白酶可以將蛋白質(zhì)分解成小分子肽和氨基酸，小分子肽可在肽酶作用下分解成氨基酸；淀粉酶可以將淀粉分解成可溶性麥芽糖，纖維素酶可以將纖維素分解成葡萄糖，以達(dá)到去污的目的，4.影響加酶洗衣粉洗滌效果的因素有哪些?酶制劑的種類，污物的類型，水溫、水量、水質(zhì)，衣物的質(zhì)地和大小，洗衣粉的用量，浸泡時(shí)間，洗滌時(shí)間等。

5.酶能直接添加到洗衣粉中嗎?為什么?科學(xué)家是如何解決這一難題的?影響酶活性的因素：溫度、酸堿度和表面活性劑。生產(chǎn)方式：通過基因工程生產(chǎn)出能夠耐酸、耐堿、忍受表面活性劑和較高溫度的酶。

6.從酶的特性角度分析含蛋白酶的洗衣粉能否洗滌羊毛、蠶絲類衣物?蛋白酶可以將蛋白質(zhì)分解成小分子肽和氨基酸，小分子肽可在肽酶作用下分解成氨基酸因此，蛋白類纖維織物（羊毛、蠶絲等）不能用加（蛋白）酶洗衣粉來洗滌。7.被血漬或花生油污染的衣服，最好選擇復(fù)合型加酶洗衣粉進(jìn)行洗滌還是單--型加酶洗衣粉進(jìn)行洗滌?單--型加酶洗衣粉進(jìn)行洗滌8.從影響酶活性因素的角度，分析不同條件下的加酶洗衣粉的洗滌效果是否一定大于普通洗衣粉?不一定，因?yàn)槊妇哂袑Ｒ恍愿咧猩镞x修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第25頁。

9.請回答下列與探究有關(guān)加酶洗衣粉的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)相關(guān)的問題

(1)探究普通洗衣粉和加酶洗衣粉洗滌效果的不同時(shí)，如何控制變量?

自變量：洗衣粉的類型；因變量：洗滌效果。

(2)探究溫度對加酶洗衣粉洗滌效果的影響的實(shí)驗(yàn)中應(yīng)如何設(shè)置溫度梯度?高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第25頁。考慮所處的環(huán)境，10-60℃溫度梯度為10℃

(3)布料和衣物哪個(gè)更適合作為洗滌材料?為什么?布料，因?yàn)椴剂先菀卓刂破浯笮?、顏色以及污漬的量使其相同。

(4)水的用量和洗衣粉用量與布料的大小有什么關(guān)系?

水的用量和洗衣粉用量與布料的大小成正比。

(5)評判實(shí)驗(yàn)結(jié)果必須有一個(gè)客觀標(biāo)準(zhǔn)，使用什么方法和標(biāo)準(zhǔn)判斷洗滌效果?可在洗滌后比較污物的殘留狀況，如已消失、顏色變淺、面積減小等。課題3酵母細(xì)胞的固定化

1.酶應(yīng)用時(shí)存在哪些實(shí)際問題?

直接使用酶的實(shí)際問題：酶通常對強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、高溫和有機(jī)溶劑等條件非常敏感，容易失活；溶液中的酶很難回收，不能被再次利用，提高了生產(chǎn)成本；反應(yīng)后酶會(huì)混在產(chǎn)物中，可能影響產(chǎn)品品質(zhì)。

2.什么是高果糖漿?生產(chǎn)高果糖漿的酶是?

高果糖漿(HFCS)是一種以玉米為原料加工制成的營養(yǎng)性(含熱量)甜味劑。它被廣泛運(yùn)用在碳酸飲料、果汁飲料和運(yùn)動(dòng)飲料以及小吃、糖漿、果凍和其他含糖產(chǎn)品中。生產(chǎn)高果糖漿的酶是葡糖糖異構(gòu)酶3.固定化酶反應(yīng)柱由哪些部件構(gòu)成?右圖:

4.什么是固定化酶和固定化細(xì)胞技術(shù)?包含哪些方法?固定化酶和固定化細(xì)胞技術(shù):利用物理或化學(xué)方法將酶或細(xì)胞固定在一定空間內(nèi)的技術(shù)。高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第26頁。常用方法：包括包埋法、化學(xué)結(jié)合法和物理吸附法。

5.酶和細(xì)胞分別適用哪種方法固定?為什么?高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第26頁。一般來說，酶更適合采用化學(xué)結(jié)合法和物理吸附法固定化，而細(xì)胞多采用包埋法固定化，這是因?yàn)轶w積大的細(xì)胞難以被吸附或結(jié)合，而體積小的酶易從包埋材料中漏出。

6.包埋法固定化細(xì)胞常用的載體由哪些?載體：本課題使用包埋法來固定細(xì)胞，即將微生物細(xì)胞均勻地包埋在不溶于水的多孔性載體中。常用的載體有明膠、瓊脂糖、海藻酸鈉、醋酸纖維素和聚丙烯酰胺等。本實(shí)驗(yàn)選用海藻酸鈉作載體包埋酵母細(xì)胞。

7.固定化酶優(yōu)點(diǎn)是什么?固定化細(xì)胞優(yōu)點(diǎn)是什么?固定化酶的優(yōu)缺點(diǎn)①優(yōu)點(diǎn)：酶既能與反應(yīng)物接觸，又能與產(chǎn)物分離，還可以被反復(fù)利用。②缺點(diǎn)：一種酶只能催化一種反應(yīng)，不能催化一系列的酶促反應(yīng)。固定化細(xì)胞技術(shù)的優(yōu)缺點(diǎn)①優(yōu)點(diǎn)：成本低，易操作，對酶活性影響小，能固定一系列酶，催化一系列反應(yīng)。②缺點(diǎn)：只能以小分子物質(zhì)作為反應(yīng)物，大分子物質(zhì)不易進(jìn)入細(xì)胞，反應(yīng)時(shí)需要為固定化細(xì)胞提供營養(yǎng)物質(zhì)。

8.制備固定化酵母細(xì)胞的基本流程?

酵母細(xì)胞的活化→配制CaCl2溶液→配制海藻酸鈉溶液→海藻酸鈉溶液與酵母細(xì)胞混合→固定化酵母細(xì)胞

9.什么是活化?

活化就是讓處于休眠狀態(tài)的微生物重新恢復(fù)正常的生活狀態(tài)。

10.加熱溶化海藻酸鈉時(shí)應(yīng)注意什么?為什么?

溶解海藻酸鈉采用酒精燈加熱，邊加熱邊攪拌。加熱時(shí)要用小火，或者間斷加熱，反復(fù)幾次，直到完全溶化。如果加熱太快，海藻酸鈉會(huì)發(fā)生焦糊。海藻酸鈉溶液采用高壓蒸汽滅菌法滅菌。11.多次攪拌的目的是什么?

活化酵母時(shí)：使酵母細(xì)胞和蒸餾水混合均勻高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第27頁。配制海藻酸鈉溶液時(shí)：防止海藻酸鈉會(huì)發(fā)生焦糊。高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第27頁。海藻酸鈉溶液和已活化的酵母細(xì)胞時(shí)：海藻酸鈉溶液和已活化的酵母細(xì)胞時(shí)混合均勻

12.CaCl2的作用是什么?使海藻酸鈉膠體聚沉，以便形成結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的凝膠珠。（使膠體聚沉）

13.固定化酵母細(xì)胞時(shí)注射器滴加的是什么溶液?滴加速度有什么要求?固定化酵母細(xì)胞時(shí)注射器滴加的是滅菌后海藻酸鈉溶液，滴加速度：恒定緩慢的速度14.海藻酸鈉濃度太低和太高對包埋結(jié)果的影響?海藻酸鈉溶液的濃度關(guān)系到固定化細(xì)胞的質(zhì)量。如果海藻酸鈉濃度過高，將很難形成凝膠珠；如果濃度過低，形成的凝膠珠所包埋的酵母細(xì)胞的數(shù)目少，影響實(shí)驗(yàn)效果。專題5

DNA

和蛋白質(zhì)技術(shù)

課題3血紅蛋

白的提取和分離

1.血紅蛋白存在于哪里?作用是什么?其化學(xué)結(jié)構(gòu)是怎樣的?

血紅蛋白存在于紅細(xì)胞內(nèi)，血紅蛋白作用運(yùn)輸氧氣，血紅蛋白由四條肽鏈組成，包括兩條α－肽鏈和兩條β－肽鏈。其中每條肽鏈環(huán)繞一個(gè)亞鐵血紅素基團(tuán)，此基團(tuán)可攜帶一分子氧或一分子二氧化碳。

2.凝膠色譜法的概念是什么?凝膠色譜法的原理是什么?

凝膠色譜法也稱做分配色譜法，是根據(jù)相對分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)的有效方法。當(dāng)相對分子量不同的蛋白質(zhì)通過凝膠時(shí)，相對分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程較長，移動(dòng)速度較慢，通過凝膠的時(shí)間較長；相對分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)無法進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，只能在凝膠外部移動(dòng)，路程較短，移動(dòng)速度較快，通過凝膠的時(shí)間較短。因此可將各種相對分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)分子分離。凝膠顆粒膨脹顆應(yīng)使用什么?為了加速膨脹,可以怎么操作?這種方法有什么好處?

色譜柱制作成功的標(biāo)志?如何判斷是否有氣泡產(chǎn)生?蒸餾水，高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第28頁。為了加速膨脹，可以將加入洗脫液的濕凝膠用沸水浴加熱，逐漸升溫至接近沸騰，這種方法不但節(jié)約時(shí)間，還可以除去凝膠中可能帶有的微生物，排除膠粒內(nèi)的空氣。高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第28頁。由于凝膠是一種半透明的介質(zhì)，因此可以在凝膠柱旁放一支與凝膠柱垂直的日光燈，檢查凝膠是否裝填得均勻。在蛋白質(zhì)分離過程中，需仔細(xì)觀察紅色區(qū)帶在洗脫過程中的移動(dòng)情況。如果紅色區(qū)帶均勻一致地移動(dòng)，說明色譜柱制作成功。輕輕敲打柱體以消除氣泡。緩沖溶液作用是什么?如何配制?緩沖溶液作用：在一定范圍內(nèi)，抵制外界的酸和堿對溶液pH的影響，維持pH基本不變。原理：由弱酸和相應(yīng)的強(qiáng)堿弱酸鹽組成（如H2CO3－NaHCO3，NaH2PO4/Na2HPO4等），調(diào)節(jié)酸和鹽的用量，可配制不同pH的緩沖液。配制：通常由1～2種緩沖劑溶解于水中配制而成，例如磷酸緩沖液由Na2HPO4和NaH2PO4兩種試劑構(gòu)成。通過調(diào)節(jié)緩沖劑的使用比例就可以得到不同pH范圍內(nèi)使用的緩沖液。5.電泳的概念是什么?電泳的原理是什么?電泳利用了分子的哪些差異將其分離?常用的電泳方法是什么?①概念：指帶電粒子在電場作用下發(fā)生遷移的過程。②原理：在一定的pH下，多肽、核酸等生物大分子的可解離基團(tuán)會(huì)帶上正電或負(fù)電，在電場的作用下，這些帶電分子會(huì)向著與其所帶電荷相反的電極移動(dòng)。③影響電泳速率的因素：待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)的差異以及分子本身的大小、形狀的不同，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而實(shí)現(xiàn)樣品中各種分子的分離。帶電性質(zhì)決定遷移方向，分子大小決定遷移速度。④方法：常用的電泳方法有瓊脂糖凝膠電泳和聚丙烯酰胺凝膠電泳。6.通常用哪種電泳方法測定蛋白質(zhì)分子量?其原理是什么?

在測定蛋白質(zhì)分子量時(shí)通常使用SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳。蛋白質(zhì)在聚丙烯酰胺凝膠中的遷移率取決于它所帶凈電荷的多少及分子的大小等因素。為了消除凈電荷對遷移率的影響，可以在凝膠中加入SDS。SDS能與各種蛋白質(zhì)形成蛋白質(zhì)高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第29頁。－SDS復(fù)合物，SDS所帶負(fù)電荷的量大大超過了蛋白質(zhì)分子原有的電荷量，因而掩蓋了不同種蛋白質(zhì)間的電荷差別，使電泳遷移率完全取決于分子的大小。SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳中，小分子的移動(dòng)速度快，大分子的移動(dòng)速度慢，分子向陽極移動(dòng)。高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第29頁。SDS能使蛋白質(zhì)發(fā)生完全變性。由幾條肽鏈組成的蛋白質(zhì)復(fù)合體在SDS的作用下會(huì)解聚成單條肽鏈，因此測定的結(jié)果只是單條肽鏈的分子量。7蛋白質(zhì)的提取和分離包括哪四步?

蛋白質(zhì)提取和分離一般分為四步：樣品處理、粗分離、純化和純度鑒定。

8.實(shí)驗(yàn)操作過程中的樣品處理是如何進(jìn)行的?

①紅細(xì)胞的洗滌：采集血樣低速短時(shí)間離心→用膠頭吸管吸出上層透明黃色血漿(含血漿蛋白)，將下層暗紅色的紅細(xì)胞液體倒入燒杯→加入五倍體積的生理鹽水，緩慢攪拌1Omin→再低速短時(shí)間離心→重復(fù)三次，直至上清液不再呈現(xiàn)黃色→表明紅細(xì)胞已洗滌干凈，得到純凈紅細(xì)胞。②血紅蛋白的釋放：紅細(xì)胞加蒸餾水到原血液的體積→加40%體積的甲苯→磁力攪拌器上攪拌10分鐘→紅細(xì)胞破裂，釋放血紅蛋白③分離血紅蛋白溶液：混合液離心→用濾紙過濾，除去脂溶性沉淀層→分液漏斗中靜置片刻→分離出下層的紅色透明液體。④透析：取1mL的血紅蛋白溶液裝入透析袋中，將透析袋放入一定量適宜濃度的磷酸緩沖液中，透析12h。若要盡快達(dá)到理想的透析效果可以增加緩沖液的量或及時(shí)更換緩沖液。

9.紅細(xì)胞的洗滌的目的是什么?洗滌效果取決于哪些因素?為什么要低速短時(shí)間離心?洗滌干凈的標(biāo)志?紅細(xì)胞的洗滌目的：去除雜蛋白(如血漿蛋白)，獲得純凈紅細(xì)胞，以利于后續(xù)步驟的分離純化。洗滌效果取決于：洗滌次數(shù)、離心速度和時(shí)間等注：為防止血液凝固，在采血容器中要預(yù)先加入抗凝血?jiǎng)幟仕徕c。生理鹽水作用：能保持紅細(xì)胞滲透壓穩(wěn)定而不至于破裂。洗滌次數(shù)過少，無法除去血漿蛋白。要低速短時(shí)間離心的原因：離心速度過高和時(shí)間過長會(huì)使白細(xì)胞等一同沉淀，達(dá)不到分離的效果。高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第30頁。洗滌干凈的標(biāo)志：上清液不再呈現(xiàn)黃色→表明紅細(xì)胞已洗滌干凈，得到純凈紅細(xì)胞。高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第30頁。10.釋放血紅蛋白的原理?用什么溶液釋放血紅蛋白?

釋放血紅蛋白的原理紅細(xì)胞吸水漲破。甲苯作用：溶解細(xì)胞膜，加速紅細(xì)胞破裂并釋放出血紅蛋白。磁力攪拌的作用是加速細(xì)胞破裂。

11..分離血紅蛋白溶液時(shí)離心有什么要求?離心后分成哪幾層?

分離血紅蛋白時(shí)離心的速度較洗滌時(shí)要高，時(shí)間較長。試管中混合液離心后分為四層，從上往下數(shù)：第1層：無色透明的甲苯層；第2層：白色薄層固體，是脂溶性物質(zhì)的沉淀層；第3層：紅色透明液體，是血紅蛋白的水溶液；第4層：暗紅色的雜質(zhì)沉淀層。12.血紅蛋白溶液進(jìn)行透析的目的是什么?用什么溶液?

除去樣品中相對分子質(zhì)量較小的雜質(zhì)。適宜濃度的磷酸緩沖液，13.制作凝膠色譜柱的材料有哪些?如何制作?打孔安裝玻璃管挖出凹穴abcdef打孔安裝玻璃管挖出凹穴abcdef打孔打孔安裝玻璃管挖出凹穴abcdef14.凝膠中的G-75表示的含義是什么?裝填凝膠時(shí)需注意什么?用什么溶脹凝膠?用什么來洗滌平衡?

其中“G”表示凝膠的凝膠的交聯(lián)程度，膨脹的程度及范圍，75表示凝膠得水值，即每克凝膠膨脹時(shí)吸水7.5g。裝填時(shí)可輕輕敲動(dòng)色譜柱，使凝膠裝填均勻。色譜柱內(nèi)不能有氣泡存在，一旦發(fā)現(xiàn)有氣泡，必須重裝，因?yàn)闅馀輹?huì)攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低分離效果。裝填完后，立即用磷酸緩沖液洗滌平衡凝膠，使凝膠裝填緊密。高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第31頁。干凝膠用蒸餾水充分溶脹，配成凝膠懸浮液，為了加速膨脹，可以將加入洗脫液的濕凝膠用沸水浴加熱，逐漸升溫至接近沸騰，這種方法不但節(jié)約時(shí)間，還可以除去凝膠中可能帶有的微生物，排除膠粒內(nèi)的空氣。高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第31頁。用磷酸緩沖液洗滌平衡凝膠，使凝膠裝填緊密。注：洗滌平衡時(shí)不能發(fā)生洗脫液流干，露出凝膠顆粒的現(xiàn)象，一旦發(fā)生這種情況需要重新裝填。洗脫液液面不要低于凝膠表面，否則可能有氣泡混入，影響液體在柱內(nèi)的流動(dòng)與最終生物大分子物質(zhì)的分離效果。15.樣品的加入和洗脫是如何進(jìn)行的?何時(shí)用試管收集流出液?

①調(diào)節(jié)緩沖液：樣品的加人和洗脫加樣前，打開色譜柱下端的流出口，使柱內(nèi)凝膠面上的緩沖液緩慢下降到與凝膠面平齊，關(guān)閉出口。②滴加透析樣品：用吸管小心地將1

mL透析后的樣品加到色譜柱的頂端(右圖)，滴加樣品時(shí)，吸管管口貼著管壁環(huán)繞移動(dòng)加樣，注意不要破壞凝膠面。③樣品滲入凝膠床：加樣后，打開下端出口，使樣品滲入凝膠床內(nèi)。等樣品完全進(jìn)入凝膠層后，關(guān)閉下端出口。洗脫：小心加人物質(zhì)的量濃度為20

mmo/L的磷酸緩沖液(pH

為7.0)到適當(dāng)高度，連接緩沖液洗脫瓶，打開下端出口，進(jìn)行洗脫。④收集：待紅色的蛋白質(zhì)接近色譜柱底端時(shí)，用試管⑤收集流出液，每5mL收集一管，連續(xù)收集(右上圖)。如果紅色區(qū)帶均勻一致地移動(dòng)，說明色譜柱制作成功。注：洗脫過程中加入物質(zhì)的量濃度為20mmol/L的磷酸緩沖液(pH為7.0)的目的是模擬生物體內(nèi)的生理環(huán)境，保持體外的pH和體內(nèi)一致，保證血紅蛋白的結(jié)構(gòu)和功能穩(wěn)定。

16.如何進(jìn)行純度鑒定?

對分離的蛋白質(zhì)樣品進(jìn)行純度鑒定，使用最多的方法是SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳17.凝膠色譜柱裝填過程中為什么不能有氣泡?如果發(fā)生洗脫液流干，露出凝膠顆粒的現(xiàn)象，如何處理?

色譜柱內(nèi)不能有氣泡存在，一旦發(fā)現(xiàn)有氣泡，必須重裝，因?yàn)闅馀輹?huì)攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低分離效果。裝填完后，立即用磷酸緩沖液洗滌平衡凝膠，使凝膠裝填緊密。洗滌平衡時(shí)不能發(fā)生洗脫液流干，露出凝膠顆粒的現(xiàn)象，一旦發(fā)生這種情況需要重新裝填。高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第32頁。洗脫液液面不要低于凝膠表面，否則可能有氣泡混入，影響液體在柱內(nèi)的流動(dòng)與最終生物大分子物質(zhì)的分離效果。高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第32頁。18.透析后的樣品加入到色譜柱的頂端時(shí)，色譜柱下端的流出口應(yīng)該關(guān)閉還是打開?什么時(shí)候收集流出液?

關(guān)閉，待紅色的蛋白質(zhì)接近色譜柱底端時(shí)，用試管收集流出液

19.電泳法中帶電分子的遷移速度取決于哪些因素?

SDS的作用有哪些?純度鑒定的方法?

待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)的差異以及分子本身的大小、形狀的不同，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而實(shí)現(xiàn)樣品中各種分子的分離。帶電性質(zhì)決定遷移方向，分子大小決定遷移速度。為了消除凈電荷對遷移率的影響，可以在凝膠中加入SDS。SDS能與各種蛋白質(zhì)形成蛋白質(zhì)－SDS復(fù)合物，SDS所帶負(fù)電荷的量大大超過了蛋白質(zhì)分子原有的電荷量，因而掩蓋了不同種蛋白質(zhì)間的電荷差別，使電泳遷移率完全取決于分子的大小。SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳中，小分子的移動(dòng)速度快，大分子的移動(dòng)速度慢，分子向陽極移動(dòng)。

20.在樣品處理、粗分離、純化與純度鑒定中哪些步驟使用了磷酸緩沖液?

粗分離、純化與純度鑒定使用了磷酸緩沖液

21.一個(gè)血紅蛋白分子可以攜帶4個(gè)氧氣分子，為什么?血紅蛋白呈紅色的原因?

血紅蛋白由四條肽鏈組成，包括兩條α－肽鏈和兩條β－肽鏈。其中每條肽鏈環(huán)繞一個(gè)亞鐵血紅素基團(tuán)，此基團(tuán)可攜帶一分子氧或一分子二氧化碳。血紅蛋白因含有血紅素而呈現(xiàn)紅色

22.分離血紅蛋白溶液的步驟?過濾的目的?使用分液漏斗的目的?

目的：經(jīng)過離心使血紅蛋白與其他雜質(zhì)分離開。過程：混合液離心→用濾紙過濾，除去脂溶性沉淀層→分液漏斗中靜置片刻→分離出下層的紅色透明液體。將試管中的液體用濾紙過濾，除去脂溶性沉淀層，于分液漏斗中靜止片刻后，分出下層紅色透明液體。（注：離心后過濾可分離得到血紅蛋白的原因是紅細(xì)胞破碎物沉淀被留在里心管里，甲苯和脂溶性物質(zhì)沉淀不能通過濾紙，所以濾液就是血紅蛋白的水溶液）高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第33頁。高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第33頁。專題6植物有效成分的提取課題1植物芳香油的提取1.天然香料的來源？植物、動(dòng)物2.植物芳香油的特點(diǎn)及組成？植物芳香油揮發(fā)性強(qiáng)，成分復(fù)雜，主要包括萜類化合物及其衍生物。3.植物芳香油的提取方法有哪些？蒸餾、壓榨和萃取4.植物芳香油提取的常用方法是什么？水蒸氣蒸餾法（注意：“氣”字不要寫錯(cuò)）5.水蒸氣蒸餾法的原理、適用范圍、不足？原理：利用水蒸氣將揮發(fā)性較強(qiáng)的植物芳香油攜帶出來形成油水混合物，冷卻后混合物又會(huì)重新分出油層和水層。適用范圍：適用于提取玫瑰油、薄荷油等揮發(fā)性強(qiáng)的芳香油。不足：水中蒸餾會(huì)導(dǎo)致原料焦糊和有效成分水解等問題。6.壓榨法的原理、適用范圍、不足？原理：通過機(jī)械加壓，壓榨出果皮中的芳香油。適用范圍：適用于柑橘、檸檬等易焦糊原料的提取。不足：出油率低。7.萃取法的原理、適用范圍、不足？原理：使芳香油溶解在有機(jī)溶劑中，蒸發(fā)出有機(jī)溶劑后就可獲得芳香油。適用范圍：適用范圍廣，要求原料的顆粒盡可能細(xì)小，能充分浸泡在有機(jī)溶劑中。不足：使用的有機(jī)溶劑必須事先精制，除去雜質(zhì)，否則會(huì)影響芳香油的質(zhì)量。8.根據(jù)蒸餾過程中原料放置的位置，可以將水蒸氣蒸餾法分為哪幾類？高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第34頁。水中蒸餾：原料放在沸水中加熱蒸餾。高中生物選修1：生物技術(shù)實(shí)踐-知識清單總結(jié)全文共38頁，當(dāng)前為第34頁。水上蒸餾：原料隔放在沸水上加熱蒸餾。水氣蒸餾：利用外來高溫水蒸氣加熱蒸餾。9.為什么柑橘和檸檬中的芳香油不能用蒸餾法提?。繎?yīng)用什么方法提?。恳?yàn)樗姓麴s會(huì)導(dǎo)致原料焦糊和有效成分水解等問題。因此，柑橘和檸檬芳香油的制備通常使用壓榨法。10.提取玫瑰精油的實(shí)驗(yàn)流程：鮮玫瑰花+清水→水蒸氣蒸餾→油水混合物→分離油層（加入NaCl）→除水（加入無水NaSO4）→過濾→玫瑰油11.在提取玫瑰精油時(shí)要用的哪兩種物質(zhì)？作用分別是？NaCl：促使油水分離。無水Na2SO4：除去油層中的水分12.玫瑰花瓣與清水的質(zhì)量比？玫瑰花瓣與清水的質(zhì)量比為1:413.用于提煉玫瑰精油的玫瑰花期是？每年5月上、中旬，此階段花朵含油量最高14.玫瑰精油的化學(xué)性質(zhì)有哪些？玫瑰精油的化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，難溶于水，易溶于有機(jī)溶劑，能隨水蒸氣一同蒸餾。15.用水