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文檔簡介

《遺傳學(xué)》瓊脂糖凝膠電泳主要內(nèi)容一二實驗?zāi)康膶嶒炘韺嶒灢牧蠈嶒灢襟E實驗注意事項三四五一、實驗?zāi)康膶W(xué)習(xí)瓊脂糖凝膠電泳分離DNA的原理和方法，并掌握檢測DNA的純度、濃度與分子量的方法。二、實驗原理瓊脂糖是一種天然聚合長鏈狀分子，沸水中溶解，45℃開始形成多孔行濾孔，凝膠孔徑的大小決定于瓊脂糖的濃度。

DNA分子在堿性環(huán)境中帶負電荷，在外加電場作用下向正極泳動。不同DNA，其分子量大小及構(gòu)型不同，電泳時的泳動率就不同，從而分出不同的區(qū)帶。

三、實驗材料（一）材料試驗提取的植物DNA。（二）試劑瓊脂糖、10xTBE電泳緩沖液。10x載樣緩沖液、EB母液（0.5mg/ml）、λDNA(HindⅢ）。（三）儀器與用具微波爐，電泳儀，微型電泳槽，凝膠成像系統(tǒng)、微量取液器、吸管頭若干、加樣板、量筒、三角瓶、透明膠帶。四、實驗步驟（一）、制膠1、稱取1g瓊脂糖加入盛有100ml0.5×TBE電泳緩沖液的5000ml三角瓶中，搖勻，用電子天平稱三角瓶的總重量。在微波爐或者電爐上加熱至瓊脂糖完全溶解。冷卻到約60℃后，加入5ul的Goldview（終濃度0.5ug/ml），并搖勻。2、插入適當(dāng)?shù)氖嶙拥街颇z板，將溶解的瓊脂糖倒入其中，直至厚度約4-6mm。3、冷卻至室溫。4、充分凝固后拔出梳子，要保證點樣孔完好。5、將凝膠放入電泳槽中，加電泳緩沖液至液面覆蓋凝膠1-2mm。（二）點樣

1xTE或ddH2O:7μL10ul混合液10xloadingbuffer:1ul

樣品:2ul

混合后點入點樣孔中。其中最左邊的兩個孔點5ulMarker3作為分子量標準。（三）電泳打開電源開關(guān)，調(diào)節(jié)電壓至3-5v/cm即100V，可見溴酚藍條帶由負極向正極移動，約一小時可觀察。（四）觀察

用凝膠成像系統(tǒng)觀察電泳好的凝膠，打開紫外燈，可以看到橙紅色核酸條帶，根據(jù)條帶的粗細和熒光強度，可粗略估計樣品DNA的濃度。同時根據(jù)已知標準DNA的分子量，通過線性DNA條帶的位置初步估計樣品分子量。五、實驗注意事項1、用微波爐融膠時，膠液的量不應(yīng)超過三角瓶容量的1/3，否則易溢出。2、煮好的膠應(yīng)

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