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文檔簡介

藥物分離與純化技術課程電泳技術--聚丙烯酰胺凝膠電泳聚丙烯酰胺凝膠電泳—電泳技術大綱1.聚丙烯酰胺凝膠電泳概念2.聚丙烯酰胺凝膠電泳特點3.聚丙烯酰胺凝膠電泳分類聚丙烯酰胺凝膠電泳—電泳技術聚丙烯酰胺凝膠電泳PAGE是以丙稀酰胺為單體、亞甲基雙丙稀酰胺為交聯(lián)劑，通過自由基誘導聚合所形成的，具有一定網狀結構的凝膠為載體的電泳。（一）聚丙烯酰胺凝膠電泳概念聚丙烯酰胺凝膠電泳—電泳技術

電泳過程中，樣品分子的遷移速率，除受自身電荷大小影響外，還與樣品分子的大小和形狀密切相關（即凝膠載體的分子篩效應），具有很高的分辨率。

PAGE可用于蛋白、酶、核酸等生物分子的分離、定性、定量及少量制備，還可用于測定分子量和等電點。（一）聚丙烯酰胺凝膠電泳概念聚丙烯酰胺凝膠電泳—電泳技術（1）一定濃度范圍內凝膠透明（易于電泳過程觀察監(jiān)測），且在270nm無吸收（便于蛋白及核酸電泳后的掃描檢測），有彈性，機械性能好；（2）化學性質穩(wěn)定，不與被分離物質起化學反應，并在很多溶劑中不溶；（二）聚丙烯酰胺凝膠電泳特點聚丙烯酰胺凝膠電泳裝置及分離原理聚丙烯酰胺凝膠電泳—電泳技術（3）對pH和溫度變化穩(wěn)定，操作條件一致時，樣品分離重復性好；（4）對樣品吸附作用小，且聚合物不帶電荷，電滲作用?。唬ǘ┚郾０纺z電泳特點聚丙烯酰胺凝膠電泳法分離血清蛋白聚丙烯酰胺凝膠電泳—電泳技術（5）凝膠孔徑大小可調控，具有可控分子篩效應；（6）分辨率高（不連續(xù)PAGE集濃縮、分子篩和電荷效應一體）。（二）聚丙烯酰胺凝膠電泳特點聚丙烯酰胺凝膠電泳—電泳技術根據是否存在濃縮效應可分為連續(xù)PAGE和不連續(xù)PAGE。（1）連續(xù)PAGE

電泳體系中緩沖溶液pH值及凝膠濃度相同，帶電分子在電場的作用下主要依靠電荷和分子篩效應實現(xiàn)分離。（三）聚丙烯酰胺凝膠電泳分類聚丙烯酰胺凝膠電泳—電泳技術（2）不連續(xù)PAGE

電泳體系中由于緩沖溶液離子成分、pH、凝膠濃度及電位梯度的不連續(xù)性，帶電分子在電場中涌動不僅有電荷效應、分子篩效應，還有濃縮效應，因此分離條帶的清楚度和分辨率均有所提高。（三）聚丙烯酰胺凝膠電泳分類垂直板電泳裝置聚丙烯酰胺凝膠電泳—電泳技術不連續(xù)PAGE系統(tǒng)的組成：①電極緩沖液：pH8.3的Tris-甘氨酸緩沖液；②樣品膠：無需專門制備，只需在樣品液中加入等體積40%的蔗糖溶液即可；（三）聚丙烯酰胺凝膠電泳分類聚丙烯酰胺電泳分離聚丙烯酰胺凝膠電泳—電泳技術不連續(xù)PAGE系統(tǒng)的組成：③濃縮膠：pH6.7Tris-HCl介質，T=2-3%的大孔膠，無篩分效果；④分離膠：pH8.9Tris-HCl介質，T=7.5

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