葡萄糖酸的分析與檢驗(yàn)高碘酸氧化法

《生物產(chǎn)品的分析與檢驗(yàn)》有機(jī)酸的分析與檢驗(yàn)-----葡萄糖酸的分析與測定一、葡萄糖酸的性質(zhì)與結(jié)構(gòu)（一）性質(zhì)葡萄糖酸，又名D-葡萄糖酸，醛糖酸，是葡萄糖的醛基經(jīng)氧化生成的糖酸；葡萄糖酸天然存在于水果、蜂蜜、紅酒和紅茶菌中。弱酸性，可溶于水，微溶于乙醇，不溶于乙醚和大多數(shù)有機(jī)溶劑。用作蛋白凝固劑、食品防腐劑和食品酸度調(diào)節(jié)劑；用于生產(chǎn)葡萄糖酸鹽，如葡萄糖酸鈉、葡萄糖酸鉀、葡萄糖酸鈣、葡萄糖酸鎂、葡萄糖酸鋅等。一、葡萄糖酸的性質(zhì)與結(jié)構(gòu)（二）化學(xué)式為C6H12O7，分子量為196.1566，結(jié)構(gòu)式如下：二、葡萄糖酸含量的測定-高碘酸氧化法------用高碘酸氧化法測定發(fā)酵液中葡萄糖酸含量（一）測定原理葡萄糖酸經(jīng)過高碘酸氧化后生成甲醛。CH2OH(CHOH)4COOH+4HIO4=HCHO+3HCOOH+CHOCOOH+H2O+4HIO3過剩的HIO4和生成的HIO3用NaHSO3溶液還原。4HIO3+14H2SO34I+14H2SO4+2H2O2HIO3+5H2SO32I+5H2SO4+H2O最初游離出來的碘液將液體染色成黃色，繼續(xù)滴加亞硫酸溶液，直至滴下一滴能夠使液體明顯（剛）褪色。生成的甲醛用乙酰丙酮比色法測定。在過量銨鹽存在下，甲醛與乙酰丙酮生成黃色的二乙?；浔R易司啶，根據(jù)顏色的深淺，比色定量，生成的顏色能穩(wěn)定10h。（二）實(shí)驗(yàn)儀器可見分光光度計(jì)旋渦混合器（三）試劑及溶液的配制1.乙酰丙酮試劑：醋酸銨25g，冰醋酸3mL，新蒸餾的乙酰丙酮0.2mL，全部溶解于100mL水中。2.0.02mol/L高碘酸溶液3.1g/L亞硫酸氫鈉溶液4.5mmol/L的葡萄糖酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。（四）操作步驟1.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制準(zhǔn)確配制5mmol/L的葡萄糖酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液，按下表在各管中加樣。試管號(hào)012345678910標(biāo)準(zhǔn)樣/mL00.10.20.30.40.50.60.70.80.91高碘酸/mL01111111111標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制表1.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

在室溫下任其反應(yīng)20min。在旋渦混合器上充分混合并滴加NaHSO3至褐色剛褪。每管各加2mL乙酰丙酮試劑，定容至25mL。沸水浴中加熱3min，冷卻。在可見分光光度計(jì)420nm波長下測定OD值，用空白管溶液調(diào)零點(diǎn)，以葡萄糖酸濃度為橫坐標(biāo)，ΟD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。2.樣品中葡萄糖酸含量的測定精確稱取樣品0.1~0.2g，加水溶解并定容至100mL。將樣品溶液稀釋適當(dāng)倍數(shù)，吸取1.0mL樣品稀釋液加入試管中，再按繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法操作，以下各步相同，測得的OD值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得相應(yīng)的葡萄糖酸含量。（五）結(jié)果記錄與計(jì)算（1）結(jié)果記錄將實(shí)驗(yàn)結(jié)果記入下表：試管號(hào)123平均值樣品質(zhì)量，g樣品溶液的稀釋倍數(shù)從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的葡萄糖酸的含量，μg樣品中葡萄糖酸的含量,%(五）結(jié)果記錄與計(jì)算（2）計(jì)算公式：式中：w—樣品中葡萄糖酸的含量，%m1—從標(biāo)準(zhǔn)曲線