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文檔簡介

《生物產(chǎn)品的分析與檢驗(yàn)》有機(jī)酸的分析與檢驗(yàn)-----葡萄糖酸的分析與測(cè)定葡萄糖酸含量的測(cè)定方法二—————異羥肟酸比色法葡萄糖酸在酸性條件下發(fā)生內(nèi)酯化，形成的內(nèi)酯與羥胺堿反應(yīng)，生成異羥肟酸。異羥肟酸與FeCl3能生成有色絡(luò)合物，從而可通過分光光度比色法定量分析葡萄糖酸的含量（二）試驗(yàn)儀器可見分光光度計(jì)（一）測(cè)定原理1.標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：用葡萄糖酸鈉配制0.100mol/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液儲(chǔ)備液。使用時(shí)根據(jù)需要稀釋至不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖酸溶液。2.鹽酸羥胺與NaOH混合試劑：配制4mol/L鹽酸羥胺溶液和4mol/L的NaOH溶液，低溫保存。使用時(shí)，將等體積的鹽酸羥胺和NaOH混合，混合后pH值為8.0。配制的溶液應(yīng)在4h內(nèi)使用。3.FeCl3試劑：FeCl3和HCl的混合溶液，其中FeCl3和HCl的濃度分別為0.37mol/L和0.1mol/L。（三）所用試劑及其配制將樣品溶液稀釋一定倍數(shù)后，在10mL帶有磨口塞的試管中各加入0.5mL標(biāo)準(zhǔn)溶液或者樣品，再加入0.5mL去離子水，混合均勻后，沸水浴中加熱20min，冷卻至室溫。然后順序加入2mL鹽酸羥胺和NaOH混合試劑、1mL4mol/LHCl和1mLFeCl3試劑，混合均勻，這時(shí)反應(yīng)混合物的pH為1.2±0.2。放置10min后比色(波長505nm)，以空白管(用0.5mL去離子水替代樣品溶液，其余試劑用量與前相同)校零，讀取各管的吸光度OD505值。測(cè)定工作在10min內(nèi)完成。（四）樣品測(cè)定分別配制0、1、2、4、8mmol/L的葡萄糖酸鈉溶液，按照前述的方法測(cè)定其吸光度(OD505)值，作出葡萄糖酸與OD505的標(biāo)準(zhǔn)曲線。（五）標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制樣品中葡萄糖酸的含量按下式計(jì)算：式中：C---樣品溶液中葡萄糖酸的含量，mmol/L；C1---從標(biāo)準(zhǔn)

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