微生物課件（老師版） 5.025病毒檢查與防治25改

病毒感染的檢查方法與防治原則病毒的診斷抗病毒治療病毒感染的預(yù)防病毒學(xué)診斷一、標(biāo)本的采取與送檢：用于分離培養(yǎng)的標(biāo)本：

咽拭子、糞便需加雙抗、冷凍、快速，否則，放-70℃冰箱或液氮罐內(nèi)?；蛑?0%甘油緩沖鹽水低溫冷凍保存。

血清學(xué)診斷的標(biāo)本：雙份血清

二、病毒的分離與鑒定(一).病毒的分離1.動(dòng)物接種：選擇敏感動(dòng)物、適宜的接種部位、防止動(dòng)物體內(nèi)帶有的潛在病毒對(duì)分離病毒的干擾。2.雞胚培養(yǎng)：用孵化7~14d的雞胚

絨毛尿囊膜接種—天花病毒、痘苗病毒；

尿囊腔接種—流感病毒、腮腺炎病毒；

羊膜腔接種—流感病毒、

卵黃囊接種—嗜神經(jīng)病毒三大培養(yǎng)方法絨毛尿囊膜接種尿囊腔接種羊膜腔接種

卵黃囊接種卵白尿囊氣室羊膜腔卵黃囊尿囊羊膜腔卵白卵黃囊氣室3.細(xì)胞培養(yǎng)（組織培養(yǎng)）：原代細(xì)胞：動(dòng)物、雞胚或人胚腎細(xì)胞二倍體細(xì)胞：細(xì)胞在體外分裂50~100代后，仍保留2倍染色體數(shù)目的單層細(xì)胞如人胚肺WI—26。傳代細(xì)胞：癌細(xì)胞如Hela細(xì)胞或2倍體細(xì)胞。病毒在培養(yǎng)細(xì)胞中增殖的指標(biāo)1.細(xì)胞病變效應(yīng)（cytopathic

effect，CPE）：培養(yǎng)的單層梭形細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落。正常細(xì)胞病變細(xì)胞CPE2.包涵體形成(inclusionbody)：病毒增殖后在宿主細(xì)胞內(nèi)留下的斑塊結(jié)構(gòu)。不同病毒包涵體在細(xì)胞內(nèi)的位置、大小形狀及染色性不同，用以病毒感染的輔助診斷（腺病毒包涵體在胞核內(nèi)嗜堿性；狂犬病毒包涵體在胞質(zhì)內(nèi)嗜酸性；麻疹病毒在胞質(zhì)、胞核內(nèi)嗜酸性）。Nagribody3.紅細(xì)胞吸附（hemadsorption，HAd）

流感病毒感染細(xì)胞后，由于細(xì)胞膜上出現(xiàn)了血凝素（heamagglutinin，HA），具有吸附脊椎動(dòng)物（雞、猴）紅細(xì)胞的能力，此即紅細(xì)胞吸附。

流感病毒培養(yǎng)液+CRBC

紅細(xì)胞凝集流感病毒培養(yǎng)液+病人血清+CRBC

紅細(xì)胞不凝集前者為血凝試驗(yàn)測(cè)流感病毒，后者為血凝抑制試驗(yàn)，測(cè)病人血清中抗體。均用于流感診斷。4.干擾現(xiàn)象某些病毒感染細(xì)胞后不出現(xiàn)CPE，但能干擾其后感染的另一病毒的增殖，從而阻抑后者特有的CPE。5.細(xì)胞代謝的改變培養(yǎng)液PH值改變也是病毒的增殖指標(biāo).紅細(xì)胞吸附現(xiàn)象(二).病毒的數(shù)量與感染性測(cè)定在單位體積測(cè)定感染性病毒的數(shù)量稱為滴定.常用的方法有蝕斑測(cè)定法和50%組織細(xì)胞感染量(ID50infectioudose).(三)新分離病毒的鑒定1.病毒核酸類(lèi)型的測(cè)定用RNA酶、DNA酶2.理化性狀的檢測(cè)大小及結(jié)構(gòu)、衣殼對(duì)稱類(lèi)型、有無(wú)包膜3.形態(tài)學(xué)觀察電子顯微鏡、免疫電子顯微鏡觀察4.血清學(xué)鑒定抗原抗體特異性反應(yīng)的原理5.基因測(cè)序最重要的方法病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖的初步鑒定肉眼可見(jiàn)指標(biāo)紅細(xì)胞吸附病毒代謝的改變病毒數(shù)量與感染性的測(cè)定蝕斑測(cè)定ID50測(cè)定光鏡可見(jiàn)指標(biāo)免疫熒光與免疫酶法檢測(cè)包涵體的檢查細(xì)胞病變效應(yīng)三、病毒感染的血清學(xué)診斷（雙份血清）1.中和試驗(yàn)(neutralizingtest)：測(cè)中和抗體

病人血清+病毒（定量）細(xì)胞培養(yǎng)（CPE+/-）

抑制病毒增殖的血清最高稀釋倍數(shù)為效價(jià)。細(xì)胞培養(yǎng)的中和試驗(yàn)常用于人群免疫情況的調(diào)查，臨床少用。2.補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（complementfixationtest，CFtest）3.血凝抑制試驗(yàn)（hemagglutinationinhibitiontest，HIt）4.凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)對(duì)流電泳：簡(jiǎn)單、特異、敏感37℃1h

接種雞胚（感染與否）

接種動(dòng)物（感染與否）病毒的血清學(xué)診斷補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)血凝抑制試驗(yàn)免疫擴(kuò)散等中和試驗(yàn)酶免疫技術(shù)一、病毒感染的預(yù)防(一)人工主動(dòng)免疫(artificialactiveimmunization)疫苗:死疫苗(killedvaccine)如白百破、傷寒、流腦、乙腦、流感、鉤端螺旋體等?？杉ぐl(fā)HI，安全、方便；抗原性改變，效果差，需多次注射；反應(yīng)重）。

活疫苗（livingvaccine）如BCG、鼠疫、炭疽、脊髓灰質(zhì)炎和麻疹疫苗等。可激發(fā)HI、CMI；多由減毒病原菌制成；偶可發(fā)生回復(fù)突變，毒力回升；或免疫缺陷者接種后發(fā)病。聯(lián)合疫苗在試用中。

基因工程疫苗：目的基因原核或真核細(xì)胞

基因產(chǎn)物（如乙肝疫苗）

導(dǎo)入

人工培養(yǎng)DNA疫苗：又稱為基因疫苗或核酸疫苗（第三代疫苗），這種核酸既是載體又能在真核細(xì)胞中表達(dá)抗原，誘導(dǎo)產(chǎn)生細(xì)胞毒殺傷功能的T細(xì)胞，有效預(yù)防病毒、胞內(nèi)寄生菌及寄生蟲(chóng)引起的傳染。轉(zhuǎn)基因植物疫苗：將編碼某一病原體保護(hù)性抗原的基因轉(zhuǎn)入植物并在植物中表達(dá)，人們食用植物時(shí)，就完成了預(yù)防接種。如食用西紅柿，獲得乙肝疫苗的接種。治療疫苗：葡萄球菌的自身疫苗治療葡萄球菌的感、乙肝疫苗治療乙肝帶毒者。可能的機(jī)制是前者是脫敏作用，后者是打破免疫耐受。類(lèi)毒素：細(xì)菌外毒素+0.3%~0.4%甲醛類(lèi)毒素(毒性消失,保留抗原性).如白百破疫苗中的白喉和破傷風(fēng)類(lèi)毒素（外毒素、類(lèi)毒素、抗毒素）.(二)人工被動(dòng)免疫

抗毒素(antitoxin)：如白喉、破傷風(fēng)抗毒素（中和毒素、可能引起超敏反應(yīng)）。

抗菌血清（antisera）：如抗銅綠假單胞菌的抗菌血清。

丙種球蛋白（人血球蛋白、胎盤(pán)球蛋白）：用于甲肝、麻疹、脊髓灰質(zhì)炎及免疫缺陷患者免疫制劑（IFN-γ、IFN-α、IL、CSF、LAK細(xì)胞）。二、病毒感染的治療(一)抗病毒化學(xué)制劑1.核苷類(lèi)藥物:無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷為鳥(niǎo)嘌呤或脫氧鳥(niǎo)嘌呤核苷類(lèi)似物，用于抗皰疹病毒；

阿糖腺苷阻止DNA合成還可選擇抑制DNA聚合酶用于HSV、HBV等；

疊氮胸苷為胸腺嘧啶類(lèi)似藥，阻斷前病毒DNA的合成而抑制HIV的復(fù)制；

3‘-氮唑核苷（病毒唑）對(duì)RNA、DNA病毒的復(fù)制有抑制作用，用于流感病毒和呼吸道合胞病毒的感染；核苷類(lèi)藥物的作用機(jī)制：抑制病毒基因復(fù)制

模擬核苷成分摻人病毒基因組，合成異常的嘧啶分子摻人子代DNA中，使其結(jié)構(gòu)基因無(wú)法合成和表達(dá)從而抑制病毒復(fù)制；或競(jìng)爭(zhēng)病毒復(fù)制酶，從而抑制病毒復(fù)制；2.蛋白酶抑制劑：用于HIV的感染。3.阻止病毒脫殼復(fù)制：如金剛脘胺對(duì)甲型流