甘油三酯測(cè)定

生物化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)00

PARTZERO血脂測(cè)定TCTGHDL-CLDL-C01主要內(nèi)容020305060704ApoAⅠ、Lp（a）ApoB02

PARTTWO血脂測(cè)定之甘油三酯測(cè)定一、甘油三酯測(cè)定1.甘油三酯概況血漿中的甘油酯90%～95%是甘油三酯。脂肪的消化主要在小腸。飲食中脂肪被消化吸收后，以甘油三酯形式形成乳糜微粒循環(huán)于血液中，進(jìn)食后12h，正常人血中幾乎沒有乳糜微粒，甘油三酯恢復(fù)至原有水平。

血清中TG甘油脂肪酸甘油三酯首要功能是為細(xì)胞代謝提供能量，食物中的脂肪還提供必需脂肪酸。甘油三酯可在體內(nèi)合成，合成的第一個(gè)中間產(chǎn)物是磷脂酸。功能：

TG水平與種族、年齡、性別以及生活習(xí)慣（如飲食、運(yùn)動(dòng)等）有關(guān)，TG水平的個(gè)體內(nèi)與個(gè)體間差異大。如高脂肪飲食后TG升高，一般餐后2～4h達(dá)到高峰，8h后基本恢復(fù)正常空腹水平。一、甘油三酯測(cè)定對(duì)被檢者要求：穩(wěn)定膳食2～3周，禁酒3d，空腹12h后抽血，樣品采集后盡快分離血清，以防止TG水解。測(cè)定方法：同位素稀釋-質(zhì)譜法酶法化學(xué)法一、甘油三酯測(cè)定(磷酸甘油氧化酶法)二氯甲烷抽提，變色酸顯色法（一）化學(xué)法皂化乙酰丙酮顯色一、甘油三酯測(cè)定抽提與分離氧化正庚烷、異丙醇和稀硫酸混合抽提KOH消解以過碘酸在酸性溶液中將甘油氧化顯色（一）酶法一、甘油三酯測(cè)定檢測(cè)原理：用LPL使血清中TG水解成甘油和FFA，甘油在ATP和GK的作用下，生成3-磷酸甘油，再經(jīng)GPO作用氧化生成磷酸二羥丙酮和H2O2，H2O2在POD作用下與4-AAP及4-氯酚（三者合稱PAP）反應(yīng)，生成紅色醌類化物。分光光度計(jì)波長(zhǎng)500nm測(cè)定吸光度，對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算出TG含量。（一）酶法一、甘油三酯測(cè)定三者合稱PAP在500nm處的吸收值與膽固醇含量成正比01方法評(píng)價(jià)簡(jiǎn)便、快速、微量且試劑較穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)02TG值包括了血清中游離的甘油(產(chǎn)生干擾，使結(jié)果偏高).一、甘油三酯測(cè)定03VitC和抗壞血酸也可使結(jié)果偏低。04LPL除水解TG外，亦能水解MG和DG，故測(cè)定結(jié)果包含了MG和DG的值。消除游離甘油(FG)的干擾(1)外空白法：即同時(shí)采用不含LPL的酶試劑測(cè)定血清中FG作空白值，由于此法均需雙份測(cè)定，使成本加倍，但也同時(shí)獲得血清FG數(shù)值。消除游離甘油(FG)的干擾(2)內(nèi)空白法：（兩步法或雙試劑法）將酶試劑分作兩部分，其中LPL和4-AAP組成試劑Ⅱ，其余部分為試劑Ⅰ。血清先加試劑Ⅰ，37℃孵育后，因無LPL存在，TG不被水解，F(xiàn)G在GK和GPO的作用下反應(yīng)生成H2O2，但因不含4-AAP，不能完成顯色反應(yīng)，故可除去FG的干擾；再加入試劑Ⅱ，即可測(cè)出TG水解生成的甘油。（一）內(nèi)空白法反應(yīng)原理一、甘油三酯測(cè)定血清加試劑Ⅰ，37℃孵育，第一步反應(yīng)如下：上述反應(yīng)中，因無LPL，血清中TG不能水解，游離甘油（FG）在GK和GPO催化下生成H2O2，但因試劑不含4-AAP，不能完成Trinder顯色反應(yīng)(故可除去FG的干擾)；（一）內(nèi)空白法反應(yīng)原理一、甘油三酯測(cè)定然后再加入試劑Ⅱ，TG即開始發(fā)生水解反應(yīng)，最后生成紅色苯醌亞胺，反應(yīng)式同前。即通過血清分步反應(yīng)除去FG的干擾。內(nèi)空白法雖然增加了操作步驟，但不增加試劑成本，且排除FG干擾效果好，預(yù)孵育5min即可排除4mmol/LFG的干擾。（二）乳酸脫氫酶法一、甘油三酯測(cè)定本法的前兩步與1法相同：利用NADH在340nm處吸光度的下降來測(cè)定甘油三酯的濃度。方法評(píng)價(jià)該法結(jié)果準(zhǔn)確，但靈敏度較低，試劑也不太穩(wěn)定。由于血清本身存在游離甘油和丙酮酸等物質(zhì)，所以測(cè)定時(shí)除了做試劑空白外，還要做標(biāo)本空白。（三）甘油氧化酶法一、甘油三酯測(cè)定該法直接測(cè)定甘油。分兩步反應(yīng)：此步反應(yīng)可以消除血清中游離甘油的干擾作用，其中EMAE是一種還原劑，其作用與酚相似，但靈敏度比酚高。一般第一步反應(yīng)后3~5分鐘后即可進(jìn)行第二步反應(yīng)。。（1）（三）甘油氧化酶法一、甘油三酯測(cè)定（2）第二步反應(yīng)包括：2007年《中國(guó)成人血脂異常防治指南》合適范圍：1.7mmol/L（150mg/dl）以下；邊緣升高;1.7~2.25mmol/L（150~199mg/dl）；升高：≥2.26mmol/L（200mg/dl）。一、甘油三酯測(cè)定參考值：①原發(fā)高脂蛋白血癥；②糖尿??；③梗阻性黃疸；④甲狀腺功能低下；⑤皮質(zhì)醇增多癥；⑥腎病綜