實驗四乙肝兩對半

實驗四乙肝兩對半

主講：胡榮一、原理1.HBsAg：雙抗體夾心法

載體-抗-HBs-HBsAg（待測）-抗-HBs*HRP2.HBsAb：雙抗原夾心法載體-HBsAg-HBsAb（待測）-HBsAg*HRP3.HBeAg：雙抗體夾心法載體-抗-HBe-HBeAg（待測）-抗-HBe*HRP4.HBeAb：競爭法

載體-抗-HBe-HBeAg-抗-HBe*HRP/抗-HBe（待測）5.HBcAb：競爭法

載體-HBcAg-抗-HBc（待測）/抗-HBc*HRP二、實驗器材乙肝兩對半檢測試劑盒，試管、生理鹽水、加樣槍、蒸餾水、水浴箱、洗瓶、移液管（2ml）、燒杯等。三、操作步驟實驗前準(zhǔn)備：取出試劑盒及待測樣品恢復(fù)至室溫，水浴箱調(diào)至37℃。1.配置洗滌液用蒸餾水將濃縮洗滌液作1：20倍稀釋，盛于洗瓶中。2.加樣（以下均為2.3.4.5項檢測流程）取一定量的包被孔，設(shè)置空白對照1孔，陰性對照3孔，陽性對照2孔，分別加陰、陽性對照、待測標(biāo)本50μl于相應(yīng)孔中。（核心抗體加樣前將血清作1：50倍稀釋：2.5mlN.S+50μl血清）3.加酶

除空白孔外，每孔加50μl（1d）酶標(biāo)記物，輕輕振蕩混勻（30s），用封板膜將板孔封好。4.溫育將板置于水浴箱濕盒中（37C°），30min（在封板膜上用記號筆標(biāo)記時間）。5.洗滌甩去孔內(nèi)液體（一次甩盡，無殘留，無氣泡），洗滌液注滿各孔（滿而不溢出），靜置5-10s，甩去孔內(nèi)液體，重復(fù)6次，衛(wèi)生紙上拍干。（也可用洗板機(jī)洗）6.顯色每孔（包括空白孔）加底物液、顯色劑各50μl（1d），輕輕振蕩混勻，封板后置水浴箱，10min。7.觀察結(jié)果

HBsAg、HBsAb、HBeAg顯藍(lán)色為陽性；

抗-HBe、抗HBc不顯藍(lán)色為陽性。乙肝表面抗原（HBsAg）檢測流程取一定量的包被孔，三孔陰性，二孔陽性，一孔空白，各孔加入樣本稀釋液20微升，然后在相應(yīng)孔中加入陽性對照、陰性對照、標(biāo)本100微升，空白不加，混勻30s…HBsAb+/-HBeAg+/-HBeAb+/-HBcAb+/-四、結(jié)果報告

5/6人一小組，每人分別從四個試劑盒（HBsAg一大組只做一塊板，一塊板上設(shè)計一個空白孔，一個陰性對照孔，一個陽性對照孔）中取出一個杯子，置于板孔內(nèi)，在板上標(biāo)記好位置，每板每一項只做一個陰性對照孔，一個陽性對照孔，一個空白孔，作好標(biāo)記。每個同學(xué)至少洗板一次。HBsAg加顯色液后交給老師。五個試劑盒中的洗滌液、底物液和顯色劑可以混用。五、注意事項項目123456陰對陽對空白HBsAgHBsAb血清+酶2~~~~~陰對2+酶2陽對2+酶2無HBeAg血清+酶3~~~~~陰對3+酶3HBeAb血清+酶4~~~~~陰對4+酶4HBcAb血清+酶5~~~~~陰對5+酶5溫?。?7C°、30min）洗板（6次）加底物、顯色劑（50μl）溫?。?7C°、10min）觀察結(jié)果布板、標(biāo)記加樣

孔底加樣，避免產(chǎn)生氣泡。

揭開封板膜時避免孔與孔之間的交叉污染。加洗液時，每孔液量以加滿但不溢出為最佳。嚴(yán)格記錄溫育時間（可在封板膜上做好標(biāo)記）。滴加試劑時手法準(zhǔn)確。完成實驗后微量反應(yīng)孔入垃圾桶，反應(yīng)板架放入桶中（84消毒液）。項目“小三陽”“大三陽”需打疫苗有免疫力H