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上節(jié)內(nèi)容蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與幾種蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與轉(zhuǎn)運(yùn)蛋轉(zhuǎn)運(yùn)蛋收縮與免疫球蛋白質(zhì)兩性膠沉兩性膠沉變性與折紫外本章主要內(nèi)二.氨基重點(diǎn))四.蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)(重點(diǎn)五.蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能(重點(diǎn)六.蛋白質(zhì)的性質(zhì)(重點(diǎn)七.蛋白質(zhì)的分離純化與鑒定(重點(diǎn)七、Protein1.Salting鹽析(saltingout)原理:破壞蛋白質(zhì)疏水區(qū)表面的水化層導(dǎo)致蛋白質(zhì)沉淀。最先的是那些表面Differentproteinsprecipitatedatdifferentsaltconcentrations(飽和或半飽和濃度).Itisoneofthemostcommonlyusedforprotein鹽溶(Saltingin)稀鹽濃度范圍內(nèi),增加蛋白質(zhì)SaltingAmmoniumsulfate,(NH4)2SO4,isthemostcommonlyusedreagentforsaltingoutThepHmaybeadjustedtoapproximatethepIofthedesiredprotein.Asignificantconcentration(濃縮)oflargetiesofproteinSalting分分級增加鹽濃度,控制pH,沉淀目標(biāo)蛋白(白色)Ionexchange原理:電荷差異,參看aminoAnion陰離子DEAE:Cation陽離子exchangersCM:carboxymethylMatrixcelluloseandagarose-basedresins樹脂IonexchangeIsoelectric等電聚焦(IEF)原理:電荷不可用于蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的測定,分辨率(pI<GelfiltrationMolecularsieve分子篩MolecularareseparatedaccordingtotheirsizeandshapeStationaryphase固定相gelbeadscontainingporesthatspanarelativelynarrowsizerangeSephadex(葡聚糖凝膠Bio-gelP(聚丙烯酰胺凝膠Gelfiltration七、ProteinSDSsodiumdodecylsulfate十二烷基磺酸鈉PAGEpolyacrylamidegelelectrophoresis非常有純度檢測;亞基組成分析;分子量測1.4gSDS/1g兩個(gè)氨基酸結(jié)合一個(gè) 結(jié)果所有肽鏈覆蓋上相同密度的負(fù)電荷可看成若存在鏈間二硫鍵,如何進(jìn)行分SDS裝置及電泳SDS測定蛋白質(zhì)的Two-dimensionalPermitstheresolutionofcomplexmixturesofproteinsAmoresensitive yticalmethodthaneitherelectrophoreticmethodalone.SeparatesproteinsofidenticalmolecularweightthatdifferinpI,orproteinswithsimilarpIvaluesbutdifferentmolecularTwo-dimensional②①>60000應(yīng)用:最常用方法:(densitygradient常用的密度梯度:DensityGradient(密度梯度離心Dialysisand半透膜:玻璃紙、火棉紙、改性纖維素將蛋白質(zhì)與其他小分子物濃縮和脫粗分Ultrafiltration(超過濾Affinity(親和色譜Principle:Manyproteinscanbindspecificmolecules(ligand)tightly.Ligandiscovalentlyattachedtoaninertmatrix.Asignificantpurificationchromatography(免疫親和色譜)ligand=antibodyHis-tag(組氨 其他用途增加蛋白可溶性提高蛋白穩(wěn)定性漿狀動(dòng)(植)機(jī)械破漿狀動(dòng)(植)
低速離蛋白(除膜等雜蛋白蛋白蛋白
蛋蛋白層析電泳檢蛋白蛋白
純純稀透(除鹽
電泳檢
-80℃蛋白質(zhì)含量雙縮Folin-酚試劑法(Lowry法Bradford法(考馬斯亮 蛋白質(zhì)純度HP
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