第8章 原核生物基因表達(dá)調(diào)控_第1頁
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文檔簡(jiǎn)介

章原核生物基因表達(dá)調(diào)控概述第一節(jié)原核生物基因表達(dá)調(diào)控概述一、基因表達(dá)調(diào)控的意義在一定調(diào)節(jié)機(jī)制控制下,基因通過轉(zhuǎn)錄和翻譯而產(chǎn)生其蛋白質(zhì)產(chǎn)物,或轉(zhuǎn)錄后直接產(chǎn)生其RNA產(chǎn)物,如tRNA、rRNA等的過程。大多數(shù)基因的表達(dá)產(chǎn)物是蛋白質(zhì),部分基因如tRNA和rRNA基因表達(dá)產(chǎn)物是RNA。圍繞基因表達(dá)過程中發(fā)生的各種各樣的調(diào)節(jié)方式都通稱為基因表達(dá)調(diào)控。在生物體生命活動(dòng)中并不是所有的基因都同時(shí)表達(dá),在生物體代謝過程中所需要的各種酶和蛋白質(zhì)的基因以及構(gòu)成細(xì)胞化學(xué)成分的各種編碼基因,在正常情況下是持續(xù)表達(dá)的,而與生物發(fā)育過程有關(guān)的基因則要在特定的時(shí)間和空間才進(jìn)行表達(dá)。(1)時(shí)間特異性或階段特異性(2)空間特異性或組織細(xì)胞特異性1時(shí)間特異性按功能需要,某一特定基因的表達(dá)嚴(yán)格按特定的時(shí)間順序發(fā)生,稱之為基因表達(dá)的時(shí)間特異性(temporalspecificity)。多細(xì)胞生物基因表達(dá)的時(shí)間特異性又稱階段特異性(stagespecificity)。2空間特異性(spatialspecificity)在個(gè)體生長(zhǎng)全過程,某種基因產(chǎn)物在個(gè)體按不同組織空間順序出現(xiàn),稱之為基因表達(dá)的空間特異性(spatialspecificity)?;虮磉_(dá)伴隨時(shí)間順序所表現(xiàn)出的這種分布差異,實(shí)際上是由細(xì)胞在器官的分布決定的,所以空間特異性又稱細(xì)胞或組織特異性(cellortissuespecificity)。二、原核生物基因表達(dá)調(diào)控的特點(diǎn)與方式(1)原核生物基因表達(dá)調(diào)控包括在DNA水平、轉(zhuǎn)錄水平、轉(zhuǎn)錄后水平和翻譯水平,但轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)節(jié)是最有效、最經(jīng)濟(jì)的方式,也是最主要的調(diào)節(jié)方式。(2)原核生物基因的表達(dá)調(diào)控多以操縱子為單位進(jìn)行,即將功能相關(guān)的基因組織在一起,同時(shí)開啟或關(guān)閉基因表達(dá)。(3)基因調(diào)控的模式可分成兩大類,正調(diào)控和負(fù)調(diào)控,原核生物以負(fù)調(diào)控為主。轉(zhuǎn)錄水平上的調(diào)控轉(zhuǎn)錄后水平上的調(diào)控操縱子學(xué)說1961年,法國巴斯德研究院的FrancoisJacob(雅各布)與JacquesMonod(莫洛)提出,獲1965年諾貝爾生理學(xué)和醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。

操縱子(operon)

結(jié)構(gòu)基因

啟動(dòng)子

操縱基因

調(diào)節(jié)基因(promoter)(operator)阻抑蛋白三、原核生物基因表達(dá)調(diào)控的幾個(gè)重要概念結(jié)構(gòu)基因:編碼細(xì)胞結(jié)構(gòu)和基本代謝活動(dòng)所必要的RNA和蛋白質(zhì)的基因。調(diào)節(jié)基因:編碼合成那些參與基因表達(dá)調(diào)控的RNA和蛋白質(zhì)的特異DNA序列。調(diào)節(jié)基因編碼的調(diào)節(jié)物通過與DNA上的特定位點(diǎn)結(jié)合控制轉(zhuǎn)錄是調(diào)控的關(guān)鍵。順式作用元件(cis-actingelements):調(diào)節(jié)基因表達(dá)的DNA序列。反式作用因子(trans-actingfactors):調(diào)節(jié)基因表達(dá)的蛋白質(zhì)因子,可直接或間接結(jié)合順式作用元件。正調(diào)控和負(fù)調(diào)控正調(diào)控(positivecontrol)在沒有調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)存在時(shí)基因是關(guān)閉的,加入某種調(diào)節(jié)蛋白后基因活性就被開啟,這樣的調(diào)控為正轉(zhuǎn)錄調(diào)控。調(diào)節(jié)基因操縱基因結(jié)構(gòu)基因mRNA酶蛋白調(diào)節(jié)蛋白負(fù)調(diào)控(negativecontrol)在沒有調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)存在時(shí)基因是表達(dá)的,加入這種調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)后基因表達(dá)活性便被關(guān)閉,這樣的調(diào)控負(fù)轉(zhuǎn)錄調(diào)控。調(diào)節(jié)基因操縱基因結(jié)構(gòu)基因阻遏蛋白不轉(zhuǎn)錄,基因封閉

正調(diào)控(positiveregulation)與缺乏調(diào)控因子時(shí)比較,若調(diào)控因子使靶基因的表達(dá)水平上升。調(diào)控因子稱激活蛋白(activator)正調(diào)控可分為:可誘導(dǎo)的正調(diào)控系統(tǒng)調(diào)節(jié)因子在誘導(dǎo)物的作用下,能與啟動(dòng)子結(jié)合開啟結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄??勺瓒舻恼{(diào)控系統(tǒng)調(diào)節(jié)因子可與啟動(dòng)子結(jié)合,促進(jìn)結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄。但當(dāng)其與輔阻遏物結(jié)合后,不能啟動(dòng)結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄。2023/5/18142023/5/1815負(fù)調(diào)控(negativeregulation)與缺乏調(diào)控因子時(shí)比較,若調(diào)控因子使基因的表達(dá)水平下降,甚至關(guān)閉,調(diào)控因子稱阻遏蛋白(repressor)負(fù)調(diào)控可分為:可誘導(dǎo)的負(fù)調(diào)控系統(tǒng)阻遏蛋白與操縱基因結(jié)合,可阻止結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄,但有誘導(dǎo)物時(shí),它與阻遏蛋白結(jié)合從而解除對(duì)結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄的抑制??勺瓒舻呢?fù)調(diào)控系統(tǒng)阻遏蛋白不影響結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄,但它與輔阻遏物結(jié)合后,抑制結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄。2023/5/18162023/5/1817四、原核生物基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制1代謝產(chǎn)物對(duì)基因活性的調(diào)節(jié)

一些基因的特殊代謝產(chǎn)物對(duì)基因活性的調(diào)節(jié)具有誘導(dǎo)或阻遏作用。一些基因在特殊的代謝物或化合物的作用下,由原來關(guān)閉的狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)楣ぷ鳡顟B(tài),即在某些物質(zhì)的誘導(dǎo)下使基因活化.如乳糖操縱子,調(diào)節(jié)分解代謝的操縱子,同時(shí)受cAMP-CAP的活性調(diào)節(jié)2弱化子對(duì)基因活性的影響弱化子:在操縱基因與結(jié)構(gòu)基因之間的一段可以終止轉(zhuǎn)錄作用的核苷酸序列。當(dāng)操縱子被阻遏時(shí),RNA合成被終止,這段核苷酸序列起終止轉(zhuǎn)錄信號(hào)作用。UUUU……RNA聚合酶起調(diào)節(jié)作用的是某種氨酰-tRNA的濃度RNA在分子內(nèi)采用不同的堿基配對(duì)方式,形成不同的二級(jí)結(jié)構(gòu)而參與調(diào)控。當(dāng)不同的結(jié)構(gòu)對(duì)是否允許終止存在差異時(shí),改變二級(jí)結(jié)構(gòu)可對(duì)轉(zhuǎn)錄終止進(jìn)行調(diào)控。

弱化子作用機(jī)制UUUU……UUUU……調(diào)節(jié)區(qū)結(jié)構(gòu)基因trpROP前導(dǎo)序列衰減子區(qū)域UUUU……前導(dǎo)mRNA1234衰減子結(jié)構(gòu)

第10、11密碼子為trp密碼子終止密碼子14aa前導(dǎo)肽編碼區(qū):

包含序列1形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)能力強(qiáng)弱:序列1/2>序列2/3>序列3/4

trp密碼子

UUUU……5’trpmRNAtrpL1234寡聚U區(qū)trpE(a)正常(b)高[Trp]12轉(zhuǎn)錄終止34(C)低[Trp]1234轉(zhuǎn)錄延伸UUUU……34UUUU3’34核糖體前導(dǎo)肽前導(dǎo)mRNA1.當(dāng)色氨酸濃度高時(shí)轉(zhuǎn)錄衰減機(jī)制125’trp密碼子衰減子結(jié)構(gòu)就是終止子可使轉(zhuǎn)錄前導(dǎo)DNAUUUU3’RNA聚合酶終止UUUU……342423UUUU……核糖體前導(dǎo)肽前導(dǎo)mRNA15’trp密碼子

結(jié)構(gòu)基因前導(dǎo)DNARNA聚合酶2.當(dāng)色氨酸濃度低時(shí)Trp合成酶系相關(guān)結(jié)構(gòu)基因被轉(zhuǎn)錄序列3、4不能形成衰減子結(jié)構(gòu)3降解物對(duì)基因活性的調(diào)節(jié)葡萄糖效應(yīng)(降解物抑制作用)是指當(dāng)葡萄糖和其它糖類一起作為細(xì)菌的碳源時(shí)葡萄糖總是優(yōu)先被利用,葡萄糖的存在阻止了其它糖類的利用的現(xiàn)象。降解物對(duì)基因活性的調(diào)節(jié)葡萄糖通過降低cAMP的含量而抑制基因表達(dá)4細(xì)菌的應(yīng)急反應(yīng)

細(xì)菌的應(yīng)急反應(yīng)指細(xì)菌在惡劣生長(zhǎng)環(huán)境中關(guān)閉tRNA和核糖體形成的能力。細(xì)菌的應(yīng)急反應(yīng)的機(jī)制應(yīng)急信號(hào):鳥苷四磷酸(ppGpp)、鳥苷五磷酸(pppGpp)誘導(dǎo)物:空載tRNA焦磷酸轉(zhuǎn)移酶DiscoveryofOperon

1940年,Monod發(fā)現(xiàn):細(xì)菌在含葡萄糖和乳糖的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)時(shí),細(xì)菌先利用葡萄糖,葡萄糖用完后,才利用乳糖;在糖源轉(zhuǎn)變期,細(xì)菌的生長(zhǎng)會(huì)出現(xiàn)停頓。即產(chǎn)生“二次生長(zhǎng)曲線”。JacquesMonod

第二節(jié)乳糖操縱子311951年,Monod與Jacob合作,發(fā)現(xiàn)兩基因:

Z基因:與合成β-半乳糖苷酶有關(guān);

I基因:決定細(xì)胞對(duì)誘導(dǎo)物的反應(yīng)。1961年,F.Jacob&J.Monod提出乳糖操縱子學(xué)說,

此后不斷完善。1965年獲諾貝爾生理學(xué)和醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。FrancisJacob

JacquesMonod

2023/5/1832一、乳糖操縱子(lacoperon)的結(jié)構(gòu)與組成

調(diào)控區(qū)阻遏基因啟動(dòng)子控制基因

結(jié)構(gòu)基因Z:β-半乳糖苷酶Y:透酶A:乙?;D(zhuǎn)移酶ZYAOPDNAILac操縱子P、O區(qū)的重疊乳糖操縱子模型Z、Y、A基因的產(chǎn)物為一條多順反子mRNAlacZ:編碼β-半乳糖苷酶,它可以將乳糖水解為半乳糖和葡萄糖;lacY:編碼半乳糖苷透性酶,它能將乳糖運(yùn)送透過細(xì)菌的細(xì)胞壁;lacA:編碼硫代半乳糖苷乙酰轉(zhuǎn)移酶,進(jìn)行乳糖代謝。乳糖操縱子的結(jié)構(gòu)基因及其表達(dá)產(chǎn)物二、酶的誘導(dǎo)-lac體系受調(diào)控的證據(jù)在不含乳糖及β-半乳糖苷的培養(yǎng)基中,lac+基因型每個(gè)大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)大約只有1~2個(gè)酶分子。如果在培養(yǎng)基中加入乳糖,酶的濃度很快達(dá)到細(xì)胞總蛋白量的6%或7%,每個(gè)細(xì)胞中可有超過105個(gè)酶分子。1實(shí)驗(yàn)證據(jù)mRNA阻遏蛋白IDNAZYAOPpol沒有乳糖存在時(shí)阻遏基因(1)Lac阻遏物的作用---負(fù)調(diào)控2023/5/1840mRNA阻遏蛋白有乳糖存在時(shí)IDNAZYAOPpol啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄mRNA乳糖異乳糖乳糖操縱子為一個(gè)可誘導(dǎo)的負(fù)控制系統(tǒng)2023/5/1842(2)CAP的正性調(diào)節(jié)代謝物阻遏效應(yīng)研究認(rèn)為葡萄糖的某些降解產(chǎn)物抑制lacmRNA的合成,這種效應(yīng)稱之為代謝物阻遏效應(yīng)。葡萄糖效應(yīng)

Catabolitegeneactivationproteinsite-10site-35siteCACCCCAGGCTTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATGTTGTGTGGAATTGAGCGGATAACAATTTCACACCTCATTAGGACTCGATTGAGTGTAATTA5’3’Operonregion20bpRNApolymerasebindingregionorpromoterregionPrimarystructureoflacoperonregulationregion5’TATAAT3’Pribnowbox(3)協(xié)調(diào)調(diào)節(jié)當(dāng)阻遏蛋白封閉轉(zhuǎn)錄時(shí),CAP對(duì)該系統(tǒng)不能發(fā)揮作用;如無CAP存在,即使沒有阻遏蛋白與操縱序列結(jié)合,操縱子仍無轉(zhuǎn)錄活性。單純?nèi)樘谴嬖跁r(shí),細(xì)菌利用乳糖作碳源;若有葡萄糖或葡萄糖/乳糖共同存在時(shí),細(xì)菌首先利用葡萄糖。mRNA低半乳糖時(shí)高半乳糖時(shí)

葡萄糖低cAMP濃度高

葡萄糖高cAMP濃度低RNA-polOOOOmRNA阻遏蛋白IDNAZYAOPpol阻遏基因弱啟動(dòng)子控制的組成型合成二、阻遏蛋白的作用機(jī)制阻遏蛋白結(jié)構(gòu)具有對(duì)稱性,是相同亞基構(gòu)成的四聚體。第三節(jié)色氨酸操縱子trp操縱子的結(jié)構(gòu)阻遏型操縱子trpAtrpBtrpCtrpEtrpDPtrpOtrp前導(dǎo)序列aTrp阻抑物色氨酸激活RNAtrpEtrpDtrpCtrpBtrpA色氨酸合成所需的酶trpR一、trp操縱子的阻遏系統(tǒng)酶阻遏的操縱子模型輔阻遏蛋白無活性,不能與操縱基因結(jié)合,結(jié)構(gòu)基因表達(dá)。調(diào)節(jié)基因操縱基因結(jié)構(gòu)基因mRNA酶蛋白.........輔阻遏蛋白trp操縱子的阻遏調(diào)控機(jī)制色氨酸操縱子主要參與調(diào)控一系列用于色氨酸合成代謝的酶蛋白的轉(zhuǎn)錄合成。當(dāng)細(xì)胞內(nèi)缺乏色氨酸時(shí),此操縱子開放,而當(dāng)細(xì)胞內(nèi)合成的色氨酸過多時(shí),此操縱子被關(guān)閉。色氨酸操縱子的調(diào)控機(jī)制與乳糖操縱子類似,但通常情況下,操縱子處于開放狀態(tài),其輔阻遏蛋白不能與操縱基因結(jié)合而阻遏轉(zhuǎn)錄。而當(dāng)色氨酸合成過多時(shí),色氨酸作為輔阻遏物與輔阻遏蛋白結(jié)合而形成阻遏蛋白,后者與操縱基因結(jié)合而使基因轉(zhuǎn)錄關(guān)閉。TrpTrp濃度高時(shí)Trp濃度低時(shí)mRNAOPtrpR調(diào)節(jié)區(qū)結(jié)構(gòu)基因RNA聚合酶RNA聚合酶色氨酸操縱子——阻遏調(diào)節(jié)?二、色氨酸操縱子的弱化系統(tǒng)(一)弱化子在操縱區(qū)與結(jié)構(gòu)基因之間的一段可以終止轉(zhuǎn)錄作用的核苷酸序列,當(dāng)操縱子被阻遏時(shí),RNA合成被終止,這段核苷酸起終止轉(zhuǎn)錄信號(hào)作用.調(diào)節(jié)區(qū)結(jié)構(gòu)基因trpROP前導(dǎo)序列衰減子區(qū)域UUUU……前導(dǎo)mRNA1234UUUU……RNA聚合酶起調(diào)節(jié)作用的是某種氨酰-tRNA的濃度(二)前導(dǎo)肽UUUU……342423UUUU……核糖體前導(dǎo)肽前導(dǎo)mRNA15’trp密碼子

結(jié)構(gòu)基因前導(dǎo)DNARNA聚合酶當(dāng)色氨酸濃度低時(shí)Trp合成酶系相關(guān)結(jié)構(gòu)基因被轉(zhuǎn)錄序列3、4不能形成衰減子結(jié)構(gòu)(三)mRNA前導(dǎo)區(qū)的序列分析前導(dǎo)區(qū)mRNA上有兩個(gè)連續(xù)的色氨酸密碼子;前導(dǎo)序列上有4個(gè)分別以1、2、3、4表示的片斷能以兩種不同的方式進(jìn)行堿基配對(duì),有時(shí)以1-2和3-4配對(duì),有時(shí)只以2-3方式互補(bǔ)配對(duì)。UUUU……前導(dǎo)mRNA1234(四)轉(zhuǎn)錄的弱化作用mRNA轉(zhuǎn)錄的終止是通過前導(dǎo)肽基因的翻譯來調(diào)節(jié)的。在前導(dǎo)肽基因中有兩個(gè)相鄰的色氨酸密碼子,故這個(gè)前導(dǎo)肽的翻譯必定對(duì)tRNATrp的濃度敏感。(五)衰減子的生物學(xué)意義活性阻遏物和非活性阻遏物的轉(zhuǎn)變可能較慢,而tRNA荷載與否可能更為靈敏;氨基酸的主要用途是合成蛋白質(zhì),因而以tRNA荷載情況為標(biāo)準(zhǔn)來進(jìn)行控制可能更為恰當(dāng)。當(dāng)細(xì)胞內(nèi)氨基酸高于某一水平時(shí),可以實(shí)現(xiàn)完全的阻遏;而只有低于這一水平時(shí),才需用衰減子這個(gè)調(diào)節(jié)系統(tǒng)來進(jìn)行調(diào)節(jié),阻遏蛋白和衰減子調(diào)節(jié)機(jī)制都是為了避免浪費(fèi),提高效率。第四節(jié)轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控方式一、mRNA自身結(jié)構(gòu)元件對(duì)翻譯其實(shí)的調(diào)節(jié)1、SD序列對(duì)翻譯的影響SD序列:mRNA起始密碼前的一段富含嘌呤核苷酸的序列(9-12bp)。

5′-AGGAPuPuUUUPuPuAUG-3′SD序列的順序及位置對(duì)翻譯的影響SD與AUG之間相距一般以4-10個(gè)核苷酸為佳,9個(gè)核苷酸最佳?!璕BS2、mRNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)對(duì)翻譯起始的調(diào)控SDsequenceAUG~10basesUAAGGAGGU:complementarywith16srRNA5’實(shí)驗(yàn)證據(jù)RNA引物由dnaG基因編碼的引物酶催化合成。dnaG、rpoD及rpsU屬于大腸桿菌基因組上的同一個(gè)操縱子基因轉(zhuǎn)錄出來的三個(gè)蛋白相應(yīng)的mRNA拷貝數(shù)大體相同,由于翻譯的調(diào)控使得蛋白的拷貝數(shù)發(fā)生了很大的變化。二、稀有密碼子對(duì)翻譯的影響由于細(xì)胞內(nèi)對(duì)應(yīng)于稀有密碼子的t

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