BPG層析柱標(biāo)準(zhǔn)裝柱流程規(guī)范

word文檔精品文檔分享BPG300層析柱標(biāo)準(zhǔn)裝柱流程標(biāo)準(zhǔn)SOP-BPG-001操作標(biāo)準(zhǔn)目的：為了使BPG300層析柱裝柱過程可重復(fù)，并能夠得到較好的柱效，故建立此操作標(biāo)準(zhǔn)。X圍：配合?KTAprocess系統(tǒng)進(jìn)展有效的蛋白質(zhì)純化操作。責(zé)任人：層析工序操作人員標(biāo)準(zhǔn)操作程序：1根本術(shù)語概念填料因子〔PackingFactor,PF〕對填料進(jìn)展沉降壓縮得到的調(diào)料高度和最后裝柱完成時(shí)填料高度〔柱高〕的比值，GEHC生產(chǎn)的各種常見填料的PF參見?GEHCAxiChrom300-1000columnsUserManual28-9562-89EditionAA線性流速〔linearflowratecm/h表示；體積流速〔volumeflowrate單位時(shí)間內(nèi)液體流經(jīng)的空間容積，常用ml/min表示；1word文檔精品文檔分享BPG300層析柱標(biāo)準(zhǔn)裝柱流程標(biāo)準(zhǔn)SOP-BPG-001換算：2準(zhǔn)備工作2.1檢查層析柱的完整性，所帶配件，是否水平〔用水平儀矯正〕，是否清潔〔如有污染應(yīng)進(jìn)展清洗〕。2.2確定所用填料及其特性、濃度等以DEAESepharoseFastFlow填料為例，其填料因子〔PF〕為1.15，新填料〔slurry〕濃度為75%〔保存于20%。2.3確定放大后的工藝參數(shù)以XX生化制藥股份的放大工藝為例，中試工藝參數(shù)：柱高h(yuǎn)=10cm；體積流速v1=3ml/min；柱內(nèi)徑d=1.6cm.即，線性流速v2=v1/s柱=3/(3.140.82)cm/min=1.5cm/min；樣品與填料接觸時(shí)間t=h/v2=10/1.5min=6.67min；在工藝的線性放大中、v2和t均不變，那么可保證樣品出峰的位置〔洗脫時(shí)間〕和形狀不變。使用BPG300層析柱進(jìn)展放大的工藝參數(shù)：裝柱體積V柱=S柱h=3.141.521L=7L；裝柱需要slurry體積Vslurry=V柱×slurry以DEAESepharoseFastFlow為填料，那么，Vslurry×；裝入柱中的slurry高度Lslurry=Vslurry/S柱=10.73/(3.14.52)dm=1.52dm=15.2cm.3管路安裝3.1層析柱管道和配件安裝3.1.1卸下柱子頂部和底部的盲堵墊圈，旋松密封調(diào)節(jié)器，用純水或20%乙醇充分浸潤柱內(nèi)壁和柱頭O型圈；3.1.2用扳手對稱卸下支持桿連接到法蘭的螺絲，并通過旋轉(zhuǎn)高度調(diào)節(jié)手柄將柱頭旋至最高處，在柱頭頂部依次安裝壓力表和四路二通閥，在柱底安裝四路二2word文檔精品文檔分享BPG300層析柱標(biāo)準(zhǔn)裝柱流程標(biāo)準(zhǔn)SOP-BPG-001通閥；3.1.3在頂部四路二通閥上橫向連接一根細(xì)管，另一端連至?KTAprocess上端連接口COLUMNTOP，同時(shí)從柱底四路二通閥橫向接出一根細(xì)管至?KTAprocess的下端連接口COLUMNBOTTOM。圖1、BPG300層析柱安裝示意圖3.2層析柱下端篩網(wǎng)排氣泡3.2.1連接兩根足夠長的細(xì)管到?KTA進(jìn)樣泵的A1和B1進(jìn)口，兩管另一端均放入純水中；3.2.2從A1泵入純水：翻開UNICORN軟件，在systemcontrol窗口點(diǎn)擊manual→→InletA，選擇inletA1，insert；InletB，選擇，；3word文檔精品文檔分享BPG300層析柱標(biāo)準(zhǔn)裝柱流程標(biāo)準(zhǔn)SOP-BPG-001Column，選擇upflow，；Pump→Flow，設(shè)定流速60L/h，點(diǎn)擊execute運(yùn)行程序充水至BPG柱中2-3cm左右，pause，去除下端篩網(wǎng)中的空氣，用注射器吸出篩網(wǎng)中殘留的氣泡。4裝填料4.1準(zhǔn)備填料所用填料為DEAESepharoseFastFlow，裝置的是保存于20%乙醇中的新slurry；4.2卸下柱頭，用攪拌棍引流參加混勻的slurry至15.2cm處，再參加純水至40cm左右，充分?jǐn)嚢杌靹?，同時(shí)防止擠壓篩網(wǎng)和柱壁，靜置使填料界面至少低于；4.3在systemcontrol窗口點(diǎn)擊manual→→InletA，選擇inletA1，；InletB，選擇closed，；Column，選擇downflow，；Pump→Flow，設(shè)定流速60L/h，點(diǎn)擊execute運(yùn)行程序?qū)⒅^上端篩網(wǎng)充滿水以除去氣泡，再裝上柱頭，用密封調(diào)節(jié)器固定柱頭，擰緊螺絲；4.4在systemcontrol窗口點(diǎn)擊manual→Pump→Flow，設(shè)定流速為42L/h〔14cm左右，將密封調(diào)節(jié)器旋至全松，將柱頭快速調(diào)至距離填料3-4cm處，將密封調(diào)節(jié)器旋至半松，將柱頭快速調(diào)至濾網(wǎng)距離填料，旋嚴(yán)密封調(diào)節(jié)器，再設(shè)定高流速〔如150L/h繼續(xù)壓縮填料，最后再調(diào)節(jié)柱頭至10cm。整個(gè)過程一直有流速，泵速不能停。5柱效測定4word文檔精品文檔分享BPG300層析柱標(biāo)準(zhǔn)裝柱流程標(biāo)準(zhǔn)SOP-BPG-001圖2、柱效測定示意圖5.1平衡將A1接口細(xì)管放入0.4MNaCl溶液中，將柱頂端四路二通閥調(diào)至管路與大氣相連狀態(tài)，在systemcontrol窗口點(diǎn)擊manual→valves→InletA，選擇inletA1，insert；InletB，選擇closed，；Column，選擇downflow，insert；Pump→Flow，再設(shè)定高流速〔如150L/h運(yùn)行，排氣泡，再將閥調(diào)至管路與柱頭相連狀態(tài)，平衡3-5個(gè)柱體積至電導(dǎo)曲線穩(wěn)定，點(diǎn)擊END；5.2上樣5.2.1將B1接口細(xì)管放入2MNaCl溶液，柱頂端四路二通閥調(diào)至管路與大氣相連狀態(tài)，在systemcontrol窗口點(diǎn)擊→valves→InletA，選擇，；InletB，選擇InletB1，insert；Column，選擇downflow，；Pump→Flow，設(shè)定高流速〔〕點(diǎn)擊execute運(yùn)行，排氣泡，pause；5.2.2在systemcontrol窗口點(diǎn)擊manual→→End_Timer，選擇Acc.Volumn,Timeout設(shè)上樣量為70mL〔1%Pump→Flow，設(shè)定上樣流速60L/h，點(diǎn)擊的同時(shí)將柱頂端四路二通閥調(diào)至管路與柱頭相連，完成上樣；5.3洗脫5word文檔精品文檔分享BPG300層析柱標(biāo)準(zhǔn)裝柱流程標(biāo)準(zhǔn)SOP-BPG-0015.3.1將柱頂端四路二通閥調(diào)至管路與大氣相連狀態(tài)，在systemcontrol窗口點(diǎn)擊manual→→InletA，選擇inletA1，insert；InletB，選擇closed，；Column，選擇downflow，insert；Pump→Flow，設(shè)定高流速〔150L/h〕點(diǎn)擊execute運(yùn)行，排氣泡，同時(shí)將管路充滿0.4MNaCl溶液，調(diào)流速至21L/h〔5.3.2待流速穩(wěn)定后，在systemcontrol窗口點(diǎn)擊→valves→InjectionMark，，點(diǎn)擊execute的同時(shí)將柱頂端四路二通閥調(diào)至管路與柱頭相連，開場洗脫，在一個(gè)柱體積左右，電導(dǎo)檢測下將產(chǎn)生目的峰。5.4測柱效在Evaluation窗口中，選擇實(shí)驗(yàn)保存的結(jié)果，在結(jié)果圖中點(diǎn)擊鼠標(biāo)右鍵，選擇Properties，點(diǎn)擊，并選中Cond_102，點(diǎn)擊OK?；氐紼valuation窗口，選擇積分按鈕，在彈出窗口中，選擇Cond_102，peakwindow中調(diào)整積分的X圍，并在Reject中，填Peakmustbeoneof1；確定后，在積分結(jié)果窗口，點(diǎn)擊右鍵，選擇Properties，在peaktable選項(xiàng)中，勾選PlateHeight〔HETP〕和Asymmetry。確定后即可計(jì)算得到計(jì)算理論塔板高度HETP和對稱因子As。6word文檔精品文檔分享BPG300層析柱標(biāo)準(zhǔn)裝柱流程標(biāo)準(zhǔn)SOP-BPG-0011WhencalculatingtheamountofmediatobepackedusetheCompressionFactor1.1insteadoft