紫外可見(jiàn)光分光光度法教學(xué)

關(guān)于紫外可見(jiàn)光分光光度法教學(xué)第1頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

利用被測(cè)物質(zhì)的分子對(duì)紫外-可見(jiàn)光選擇性吸收的特性而建立起來(lái)的方法。第2頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一．分子吸收光譜的產(chǎn)生在分子中存在著電子的運(yùn)動(dòng)，以及組成分子的各原子間的振動(dòng)和分子作為整體的轉(zhuǎn)動(dòng)。分子的總能量可以認(rèn)為等于這三種運(yùn)動(dòng)能量之和。即：E分子=E電子+E振動(dòng)+E轉(zhuǎn)動(dòng)第3頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

分子中的這三種運(yùn)動(dòng)狀態(tài)都對(duì)應(yīng)有一定的能級(jí)。即在分子中存在著電子能級(jí)、振動(dòng)能級(jí)和轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)。這三種能級(jí)都是量子化的。其中電子能級(jí)的間距最大（每個(gè)能級(jí)間的能量差叫間距或能級(jí)差），振動(dòng)能級(jí)次之，轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)的間距最小。第4頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月如果用△E電子，△E振動(dòng)以及△E轉(zhuǎn)動(dòng)表示各能級(jí)差，則：△E-電子＞△E-振動(dòng)＞△E-轉(zhuǎn)動(dòng)第5頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月由于組成分子能量的幾部分都具有一定的能級(jí)，所以分子也具有一定的能級(jí)，如圖是雙原子分子的能級(jí)圖：第6頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第7頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月由圖可見(jiàn)，在每一個(gè)電子能級(jí)上有許多間距較小的振動(dòng)能級(jí)，在每一個(gè)振動(dòng)能級(jí)上又有許多間距更小的轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)。由于這個(gè)原因，處在同一電子能級(jí)的分子，可能因振動(dòng)能量不同而處于不同的能級(jí)上。同理，處于同一電子能級(jí)和同一振動(dòng)能級(jí)上的分子，由于轉(zhuǎn)動(dòng)能量不同而處于不同的能級(jí)上。第8頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月當(dāng)用光照射分子時(shí)，分子就要選擇性的吸收某些波長(zhǎng)（頻率）的光而由較低的能級(jí)E躍遷到較高能級(jí)E‘上，所吸收的光的能量就等于兩能級(jí)的能量之差：△E=E‘－E第9頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月其光的頻率為：γ=△E/h或光的波長(zhǎng)為：λ=hc/△E第10頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月由于分子選擇性的吸收了某些波長(zhǎng)的光，所以這些光的能量就會(huì)降低，將這些波長(zhǎng)的光及其所吸收的能量按一定順序排列起來(lái)，就得到了分子的吸收光譜。第11頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、分子吸收光譜類型

遠(yuǎn)紅外光譜、紅外光譜及紫外-可見(jiàn)光譜三類。分子的轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)躍遷，需吸收波長(zhǎng)為遠(yuǎn)紅外光，因此，形成的光譜稱為轉(zhuǎn)動(dòng)光譜或遠(yuǎn)紅外光譜。第12頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月分子的振動(dòng)能級(jí)差一般需吸收紅外光才能產(chǎn)生躍遷。在分子振動(dòng)時(shí)同時(shí)有分子的轉(zhuǎn)動(dòng)運(yùn)動(dòng)。這樣，分子振動(dòng)產(chǎn)生的吸收光譜中，包括轉(zhuǎn)動(dòng)光譜，故常稱為振-轉(zhuǎn)光譜。由于它吸收的能量處于紅外光區(qū)，故又稱紅外光譜。第13頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月電子的躍遷吸收光的波長(zhǎng)主要在真空紫外到可見(jiàn)光區(qū)，對(duì)應(yīng)形成的光譜，稱為電子光譜或紫外-可見(jiàn)吸收光譜。第14頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月三．有機(jī)化合物的紫外—可見(jiàn)吸收光譜（一）、躍遷類型主要有σ→σ*、n→σ*、n→π*

、π→π*第15頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

*

n*

n***n第16頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月σ→σ*

躍遷主要發(fā)生在真空紫外區(qū)。b.π→π*

躍遷吸收的波長(zhǎng)較長(zhǎng)，孤立的π→π*躍遷一般在200nm左右C、n→π*

躍遷一般在近紫外區(qū)（200~400nm），吸光強(qiáng)度較小，n→σ*

躍遷吸收波長(zhǎng)仍然在150~250nm范圍，因此在紫外區(qū)不易觀察到這類躍遷。第17頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月在以上幾種躍遷中，只有-*和n-*兩種躍遷的能量小，相應(yīng)波長(zhǎng)出現(xiàn)在近紫外區(qū)甚至可見(jiàn)光區(qū)，且對(duì)光的吸收強(qiáng)烈，是我們研究的重點(diǎn)。第18頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（二）、常用術(shù)語(yǔ)1，生色團(tuán):有機(jī)物中含有n→π*

或π→π*

躍遷的基團(tuán)；第19頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2，助色團(tuán):助色團(tuán)是指帶有非鍵電子對(duì)的基團(tuán)；可使生色團(tuán)吸收峰向長(zhǎng)波方向移動(dòng)并提高吸收強(qiáng)度的一些官能團(tuán)，常見(jiàn)助色團(tuán)助色順序?yàn)椋?F<-CH3<-Br<-OH<-OCH3<-NH2<-NHCH3<-NH(CH3)2<-NHC6H5<-O-第20頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3，紅移與藍(lán)移（紫移）某些有機(jī)化合物經(jīng)取代反應(yīng)引入含有未共享電子對(duì)的基團(tuán)之后，吸收峰的波長(zhǎng)將向長(zhǎng)波方向移動(dòng)，這種效應(yīng)稱為紅移效應(yīng)。第21頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

在某些生色團(tuán)如羰基的碳原子一端引入一些取代基之后，吸收峰的波長(zhǎng)會(huì)向短波方向移動(dòng)，這種效應(yīng)稱為藍(lán)移（紫移）效應(yīng)。如-R，-OCOR，第22頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月四．溶劑對(duì)紫外、可見(jiàn)吸收光譜的影響改變?nèi)軇┑臉O性，會(huì)引起吸收帶形狀的變化。改變?nèi)軇┑臉O性，還會(huì)使吸收帶的最大吸收波長(zhǎng)發(fā)生變化。下表為溶劑對(duì)一種丙酮紫外吸收光譜的影響。

正己烷CHCl3CH3OHH2O

*230238237243n

*

329315309305第23頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月由于溶劑對(duì)電子光譜圖影響很大，因此，在吸收光譜圖上或數(shù)據(jù)表中必須注明所用的溶劑。與已知化合物紫外光譜作對(duì)照時(shí)也應(yīng)注明所用的溶劑是否相同。在進(jìn)行紫外光譜法分析時(shí)，必須正確選擇溶劑。第24頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月五．吸收曲線（吸收光譜）及最大吸收波長(zhǎng)1．吸收曲線：每一種物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)光的吸收程度是不同的。如果我們讓各種不同波長(zhǎng)的光分別通過(guò)被測(cè)物質(zhì)，分別測(cè)定物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)光的吸收程度。以波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)，吸收程度為縱坐標(biāo)作圖所得曲線。第25頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月例：丙酮

max=279nm(=15)

nm第26頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月300400500600700/nm350525545Cr2O72-MnO4-1.00.80.60.40.2Absorbance350Cr2O72-、MnO4-的吸收光譜第27頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第28頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2、吸收峰和最大吸收波長(zhǎng)max吸收曲線表明了某種物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)光的吸收能力分布。曲線上的各個(gè)峰叫吸收峰。峰越高，表示物質(zhì)對(duì)相應(yīng)波長(zhǎng)的光的吸收程度越大。其中最高的那個(gè)峰叫最大吸收峰，它的最高點(diǎn)所對(duì)應(yīng)的波長(zhǎng)叫最大吸收波長(zhǎng)，用λmax表示。第29頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

3．物質(zhì)的吸收曲線和最大吸收波長(zhǎng)的特點(diǎn)：

1）不同的物質(zhì)，吸收曲線的形狀不同，最大吸收波長(zhǎng)不同。2）對(duì)同一物質(zhì)，其濃度不同時(shí)，吸收曲線形狀和最大吸收波長(zhǎng)不變，只是吸收程度要發(fā)生變化，表現(xiàn)在曲線上就是曲線的高低發(fā)生變化。第30頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第31頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月六．光的選擇性吸收與物質(zhì)顏色的關(guān)系：1．可見(jiàn)光的顏色和互補(bǔ)色：在可見(jiàn)光范圍內(nèi)，不同波長(zhǎng)的光的顏色是不同的。平常所見(jiàn)的白光（日光、白熾燈光等）是一種復(fù)合光，它是由各種顏色的光按一定比例混合而得的。利用棱鏡等分光器可將它分解成紅、橙、黃、綠、青、藍(lán)、紫等不同顏色的單色光。第32頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月白光除了可由所有波長(zhǎng)的可見(jiàn)光復(fù)合得到外，還可由適當(dāng)?shù)膬煞N顏色的光按一定比例復(fù)合得到。能復(fù)合成白光的兩種顏色的光叫互補(bǔ)色光。第33頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月/nm顏色互補(bǔ)光400-450紫黃綠450-480藍(lán)黃480-490綠藍(lán)橙490-500藍(lán)綠紅500-560綠紅紫560-580黃綠紫580-610黃藍(lán)610-650橙綠藍(lán)650-760紅藍(lán)綠第34頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2．物質(zhì)的顏色與吸收光的關(guān)系：當(dāng)白光照射到物質(zhì)上時(shí)，如果物質(zhì)對(duì)白光中某種顏色的光產(chǎn)生了選擇性的吸收，則物質(zhì)就會(huì)顯示出一定的顏色。物質(zhì)所顯示的顏色是吸收光的互補(bǔ)色。第35頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月完全吸收完全透過(guò)吸收黃色光光譜示意表觀現(xiàn)象示意復(fù)合光第36頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月物質(zhì)顏色吸收光物質(zhì)顏色吸收光顏色波長(zhǎng)范圍（nm）顏色波長(zhǎng)范圍(nm)黃綠紫400～450紫綠560～580黃藍(lán)450～480藍(lán)黃580～600橙綠藍(lán)480～490綠藍(lán)橙600～650紅藍(lán)綠490～500藍(lán)綠紅650～760紫紅綠500～560

第37頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月§2—2光吸收定律——朗白—比耳定律一．基本概念：當(dāng)強(qiáng)度為I0的一定波長(zhǎng)的單色入射光束通過(guò)裝有均勻待測(cè)物的溶液介質(zhì)時(shí)，該光束將被部分吸收Ia，部分反射Ir，余下的則通過(guò)待測(cè)物的溶液It，即有：I0=Ia+It+Ir第38頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月如果吸收介質(zhì)是溶液（測(cè)定中一般是溶液），式中反射光強(qiáng)度主要與器皿的性質(zhì)及溶液的性質(zhì)有關(guān)，在相同的測(cè)定條件下，這些因素是固定不變的，并且反射光強(qiáng)度一般很小。所以可忽略不記，這樣：Io=Ia+It第39頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月即：一束平行單色光通過(guò)透明的吸收介質(zhì)后，入射光被分成了吸收光和透過(guò)光。待測(cè)物的溶液對(duì)此波長(zhǎng)的光的吸收程度可以透光率T和吸光度A用來(lái)表示。第40頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月透光率——透光率表示透過(guò)光強(qiáng)度與入射光強(qiáng)度的比值，用T來(lái)表示，計(jì)算式為：T=It/IoT常用百分比（T%）表示。吸光度——透光率的倒數(shù)的對(duì)數(shù)叫吸光度。用A表示：A=-lgT第41頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、朗白—比耳定律：（一）定律內(nèi)容：當(dāng)用一束強(qiáng)度為Io的單色光垂直通過(guò)厚度為b、吸光物質(zhì)濃度為c的溶液時(shí)，溶液的吸光度正比于溶液的厚度b和溶液中吸光物質(zhì)的濃度c的乘積。數(shù)學(xué)表達(dá)式為：A=-lgT=Kbc

第42頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（二）比例常數(shù)K的幾種表示方法：吸收定律的數(shù)學(xué)表達(dá)式中的比例常數(shù)叫“吸收系數(shù)”，它的大小可表示出吸光物質(zhì)對(duì)某波長(zhǎng)光的吸收本領(lǐng)（即吸收程度）。它與吸光物質(zhì)的性質(zhì)、入射光的波長(zhǎng)及溫度等因素有關(guān)。第43頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月另外，K的值隨著b和c的單位不同而不同。下面就介紹K的幾種不同的表示方法。第44頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1．吸光系數(shù)：當(dāng)溶液濃度c的單位為g/L,溶液液層厚度b的單位為cm時(shí)，K叫“吸光系數(shù)”，用a表示，其單位為L(zhǎng)/g·cm，此時(shí)：A=abc由式可知：a=A/bc，它表示的是當(dāng)c=1g/L、b=1cm時(shí)溶液的吸光度。第45頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2．摩爾吸光系數(shù)：當(dāng)溶液濃度c的單位為mol/L，液層厚度b的單位為cm時(shí)，K叫“摩爾吸光系數(shù)”，用ελ表示，其單位為L(zhǎng)/mol·cm，此時(shí)：A=ελbc由此式可知：ελ=A/bc，它表示的是當(dāng)c=1mol/L，b=1cm時(shí)，物質(zhì)對(duì)波長(zhǎng)為λ的光的吸光度。第46頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月對(duì)于K的這兩種表示方法，它們之間的關(guān)系為：ελ=aMM為吸光物質(zhì)的分子量。第47頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月ελ和a的大小都可以反映出吸光物質(zhì)對(duì)波長(zhǎng)為λ的單色光的吸收能力。但更常用和更好的是用ελ來(lái)表示吸光物質(zhì)對(duì)波長(zhǎng)為λ的光的吸收能力。摩爾吸光系數(shù)越大，表示物質(zhì)對(duì)波長(zhǎng)為λ的光的吸收能力越強(qiáng)，同時(shí)在分光光度法中測(cè)定的靈敏度也越大。

第48頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（三）吸收定律的適用條件：1．必須是使用單色光為入射光；2．溶液為稀溶液；第49頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3．吸收定律能夠用于彼此不相互作用的多組分溶液。它們的吸光度具有加合性，且對(duì)每一組分分別適用，即：A總=A1+A2+A3…+An=ε1bc1+ε2bc2+ε3bc3…+εnbcn4．吸收定律對(duì)紫外光、可見(jiàn)光、紅外光都適用第50頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月例題：已知某化合物的相對(duì)分子量為251，將此化合物用已醇作溶劑配成濃度為0.150mmol·L-1溶液，在480nm處用2.00cm吸收池測(cè)得透光率為39.8%，求該化合物在上述條件下的摩爾吸光系數(shù)和吸光系數(shù)。第51頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月解：已知溶劑濃度c=0.150mmol.L-1，b=2.00cm,T=0.398,由Lambert-Beer定律得：ε（480nm）=A/cb=-lg0.398/0.150×10-3×2.00=1.33×103(L·mol-1·cm-1)第52頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月由ε=aM,得:a=ε/M=ε/251=5.30(L·g-1·cm-1)第53頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月三．實(shí)際溶液對(duì)吸收定律的偏離及原因：（一）偏離：被測(cè)物質(zhì)濃度與吸光度不成線性關(guān)系的現(xiàn)象，如下圖。AC第54頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（二）偏離吸收定律的原因：1．入射光為非單色光：嚴(yán)格地說(shuō)吸收定律只適用于入射光為單色光的情況。但在紫外可見(jiàn)光分光光度法中，入射光是由連續(xù)光源經(jīng)分光器分光后得到的，這樣得到的入射光并不是真正的單色光，而是一個(gè)有限波長(zhǎng)寬度的復(fù)合光，這就可能造成對(duì)吸收定律的偏離。第55頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月證明如下：（設(shè)混合光是雙波長(zhǎng)）。設(shè)由強(qiáng)度為I0、1和I0、2

的1和2兩種波長(zhǎng)組成的入射光，通過(guò)溶液后的強(qiáng)度分別為I1和I2。第56頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月將Beer定律應(yīng)用于該兩個(gè)波長(zhǎng)：在1處：第57頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月同理，在2處：第58頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月綜合前兩式，得第59頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月當(dāng)1=2時(shí)，或者說(shuō)當(dāng)1=2時(shí)，有A=1bc,符合L-B定律；當(dāng)12時(shí)，或者說(shuō)當(dāng)12時(shí)，則吸光度與濃度是非線性的。二者差別越大，則偏離L-B越大；第60頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月對(duì)非單色光引起的偏離，其原因是由于同一物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)的光的摩爾吸光系數(shù)不同造成的。所以只要在入射光的波長(zhǎng)范圍內(nèi)，摩爾吸光系數(shù)差別不是太大，由此引起的偏離是較小的。第61頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2．非平行光和光的散射：當(dāng)入射光是非平行光時(shí)，所有光通過(guò)介質(zhì)的光的光程不同，引起小的偏離。另外，當(dāng)溶液中含有懸浮物或膠粒等散射質(zhì)點(diǎn)時(shí)，入射光通過(guò)溶液時(shí)就會(huì)有一部分光因散射而損失掉，使透過(guò)光強(qiáng)度減小，測(cè)得的吸光度增大，從而引起偏離吸收定律。第62頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3．化學(xué)因素引起的偏離：1）離解作用：2）酸效應(yīng)：3）溶劑作用：第63頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1）離解作用：在可見(jiàn)光區(qū)域的分析中常常是將待測(cè)組分同某種試劑反應(yīng)生成有色配合物來(lái)進(jìn)行測(cè)定的。有色配合物在水中不可避免的要發(fā)生離解，從而使得有色配合物的濃度要小于待測(cè)組分的濃度，導(dǎo)致對(duì)吸收定律的偏離。特別是在稀溶液中時(shí)，更是如此。第64頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2）酸效應(yīng)：如果待測(cè)組分包括在一種酸堿平衡體系中，溶液的酸度將會(huì)使得待測(cè)組分的存在形式發(fā)生變化，而導(dǎo)致對(duì)吸收定律的偏離。3）溶劑作用：溶劑對(duì)吸收光譜的影響是比較大的，溶劑不同時(shí)，物質(zhì)的吸收光譜不同。第65頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月§2—3紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)一．分光光度計(jì)的主要部件和工作原理：0.575光源單色器吸收池檢測(cè)器顯示第66頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（一）光源：用于提供足夠強(qiáng)度和穩(wěn)定的連續(xù)光譜。分光光度計(jì)中常用的光源有熱輻射光源和氣體放電光源兩類。第67頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

熱輻射光源用于可見(jiàn)光區(qū)，如鎢絲燈和鹵鎢燈；氣體放電光源用于紫外光區(qū)，如氫燈和氘燈。鎢燈和碘鎢燈可使用的范圍在340~2500nm。氫燈和氘燈。它們可在160~375nm范圍內(nèi)產(chǎn)生連續(xù)光源。另外，為了使光源發(fā)出的光在測(cè)量時(shí)穩(wěn)定，光源的供電一般都要用穩(wěn)壓電源，即加有一個(gè)穩(wěn)壓器。第68頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（二）分光系統(tǒng)：分光系統(tǒng)也叫單色器。單色器是能從光源輻射的復(fù)合光中分出單色光的光學(xué)裝置，其主要功能：產(chǎn)生光譜純度高的光波且波長(zhǎng)在紫外可見(jiàn)區(qū)域內(nèi)任意可調(diào)。第69頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月單色器一般由入射狹縫、準(zhǔn)光器（透鏡或凹面反射鏡使入射光成平行光）、色散元件、聚焦元件和出射狹縫等幾部分組成。其核心部分是色散元件，起分光的作用。第70頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月能起分光作用的色散元件主要是棱鏡和光柵。第71頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月棱鏡有玻璃和石英兩種材料。它們的色散原理是依據(jù)不同的波長(zhǎng)光通過(guò)棱鏡時(shí)有不同的折射率而將不同波長(zhǎng)的光分開(kāi)。由于玻璃可吸收紫外光，所以玻璃棱鏡只能用于350~3200nm的波長(zhǎng)范圍，即只能用于可見(jiàn)光域內(nèi)。石英棱鏡可使用的波長(zhǎng)范圍較寬，可從185~4000nm，即可用于紫外、可見(jiàn)和近紅外三個(gè)光域。第72頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月入射狹縫準(zhǔn)直透鏡棱鏡聚焦透鏡出射狹縫白光紅紫λ1λ2800600500400第73頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月光柵是利用光的衍射與干涉作用制成的，它可用于紫外、可見(jiàn)及紅外光域，而且在整個(gè)波長(zhǎng)區(qū)具有良好的、幾乎均勻一致的分辨能力。第74頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（三）吸收池（比色皿）：在紫外可見(jiàn)分光光度法中，一般都是用液體溶液進(jìn)行測(cè)定的，用于盛放試液的器皿就是吸收池或比色皿。有玻璃和石英兩種。第75頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（四）光檢測(cè)系統(tǒng)：用于檢測(cè)光信號(hào)。利用光電效應(yīng)將光強(qiáng)度信號(hào)轉(zhuǎn)換成電信號(hào)的裝置，也叫光電器件。分光光法中，得到的是一定強(qiáng)度的光信號(hào)，這個(gè)信號(hào)需要用一定的部件檢測(cè)出來(lái)。檢測(cè)時(shí)，需要將光信號(hào)轉(zhuǎn)換成電信號(hào)才能測(cè)量得到。光檢測(cè)系統(tǒng)的作用就是進(jìn)行這個(gè)轉(zhuǎn)換。第76頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月常用的光檢測(cè)系統(tǒng)主要有光電池、光電管和光電倍增管。1、光電池：用半導(dǎo)體材料制成的光電轉(zhuǎn)換器。用得最多的是硒光電池。其結(jié)構(gòu)和作用原理為：第77頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月硒光電池第78頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月光電管：它是在抽成真空或充有惰性氣體的玻璃或石英泡內(nèi)裝上2個(gè)電極構(gòu)成，其結(jié)構(gòu)如圖：第79頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1234第80頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1是光電管的陽(yáng)極，它由一個(gè)鎳環(huán)或鎳片組成；2是光電管的陰極，它由一個(gè)金屬片上涂一層光敏物質(zhì)構(gòu)成，如涂上一層氧化銫。涂上的光敏物質(zhì)具有這樣一個(gè)特性：當(dāng)光照射到光敏物質(zhì)上時(shí)，它能夠放出電子；第81頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3為電池，其作用是在陰、陽(yáng)極之間加上一電壓；4為放大器，放大由光電管產(chǎn)生的電信號(hào)；第82頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月光電管將光強(qiáng)度信號(hào)轉(zhuǎn)換成電信號(hào)的過(guò)程是這樣的：當(dāng)一定強(qiáng)度的光照射到陰極上時(shí)，光敏物質(zhì)要放出電子，放出電子的多少與照射到它的光的大小成正比，而放出的電子在電場(chǎng)的作用下要流向陽(yáng)極，從而造成在整個(gè)回路中有電流通過(guò)。而此電流的大小與照射到光敏物質(zhì)上的光的強(qiáng)度的大小成正比。這就是光電管產(chǎn)生光電效應(yīng)的原理。第83頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月紅敏管625-1000nm藍(lán)敏管200-625nm光電管第84頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月光電倍增管：它是一個(gè)非常靈敏的光電器件，可以把微弱的光轉(zhuǎn)換成電流。其靈敏度比前2種都要高得多。它是利用二次電子發(fā)射以放大光電流，放大倍數(shù)可達(dá)到108倍。第85頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月光電倍增管1個(gè)光電子可產(chǎn)生106～107個(gè)電子第86頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（五）信號(hào)指示系統(tǒng)它的作用是放大信號(hào)并以適當(dāng)方式指示或記錄下來(lái)。常用的信號(hào)指示裝置有直讀檢流計(jì)、電位調(diào)節(jié)指零裝置以及數(shù)字顯示或自動(dòng)記錄裝置等。很多型號(hào)的分光光度計(jì)裝配有微處理機(jī)，一方面可對(duì)分光光度計(jì)進(jìn)行操作控制，另一方面可進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。第87頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、分光光度計(jì)的類型：（一）單光束分光光度計(jì)：0.575光源單色器吸收池檢測(cè)器顯示第88頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月這類分光光度計(jì)的特點(diǎn)是：結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，價(jià)格便宜。主要適用于定量分析，而不適用于作定性分析。另外，結(jié)果受電源的波動(dòng)影響較大。第89頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（二）單波長(zhǎng)雙光束分光光度計(jì)比值光源單色器吸收池檢測(cè)器顯示光束分裂器第90頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月雙光束分光光度計(jì)是自動(dòng)比較了透過(guò)參比溶液和樣品溶液的光的強(qiáng)度，它不受光源（電源）變化的影響。雙光束分光光度計(jì)還能進(jìn)行波長(zhǎng)掃描，并自動(dòng)記錄下各波長(zhǎng)下的吸光度，很快就可得到試液的吸收光譜。所以能用于定性分析。第91頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月光源單色器單色器檢測(cè)器切光器狹縫吸收池（三）雙光束雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)：第92頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月雙波長(zhǎng)分光光度法21XAY∵∴Y

的存在不干擾X的測(cè)定第93頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月三、分光光度計(jì)的校正通常在實(shí)驗(yàn)室工作中，驗(yàn)收新儀器或?qū)嶒?yàn)室使用過(guò)一段時(shí)間后都要進(jìn)行波長(zhǎng)校正和吸光度校正。建議采用下述的較為簡(jiǎn)便和實(shí)用的方法來(lái)進(jìn)行校正：鐠銣玻璃或鈥玻璃都有若干特征的吸收峰，可用來(lái)校正分光光度計(jì)的波長(zhǎng)標(biāo)尺，前者用于可見(jiàn)光區(qū)，后者則對(duì)紫外和可見(jiàn)光區(qū)都適用。也可用K2CrO4標(biāo)準(zhǔn)溶液來(lái)校正吸光度標(biāo)度。第94頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月§2—4顯色反應(yīng)及其影響因素一．顯色反應(yīng)和顯色劑：（一）顯色反應(yīng)：在光度分析中將試樣中的待測(cè)組分轉(zhuǎn)變成有色化合物的反應(yīng)叫顯色反應(yīng)。第95頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月顯色反應(yīng)一般分為兩大類：一類是配位反應(yīng)；另一類是氧化還原反應(yīng)。Fe3＋＋SCN－=FeSCN－；Mn2＋－5e＋4H2O=MnO4－＋8H＋在這兩類反應(yīng)中，用得較多的是配位反應(yīng)。第96頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（二）顯色劑：與待測(cè)組分生成有色化合物的試劑叫顯色劑；1．無(wú)機(jī)顯色劑：第97頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2．有機(jī)顯色劑：1）優(yōu)點(diǎn)：

a．具有鮮明的顏色，ε都很大（一般可達(dá)到104以上），所以測(cè)定的靈敏度很高；b．生成的一般為螯合物，穩(wěn)定性很好，一般離解常數(shù)都很?。坏?8頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月c．選擇性好d．有些有色配合物易溶于有機(jī)溶劑，可進(jìn)行萃取光度分析，提高了測(cè)定的靈敏度和選擇性。第99頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3．常見(jiàn)的有機(jī)顯色劑：1．磺基水楊酸：其結(jié)構(gòu)式如下：第100頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月它可用于測(cè)定三價(jià)鐵離子。2．鄰二氮菲（鄰菲羅啉，1，10—二氮菲）：結(jié)構(gòu)式為：直接在PH=3～9時(shí)與Fe2+生成紅色螯合物。用于鐵的測(cè)定。第101頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3．雙硫腙：也叫二苯—硫腙。結(jié)構(gòu)式為：測(cè)定很多重金屬離子，如：鉛、鋅、銅、銀、汞、鎘等。第102頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4．偶氮胂Ⅲ（鈾試劑Ⅲ）：可用于測(cè)定鈾、釷、鋯等。其結(jié)構(gòu)式為：

第103頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二．選擇顯色反應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)：1．選擇性要好：2．靈敏度要高：3．有色化合物的組成要恒定，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定。4．顯色劑的顏色與有色化合物的顏色差別要大5．反應(yīng)的條件要易于控制。第104頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月三．影響顯色反應(yīng)的因素：（一）顯色劑用量：顯色反應(yīng)就是將待測(cè)組分轉(zhuǎn)變成有色化合物的反應(yīng)，其反應(yīng)一般可用下式代表：M＋R=MR反應(yīng)具有一定的可逆性，當(dāng)加入R的用量時(shí)，有利于反應(yīng)向右進(jìn)行。第105頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月但要注意，加入的顯色劑用量也不能太多，否則產(chǎn)生副反應(yīng)，對(duì)測(cè)定產(chǎn)生不利。例如：用SCN-與Fe3+反應(yīng)生成紅色配合物測(cè)定鐵時(shí)，當(dāng)加入的顯色劑太多時(shí)，就會(huì)對(duì)測(cè)定產(chǎn)生不利。第106頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月對(duì)于不同的情況，顯色劑的用量對(duì)顯色反應(yīng)的影響是不同的。在實(shí)際選用時(shí)，一般是通過(guò)實(shí)驗(yàn)來(lái)確定的。第107頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月實(shí)驗(yàn)的方法為：固定待測(cè)組分的濃度和其它條件，分別加入不同量的顯色劑，分別測(cè)定它們的吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，顯色劑用量為橫坐標(biāo)作圖，可得到吸光度—顯色劑用量的曲線，其結(jié)果分為三種情況：第108頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（二）溶液酸度：酸度對(duì)顯色反應(yīng)的影響很大，因?yàn)槿芤核岫戎苯佑绊懼饘匐x子、顯色劑的存在形式和有色化合物的組成、穩(wěn)定性等。第109頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1．酸度對(duì)金屬離子存在形式的影響：很多高價(jià)金屬離子都要水解，酸度較低時(shí)，不利于顯色反應(yīng)的進(jìn)行。第110頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2．酸度對(duì)顯色劑濃度的影響：很多顯色劑都是有機(jī)弱酸，在溶液中有如下平衡：HRH+＋R－而顯色反應(yīng)為M＋RMR所以酸度太高對(duì)反應(yīng)不利。第111頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3．酸度對(duì)顯色劑顏色的影響：很多顯色劑本身就是酸堿指示劑，酸度不同時(shí)，它們的顏色不同。如果控制不好酸度，就會(huì)使指示劑顏色與有色化合物的顏色相近而影響測(cè)定。第112頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月比如：用二甲酚橙為顯色劑，它與金屬離子形成的配合物為紅色，它本身在PH<6.3時(shí)為檸檬黃色，而在PH＞6.3時(shí)為紅紫色。所以在PH＞6.3時(shí)，就無(wú)法進(jìn)行測(cè)定。第113頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4．酸度對(duì)配合物組成的影響：有些顯色反應(yīng)當(dāng)酸度不同時(shí)，要生成配位比不同的配合物，其顏色也有所不同。如：Fe3+與水揚(yáng)酸的配合物：PH＜4 Fe(C7H4O3)+

紫色4＜PH＜9 Fe(C7H4O3)2－ 紅色PH＞9 Fe(C7H4O3)

33－黃色第114頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月由上可見(jiàn)，酸度對(duì)顯色反應(yīng)的影響是很大的，適宜的酸度要由實(shí)驗(yàn)來(lái)確定。第115頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（三）顯色時(shí)間：顯色反應(yīng)的速度有快有慢，快的幾乎是瞬間完成，顏色很快達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)，并且能保持較長(zhǎng)時(shí)間。大多數(shù)顯色反應(yīng)的速度是比較慢的，需要一定時(shí)間才能達(dá)到穩(wěn)定。而且有些有色化合物放置過(guò)久也會(huì)褪色。適宜的顯色時(shí)間要由實(shí)驗(yàn)來(lái)確定。第116頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（四）溫度：一般顯色反應(yīng)在室溫下進(jìn)行，但是也有一些反應(yīng)要加熱到一定溫度下才能進(jìn)行。而且還有一些有色配合物在室溫下要分解。第117頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（五）溶劑的影響：1．影響有色化合物的溶解度；2．影響有色化合物的顏色；3．影響顯色反應(yīng)進(jìn)行的速度；第118頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（六）干擾離子的影響和消除方法：

第119頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1．與試劑生成有色配合物及大量干擾離子與試劑生成穩(wěn)定的配合物；2．干擾離子本身有色；3．與被測(cè)離子形成難離解化合物。第120頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月消除干擾的方法主要有以下幾種：1．控制酸度：2．加入掩蔽劑；3．分離干擾離子；4．進(jìn)行同時(shí)測(cè)定；5．利用氧化還原反應(yīng)改變價(jià)態(tài)；

第121頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月6、用參比溶液消除顯色劑和某些共存有色離子的干擾；7、選擇適當(dāng)?shù)牟ㄩL(zhǎng)；8、分離：以上方法均不奏效時(shí)，采用預(yù)先分離的方法。第122頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月§2—6光度測(cè)量誤差及測(cè)量條件的選擇光度分析的誤差來(lái)源于兩方面：一方面是各種化學(xué)因素引入的誤差；另一方面是儀器測(cè)量不準(zhǔn)引入的誤差。對(duì)于化學(xué)因素，前面巳經(jīng)講過(guò)，現(xiàn)在我們來(lái)看儀器測(cè)量不準(zhǔn)引入的誤差。第123頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一．儀器測(cè)量誤差：任何光度計(jì)都有一定的測(cè)量誤差，測(cè)量誤差的來(lái)源主要是光源的發(fā)光強(qiáng)度不穩(wěn)定，光電效應(yīng)的非線性，電位計(jì)的非線性，雜散光的影響，單色器的光不純等等因素，第124頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月對(duì)于一臺(tái)固定的光度計(jì)來(lái)說(shuō)，以上因素都是固定的，也就是說(shuō)，它的誤差具有一定的穩(wěn)定性。其大小可由光度計(jì)的透光率的讀數(shù)準(zhǔn)確度表現(xiàn)出來(lái)。第125頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月具體說(shuō)來(lái)，對(duì)于一個(gè)給定的光度計(jì)來(lái)說(shuō)，其透光率的讀數(shù)誤差等于常數(shù)△T，約為0.01～0.02。但透光率的讀數(shù)誤差不能代表測(cè)定結(jié)果的誤差。測(cè)量結(jié)果的誤差常用濃度的相對(duì)誤差△C/C表示（△C表示測(cè)量結(jié)果的濃度的絕對(duì)誤差）。它的大小是與△T的大小有關(guān)的。第126頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第127頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月而同樣大小的△T在透光率不同時(shí)（溶液濃度不同），所引起的濃度相對(duì)誤差是不同的。下表列出了在一定△T時(shí)不同透光率所對(duì)應(yīng)的濃度誤差：第128頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月T%95908070△c/c△T20.510.65.64.0△T10.35.32.82.0T%

60504030△c/c△T3.262.882.732.77

△T1.621.441.371.39T%

20105

△c/c△T3.114.346.7

△T1.562.173.34

第129頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月T%在80～10%即A=1～0.1時(shí)的濃度測(cè)量的相對(duì)誤差較小。對(duì)于精度較好的儀器，當(dāng)T%在60～20%（A=0.2～0.7）時(shí)，測(cè)量誤差約為1%。當(dāng)T=0.368或A=0.434時(shí)，濃度的測(cè)量誤差最小。第130頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二．測(cè)量條件的選擇：1．測(cè)量波長(zhǎng)的選擇：一般選用待測(cè)物質(zhì)的最大吸收波長(zhǎng)作為測(cè)量波長(zhǎng)（入射光）但當(dāng)在最大吸收波長(zhǎng)處有干擾時(shí)，則應(yīng)根據(jù)“吸收最大干擾最小”的原則來(lái)選擇波長(zhǎng)。第131頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2．控制適當(dāng)?shù)奈舛确秶河蓽y(cè)量誤差可知，當(dāng)吸光度在0.2～0.8之間時(shí)，測(cè)量誤差最小，所以應(yīng)盡量控制吸光度在此范圍進(jìn)行測(cè)定?？刂频姆椒椋?）控制溶液的濃度；2）選用適當(dāng)厚度的比色皿；第132頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3．選擇適當(dāng)?shù)膮⒈热芤海篴.如果僅有顯色劑與被測(cè)組分反應(yīng)的產(chǎn)物有吸收，則可以用純?nèi)軇┳鲄⒈热芤?；b.如果顯色劑和其他試劑有顏色，則用試劑溶液作參比液；第133頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月c.如果顯色劑與試劑中干擾組分反應(yīng)，其反應(yīng)產(chǎn)物有吸收，則按如下方式配置參比液：(1)吸收較弱時(shí)，直接用試劑溶液作參比液；(2)吸收較強(qiáng)時(shí)，可選用合適的掩蔽劑將被測(cè)組分掩蔽后再加顯色劑和其他試劑，以此配制的溶液作參比液。第134頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月§1—6紫外—可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用一．紫外-可見(jiàn)分光光度法在定性分析中的應(yīng)用（一）定性分析：（二）結(jié)構(gòu)分析：第135頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（三）分析方法：

1．比較光譜法，2．制作試樣的吸收曲線并與標(biāo)準(zhǔn)紫外光譜對(duì)照；3．利用Woodward-Fieser經(jīng)驗(yàn)規(guī)則求最大吸收波長(zhǎng)。第136頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

伍德沃德（Woodward）規(guī)則1）共軛二烯最大吸收位置的計(jì)算值母體：非環(huán)或異環(huán)二烯烴基準(zhǔn)值214nm

同環(huán)二烯烴253nm第137頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

延伸雙鍵30

環(huán)外雙鍵5

共軛體系上取代烷基5OR6SR30ClBr5位移增量（nm）第138頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2），不飽和酮最大吸收位置的計(jì)算值六元環(huán)或非環(huán)，不飽和酮基準(zhǔn)值215nm）

位移增量（nm）

同環(huán)共軛雙鍵39

環(huán)外雙鍵（C=C）5

延伸雙鍵30第139頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

共軛體系上取代基α：10；β：12；

γ位或更高位：18OCORαβγδ：6OHα：35；β：30；γ：50Clα：15：β：12Brα：25；β：30NR2β：95第140頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

基值

217四個(gè)烷基取代4520二個(gè)環(huán)外雙鍵2510計(jì)算值(max)247nm實(shí)測(cè)值(max)247nm第141頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

基值

217五個(gè)烷基取代5525二個(gè)環(huán)外雙鍵2510共軛雙鍵延長(zhǎng)13030計(jì)算值(max)282nm第142頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、定量分析（一）．微量單組分的測(cè)定：1．標(biāo)準(zhǔn)曲線法：第143頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月配制一系列不同含量的待測(cè)組分的標(biāo)準(zhǔn)溶液，以不含待測(cè)組分的空白溶液為參比，測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度。并繪制吸光度—濃度曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線（工作曲線），然后再在相同條件下測(cè)定試樣溶液的吸光度。由測(cè)得的吸光度在曲線上查得試樣溶液中待測(cè)組分的濃度，最后計(jì)算得到試樣中待測(cè)組分的含量。第144頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2．增量法：把未知試樣溶液分成體積相同的若干份，除其中的一份不加入待測(cè)組分的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)外，在其它幾份中都分別加入不同量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。然后測(cè)定各份試液試液的吸光度并繪制吸光度對(duì)加入的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的濃度（增量）作圖，得一標(biāo)準(zhǔn)曲線：第145頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月由于每份溶液中都含有待測(cè)組分，因此，標(biāo)準(zhǔn)曲線不經(jīng)過(guò)原點(diǎn)。將標(biāo)準(zhǔn)曲線外推延長(zhǎng)至與橫坐標(biāo)交于一點(diǎn)，則此點(diǎn)到原點(diǎn)的長(zhǎng)度所對(duì)應(yīng)的濃度值就是待測(cè)組分的濃度。第146頁(yè)，課件共172頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（二）．多組分的同時(shí)測(cè)定：在含有多種組分的溶液中，如果要測(cè)定多個(gè)組分，可以根據(jù)情況的不同，采用不同的方法來(lái)進(jìn)行測(cè)定。第147頁(yè)，課件共172頁(yè)