原核表達(dá)操作步驟及注意事項(xiàng)

原核表達(dá)操作步驟及注意事項(xiàng)將克隆化基因插入合適載體后導(dǎo)入大腸桿菌用于表達(dá)大量蛋白質(zhì)的方法一般稱為原核表達(dá)。這種方法在蛋易于生長(zhǎng)和控制；用于細(xì)菌培養(yǎng)的材料不及哺乳動(dòng)物細(xì)胞系統(tǒng)的材料昂貴；有各種各樣的大腸桿菌菌株及與之匹配的具各種特性的質(zhì)?？晒┻x擇。但是，在大腸桿菌中表達(dá)的蛋白由于缺少修飾和糖基化、磷酸化等翻譯后加工，常形成包涵體而影響表達(dá)蛋白的生物學(xué)活性及構(gòu)象。(1)選擇標(biāo)志的編碼序列；(2)可控轉(zhuǎn)錄的啟動(dòng)子；(3)轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列(轉(zhuǎn)錄終止子，核糖體結(jié)合位點(diǎn))；(4)一個(gè)多限制酶切位點(diǎn)接頭；(5)宿主體內(nèi)自主復(fù)制的序列。獲得目的基因－準(zhǔn)備表達(dá)載體－將目的基因插入表達(dá)載體中(測(cè)序驗(yàn)證)－轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主菌－誘導(dǎo)靶蛋白(一)獲得目的基因PCR基因片段。A(二)構(gòu)建重組表達(dá)載體1、載體酶切：將表達(dá)質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶(同引物的酶切位點(diǎn))進(jìn)行雙酶切，酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳(三)獲得含重組表達(dá)質(zhì)粒的表達(dá)菌種1、將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α，根據(jù)重組載體的標(biāo)志(抗Amp或藍(lán)白斑)作篩選，挑取單斑，堿裂(四)誘導(dǎo)表達(dá)E如何做原核表達(dá)(prokaryoticexpression)念：一個(gè)完整的表達(dá)系統(tǒng)通常包括配套的表達(dá)載體和表達(dá)菌株，如果是的活性，表達(dá)產(chǎn)物的純化方法等等。主要?dú)w結(jié)在表達(dá)載白質(zhì)——胰島素。隨著內(nèi)切酶的發(fā)現(xiàn)和基因工程技、真核系統(tǒng)中進(jìn)行蛋白表達(dá)更為種表達(dá)系統(tǒng)后，原核系統(tǒng)仍是我在網(wǎng)上看到有人把原核表達(dá)技術(shù)分成四個(gè)等級(jí)：初次嘗試掃盲、亂棍打棗入以分析，實(shí)驗(yàn)也是可以改進(jìn)，但是竄改一下戈?duì)柼┑脑挘骸俺晒M(jìn)行分析，找到問(wèn)題的癥結(jié)是我們的實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵所在。在準(zhǔn)備進(jìn)行原核表達(dá)的時(shí)候需要考慮的因素很多，市面上可供選擇的載體、菌株也很多，要如何進(jìn)行正些載體進(jìn)行介紹，讓我們對(duì)其相關(guān)產(chǎn)品及其表達(dá)原理進(jìn)行了解，以方便實(shí)驗(yàn)設(shè)整的表達(dá)系統(tǒng)通常包括配套的表殊的誘導(dǎo)表達(dá)還包括誘導(dǎo)劑，如果是融合表達(dá)還比如表達(dá)量高低，目標(biāo)蛋白的活性，表達(dá)產(chǎn)物的純化方法等等。主要?dú)w結(jié)在表表達(dá)載體：我們關(guān)心的質(zhì)粒上的元件包括啟動(dòng)子，多克隆位點(diǎn)，終止密碼，融合Tag(如果有的話)，復(fù)制子，篩選標(biāo)記/報(bào)告基因等。通常，載體很貴，我們可以通過(guò)實(shí)驗(yàn)室之間交換得到免費(fèi)的載體。但是要小心，輾轉(zhuǎn)多個(gè)實(shí)驗(yàn)室和新霉素次之，通常是另一個(gè)載體的篩選標(biāo)記用。四環(huán)素，紅霉素和氯霉素等已經(jīng)日漸式微?？剐曰虻倪x擇要注意是否會(huì)對(duì)研究對(duì)象產(chǎn)生干擾，比如代謝研究中要留意抗性基因編碼的酶是否和代謝物相互作用。在表達(dá)篩選中要注意的，不知道是否有我們實(shí)驗(yàn)人員的功勞呢大家“隨便倒掉”已經(jīng)獲得氨芐抗性的大腸桿菌之前有沒(méi)有經(jīng)過(guò)煮沸或者消毒等處理呢從以前研究啟動(dòng)子的強(qiáng)弱，通常比較少關(guān)心或者用到報(bào)告基因吧。綠色熒光蛋白是最常用的報(bào)告基因了(注意選擇適用原核表達(dá)版本的GFP)，其他還有半乳糖苷酶啊，熒光素酶啊等等。一些融合表達(dá)Tag也有位點(diǎn)啟動(dòng)子：?jiǎn)?dòng)子的強(qiáng)弱是對(duì)表達(dá)量有決定性影響的因素之一。從轉(zhuǎn)錄模式上看是不適合表達(dá)一些對(duì)宿主細(xì)菌生長(zhǎng)有害的蛋白。因?yàn)檫^(guò)量或者有害的表達(dá)產(chǎn)物能表達(dá)目的產(chǎn)物。這種方法有助于避免菌體生長(zhǎng)前期高表達(dá)對(duì)菌體生長(zhǎng)的影另外也有啟動(dòng)子是組成型的，但是啟動(dòng)子所依賴的轉(zhuǎn)錄酶是誘導(dǎo)表達(dá)的，也屬融合表達(dá)：表達(dá)載體的多克隆位點(diǎn)上有一段融合表達(dá)標(biāo)簽(Tag)，表達(dá)產(chǎn)物為融合蛋白(有分N端或者C端融合表達(dá))，方便后繼的純化步驟或者檢測(cè)。對(duì)于特別小的分子建議用較大的Tag(如GST)以獲得穩(wěn)定表達(dá)；而一般的基因多選擇小Tag以減少對(duì)目的蛋白的影響。His-Tag是最廣泛采用的Tag。避免表達(dá)產(chǎn)物在細(xì)胞內(nèi)的過(guò)度累積而影響細(xì)胞生長(zhǎng)，或者形成包含體，要復(fù)性。通常這種分泌只是分泌到細(xì)胞膜特別是強(qiáng)啟動(dòng)子，目的蛋白來(lái)不及折疊含體顆粒，包含體容易純化但是復(fù)性效率不高。分泌表達(dá)可以NA放在啟動(dòng)子上開(kāi)始延伸的一段堿基序列，其中表達(dá)菌株：我們往往最容易忽視的一點(diǎn)。不同的表達(dá)載體對(duì)應(yīng)有不同的表達(dá)菌株，一些特別設(shè)計(jì)的菌株更有助于解決一些表達(dá)難題，這一點(diǎn)生物通會(huì)有專門(mén)注：以上各種特性是可以相互組合的，不是排他的！首先來(lái)一些大腸桿菌表達(dá)的基本概念：一個(gè)完整的表達(dá)系統(tǒng)通常包括配套的表達(dá)載體和表達(dá)菌株，如果是特殊的誘導(dǎo)表達(dá)還包括誘導(dǎo)劑，如果是融合表達(dá)還包括純化系統(tǒng)或者Tag檢測(cè)等等。選擇表達(dá)系統(tǒng)通常要活性，表達(dá)產(chǎn)物的純化方法等等。主要?dú)w結(jié)在表達(dá)載Oc導(dǎo)物，成本低，但是由于發(fā)酵過(guò)程中加熱升溫比較慢而影響誘導(dǎo)效果，而且熱導(dǎo)致大腸桿菌的熱休克蛋白激活，一些蛋白酶會(huì)影響產(chǎn)物穩(wěn)定。sT7啟動(dòng)子是當(dāng)今大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)的主流，這個(gè)功能強(qiáng)大兼專一性高的啟動(dòng)子A誘導(dǎo)條件下，可以使目的基因完全處于沉默狀態(tài)而不轉(zhuǎn)錄，從而避免目的基因的量，就可以控制產(chǎn)物表達(dá)量，某些情況下可以提高產(chǎn)物的可溶性部分。有何高招且看我為你一一道來(lái)：A酶導(dǎo)致的目的基因轉(zhuǎn)錄。pLacI工轉(zhuǎn)化也是同樣的原理。如果這還不夠，更為嚴(yán)i都不會(huì)影響后繼的表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化，前者表達(dá)的溶菌酶的水平要比后者低得多，節(jié)，增加蛋白表達(dá)的滯后時(shí)間，從而降低表達(dá)水平。通過(guò)幾種不同方法來(lái)巧妙真核表達(dá)載體和原核表達(dá)載體的區(qū)別為原核和真核表達(dá)系統(tǒng)所需的表達(dá)元件不同。(1)選擇標(biāo)志的編碼序列；表達(dá)的載體,它或原核生物中表達(dá)的必需表達(dá)元件;2)真核表達(dá)和原核表達(dá)的目的都是為了能夠大量獲得自己所需要的目的基因的)原核表達(dá)載體一般只能在原核生物中表達(dá)外源基因,但有些穿梭載體可以分別在真核和原核生物中表達(dá)它們的表達(dá)元件.原核表達(dá)將克隆化基因插入合適載體后導(dǎo)入大腸桿菌用于表達(dá)大量蛋白質(zhì)的方法一般稱為原核表達(dá)。這種方法在蛋白純化、定位及功能分析等方面都有應(yīng)用。大腸桿菌用于表達(dá)重組蛋白有以下特點(diǎn)：易于生長(zhǎng)和控制；用于細(xì)菌培養(yǎng)的材料不及哺乳動(dòng)物細(xì)胞系統(tǒng)的材料昂貴；有各種各樣的大腸桿菌菌株及與之匹配的具各種特性的質(zhì)?？晒┻x擇。但是，在大腸桿菌中表達(dá)的蛋白由于缺少修飾和糖基。表達(dá)載體在基因工程中具有十分重要的作用，原核表達(dá)載體通常為質(zhì)粒，典型(2)可控轉(zhuǎn)錄的啟動(dòng)子；(3)轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列(轉(zhuǎn)錄終止子，核糖體結(jié)合位點(diǎn))；(4)一個(gè)多限制酶切位點(diǎn)接頭；(5)宿主體內(nèi)自主復(fù)制的序列。獲得目的基因－準(zhǔn)備表達(dá)載體－將目的基因插入表達(dá)載體中(測(cè)序驗(yàn)證)－轉(zhuǎn)表達(dá)蛋白的分析－擴(kuò)增、純化、進(jìn)一步檢(一)獲得目的基因物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點(diǎn))，PCR循環(huán)獲得所需基因片段。段(二)構(gòu)建重組表達(dá)載體1、載體酶切：將表達(dá)質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶(同引物的酶切位點(diǎn))進(jìn)行雙酶切，(三)獲得含重組表達(dá)質(zhì)粒的表達(dá)菌種HAmp向及閱讀框架均正確,進(jìn)入下步操作。否則應(yīng)篩(四)誘導(dǎo)表達(dá)NA碼結(jié)構(gòu)的閱讀不能發(fā)生干擾。與實(shí)驗(yàn)方案TimeAMAuthor:bioerHits:388timesE.coli是重要的原核表達(dá)體系。在重組基因轉(zhuǎn)化入E.coli菌株以后，通過(guò)溫度的控制，誘導(dǎo)其在宿主菌內(nèi)表達(dá)目的蛋白質(zhì)，將表達(dá)樣品進(jìn)行SDS以檢測(cè)表達(dá)蛋白質(zhì)。提高外源基因表達(dá)水平的基本手段之一，就是將宿主菌的生長(zhǎng)與外源基因的表達(dá)分成兩個(gè)階段，以減輕宿主菌的負(fù)荷。常用的有溫度誘導(dǎo)和藥物誘導(dǎo)。本實(shí)驗(yàn)采用異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)外源基因表達(dá)。不同的表達(dá)質(zhì)粒表達(dá)方法并不完全相同，因啟動(dòng)子不同，誘導(dǎo)表達(dá)要根據(jù)具體情況而1、誘導(dǎo)表達(dá)材料(1)LB(Luria-Bertani))培養(yǎng)基酵母膏(Yeastextract)5g蛋白胨(Peptone)10gNaCl10gAgar1-2%蒸餾水(Distilledwater)1000mlpH適用范圍：大腸桿菌50mmol/LTris-CI(pH6.8)50mmol/LDTT2%SDS(電泳級(jí))%溴酚藍(lán)10%甘油2、大腸桿菌包涵體的分離與蛋白純化材料1)酶溶法(1)裂解緩沖液：50mmol/LTris-CI(pH8.0)1mmol/LEDTA100mmol/LNaCI(2)50mmol/L苯甲基磺酰氟(PMSF)。(3)10mg/mL溶菌酶。(4)脫氧膽酸。(5)1mg/mLDNaseI。2)超聲破碎法)2×SDS凝膠電泳加樣緩沖液：100mmol/LTris-HCI(pH8.0)100mmol/LDTT4%SDS%溴酚藍(lán)20%甘油三、實(shí)驗(yàn)方案1、外源基因的誘導(dǎo)表達(dá)(1)用適當(dāng)?shù)南拗菩詢?nèi)切核酸酶消化載體DNA和目的基因。(2)按連接步驟連接目的基因和載體，并轉(zhuǎn)化到相應(yīng)的宿主菌。定，確定無(wú)誤后進(jìn)行下一步。IPTGmmolL。繼續(xù)培養(yǎng)3-5h。mLgminL凝膠電泳上樣緩2、大腸桿菌包涵體的分離與蛋白質(zhì)純化1)細(xì)菌的裂解等。前三種方法屬機(jī)械破碎法，并且方法①、②已在工業(yè)生產(chǎn)中得到應(yīng)用，后三種方法在實(shí)驗(yàn)室研究中應(yīng)用較為廣泛。下面介紹酶溶法和超聲破碎法的實(shí)驗(yàn)步驟。(1)酶溶法常用的溶解酶有溶菌酶、β-1,3-葡聚糖酶、β-1,6-葡聚糖酶、蛋白酶、殼多糖酶、糖苷酶等。溶菌酶主要對(duì)細(xì)菌類有作用，而其他幾種酶對(duì)酵母作用顯著。主要步驟為：①4℃，5000rpm離心，15min，收集誘導(dǎo)表達(dá)的細(xì)菌培養(yǎng)液(100mL)。棄上清，約每(在冷室中進(jìn)行)。(2)超聲破碎法聲頻為15-20kHz的超聲波在高強(qiáng)度聲能輸入下可以進(jìn)行細(xì)胞破碎，在處理少量樣品時(shí)操作簡(jiǎn)便，液體量損失較少，同時(shí)還可對(duì)染色體DNA進(jìn)行剪切，大大降低液體的粘稠度。淀。注意事項(xiàng)：超聲破碎與聲頻、聲能、處理時(shí)間、細(xì)胞濃度、菌種類型等因素有關(guān)，應(yīng)根據(jù)具體情況掌握；超聲波破菌前，標(biāo)本經(jīng)3-4次凍溶后更容易破碎。2)包涵體的分離蛋白質(zhì)在細(xì)菌中的高水平表達(dá)，常形成相差顯微鏡下可見(jiàn)的細(xì)胞質(zhì)顆粒，即為包涵體，經(jīng)離心沉淀后可用Triton-X100/EDTA或尿素洗滌，若為獲取可溶性的活性蛋白，須將洗滌過(guò)的包涵體重新溶解并進(jìn)行重折疊。(1)試劑與配制%TritonX-10010mmol/LEDTA(pH8.0)(2)細(xì)胞裂解混合物12000g離心，15min,4℃；棄上清，沉淀用9×洗滌液l懸??；室10μL上清和重新懸浮的沉淀，加10μL2×凝膠電泳加樣緩沖液，進(jìn)行SDS。3)包涵體的溶解和復(fù)性(1)試劑與配制1mmol/LPMSF8mol/L尿素10mmol/LDTT沖液中。1mmol/LEDTA(pH8.0)50mmol/LNaCI2mmol/L還原型谷胱甘肽1mmol/L氧化型谷胱甘肽(2)用100μL緩沖液I溶解包涵體；室溫放置lh；加9×緩沖液Ⅱ，室溫放置30min，用LL加10L20μL重新溶解的沉淀進(jìn)行SDS。(1)不同的大腸桿菌表達(dá)載體帶有不同的啟動(dòng)子和誘導(dǎo)成分。實(shí)驗(yàn)者必須根據(jù)特定系統(tǒng)和用途決定相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)方案。(2)表達(dá)和檢測(cè)時(shí)，應(yīng)設(shè)置對(duì)照組，如轉(zhuǎn)化載體和非誘導(dǎo)細(xì)胞。(3)由于大腸桿菌中表達(dá)的重組蛋白質(zhì)缺少哺乳動(dòng)物細(xì)胞特異的翻譯后加工，所以，其生物活性無(wú)法與天然蛋白質(zhì)相提并論編輯本段1定義廣義的原核表達(dá)，是指發(fā)生在原核生物內(nèi)的基因表達(dá)。狹義的原核表達(dá)，常出現(xiàn)于生物工程中。是指通過(guò)基因克隆技術(shù)，將外源目的基因，通過(guò)構(gòu)建表達(dá)載體并導(dǎo)入表達(dá)菌株的方法，使其在特定原核生物或細(xì)胞內(nèi)表達(dá)。編輯本段2原核表達(dá)系統(tǒng)一個(gè)完整的表達(dá)系統(tǒng)通常包括配套的表達(dá)載體和表達(dá)菌株。如果是特殊的誘導(dǎo)表達(dá)還包括誘導(dǎo)劑，如果是融合表達(dá)還包括純化系統(tǒng)或者Tag檢測(cè)等等。選擇表達(dá)系統(tǒng)通常要根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康膩?lái)考慮，比如表達(dá)量高低，目標(biāo)蛋白的活性，表達(dá)產(chǎn)物的純化方法等等。表達(dá)載體為了獲得高水平的基因表達(dá)產(chǎn)物，人們通過(guò)綜合考慮控制轉(zhuǎn)錄、翻譯、蛋白質(zhì)穩(wěn)定性及向胞外分泌等諸多方面的因素，設(shè)計(jì)出了許多具有不同特點(diǎn)通常關(guān)心的表達(dá)載體質(zhì)粒上的元件包括：?jiǎn)?dòng)子、多克隆位點(diǎn)、終止密碼、融合Tag(如果有的話)、復(fù)制子、篩選標(biāo)記或報(bào)告基因等。復(fù)制子：通常表達(dá)載體都會(huì)選用高拷貝的復(fù)制子。pSC101類質(zhì)粒是嚴(yán)謹(jǐn)上，是表達(dá)載體常用的。通常情況下質(zhì)粒拷貝數(shù)和表達(dá)量是非線性的正相關(guān)，當(dāng)然也不是越多越好，超過(guò)細(xì)胞的承受范圍反而會(huì)損害細(xì)胞的生長(zhǎng)。如果碰巧需要2個(gè)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)化，就要考慮復(fù)制元是否相容的問(wèn)題。篩選標(biāo)記和報(bào)告基因：氨芐青霉素抗性是最常見(jiàn)的篩選標(biāo)記，卡那霉素或者是新霉素次之，通常是另一個(gè)載體的篩選標(biāo)記用。四環(huán)素，紅霉素和氯霉素等已經(jīng)日漸式微?？剐曰虻倪x擇要注意是否會(huì)對(duì)研究對(duì)象產(chǎn)生干擾，比如代謝研究中要留意抗性基因編碼的酶是否和代謝物相互作用。在表達(dá)篩選中要注意的問(wèn)題應(yīng)該就是LB倒板前加抗生素的溫度，溫度過(guò)高容易導(dǎo)致抗生素失效。對(duì)于做表達(dá)來(lái)說(shuō)，如果不是要研究啟動(dòng)子的強(qiáng)弱，通常比較少關(guān)心或者用到報(bào)告基因吧。綠色熒光蛋白是最常用的報(bào)告基因了。其他還有半乳糖苷酶、熒光素酶等。一些融合表達(dá)Tag也有報(bào)告基因的功能。素之一。從轉(zhuǎn)錄模終止子：轉(zhuǎn)錄終止子對(duì)外源基因在大腸桿菌中的高效表達(dá)有重要作用，即控制轉(zhuǎn)錄的RNA長(zhǎng)度提高穩(wěn)定性，避免質(zhì)粒上異常表達(dá)導(dǎo)致質(zhì)粒穩(wěn)定性下降。放在啟動(dòng)子上游的轉(zhuǎn)錄終止子還可以防止其他啟動(dòng)子的通讀，降低本底。轉(zhuǎn)錄終止子有兩類，Rho因子作用下使轉(zhuǎn)錄終止mRNA和根據(jù)模版上的對(duì)稱序列形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)而終止mRNA。常見(jiàn)的是rrnBrRNA操縱子的T1T2串連轉(zhuǎn)錄終止子。核糖體結(jié)合位點(diǎn)：?jiǎn)?dòng)子下游從轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)開(kāi)始延伸的一段堿基序列，其中能與rRNA16S亞基3'端互補(bǔ)的SD序列對(duì)形成翻譯起始復(fù)合物是必的，多數(shù)載體啟動(dòng)子下游都有SD序列，也有些載體沒(méi)有。表達(dá)菌株表達(dá)菌株是我們往往最容易忽視的一點(diǎn)。目前絕大多數(shù)重要的目的基因都是在大腸桿菌中表達(dá)的。不同的表達(dá)載體對(duì)應(yīng)有不同的表達(dá)菌株，一些特別設(shè)計(jì)的菌株更有助于解決一些表達(dá)難題。hbdxs的基因融合應(yīng)該是可行的。不過(guò)這樣構(gòu)建起來(lái)也是挺麻煩的，不如使用商品化直在這里等著看結(jié)果呢，謝謝體構(gòu)建時(shí)，需要根據(jù)你的實(shí)驗(yàn)要求選擇實(shí)驗(yàn)步驟：GFP基因克隆時(shí)，需要嚴(yán)格考查讀碼框的準(zhǔn)確性，不可以移碼。設(shè)計(jì)蛋白酶識(shí)別位點(diǎn)，其余相同。以便在進(jìn)行蛋白表達(dá)后，可以使用蛋白酶將wangjiali上測(cè)序，克隆的難度遠(yuǎn)比酶切后克隆至表達(dá)載體的難度要小，陽(yáng)性克隆率高，也比較有pET原核表達(dá)金標(biāo)準(zhǔn)同宿主菌和設(shè)計(jì)用于有效檢測(cè)和純化目標(biāo)蛋白的許多其它相關(guān)產(chǎn)品。pET系統(tǒng)是在大腸桿菌中克隆和表達(dá)重組蛋白的最強(qiáng)大系統(tǒng)。根據(jù)最初由Stu化選擇是必性最好的蛋白依賴于宿主細(xì)胞的背景、培養(yǎng)條件白活性最高的條件與產(chǎn)量最高的條件不一pETIPTGRNA轉(zhuǎn)錄載載體在讀碼pET載體表達(dá)的蛋白用途各種各樣。例如，表達(dá)量為分析級(jí)的蛋白可用于活性結(jié)構(gòu)研究、試劑或親和基質(zhì)制備。許多載體適合表達(dá)用于篩選或抗原制備的分結(jié)果。，表達(dá)水平可能受影響。在這些R，還應(yīng)該確定目標(biāo)蛋白的細(xì)胞定位和溶解特定目標(biāo)蛋白的溶解性取決于多種因素，包括各自的蛋白序列。在許多情況下，溶解性不是有或無(wú)的現(xiàn)象，載體、宿主菌和培養(yǎng)條件可被用來(lái)增加或減少一步折迭和活性所要求的二硫鍵。低溫誘導(dǎo)(15-25°C)也可增加可溶性目標(biāo)蛋目的，通常使用帶信號(hào)肽的載體。要的融操作，并易于通過(guò)蛋白雜交檢測(cè)。這些多肽(融合序列很小)，它們的檢測(cè)試a在低費(fèi)用親和純化中非常有用。它們也特別適用于重新折迭(特別是帶合切割位點(diǎn)(凝血酶、因子X(jué)a和腸激酶)的載體，可以在純化后選擇性去除一個(gè)白aaNusAcBDDNArecAendA于存強(qiáng)、完全誘導(dǎo)的表達(dá)水平(通常與pET載體相關(guān))。