大學(xué)《微生物檢驗(yàn)技術(shù)》考點(diǎn)精要、各章核心知識(shí)點(diǎn)及習(xí)題庫(kù)

大學(xué)《微生物檢驗(yàn)技術(shù)》考點(diǎn)精要、各章核心知識(shí)

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《微生物檢驗(yàn)技術(shù)》考試考點(diǎn)精要1

《微生物檢驗(yàn)技術(shù)》各章核心知識(shí)點(diǎn)（詳細(xì)完整版）42

《微生物檢驗(yàn)技術(shù)》名詞解釋、填空、問(wèn)答選擇題150

《微生物檢驗(yàn)技術(shù)》考試考點(diǎn)精要

1.生物學(xué)按界門(mén)綱目科屬種分類(lèi)，種是最小單位。病毒分類(lèi)：目、科、亞科、屬、

種。屬名一VRirus結(jié)尾的單詞，亞科名一VRirinae結(jié)尾的單詞,科名一VRiridao結(jié)尾的單詞。

目名一VRirales。2004年ICTV公布病毒分為：73個(gè)科、11個(gè)亞種、289個(gè)屬。

2.結(jié)核菌可利用甘油為碳源，梭狀芽胞菌可以氨基酸為碳源，流感嗜血桿菌要V,

X因子才能生長(zhǎng)。

3.藥物敏感試驗(yàn)：紙碟法、小杯法、凹孔法、試管法。常用單片紙碟法、試管稀釋

法（以抗菌藥物的最高稀釋度仍能抑制細(xì)菌生長(zhǎng)或殺菌管為終點(diǎn)，該管含藥濃度為最低

抑菌濃度MIC或最低殺菌濃度MBC）,兩值越低則表示越敏感。MIC與抑菌圈呈負(fù)相關(guān)，

即抑菌環(huán)直徑越大，MIC越小。

各藥敏紙片間距不少于24mm,距平板內(nèi)緣不小于15mm。

藥物敏感實(shí)驗(yàn)判定標(biāo)準(zhǔn)：抑菌圈直徑（毫米）：20以上極敏、15~20高敏、10~14中

敏、10以下低敏。不同的菌株、不同的抗生素紙片需參照NCCLs的標(biāo)準(zhǔn)或者CLSI標(biāo)準(zhǔn)。

多黏菌素抑菌圈；在9毫米以上為高敏，6—9毫米為低敏，無(wú)抑菌圈為不敏。

4.常用的免疫技術(shù)：酶免疫技術(shù)（EIA）、協(xié)同凝集試驗(yàn)、免疫熒光技術(shù)（IF）、對(duì)流

免疫電泳（CIE）、免疫印跡技術(shù)。

5.病原菌核酸的檢測(cè)：核酸雜交、PCR技術(shù)、基因芯片技術(shù)。

PCR技術(shù)一是選擇DNA或RNA體外擴(kuò)增技術(shù)，用標(biāo)本提取DNA為擴(kuò)增模板，選用一對(duì)

特異寡核甘酸為引物，PCR一般要經(jīng)歷三十多次循環(huán)，經(jīng)不同溫度變性93-94C（作用Imin

氫鍵斷裂形成單鏈DNA）、退火40-60℃（迅速冷卻30-60S引物與DNA模板結(jié)合，形成局部

雙鏈）、延伸70-75℃（在TaqDNA聚合酶作用下，以A、T、G、C四種脫氧核甘酸為原料，

從引物5'-3'端延伸，合成與模板互補(bǔ)的DNA鏈。），擴(kuò)增產(chǎn)物用溪乙咤染色的凝膠電泳。

其具有特異、快速、靈敏、特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便、能夠定量。引物是PCR特異性的決定因素，

PCR反應(yīng)中TaqDNA聚合酶、引物加量過(guò)多，可引起非靶序列擴(kuò)增。

變性DNA常發(fā)生一些理化及生物學(xué)性質(zhì)的改變：1）溶液粘度降低。2）溶液旋光性發(fā)生

改變。3）增色效應(yīng)。熱變性DNA一般經(jīng)緩慢冷卻后即可復(fù)性，此過(guò)程稱(chēng)之為"退火"，Tm低

25℃左右的溫度是復(fù)性的最佳條件。核酸實(shí)驗(yàn)中經(jīng)常以迅速冷卻至4℃以下方式保持DNA的

變性（單鏈）狀態(tài)。

基因芯片技術(shù)（DNA芯片、DNA微陣列）一主要過(guò)程：DNA微陣列的制備、樣品的制備、

靶分子和探針之間的雜交、雜交信號(hào)的檢測(cè)與分析。具有快速、敏感、高通量檢測(cè)平臺(tái)。

核酸雜交（基因探針雜交技術(shù)）一是指單鏈RNA和DNA或DNA和DNA或RNA和RNA,根

據(jù)堿基配對(duì)原則，借氫鍵相連而形成雜交分子的過(guò)程。雜交百分率＞70%069%）為高度同

源性，同源性在60%以上是一個(gè)種，同源性在60%—70%是同一種內(nèi)不同亞種，同源性在20%-

-60%同一屬內(nèi)不同菌種，同源性20%W不同屬的菌種。

AFLP的含義是一一擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性。有很大功能的DNA指紋技術(shù)。一種是罕見(jiàn)切

割酶，一種是常用切割酶。具有RFLP技術(shù)的可靠性和PCR技術(shù)的高效性。

6.細(xì)菌診斷流程有：雙岐索引法，表解法，數(shù)字編碼鑒定法。致病性島：由基因編碼決

定的一團(tuán)與致病性相關(guān)的基因組。

7.病原細(xì)菌確定原則：（郭霍Koch原則）1、從一種疾病病人中能有規(guī)律地發(fā)現(xiàn)一種

細(xì)菌2、能夠分離這種細(xì)菌獲得純培養(yǎng)3、把這種細(xì)菌的培養(yǎng)物引入易感動(dòng)物體內(nèi)，可以引

起與病人類(lèi)似的疾病4、在實(shí)驗(yàn)感染引起的疾病中仍然能夠分離同一種細(xì)菌。

8.桿菌肽用于A（敏感）與非A群鏈球菌的鑒定。0/129抑菌試驗(yàn)對(duì)弧菌有用而對(duì)氣單

胞菌無(wú)用。

9.奧普托欣試驗(yàn)：肺炎鏈球菌敏感。

10.雜交分：斑點(diǎn)，菌落原位，Southern（DNA）印跡，Northern（RNA,DNA）印跡。

11.L型細(xì)菌：細(xì)胞壁缺陷（形態(tài)多樣，染色不定，可過(guò)濾，滲透壓敏感，生化減弱等）

培養(yǎng)應(yīng)高滲透壓（3-5%氯化鈉、20%蔗糖），瓊脂濃度0.5以下半固體培養(yǎng)基。染色多為G

染陰性，形態(tài)不一（巨球形是特征），固定要用10g/L糅酸不能用火焰。

增殖：以二分裂、出芽、巨形體釋放顆粒方式。一般菌落有：油煎蛋樣（L）,顆粒型

（G）,絲狀菌落（F）,鑒定要點(diǎn)：染色易變多形性，生長(zhǎng)在增菌液中微渾，顆粒樣沉淀或

沿試管壁生長(zhǎng)，返祖現(xiàn)象。致病特點(diǎn)：慢性和反復(fù)發(fā)作性感染，致病物質(zhì)是毒素。L型細(xì)菌

在體內(nèi)體外都可形成。原生質(zhì)體與原生質(zhì)球都是細(xì)胞壁缺陷的細(xì)菌。

12.細(xì)菌的突變：基因突變（又稱(chēng)點(diǎn)突變；有堿基對(duì)的置換、插入、或缺失、錯(cuò)碼）、

染色體畸變（易位、倒位、重復(fù)、缺失）。突變：自發(fā)突變、誘發(fā)突變。質(zhì)粒在細(xì)菌的自

發(fā)突變中起重要作用。細(xì)菌質(zhì)粒在重組DNA技術(shù)中常用的載體。質(zhì)粒的分離提純使用酚處

理，用乙醇沉淀。

13.噬菌體一是感染細(xì)菌、真菌、放線菌或螺旋體等微生物的病毒，具有病毒的基本特

性，專(zhuān)性胞內(nèi)寄生，有嚴(yán)格的宿主特異性。由核酸和蛋白質(zhì)組成。大多數(shù)DNA噬菌體的DNA

為線狀雙鏈（有尾噬菌體的核酸）；RNA噬菌體的RNA為線狀單鏈（無(wú)尾噬菌體的核酸為環(huán)

狀單鏈DNA或線狀單鏈RNA）o對(duì)紫外線敏感10T5分鐘失去活性。噬菌體分毒性噬菌體、

溫和噬菌體（溶原性噬菌體）；毒性噬菌體以復(fù)制方式增殖，過(guò)程吸附、穿入、生物合成、

成熟與釋放，少脫殼。在液體培養(yǎng)基中使混濁菌液變澄清，在固體培養(yǎng)基上形成噬斑。溫和

噬菌體--是噬菌體基因組整合于宿主菌染色體中，有溶原性周期、溶菌性周期。噬菌體可以

根據(jù)不同細(xì)菌的表面受體來(lái)裂解目標(biāo)菌--是判定某些種類(lèi)病原體的重要依據(jù)。

14.肽聚糖的結(jié)構(gòu)由聚糖骨架，四肽側(cè)鏈和五肽交聯(lián)橋（G一無(wú)交聯(lián)橋）。磷壁酸為G

+特有，分壁和膜兩種。外膜層由脂多糖，脂質(zhì)雙層，脂蛋白組成。細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有核蛋白體（蛋

白合成地），核質(zhì)（主要遺傳物質(zhì)）質(zhì)粒，胞質(zhì)顆粒，是細(xì)菌蛋白質(zhì)和酶類(lèi)合成的重要場(chǎng)所。

鞭毛是由細(xì)胞質(zhì)伸出的蛋白性絲狀物。性菌毛僅有1?10根，毒力和耐藥質(zhì)粒都能通過(guò)它轉(zhuǎn)

移，有致病性。

15.免疫器官：骨髓、胸腺、脾、淋巴結(jié)、扁桃體、小腸集合淋巴結(jié)、闌尾和黏膜免疫

系統(tǒng)。免疫細(xì)胞：淋巴細(xì)胞、單核吞噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、嗜酸嗜堿性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、

血小板。免疫分子：補(bǔ)體、免疫球蛋白、細(xì)胞因子

中樞免疫器官：骨髓、胸腺、鳥(niǎo)類(lèi)法氏囊。外周免疫器官：淋巴結(jié)、脾和粘膜相關(guān)淋巴組織

特異性免疫：體液免疫、細(xì)胞免疫。

體液免疫：（B淋巴細(xì)胞介導(dǎo)，CD4*Th輔助，Th2細(xì)胞能分泌細(xì)胞因子IL-4、IL-5,

IL-6,IL-10）；效應(yīng)是抗體（Ab）；1、病毒中和抗體（不能直接滅活病毒，IgG、IgM、IgA）

2、血凝抑制抗體（HLAb）3、補(bǔ)體結(jié)合抗體。

IgG在體液中含量最多，分子量小是唯一能通過(guò)胎盤(pán)的抗體。IgM分子量大，是最早產(chǎn)

生的抗體，中作早期診斷。IgA存在黏膜分泌液中，在局部可阻止病毒侵入，能抵抗蛋白酶

的水解作用，具局部抗體。IgE可與肥大細(xì)胞膜上的Fc受體結(jié)合。

補(bǔ)體C：存在血清中，不耐熱，可輔助特異性抗體介導(dǎo)的溶菌作用，是抗體發(fā)揮溶細(xì)胞

作用的必要補(bǔ)充條件。由9種成份，11種蛋白組成。補(bǔ)體激活兩個(gè)途徑：傳統(tǒng)途徑（一）-

一被Ag-Ab免疫復(fù)合物IC活化，順序Cl、C4、2C、3C、5C、6C、7C、8C、C9.旁路途徑（二）

-一被細(xì)胞的脂多糖激活。補(bǔ)體激活--酶促級(jí)連反應(yīng)。

細(xì)胞免疫（T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)，效應(yīng)細(xì)胞：細(xì)胞毒性T細(xì)胞（CTL）、CD4Thi細(xì)胞、CD8'

毒性T細(xì)胞CTL）。Thl細(xì)胞誘導(dǎo)產(chǎn)生遲發(fā)型超敏反應(yīng)（DTH）

16.測(cè)特異性抗原最常用實(shí)驗(yàn)：凝集試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、免疫熒光試驗(yàn)、膠體金免

疫吸附試驗(yàn)

17.細(xì)菌營(yíng)養(yǎng)轉(zhuǎn)運(yùn)的方式有：離子，透性酶，磷酸酶。營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)入機(jī)體的方式：易化

擴(kuò)散、主動(dòng)運(yùn)轉(zhuǎn)（由透性酶完成）、基團(tuán)移位（糖類(lèi)由磷酸酶磷酸化進(jìn)入胞內(nèi)，不能再透出

菌體）。

18.細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的條件:充足的營(yíng)養(yǎng)、適宜的溫度、合適的酸堿度、必須的氣體環(huán)境。

細(xì)菌生長(zhǎng)的溫度極限-7—90℃：嗜冷菌最適溫為10?20℃,嗜溫菌為20?40℃,嗜熱菌為

50?60℃。適宜的酸堿度PH7.2—7.6。細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖分為四期：遲緩期、對(duì)數(shù)期、穩(wěn)定期、

衰亡期

19.（腸道桿菌）細(xì)菌的四種生化反應(yīng)：口弓I口朵（I）、甲基紅（M）、VP（V）、枸檬酸鹽

利用（C）,合稱(chēng)為IMViC。大腸桿菌呈++一，產(chǎn)氣桿菌呈一++。還需做糖發(fā)酵試驗(yàn)，KIA產(chǎn)

酸產(chǎn)氣，MIU+一一，有菌體（0）莢膜（K）鞭毛（H）三抗原。腸桿菌科分型多采用苯丙氨

酸脫氨酶和葡萄糖酸鹽試驗(yàn)?？梢删謩e接種克氏雙糖鐵（KIA）尿素靛基質(zhì)動(dòng)力（MIU）來(lái)

定屬。

細(xì)菌代謝所需能量主要以生物氧化作用而來(lái)。細(xì)菌新陳代謝的產(chǎn)物:熱原質(zhì)、毒素與酶、

色素、抗生素、細(xì)菌素。熱原質(zhì)除去的最好方法--蒸鐳。內(nèi)毒素（G-脂質(zhì)A）、外毒素（G+

產(chǎn)生的毒性蛋白質(zhì)產(chǎn)物，具有抗原性強(qiáng)、毒性強(qiáng)、作用特異性強(qiáng)、不耐熱、人工化學(xué)可脫毒

性，0.4%甲醛脫毒后形成類(lèi)毒素進(jìn)行人工免疫）。據(jù)親和性及作用靶點(diǎn)分為:神經(jīng)毒素、細(xì)

胞毒素、腸毒素。細(xì)菌的內(nèi)毒素一般由：脂質(zhì)A（主要成份），非特異性核心多糖，菌體特

異性多糖。一般7?10天后機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫。IgG和IgM能在血中直接中和病毒。

熱原質(zhì)：脂多糖，多由G-產(chǎn)生，耐高溫，可引起發(fā)熱反應(yīng)，高壓蒸氣滅菌（121℃20分鐘）

使其破壞。

20.細(xì)胞壁的作用：承受胞內(nèi)高滲壓、支持細(xì)胞膜、維持細(xì)菌形態(tài)；是鞭毛運(yùn)動(dòng)的支點(diǎn)。

細(xì)胞壁的主要成份：肽聚糖（又稱(chēng)黏肽、胞壁質(zhì)），是原核生物特有的成份，能破壞肽聚分

子結(jié)構(gòu)或抑制其合成的物質(zhì)，都有抑菌和殺菌作用。

G-菌細(xì)胞壁的主要成份：肽聚糖、脂蛋白、外膜、脂多糖（LPS）（類(lèi)脂A、核心多糖、

特異性多糖），菌體脂多糖（LPS）能引起發(fā)熱故稱(chēng)熱原質(zhì)，又稱(chēng)為細(xì)菌的內(nèi)毒素。

細(xì)胞膜的主要功能：物質(zhì)納泄、生物合成、呼吸作用、形成中介體。

細(xì)胞質(zhì)中的異染顆粒主要成份：RNA、多偏磷酸鹽

21.有芽胞破傷風(fēng)菌需沸水煮3h才殺死。水中加入2%碳酸鈉能將沸點(diǎn)提到1050c又能防

止金屬生銹。

22.紫外線波長(zhǎng)265?266nm時(shí)殺菌力最強(qiáng)。日光燈波長(zhǎng)約0.5即1。

23.濾菌器用于除菌的孔徑是0.22即1,另外以石棉板為濾板的金屬濾器稱(chēng)Seitz濾器

（蔡氏濾器）按濾孔大小分K：最大，澄清用，EK-S最小，可阻止大病毒通過(guò)EK：居中，除

去一般細(xì)菌。玻璃濾菌器分G1?G6,G5,G6兩型能阻止細(xì)菌通過(guò)。

24.高壓滅菌指示物：嗜熱脂肪芽胞桿菌（ATCC7053）,紫外線殺菌指示物：枯草芽

胞桿菌黑色變種（ATCC9372）.

25.細(xì)菌遺傳物質(zhì)主要在于染色體、質(zhì)粒和轉(zhuǎn)位因子中。質(zhì)粒：不依賴(lài)染色體而復(fù)制，

不相容性，轉(zhuǎn)移性，指令性，大多數(shù)質(zhì)粒在自然狀態(tài)下是一種閉合環(huán)狀雙鏈DNA.主要有耐

藥質(zhì)粒，Col質(zhì)粒（編碼腸毒素）Vi質(zhì)粒（編碼細(xì)菌與致病性有關(guān)的蛋白）。轉(zhuǎn)位因子為存

在于細(xì)菌染色體或質(zhì)粒上的一特異的核甘酸序列可在DNA中移動(dòng)，主要有三類(lèi)：插入順序

（最小的轉(zhuǎn)位因子），轉(zhuǎn)座子，轉(zhuǎn)座噬菌體。

質(zhì)粒載體具有特點(diǎn)：復(fù)制起點(diǎn)、抗菌素抗性基因、多種限制前的單一切點(diǎn)、較高的拷貝數(shù)

26.病毒的特性：1、只含一種核酸2、基因組復(fù)制3、缺乏完整的酶系統(tǒng)4、RNA病毒的

RNA經(jīng)反轉(zhuǎn)錄合成互補(bǔ)DNA（CDNA）。甘油（10%）或10%二甲基亞颯的血清作懸浮細(xì)胞的

液體在液氮中保存細(xì)胞，在干冰溫度（-70℃）和液態(tài)氮溫度（T96℃）下長(zhǎng)期保存其感染

性；將凍存在小管或安甑里的細(xì)胞以較慢的冷凍速率（1℃/分鐘）冷凍，直至一150℃,再

將這些小管貯存在一15（k—196℃的液氮中，解凍做法是：將封口的小管迅速放入37℃的

水中，直至所有的冰融化，然后打開(kāi)管口，將內(nèi)容物移入培養(yǎng)基。PH5-9穩(wěn)定；射線和紫外

線、X線、r線能滅活病毒。病毒學(xué)上常用的細(xì)胞類(lèi)型：原代細(xì)胞、二倍體細(xì)胞、傳代細(xì)胞。

27.超凈工作臺(tái)應(yīng)采用層流技術(shù)凈化空氣、選擇垂直氣流通風(fēng)方式。潔凈度可達(dá)百

級(jí)，只保護(hù)樣品。

28.菌體蛋白電離后帶負(fù)電荷；而堿性染料電離時(shí)染料離子帶正電。

29.染色程序及方法：制片一固定一媒染一染色一脫色一復(fù)染一水洗一干燥一鏡檢。

革蘭染色法：初染（草酸鍍結(jié)晶紫）、媒染（碘液）、脫色（95%酒精）、復(fù)染（番紅）。

抗酸染色法：5%石炭酸復(fù)紅、5%鹽酸酒精脫色、美蘭復(fù)染。

芽胞染色：菌懸液一孔雀綠一水浴15-20分鐘一涂片一干燥一固定一水洗脫色一番紅

或稀釋石炭酸復(fù)紅復(fù)染一水洗一晾干

莢膜染色：（負(fù)染色法、墨水法）。負(fù)染色法：制片（蒸儲(chǔ)水+菌）一干燥（晾干）一

染色（復(fù)紅）~水洗一干燥（晾干）一涂墨素。背景灰色、菌體紅色、莢膜無(wú)色透明

鞭毛染色-一鍍銀法；媒染A液一10%單寧酸10ml+5ml飽和硫酸鉀鋁水溶液+lml苯胺飽

和水溶液+5%氯化鐵水溶液成墨色。銀染B液一5%硝酸銀+濃氨水（比重0.88）成薄霧狀。

制片（蒸儲(chǔ)水+菌）f干燥（晾干）一染色（A液3—5分鐘）一水洗f干燥（晾干）f

染色（B液稍加熱分30—60秒）f水洗f干燥（晾干）。菌體深褐色、鞭毛褐色。

30.病毒吸附蛋白（VAP）；血凝素（HAs）。病毒的復(fù)制周期：吸附、穿入、脫殼、生

物合成及組裝、成熟和釋放

31.病毒突變株分：條件致死性突變株，空斑和宿主依賴(lài)性。遺傳型變異機(jī)制有突變，

基因轉(zhuǎn)移，重組。突變：突變率由復(fù)制的準(zhǔn)確度，DNA發(fā)生損傷的機(jī)會(huì)，及對(duì)損傷DNA修復(fù)

程度來(lái)決定。

32.非特異性免疫：干擾素（IFN）、NK細(xì)胞。干擾素（IFN）一具有廣譜抗病毒作用，

只能抑制病毒，即通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞合成抗病毒蛋白（AVP）發(fā)揮效應(yīng)。

33.小淋巴細(xì)胞分為：T細(xì)胞、B細(xì)胞、K細(xì)胞。T細(xì)胞來(lái)自骨髓，在胸腺成熟。在人體

血液中T細(xì)胞占淋巴細(xì)胞總數(shù)的60—70%,；在胸導(dǎo)管則占95%以上。B細(xì)胞第一個(gè)合成產(chǎn)

物是u鏈。

34.堿基的置換：喋吟換喋吟，嗒噬換嚏噬為轉(zhuǎn)換，喋吟換喀咤為顛換。影響基因表達(dá)

的因素有：調(diào)控部位，調(diào)節(jié)蛋白，效應(yīng)分子。

35.轉(zhuǎn)化：受體菌直接攝取供體菌提供的游離DNA片段，整合重組（與染色體重組）使

受體菌的性狀發(fā)生變異。一般有鏈，嗜血，芽胞菌有此功能。

36.G+菌等電點(diǎn)pl=2?3,G—菌等電點(diǎn)pl=4?5。RNA主要存在于細(xì)胞質(zhì)中占細(xì)菌干

重的10%,DNA存在于染色體和質(zhì)粒中。G+菌的感受態(tài)是由感受態(tài)因子（CF）的胞外信號(hào)誘

導(dǎo)的。

37.轉(zhuǎn)導(dǎo)：以噬菌體為媒介，將供體菌的基因轉(zhuǎn)移到愛(ài)體菌內(nèi)而致受體菌基因改變，分普

遍和局限。

38.接合：受體菌和供體菌直接接觸，供體菌通過(guò)性菌毛所帶的F質(zhì)?；蝾?lèi)似遺傳物質(zhì)轉(zhuǎn)

移到受體菌。

39.溶源性轉(zhuǎn)換：是噬菌體的DNA與細(xì)菌染色體重組，使宿主遺傳結(jié)構(gòu)發(fā)生變異。

40.原生質(zhì)融合：兩種經(jīng)過(guò)處理失去細(xì)胞壁的原生體混合和可發(fā)生融合后的雙倍體可

發(fā)生染色體間的重組。

41.基因重組可使基因再激活表現(xiàn)為：交叉復(fù)活和多重復(fù)活。

42.粘附素是細(xì)菌表面的蛋白質(zhì)有菌毛和非菌毛。進(jìn)入宿主：黏附，定植，侵入，轉(zhuǎn)歸。

毒力有侵襲力和毒素。

43.侵襲力：菌體表面結(jié)構(gòu)，菌毛，侵襲性酶（凝固前，透明質(zhì)酸酶，鏈激酶，膠原酶

等）。是指病原突破宿主機(jī)體的防御功能，并能在體內(nèi)定居、繁殖和擴(kuò)散的能力。

45.細(xì)菌種的科學(xué)命名采用拉丁文種屬雙命名法，前一字為屬名，名詞，后一為種名，

形容詞。目前國(guó)際上普遍采用伯杰分類(lèi)系統(tǒng)，也有用CDC（USA）。目前以細(xì)菌細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)

特點(diǎn)作最高一級(jí)分類(lèi)依據(jù)將原核界分為薄，堅(jiān)，軟，疵壁四門(mén)?？疲瑢?，種分類(lèi)主耍依靠生

化特性和抗原結(jié)構(gòu)。

46.顯微鏡的分辯率為波長(zhǎng)一半。熒光顯微鏡的光源為超高壓汞燈（50—200W）。

47.油浸物鏡的工作距離一般是0.2mm。普通光學(xué)顯微鏡不能觀察細(xì)胞和細(xì)菌的亞結(jié)構(gòu)。

相差顯微鏡特殊裝置一一環(huán)狀光闌、相板，利用光干涉現(xiàn)象。適用于對(duì)活體細(xì)胞生活狀態(tài)下

的生長(zhǎng)、運(yùn)動(dòng)、增殖情況、及細(xì)微結(jié)構(gòu)的觀察。用綠色濾光片。

48.不能立刻接種的血應(yīng)用SPS（氯化鈉溶液）抗凝。懷疑細(xì)菌性心內(nèi)膜炎時(shí)血培養(yǎng)不

少于三次。

49.腸桿菌科的強(qiáng)選擇（SS瓊脂）弱選擇（EMB,麥康凱）。

50.直接鏡檢2h報(bào)告，最后鑒定和藥敏一般不過(guò)3天，除血外，必須在24h內(nèi)預(yù)報(bào)

53.a溶血是草綠色，B溶血是透明環(huán)，Y溶血紅細(xì)胞不溶解，雙環(huán)。

54.細(xì)菌數(shù)量達(dá)106~107CFU/ml時(shí)培養(yǎng)肉湯才見(jiàn)混濁。

55.血培養(yǎng)中有105菌落形成單位（CFU）/ML時(shí)才能通過(guò)革蘭氏染色檢出細(xì)菌。

56.AMS系統(tǒng)是目前微生物鑒定中最常用的自動(dòng)化儀器。

57.突變種純系動(dòng)物：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物正常染色體中某個(gè)基因發(fā)生了變異的具有各種遺傳缺

陷的突變品系動(dòng)物。

58.純***動(dòng)物：無(wú)計(jì)劃隨意交配的動(dòng)物。近交系動(dòng)物：采用兄妹交配（或親子交配）

繁殖20代以上的純品系動(dòng)物。無(wú)菌動(dòng)物：體表腸道內(nèi)無(wú)菌、體內(nèi)無(wú)抗體。悉生動(dòng)物：給出

無(wú)菌動(dòng)物引入已知的5?17種正常腸道菌的動(dòng)物。

59.小白鼠對(duì)肺鏈，破傷外毒素敏感，豚鼠對(duì)結(jié)核白喉易感，貓對(duì)金葡萄菌腸毒敏感。

測(cè)定病原體的感染性最好選用無(wú)菌動(dòng)物或悉生動(dòng)物。

60.菌種保存：“凍干”保存一穩(wěn)定劑（脫脂乳、蔗糖）。凍干菌種只能使用一次，凍

干菌種打開(kāi)后需要以傳代保存形式保留工作菌種。凍干菌種在使用時(shí)須“復(fù)蘇”且須傳代才

能恢復(fù)原生長(zhǎng)特性。低溫保存：-20℃或-80℃+甘油作穩(wěn)定劑。菌種取出須置于干冰或預(yù)冷

的鉛質(zhì)容器內(nèi)，用完立即放回不可菌種解凍。冷凍干燥保存法是最有效的方法，利用各種斜

面和半固體加石蠟油是最常用和最簡(jiǎn)便的方法，一般不含糖，不用液體。

61.在細(xì)菌生長(zhǎng)到足夠量時(shí)加入抑制蛋白質(zhì)合成的抗生素，在細(xì)菌停止繁殖后質(zhì)粒還

在復(fù)制，可以提高質(zhì)粒的收獲量。

62.糞便嘔吐物應(yīng)接種高鹽卵黃或高鹽甘露醇瓊脂，觸酶陽(yáng)性，凝固酶陽(yáng)性玻片法篩

選，試管法確證。必須做苯嗖西林的敏感試驗(yàn)。

63.真菌，霍亂，銅綠及糞堿需在室溫保存，而腦膜炎，淋球，初次分離的流感嗜血菌

保存于37℃。每轉(zhuǎn)種三代要鑒定一次。

65.葡萄球菌：產(chǎn)生脂溶性色素，多數(shù)分解甘露醇產(chǎn)酸液化明膠和產(chǎn)生血漿凝固酶。蛋

白抗原（A蛋白）種屬特異無(wú)型特異，多糖抗原（A,B,C）是半抗原，有型特異。是抵抗力

最強(qiáng)的無(wú)芽胞菌。

66.布魯司菌：無(wú)鞭無(wú)芽G-呈散沙狀，S型有莢膜，專(zhuān)性需氧，抵抗力強(qiáng)，37°C,

PH6.6~6.8,血液、血清、肝浸液可促進(jìn)生長(zhǎng)，48小時(shí)形成微小，無(wú)色透明光滑凸起菌落。

6個(gè)種19個(gè)生物型，對(duì)人致病是羊、牛、豬種。血清凝集試驗(yàn)（SAT）是常用診斷實(shí)驗(yàn)，虎

紅平板凝集試驗(yàn)（RBPT）,補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（CFT）、免疫熒光試驗(yàn)（IFT）等。靜脈血3—5毫

升。用肝浸液瓊脂培養(yǎng)基、蛋白陳、土豆浸液瓊脂等。動(dòng)物分離一豚鼠。生化特征：分解尿

素、產(chǎn)生硫化氫。

診斷標(biāo)準(zhǔn)：血清試管凝集試驗(yàn)（SAT）1：100++以上，補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（CFT）：1；10++

67.萊姆病原：伯道疏螺旋體引起萊姆病，細(xì)胞結(jié)構(gòu)：原生質(zhì)柱、表層、外膜、鞭毛。

微嗜氧G-,能自身合成類(lèi)脂化合物、主要脂肪酸，并將喋吟堿結(jié)合到核酸中，但不能合成長(zhǎng)

鏈脂肪酸，發(fā)展酵代謝產(chǎn)物--乳酸。婢傳播媒介，鼠主要宿主動(dòng)物，標(biāo)本在-20—4℃運(yùn)送。

標(biāo)本制成懸液，暗視野顯微鏡20X10或40X10下檢查。

病原分離：接種BSK培養(yǎng)基33℃培養(yǎng)。用兔抗B31特異性多克隆抗體進(jìn)行間接免疫熒

光抗體試驗(yàn)（IFA）,或ELISA、WB---最終確診方法。

68.鉤端螺旋體：原核細(xì)胞型微生物，雙股DNA。需氧或微需氧，是致病性螺旋體中唯

一能人工培養(yǎng)的。其中鼠類(lèi)和豬為主要的傳染源和儲(chǔ)存宿主，通過(guò)人的皮膚黏膜侵入。常用

柯夫培養(yǎng)基或EMJH培養(yǎng)基，需加入10%兔血清或牛血清，培養(yǎng)液透明有輕度乳光，搖動(dòng)時(shí)

有云霧狀混濁。G-Fontana鍍銀染色成棕色。對(duì)酸堿敏感，最適是PH7.2?7.5,低于6.8,

高于7.7生長(zhǎng)不良，最適溫28?30℃,12h分裂一次。電鏡下基要本結(jié)構(gòu)：柱形原生質(zhì)體、

內(nèi)鞭毛、外膜

標(biāo)本：血液、腦脊液在發(fā)病后10天內(nèi)，出現(xiàn)發(fā)熱但未用藥前，不能即時(shí)送檢，血液用

不含枸椽酸鈉抗凝5-20C保存，1周內(nèi)接種。2周取尿液則用1%牛血清白蛋白保存，用磷酸

鹽緩沖液稀釋取50微升接種到5毫升培養(yǎng)基中每個(gè)稀釋度2管，每管中先加入30微克新

霉素濾紙片或每毫升培養(yǎng)基加5-氟尿喀咤200-400微克。暗視野顯微鏡檢查每周1次連5

周，陰則每月2次連4月。

病原鑒定：血清群用顯微凝集試驗(yàn)（MAT）,血清型用交叉凝集吸收試驗(yàn)，分子生物學(xué)

技術(shù)。

69.致病性鏈球菌：沉淀生長(zhǎng)（肺鏈為混濁），在含腹水的培養(yǎng)物上生長(zhǎng)良好，溶血株

呈絮狀或顆粒狀生長(zhǎng)，不溶血株呈均勻混濁生長(zhǎng)。

（-）化膿性鏈球菌：標(biāo)本1天內(nèi)送，不超過(guò)2天。THB增菌肉湯、5%脫纖維羊血的胰

酶消化大豆瓊脂培養(yǎng)基,血液和腦脊液應(yīng)先增菌后接種平板，膿液、咽拭子直接種于血平板。

A群鏈對(duì)桿菌肽敏感青霉素G為首選，抑環(huán)＞10cm敏感。（90%對(duì)人致?。?/p>

B群鏈CAMP試驗(yàn)陽(yáng)性（鑒定指標(biāo)35℃卵育），馬尿酸鈉水解試驗(yàn)陽(yáng)性

D群鏈七葉甘水解試驗(yàn)變黑色為陽(yáng)性，6.5%氯化鈉生長(zhǎng)試驗(yàn)（黃色）

快速檢測(cè)：酶標(biāo)免疫測(cè)定法、PCR（A群鏈致熱外毒素A,B,C基團(tuán)speA,speB,speC各

溶血素0基團(tuán)si。）?？谷苎?抗體--溶血法、膠乳凝集法。

（二）肺炎鏈球菌：37.5℃pH7.4—7.6初次C02卵育，在含3%?5%的兔血清中生長(zhǎng)

良，血平板上草綠色a溶血環(huán)。如G+具有矛頭狀雙球菌可初步診斷。培養(yǎng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)自溶

管底澄清，以?shī)W普托欣試驗(yàn)、分解菊糖，膽汁溶菌陽(yáng)性區(qū)別于甲型溶血性鏈球菌。主要抗原

有：蛋白質(zhì)抗原、多糖抗原、核蛋白抗原。膽汁溶菌試驗(yàn)一0.5ml生理鹽水細(xì)胞懸液制成相

當(dāng)于0.5麥?zhǔn)蠁挝坏拿芏葮?biāo)準(zhǔn)。

取細(xì)胞懸液0.25ml+0.25ml2%的脫氧膽酸35—37℃培養(yǎng)2小時(shí)，管液清澈或濁度消失為陽(yáng)

性。

氨基糖首類(lèi)合用，B溶鏈致病性最強(qiáng)，a溶鏈為條件致病菌。幾乎所有的肺鏈對(duì)Optochin

敏感。

（三）豬鏈球菌：人感染致?。耗X膜炎、心內(nèi)膜炎、敗血癥、中毒性休克。35個(gè)血清型。

2型致病其屬于R群，屬特異基團(tuán)tuf、種特異基團(tuán)16SrRNA

70.腸球菌屬：能在高鹽（6.5%NaCl）高堿（pH9.6）40%膽汁培養(yǎng)基上和10?45℃

生長(zhǎng)，是G+菌中僅次于葡萄球菌的重要院內(nèi)感染病菌。臨床上分離最高的是糞腸球菌，可

分慶霉素高耐藥和低耐藥，一般用內(nèi)酰胺類(lèi)和氨基糖昔類(lèi)聯(lián)合。

71.腦膜炎奈瑟菌：腦液中位于中性細(xì)胞內(nèi)，大多能分解葡萄糖、麥芽糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，

具有氧化酶和觸酶。能產(chǎn)生自溶菌不宜冰箱應(yīng)立即保溫送檢，冬末春初為流行高峰，青霉素

G為首選。依據(jù)莢膜分13個(gè)血清型，主要是ABC三個(gè)血清型及W135、Y。通常采3管腦脊液

（化學(xué)、微生物、細(xì)胞學(xué)）含添加劑的巧克力平板（CAP）和血瓊脂平板（BAP）,如不能立

即接種，，則接種至預(yù)熱35℃的轉(zhuǎn)運(yùn)一分離（TI）培養(yǎng)基中保溫通氣，可保存7天，血液采

集后1分鐘內(nèi)注入肉湯中。

鏡檢：腦脊液2000r/min離心20分鐘，沉淀物鏡檢腦膜炎雙球菌常在多核白細(xì)胞內(nèi)或

細(xì)胞外。病原鑒定：Kovac氧化酶實(shí)驗(yàn)10秒內(nèi)呈紫色陽(yáng)性反應(yīng)。

快速檢測(cè)：乳膠凝集試驗(yàn)測(cè)抗原。上清液可一20度凍存長(zhǎng)時(shí)間。

72.淋球奈瑟菌：G-人類(lèi)是唯一天然宿主和傳染源。不耐干燥，35—36℃,2.5—5%C02

生長(zhǎng)，最適PH7.5,對(duì)糖類(lèi)生化最低只能發(fā)酵葡萄糖，主要有菌毛蛋白，脂多糖，外膜蛋白抗

原。細(xì)菌培養(yǎng)是目前世衛(wèi)推薦的唯一方法，用培養(yǎng)法查女病人宮頸口表面分泌物。培養(yǎng)基中

應(yīng)含萬(wàn)古霉素、多粘菌素B。標(biāo)本接種在巧克力血瓊脂平板或T-M培養(yǎng)基。急性期淋病菌常

在白細(xì)胞內(nèi)，慢性期淋病菌常在白細(xì)胞外，在中性粒細(xì)胞內(nèi)有G-性雙球菌具有診斷價(jià)值。

73.梅毒病原：菌體形似彈簧，運(yùn)動(dòng)活潑，兩端尖直，有細(xì)胞壁和膜，原生質(zhì)圓柱體且

有3-4根周漿鞭毛，G-抵抗力極弱，對(duì)青霉素、四環(huán)素、紅霉素、碎劑敏感。

標(biāo)本：I期梅毒取下疳滲出液（20分鐘內(nèi)查）；H梅毒取梅毒疹滲出液或局部淋巴結(jié)抽

出液；先天性梅毒取臍血；神經(jīng)梅毒取腦脊液。

鏡檢：新鮮標(biāo)本加蓋片暗視野顯微鏡下檢查，漿液不能含有紅細(xì)胞、微生物、組織碎片。

熒光標(biāo)記、ELISA普光下查，鍍銀染色螺旋體染成棕褐色光鏡下查。

病原分離：人工培養(yǎng)基上不易生長(zhǎng)，接種兔睪丸或眼前房?jī)?nèi)繁殖，并能保持毒力?34-

35℃,分裂為30-33小時(shí)。

抗體檢測(cè)：產(chǎn)生特異性抗體、反應(yīng)素抗體（表面脂質(zhì)引起），有非密螺和密螺抗原試驗(yàn)。

初篩試驗(yàn)和療效觀察--非密螺抗原試驗(yàn)，正常牛心肌心脂質(zhì)為抗原測(cè)患者血清中反應(yīng)素，

判斷是否復(fù)發(fā)及再感染。最常用VDRE、RPR試驗(yàn)。VDRE以膽固醇為載體。玻片凝集可定性

和半定量，低倍觀察。RPR用未處理活性炭顆粒吸附VDRE抗原。專(zhuān)用紙片圈內(nèi)（18mm）可

定性和半定量。

密螺抗原試驗(yàn)（證實(shí)試驗(yàn)）--FTA-ABS作為診斷梅毒“金標(biāo)準(zhǔn)”試驗(yàn)。它是間接熒光抗

體檢測(cè)方法，

75.腸產(chǎn)毒型（ETEC）：作用小腸，霍亂樣腸毒腹瀉，是5歲以下嬰幼兒和旅游者腹瀉

的重要病原菌；腸毒素有耐熱和不耐熱，LT-I是引起人類(lèi)主要的致病物質(zhì)，對(duì)熱不穩(wěn)定，

65C30分鐘被破壞，A亞單位是毒素的活動(dòng)部位。耐熱腸毒素（ST）是通過(guò)激活腸黏膜細(xì)胞

上的鳥(niǎo)甘環(huán)化酶，使胞內(nèi)CGMP量增多而導(dǎo)致腹瀉。

腸致病型（EPEC）：作用小腸，水樣腹瀉，是嬰兒腹瀉主要病原菌。

腸侵襲性型（EIEC）：作用大腸，志賀樣腹瀉，很像菌痢，發(fā)熱腹痛膿血便及里急后重。

腸出血型（EHEC）：其中0157：H7可引起出血性腹瀉和溶血性尿毒癥，是4歲以下兒童

急性腎功能衰的主要病原，6、7、8三月最高，北美多見(jiàn)。毒力因子：志賀樣毒素、溶血素、LEE

毒力島、Vero毒素。

腸集聚型（EAggEC）：嬰兒和旅游者腹瀉持續(xù)性水樣腹瀉。

76.志賀氏菌分：痢疾（A群），福氏（B群），鮑氏（C群）（半透明、光滑型菌落），

宋內(nèi)（D群）（扁平粗糙型菌落）四群，我國(guó)以福氏和宋內(nèi)常見(jiàn)，無(wú)莢無(wú)芽無(wú)鞭，KIA：K/A,

產(chǎn)氣+/一，H2S-,MIU-+/一一，最后可用診斷血清作群型鑒定

群血清型葡萄糖乳糖甘露醇鳥(niǎo)氨酸脫竣酶

痢疾志賀菌A1-10+---

福氏B1-6+-+-

鮑氏C1-18+-+-

宋內(nèi)D1+-++只有一個(gè)血清型，I相和II相

加熱60C10分鐘殺死，有強(qiáng)烈的內(nèi)毒素，作用于腸黏膜，使其通透性增高。糞-口傳播，

只局限于腸道，一般不進(jìn)侵入血，發(fā)熱、腹痛、水樣腹瀉，后轉(zhuǎn)為膿血黏液便，伴有里急后

重、下腹部疼痛。急性中毒性痢疾多見(jiàn)小兒。糞便不能即時(shí)送檢，需保存在30%甘油緩沖鹽

水中。志賀菌表達(dá)黏附、穿透上皮細(xì)胞、胞內(nèi)繁殖、及擴(kuò)散等活性的基因存在于大質(zhì)粒上。

測(cè)志賀菌的侵襲力用Sereny試驗(yàn)，接種于豚鼠眼結(jié)膜囊內(nèi)。

快速診斷：1、免疫染色法2、免疫熒光菌法3、協(xié)同凝集試驗(yàn)4、膠乳凝集試驗(yàn)5、分子生

物學(xué)方法

77.傷寒與副傷寒菌：無(wú)芽無(wú)莢有鞭毛（除雞沙門(mén)）多數(shù)有菌毛，112s可陽(yáng)性，傷寒菌

產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，菌體抗原有58種，鞭毛抗原有兩相即特異性和共同，表面抗原有Vi,M,5三

種，變異有：S-R,H-0,v-w,相位。

傷寒沙門(mén)菌、甲型副傷寒沙門(mén)菌、肖氏沙門(mén)菌、希氏沙門(mén)菌。所致疾病4類(lèi)型：

（1）、腸熱癥：第一次菌血癥，發(fā)熱、不適、全身痛，與菌的感染劑量有關(guān)，通常潛

伏期為2周，第二次菌血癥，高熱7-10天，緩脈、肝脾腫大，皮膚出現(xiàn)玫瑰疹，外周白細(xì)

胞明顯下降，嚴(yán)重者有出血或腸穿孔等并發(fā)癥。

（2）、胃腸炎（食物中毒）：由攝入大量＞108被鼠傷寒沙門(mén)菌（常引起食物中毒）、

豬霍亂沙門(mén)菌、腸炎沙門(mén)菌污染的食物引起。致病機(jī)制：細(xì)菌釋放的內(nèi)毒素。發(fā)熱、惡寒、

嘔吐、腹痛、水樣腹瀉。

（3）、敗血癥：4、無(wú)癥狀帶菌者：

標(biāo)本：第1-2周采血，接種于室溫＞20℃平衡血培養(yǎng)瓶，不能超過(guò)2小時(shí)送樣，不能即

時(shí)送樣放在室溫，切勿放冰箱；第3-4周取糞便；第3周起還可取尿液；整病程均可取骨髓

液。

病原分離：血液和骨髓須按1：10加入血液需氧培養(yǎng)瓶或膽鹽葡萄糖肉湯增菌后接種于

血瓊脂平板或營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，SS一雙糖或三糖鐵（TSI）培養(yǎng)基。糞便接種麥康凱（MaC）/DHL、

SS平板上，或SF增菌。

病原鑒定：凡符合克氏雙糖鐵（KIA）斜面或三糖鐵（TSI）：不發(fā)酵乳糖、蔗糖，發(fā)酵

葡萄糖、麥芽糖甘露醇，產(chǎn)氣+/一，H2S+,n引跺尿素V-P均一，硝酸鹽還原陽(yáng)性，多價(jià)血

清陽(yáng)性的為沙門(mén)屬。尿素酶試驗(yàn)與變形桿菌區(qū)別。胞內(nèi)寄生菌，臨床上主要為不明原因持續(xù)

發(fā)熱。尿素半固體（MIU）。A-F群沙門(mén)菌（0）多價(jià)血清作玻片凝集，陽(yáng)性則選用02、04、

07、09因子定群。

血清學(xué)診斷：肥達(dá)試驗(yàn)，一般傷寒沙門(mén)菌0凝集效價(jià)＞1：80、H＞1：160,副傷寒H＞

1：160具有診斷意義。新一代疫苗：傷寒Vi莢膜多糖疫苗。

78.變形桿菌屬：普通，奇異，產(chǎn)黏。普羅威登斯屬有：產(chǎn)堿，斯氏，雷極，摩根菌只

有摩氏摩根菌。有明顯多形性，呈球狀或絲狀，生長(zhǎng)于10?43℃,在固體培養(yǎng)基上普通和奇

異呈遷徙生長(zhǎng)現(xiàn)象，三屬氧化酶陰性，苯丙氨酸脫氨酶陽(yáng)性G-桿菌，加入1%石炭酸或苯乙

醇使終濃度為lg/L和0.25%可抑制變形菌遷徙樣生長(zhǎng)。能迅速分解尿素以區(qū)別沙門(mén)菌，外

斐試驗(yàn)輔助診斷立克次體

79.耶爾森氏菌（鼠疫）：有7種，鼠疫，假結(jié)核，小腸與致病有關(guān)。帶有3種質(zhì)粒，

主要的致病決定基因由質(zhì)粒和染色體上的毒力島編碼。

鼠疫耶爾森：有莢無(wú)芽無(wú)鞭，兩極濃染，28?30℃,pH6.9?7.1,液體中培養(yǎng)好，底部

可有鐘乳石樣，常用1%溶血的胰酶消化肉瓊脂（赫氏瓊脂）加入亞硫酸鈉或脫纖維血有刺

激生長(zhǎng)，用腐敗材料分離，培養(yǎng)基中加入甲紫、膽酸鈉抑制雜菌，龍膽紫亞硫酸鈉為其選擇

性培養(yǎng)基，3%氯化鈉上生長(zhǎng)呈多形性。

小腸耶爾森：無(wú)動(dòng)無(wú)芽無(wú)莢G-,25℃有動(dòng)力，有周鞭毛，最適溫20?28℃,VP試驗(yàn)

25℃陽(yáng)性，37℃陰性，KIA只利用葡萄糖，MIU22℃動(dòng)力陽(yáng)性37℃陰性。假結(jié)核：25℃有周

鞭毛有動(dòng)力37℃無(wú)動(dòng)力，最適溫30℃,pH6?8。血清檢測(cè)的抗體是F1

經(jīng)典鼠疫“四步檢驗(yàn)”：顯微鏡檢查（美蘭染色）、培養(yǎng)、鼠疫噬菌體裂解試驗(yàn)（早期

為暗黃的灰色表面粗糙的顆粒樣突起，在血培養(yǎng)上有花邊狀薄而透明不整齊的邊緣菌落。48

小時(shí)為灰白色中央突起菌落，）、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)（小鼠、豚鼠）。

快速檢測(cè)；PCR（高度特異性基因：fra、pla、inu、hms）、免疫檢測(cè)（Fl抗原）

所有疑似鼠疫病人都需采取血標(biāo)本，疑似腺鼠疫病人取腫大淋巴結(jié)穿剌液；肺鼠疫病人

取咳痰、咽拭子標(biāo)本。

80.枸檬酸桿菌：有弗勞地，異型，無(wú)丙二酸鹽。只有弗勞地靛基質(zhì)一，H2S+,僅異

型的丙二酸鹽+,B-半乳糖甘酶，賴(lài)氨酸脫竣酶，枸檬酸利用三試驗(yàn)：枸檬酸菌+一+,

沙門(mén)―/+++,愛(ài)德華一+一。

81.膠體金標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用領(lǐng)域：免疫層析技術(shù)。其優(yōu)點(diǎn)--標(biāo)記物非常穩(wěn)定。

82.細(xì)菌明膠液化試驗(yàn)原理--某些細(xì)菌產(chǎn)生胞外酶-明膠酶，能使明膠分解為氨基酸而

液化。

氧化酶試驗(yàn)一用于腸桿菌科與假單胞菌的鑒別。膽汁溶菌試驗(yàn)一用于肺炎鏈球菌與甲型

鏈球菌鑒別

0NPG試驗(yàn)一遲緩分解乳糖的細(xì)菌試驗(yàn)為陽(yáng)性。

83.沙雷菌：最適溫10?36℃,4%氯化鈉下可長(zhǎng)，產(chǎn)生靈紅霉素（非水溶）和毗段酸

（水溶），關(guān)鍵生化是DNA+和葡萄糖酸鹽十。

85.霍亂菌：呈弧狀或逗點(diǎn)狀，米由樣糞便作懸滴觀察，細(xì)菌呈穿梭樣或流星狀運(yùn)動(dòng)；

糞便涂片鏡檢見(jiàn)排列如“魚(yú)群”狀G一菌，耐堿不耐酸，可繁殖pH6.0-9.2。最適宜生長(zhǎng)pH7.2-

7.4。血清分型可分為AB的小川型，AC的稻葉型，ABC的彥島型

病原分離：水樣便直接接種在硫代硫酸鹽一檸檬酸鹽一膽鹽一蔗糖平板（TCBS）上37℃

形成較大黃菌落，在含亞硫酸鉀或慶大霉素平板選擇性平板上呈灰褐色。食品及水樣常用堿

性蛋白陳水增菌培養(yǎng)后再接種，鈉離子可剌激生長(zhǎng)，但在＞8%NaACI中不生長(zhǎng)。常用的保存

或運(yùn)送及增菌用堿性蛋白陳水，文-臘二氏，卡-布。

病原鑒定：01群無(wú)芽胞，無(wú)莢膜，單一鞭毛；0139群菌體周?chē)幸粚颖容^薄的莢膜。

測(cè)定耐熱的特異性0抗原，用玻片凝集或ELISA鑒定，血清效價(jià)1：40T：50。不耐熱的

非特異性H抗原，有兩個(gè)環(huán)狀染色體，即染色體1、染色體2。

深入鑒定：流行株與非流行株依靠噬菌體--生物分型法。噬菌體（VP1-VP5）將埃爾托

型霍亂弧菌分成32個(gè)噬菌體型。根據(jù)溶原性、溶原噬菌體的敏感性、山梨醇發(fā)酵試驗(yàn)、溶

血試驗(yàn)，將埃爾托型霍亂弧菌分成a-1共12個(gè)生物型。常見(jiàn)的流行株為噬菌體1-3型，生

物型a-d型，常見(jiàn)的有：la、lb、Id。產(chǎn)毒基因鑒定：用PCR檢測(cè)ct基因，流行株常帶有

霍亂腸毒素。

免疫檢測(cè)：霍亂為腸為非侵襲性細(xì)菌，主要剌激局部黏膜產(chǎn)生分泌性AgA抗體，同時(shí)大

量毒素及細(xì)菌脂多糖體的產(chǎn)生使機(jī)體產(chǎn)生抗毒和抗菌抗體。

恢復(fù)期帶菌者是指臨床癥狀消失后3個(gè)月內(nèi)帶菌者，恢復(fù)期帶菌的時(shí)間一般不超過(guò)2

周，健康帶菌者的排菌時(shí)間一般不超過(guò)7天。

86.副溶血弧菌：嗜鹽性弧菌（與霍亂顯著區(qū)別），是我國(guó)沿海地區(qū)最常見(jiàn)的食物中毒

病原菌，兩極濃染，NaCl最適35g/L,無(wú)鹽不長(zhǎng)，pH7.0~9.5,最適pH7.7,不耐熱，不耐

酸，在TCBS上不發(fā)酵蔗糖菌落綠色，＞80g/L鹽內(nèi)不長(zhǎng)，神奈川現(xiàn)象（B溶血），KP'是致

病株能使人或兔紅細(xì)胞發(fā)生溶血對(duì)馬紅細(xì)胞不溶血為陽(yáng)性。

87.氣單胞菌最適生長(zhǎng)溫度30℃,但在0?45℃皆可生長(zhǎng)。

88.彎曲菌屬是一類(lèi)微需氧菌，不分解糖，氧化酶+,菌體彎曲逞豆點(diǎn)狀，S狀或螺旋

狀有動(dòng)力G—菌，5種5亞種，對(duì)人致病的主要是空腸彎曲菌（人類(lèi)腹瀉最常見(jiàn)之一，43C

生長(zhǎng)，25℃不生長(zhǎng)）

89.幽門(mén)螺桿菌（HP）：常用布氏培養(yǎng)基或腦心浸液血瓊脂加入5?10%羊血和馬血，

在（85%N、10就02、5%02）條件下，37℃3—7天，長(zhǎng)成針尖狀的半透明菌落，加入萬(wàn)古霉素、

TMP、兩性霉素B等組成抑菌劑防止雜菌生長(zhǎng)。與十二脂腸潰瘍、胃癌、胃淋巴瘤發(fā)病有關(guān)。

傳染源主要是人，糞-口途徑。標(biāo)本：胃黏膜活檢組織；

病原鑒定：生物特性是具有大量高活性的尿素酶，迅速分解尿素，氧化酶+、觸酶+,

具有堿性磷酸酶、r-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶活性，硝酸鹽還原+,可生長(zhǎng)于5%甘氨酸、0.04%氯化三

苯四氮嚏培養(yǎng)基中，三糖鐵中不產(chǎn)生硫化氫，微需氧5?8%,37℃生長(zhǎng)，25℃和42℃均不生

長(zhǎng)的G-菌，初次分離要3?4天。

快速檢測(cè)：尿素呼吸試驗(yàn)--簡(jiǎn)單快捷，可以特異地診斷HP現(xiàn)癥感染，敏感性高。主要

采用13C、14C（放射性同位素）標(biāo)記尿素，13C用于兒童和孕婦。

90.《伯杰系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)分類(lèi)》的標(biāo)準(zhǔn)：G染特性，形態(tài)，鞭毛，芽胞，莢膜，代謝產(chǎn)物。

91.有芽胞的厭氧菌：只有梭菌屬包括83個(gè)種。厭氧菌每克糞中高達(dá)1012個(gè)，標(biāo)本

絕不能被正常菌污染，應(yīng)盡量避免接觸空氣。最理想的標(biāo)本是組織，送到實(shí)驗(yàn)室后20?30min

內(nèi)處理完不超過(guò)2h。應(yīng)接種固體和液體兩種培養(yǎng)基，應(yīng)使用預(yù)還原培養(yǎng)基，液體培養(yǎng)基應(yīng)

煮沸l(wèi)Omin以驅(qū)氧并立即冷卻。每份標(biāo)本至少接種三個(gè)血平板，置于有氧，無(wú)氧，5%~10%C02

環(huán)境中培養(yǎng)。厭氧手套箱培養(yǎng)法是迄今最佳厭氧培養(yǎng)儀器之一。

92.厭氧狀態(tài)的指示劑有：美藍(lán)和刃天青，無(wú)氧時(shí)白色，有氧時(shí)美藍(lán)藍(lán)色，刃天青粉紅

色。紫外線下出現(xiàn)熒光也是厭氧菌參考之一，卡那霉素用于梭桿菌與類(lèi)桿菌的區(qū)分，甲硝噪

用于厭氧菌和非厭氧菌的區(qū)別。氣液相色譜已成為鑒定厭氧菌及其分類(lèi)比較可靠的方法。

93.破傷風(fēng)桿菌：鼓槌狀，早期培養(yǎng)G+,48h后特別是芽胞形成后G-,的0和H抗

原，主要癥狀為骨骼肌痙攣，不發(fā)酵糖類(lèi)，能液化明膠產(chǎn)H2S。產(chǎn)生兩種外毒素：破傷風(fēng)溶

血素、破傷風(fēng)痙攣毒素

94.產(chǎn)氣莢膜梭菌：G+,20?50℃均能生長(zhǎng)，最適為45℃,雙層溶血，可分解糖類(lèi)

產(chǎn)酸產(chǎn)氣，出現(xiàn)洶涌發(fā)酵現(xiàn)象，分5型，主要是A型，外毒素以A毒素為主，本質(zhì)是卵磷脂

酶（a毒素），在蛋黃瓊脂平板上菌落周?chē)霈F(xiàn)乳白色渾濁圈。所致疾病為氣性壞疽，有捻發(fā)

感，青霉素為首選，萬(wàn)古為次選。

95.肉毒梭菌：G+,芽胞膠囊于次極端呈湯匙狀或網(wǎng)球拍狀，嚴(yán)格厭氧，8型，以A,

B多見(jiàn)，毒素不耐熱，Imin煮沸即死。

96.無(wú)芽胞厭氧菌是一大類(lèi)正常菌群，引起感染是內(nèi)源性感染。

97.白喉棒狀桿菌：為放線菌，G+,無(wú)莢無(wú)芽無(wú)鞭無(wú)毛，奈瑟（Neisser）染色成黃褐

色，一端或兩端染成藍(lán)色或深藍(lán)色顆粒即異染顆粒，阿培特（Albert）染色菌體呈藍(lán)綠色,

異染顆粒成藍(lán)黑色。

分離培養(yǎng)：棉拭子取咽喉部、鼻腔、皮膚病變部位，血平板，呂氏血清斜面（生長(zhǎng)迅速，

乳白色，S型，形態(tài)典型），哥倫比亞血培養(yǎng)基及亞硅酸鉀血瓊脂（48小時(shí)以上，菌落黑色，

篩選鑒別）。白喉毒素是一種毒性強(qiáng)、抗原性強(qiáng)的蛋白質(zhì)，B-棒狀桿菌噬菌體毒素基因（tox+）

編碼的蛋白質(zhì)，PCR擴(kuò)增tox+基因輔助診斷不能確診。免疫沉淀試驗(yàn)（EleK平板試驗(yàn)）檢

測(cè)產(chǎn)生白喉外毒素，是診斷白喉的關(guān)鍵試驗(yàn)。細(xì)菌一般不侵入血，但外毒素可入血引起毒血

癥，不能立即送檢時(shí)應(yīng)浸于無(wú)菌生理鹽水或15%甘油鹽水中。出現(xiàn)各種心肌炎，軟腭麻痹是

白喉晚期死亡的主要原因。（白喉類(lèi)毒素、百日咳菌苗、破傷風(fēng)類(lèi)毒素的混合疫苗DPT）

98.百日咳鮑特菌：專(zhuān)性需氧，常用包-姜培養(yǎng)基（含青霉素G）細(xì)小S銀灰色不透明

珍珠狀菌落，在加血培養(yǎng)基上,周?chē)蟹琶珷瞠M窄溶血環(huán)，液體培養(yǎng)基中混濁生長(zhǎng)。菌落常

S-R相變異，I相S型，H、m相過(guò)渡型，IV相R型。有百日咳毒素，絲狀血細(xì)胞凝聚素和

腺喋吟環(huán)化毒素。細(xì)菌不進(jìn)入血流。臨床分為3個(gè)期：1、卡他期2、痙咳期3、恢復(fù)期。依

據(jù)菌落性狀及凝集試驗(yàn)確診?？乖蠵T、FHA,主要用ELISA方法?？色@持久免疫力

咳碟法：包-姜培養(yǎng)基（含青霉素G）置10cm使飛沫直射于培養(yǎng)基上，37℃2-3天

鼻咽拭子法：如不能及時(shí)接種可放入0.3毫升PH7.2-7.4的斑蛋白陳生理鹽水中2小

時(shí)內(nèi)檢

99.TBE-Tris硼酸緩沖液，長(zhǎng)時(shí)間電泳選用。MIO最小抑菌濃度

101.決定細(xì)菌的形態(tài)因素：培養(yǎng)基的成份、PH、培養(yǎng)時(shí)間、溫度。直接觀察細(xì)菌的超

微結(jié)構(gòu)：超薄切片技術(shù)、電子顯微鏡。

102.芽胞：在80℃水中迅速死亡，在100℃水中能耐受2小時(shí)以上，在70%乙醇中能

存活20年。高壓蒸氣滅菌殺死細(xì)菌牙芽胞最有效。莢膜的重要功能：抗吞噬。是構(gòu)成細(xì)菌

毒力的因素之一。

衛(wèi)生毒理學(xué)

1.外源化學(xué)物在體內(nèi)的生物轉(zhuǎn)運(yùn)：吸收、分布、代謝、排泄四階段。

化學(xué)毒物在體內(nèi)的代謝分為兩相：I反應(yīng)-一氧化、還原、水解；I［反應(yīng)--與體內(nèi)源性

物質(zhì)結(jié)合

亞慢性毒性試驗(yàn)?zāi)康模鹤畲鬅o(wú)作用劑量、最大耐受劑量估測(cè)閾劑量。（選用兩種種屬及

嚙齒類(lèi)、非嚙齒類(lèi)，初斷乳動(dòng)物）

慢性毒性試驗(yàn)?zāi)康模鹤钚∮凶饔脛┝?、閾劑量、最大未觀察到有害作用劑量（選用兩種

種屬及嚙齒類(lèi)、非嚙齒類(lèi)，初斷乳動(dòng)物）

危害性評(píng)價(jià)組成：認(rèn)定、描述、接觸評(píng)定、特征分析

毒理學(xué)試驗(yàn)項(xiàng)目：第一階段：急性毒性試驗(yàn)。第二階段：遺傳毒性試驗(yàn)。第三階段：亞

慢性毒性試驗(yàn)。第四階段：慢性毒性試驗(yàn)和致癌試驗(yàn)

GB19489-2004《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》分級(jí)：危害等級(jí)I、II、III、IV。

生物安全防護(hù)水平（BSLT、2、3、4）?

生物安全柜一級(jí)：可保護(hù)工作人員和環(huán)境。生物安全柜二級(jí)：分Al、A2、Bl、B2可保

護(hù)工作人員、環(huán)境、樣品。生物安全柜三級(jí)：

2.普通光學(xué)顯微鏡：最高分辨率0.2um,不能觀察細(xì)菌的亞結(jié)構(gòu)

3.暗視野顯微鏡：分辨率0.02-0.04um,載玻片厚度1.0mm、蓋玻片0.17mm

4.熒光顯微鏡：

5.滴定管精度為0.2-0.1ml,微量滴定管精度為0.005ml。微量吸管5—lOOOuk培養(yǎng)

皿分：5^7.5、9、10cm

蛋白質(zhì)、核酸提取及相關(guān)設(shè)備

一、蛋白質(zhì)分離純化一一實(shí)驗(yàn)室常用鹽析法(硫酸鍍).

核酸純化一一酚、氯仿抽提

制備細(xì)胞外膜蛋白一一超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)。

大多數(shù)限制內(nèi)切酶使用溫度37℃,保存溫度是-20℃。

二、層析

凝膠過(guò)濾法(分子篩層析法)--主要用于蛋白或核酸分離。介質(zhì)：葡聚糖。過(guò)濾中先

洗脫的是大分子物質(zhì)，后小分子物質(zhì)。原理：纖維素或凝膠介質(zhì)帶電荷不同。

三、檢測(cè)儀

1、分光光度計(jì)及檢測(cè)物質(zhì)

分光光度計(jì)波長(zhǎng)nm比色皿

檢測(cè)細(xì)菌濃度可見(jiàn)分光光度計(jì)600玻璃

測(cè)定顏色可見(jiàn)分光光度計(jì)450

檢測(cè)蛋白紫外分光光度計(jì)280石英

檢測(cè)核酸紫外分光光度計(jì)260石英

2、紫外透射儀：暗室紫外線下看DNA條帶。

3、測(cè)序儀：蛋白測(cè)序儀-一測(cè)定氨基酸排列順序

DNA測(cè)序儀——測(cè)核甘酸排列順序。物質(zhì)是；質(zhì)粒、噬菌體、PCR產(chǎn)物

4、擴(kuò)增儀：能做PCR稱(chēng)DNA擴(kuò)增數(shù)

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