磁珠分選原理及應(yīng)用

1/1MD0xxx.01MiltenyiBiotec:

免疫磁珠分選技術(shù)及應(yīng)用

德國美天旎生物技術(shù)有限公司目前一頁\總數(shù)四十八頁\編于三點(diǎn)MD0197.02內(nèi)容

?

MACS技術(shù)原理

?MACS技術(shù)設(shè)備及分選策略

?幾種特殊的MACS分選

分選和分析DC細(xì)胞

分選各種T細(xì)胞

分選和分析細(xì)胞因子分泌細(xì)胞

分選造血干細(xì)胞

分選人類腫瘤細(xì)胞

分選和分析凋亡和死亡細(xì)胞

分選轉(zhuǎn)染細(xì)胞

分子生物學(xué)和蛋白生化的分選目前二頁\總數(shù)四十八頁\編于三點(diǎn)MD0347.01MACS技術(shù)原理MACS(MagneticActivatedCellSorting)：=免疫學(xué)+細(xì)胞生物學(xué)+磁力學(xué)基于抗體對(duì)抗原的特異性識(shí)別磁性微珠直接或者間接偶聯(lián)在抗體上，從而與細(xì)胞相連在高強(qiáng)度、梯度磁場中達(dá)到細(xì)胞磁性分離的目的目前三頁\總數(shù)四十八頁\編于三點(diǎn)MD0651.01MACS?磁性分選MACS微珠進(jìn)行磁性標(biāo)記未標(biāo)記的細(xì)胞

先行流出洗脫陽性分選的細(xì)胞目前四頁\總數(shù)四十八頁\編于三點(diǎn)MD0197.02分選前標(biāo)本制備：過濾MACS預(yù)選濾器：30m

目前五頁\總數(shù)四十八頁\編于三點(diǎn)MD0197.02MACS技術(shù)

設(shè)備與試劑

?

MACS微珠

?

MACS分選柱

?

MACS分選器

?詳細(xì)分選方案*

目前六頁\總數(shù)四十八頁\編于三點(diǎn)MACS技術(shù)

設(shè)備與試劑MACS微珠：MACS微珠是與高度特異性單克隆抗體相偶聯(lián)的超順磁化微粒，可用于目的細(xì)胞的磁性標(biāo)記。

特性：

50nm大小對(duì)細(xì)胞沒有毒性可生物降解不影響細(xì)胞特性

目前七頁\總數(shù)四十八頁\編于三點(diǎn)MD0057.03MACS技術(shù)分選的CD8+T細(xì)胞微珠目前八頁\總數(shù)四十八頁\編于三點(diǎn)MACS微珠直標(biāo)微珠多選微珠間標(biāo)微珠目前九頁\總數(shù)四十八頁\編于三點(diǎn)MACS技術(shù)

設(shè)備與試劑MACS分選柱：

》填充有不同規(guī)格的鐵珠?！疯F珠表面有親水包被，不損傷細(xì)胞?！窡o菌包裝?！房捎糜诜诌x多種細(xì)胞及亞細(xì)胞物質(zhì)、細(xì)菌、病毒、mRNA和蛋白質(zhì)。專利產(chǎn)品將磁場擴(kuò)大1000－10000倍——高純度，高回收率

目前十頁\總數(shù)四十八頁\編于三點(diǎn)MD0061.02在MS柱中產(chǎn)生的強(qiáng)大磁場

目前十一頁\總數(shù)四十八頁\編于三點(diǎn)MACS分選柱：MACS技術(shù)

設(shè)備與試劑目前十二頁\總數(shù)四十八頁\編于三點(diǎn)MACS分選器：從手動(dòng)到自動(dòng)，從實(shí)驗(yàn)室到臨床MACS技術(shù)

設(shè)備與試劑目前十三頁\總數(shù)四十八頁\編于三點(diǎn)MACS分選器MACS技術(shù)

設(shè)備與試劑目前十四頁\總數(shù)四十八頁\編于三點(diǎn)autoMACS分選儀9種程序，一機(jī)完成所有細(xì)胞分選成本低，兩個(gè)可重復(fù)使用的分選柱（2周內(nèi)100次）快速（3－10分鐘）重復(fù)性好全自動(dòng)分選，儀器操作簡單適用范圍廣：從少量標(biāo)本（105）到大量標(biāo)本（4X109），進(jìn)樣量0.5ml-50ml8種全血微珠，可以做常見細(xì)胞的全血分選，省去了費(fèi)時(shí)的提取單個(gè)核細(xì)胞過程

目前十五頁\總數(shù)四十八頁\編于三點(diǎn)MACS技術(shù)主要優(yōu)勢

? 小磁珠:50nm（快速、不活化細(xì)胞、不沉淀）

? 保留細(xì)胞功能（直接進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)；無毒性；氧化

鐵和多聚糖組成，可生物降解）

? 與流式細(xì)胞儀兼容（不影響細(xì)胞光學(xué)特性、不影響熒

光抗體標(biāo)記、與流式細(xì)胞儀分選聯(lián)合使用可以縮短流

式分選時(shí)間）

?快速、簡便、無菌

?適用范圍廣（磁珠種類多、從少量到大量、適用于分

選各種細(xì)胞、亞細(xì)胞物質(zhì)）MD0043.02目前十六頁\總數(shù)四十八頁\編于三點(diǎn)MACS?

細(xì)胞分選策略

? 陽性分選

?去除分選

?去除分選后再陽性分選

?多重分選

MD0044.02目前十七頁\總數(shù)四十八頁\編于三點(diǎn)MACS細(xì)胞分選策略

1、陽性分選：

? 根據(jù)特異性標(biāo)志分選細(xì)胞:陽性分選是指目的細(xì)胞磁性標(biāo)記

后，作為陽性的標(biāo)記組分直接分選出來。

?優(yōu)點(diǎn)：

》高純度，尤其是富集稀有的細(xì)胞

》高回收率

》操作簡便、迅速

MD0044.02目前十八頁\總數(shù)四十八頁\編于三點(diǎn)MD016102陽性分選策略MACS?

微珠磁性標(biāo)記未標(biāo)記細(xì)胞先行流出將分選柱移出磁場，洗脫陽性分選細(xì)胞目前十九頁\總數(shù)四十八頁\編于三點(diǎn)MACS細(xì)胞分選策略

2、去除分選：

?

去除分選是磁性標(biāo)記非目的細(xì)胞，并將其從細(xì)胞混合物中去

除，即未磁性標(biāo)記的細(xì)胞為目的細(xì)胞。

?去除分選策略適用范圍：

》去除不需要的細(xì)胞

》缺乏針對(duì)目的細(xì)胞的特異性抗體（如腫瘤細(xì)胞）

》不需要抗體和目的細(xì)胞結(jié)合

》需進(jìn)一步通過陽性選擇分選細(xì)胞亞群

MD0044.02目前二十頁\總數(shù)四十八頁\編于三點(diǎn)MD0160.02去除分選磁性標(biāo)記分選未磁性標(biāo)記細(xì)胞目前二十一頁\總數(shù)四十八頁\編于三點(diǎn)MACS細(xì)胞分選策略

3、去除分選后再陽性分選：

?

即先去除非目的細(xì)胞，再進(jìn)行陽性分選。

?適用范圍：

》非目的細(xì)胞也表達(dá)用來陽性選擇目的細(xì)胞的抗原。

》要分選非常稀有細(xì)胞，先去除非目的細(xì)胞再行陽性分選，

可獲得高純度的目的細(xì)胞。

MD0044.02目前二十二頁\總數(shù)四十八頁\編于三點(diǎn)1.去除非CD4+T細(xì)胞。

用生物素化抗體混合物和抗生物素微珠間接磁性標(biāo)記非CD4+T細(xì)胞磁性分選去除標(biāo)記細(xì)胞

先行流出為CD4+T細(xì)胞2.CD25微珠直接磁性標(biāo)記CD25+細(xì)胞陽性分選靶細(xì)胞CD4+CD25+

調(diào)節(jié)性T滯留在分選柱上，離開磁場后洗脫下來去除后再陽性分選CD4+CD25+雙陽性細(xì)胞目前二十三頁\總數(shù)四十八頁\編于三點(diǎn)MD0652.01多選微珠標(biāo)記MACS分選磁性顆粒的酶解離終止解離反應(yīng)根據(jù)第二標(biāo)志進(jìn)行磁珠標(biāo)記MACS分選MACS細(xì)胞分選策略

4、多選微珠：

目前二十四頁\總數(shù)四十八頁\編于三點(diǎn)MACS暢銷機(jī)器與分選柱

?

MiniMACSstartingkit：1個(gè)分選架、1個(gè)MiniMACS分選器、1盒MS分選柱、1支價(jià)值7500元試劑（15088元）：可做陽性分選、小量標(biāo)本、間標(biāo)去除分選、分子生物學(xué)分選

?

Mini&MidiMACSstartingkit：1個(gè)分選架、1個(gè)MiniMACS分選器、1個(gè)MidiMACS分選器、1盒MS分選柱、1盒LS/LD分選柱、1支價(jià)值7500元試劑（27838元）：可做陽性分選和去除分選

?

MS分選柱：1盒25個(gè)，2763元

?LS分選柱：1盒25個(gè)，4356元

?LD分選柱：1盒25個(gè)，5100元

?uMACS與u或者M(jìn)分選柱：分子生物學(xué)分選

? VarioMACS分選儀

? autoMACS自動(dòng)分選儀、CliniMACS分選儀

MD0044.02目前二十五頁\總數(shù)四十八頁\編于三點(diǎn)MACS幾種暢銷磁珠與抗體

?

專利產(chǎn)品：CD133、CD303、CD304

?

特殊產(chǎn)品：人類DC系列：BDCA-1(CD1c)、BDCA-2(CD303)、

BDCA-3(CD141)、BDCA-4(CD304)

小鼠DC系列：mPDCA微珠與抗體

干細(xì)胞產(chǎn)品：CD133、CD271微珠與抗體

細(xì)胞因子分泌細(xì)胞：CSA分選與分析

TH2細(xì)胞：CD294(CRTH)微珠與抗體

分選人類腫瘤細(xì)胞：上皮腫瘤：CK、HEA

非血液腫瘤：CD45去除

死亡細(xì)胞去除試劑盒

分選轉(zhuǎn)染細(xì)胞

分選HIV病毒、mRNA、cDNA

?topten：CD133、CD34、人CD4+CD25+、小鼠CD4+CD25+

CD303/CD304、人類NK、小鼠CD11c、anti-PE微珠

小鼠干細(xì)胞試劑盒（系別陰性＋CD117）、CD4/CD8

MD0044.02目前二十六頁\總數(shù)四十八頁\編于三點(diǎn)主要競爭對(duì)手分析

Dynal：大磁珠

主要市場：CD4、CD8等高頻細(xì)胞，

優(yōu)勢：價(jià)格

劣勢：回收率低（不能做低頻細(xì)胞、弱表達(dá)細(xì)胞分選）

磁珠必需剪切（耗時(shí)——細(xì)胞狀態(tài)不佳）

大磁珠（活化細(xì)胞）

我們的優(yōu)勢：純度高、回收率高、細(xì)胞活性好

不活化細(xì)胞，不改變細(xì)胞功能

省時(shí)、省細(xì)胞

產(chǎn)品品種最多，有專利產(chǎn)品

有手動(dòng)、自動(dòng)、臨床級(jí)產(chǎn)品

有強(qiáng)大的技術(shù)支持隊(duì)伍

很好的聲譽(yù)，市場占有率最高

MD0044.02目前二十七頁\總數(shù)四十八頁\編于三點(diǎn)主要賣點(diǎn)

干細(xì)胞產(chǎn)品：人類：CD133、CD34、MSC試劑盒（CD271）

小鼠：系別陰性試劑盒、CD117微珠

定向分化培養(yǎng)基

DC產(chǎn)品：人類：BDCA-1、BDCA-2/4

小鼠：CD11c

NK產(chǎn)品：人類：NK細(xì)胞陰選試劑盒、CD3/CD56

T細(xì)胞產(chǎn)品：CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（人和小鼠）

CSA系列

CD4、CD8微珠及陰選試劑盒

B細(xì)胞產(chǎn)品：CD19微珠及陰選試劑盒

腫瘤細(xì)胞分選：癌細(xì)胞富集試劑盒、HEA微珠、CD45陰選

單核細(xì)胞分選：CD14微珠及陰選試劑盒

間標(biāo)微珠

死細(xì)胞去除試劑盒

預(yù)選濾器、FCR阻斷劑、T細(xì)胞活化與擴(kuò)增試劑盒

流式細(xì)胞儀抗體（價(jià)廉、包裝量大、優(yōu)質(zhì)）

MD0044.02目前二十八頁\總數(shù)四十八頁\編于三點(diǎn)識(shí)別DC和DC亞群New

Lineage-

(CD3,CD14,CD16,CD19,CD20,CD56)

HLA-DR+PDCCD11c-CD123+BDCA-2(CD303)+BDCA-4(CD304)+CD123lowCD123-CD11c+CD123low/-MDCMDC1MDC2BDCA-1(CD1c)+BDCA-3(CD141)++DC亞群特異性標(biāo)志:BloodDendriticCellAntigensBDCA-2/4+BDCA-1+BDCA-3+目前二十九頁\總數(shù)四十八頁\編于三點(diǎn)CD11c+DCCD8+DCCD4+DCCD11c+B220+Gr-1(Ly-6C/G)+DCCD11c+B220-

DCConventionalDC(“l(fā)ymphoid“DC)(“myeloid“DC)CD11cCD8aCD11cCD4PEFITCAPCCD11cCD11cB220Gr-1PlasmacytoidDC(PDC)mPDCA-1MACS?

技術(shù)分選與分析小鼠DC細(xì)胞New

目前三十頁\總數(shù)四十八頁\編于三點(diǎn)MACS?技術(shù)分選與分析大鼠DC細(xì)胞New

MD0044.02Anti-DC(OX62)微珠

用于從大鼠外周血、淋巴和非淋巴組織中分選或者去除OX62+DC。

單克隆抗體OX62識(shí)別表達(dá)于大部分大鼠DC上的整合素αE2亞單位（分子量150kDa）。

兩個(gè)主要的樹突狀細(xì)胞亞群：CD4/OX41雙陽性和CD4/OX41雙陰性亞群。

該抗原也表達(dá)于表皮TCRα/β+或γ/δ+的T細(xì)胞亞群和垂體前葉星狀濾泡樣（S100+）細(xì)胞的一個(gè)亞群，但在朗格罕氏細(xì)胞和巨噬細(xì)胞上不表達(dá)。

目前三十一頁\總數(shù)四十八頁\編于三點(diǎn)MACS?技術(shù)分選與分析功能性T細(xì)胞MD0044.02目前三十二頁\總數(shù)四十八頁\編于三點(diǎn)MD0420.02MACS?

細(xì)胞因子分泌細(xì)胞分析與分選New抗原特異性

再刺激細(xì)胞因子

分泌階段捕獲試劑

標(biāo)記熒光標(biāo)記和

磁性分選????CatchReagentDetectionAntibodyAnti-PEMicroBeadscytokinesecretingcellsecretedcytokine目前三十三頁\總數(shù)四十八頁\編于三點(diǎn)MD0420.02MACS?

細(xì)胞因子分泌細(xì)胞分析與分選New分選前刺激組分選后未刺激組*百分比均為占CD4＋細(xì)胞百分比目前三十四頁\總數(shù)四十八頁\編于三點(diǎn)MD0420.02MACS?

細(xì)胞因子分泌細(xì)胞分析New刺激組未刺激組

使用PE-CMVpp65/HLA/A2-tetramers

和IFN-gSecretionAssay-DetectionKit(APC)orIL-2SecretionAssay-DetectionKit(APC)檢測HLA/A2CMV+患者PBMC。*百分比均為占CD8＋細(xì)胞百分比目前三十五頁\總數(shù)四十八頁\編于三點(diǎn)人類細(xì)胞因子分泌細(xì)胞分選與檢測試劑盒IFN-g

分泌細(xì)胞IL-2分泌細(xì)胞IL-4分泌細(xì)胞IL-10分泌細(xì)胞TNF-分泌細(xì)胞MACS?

細(xì)胞因子分泌細(xì)胞分析與分選

New小鼠細(xì)胞因子分泌細(xì)胞分選與檢測試劑盒IFN-g

分泌細(xì)胞IL-2分泌細(xì)胞IL-4分泌細(xì)胞IL-5分泌細(xì)胞IL-10分泌細(xì)胞目前三十六頁\總數(shù)四十八頁\編于三點(diǎn)人類干細(xì)胞分選微珠與試劑盒

? CD34微珠及多選微珠：用于從骨髓、外周血、臍帶血中分選

造血干細(xì)胞、內(nèi)皮前體細(xì)胞

?

CD133微珠：用于從骨髓、外周血、臍帶血中分選

造血干細(xì)胞、內(nèi)皮前體細(xì)胞、多能成體干細(xì)胞（MAPC）

?

CD117微珠：用于從骨髓、外周血、臍帶血中分選

造血干細(xì)胞、骨髓間充質(zhì)細(xì)胞

?

CD45/GlyA去除分選試劑盒：用于從骨髓中陰選分選

多能成體干細(xì)胞（MAPC）

?

CD105微珠：用于從骨髓中分選間充質(zhì)細(xì)胞

? 抗成纖維細(xì)胞微珠：用于從骨髓中分選間充質(zhì)細(xì)胞

多能成體干細(xì)胞（MAPC）

?

MSC分選工具（CD271）new：用于從骨髓中分選間充質(zhì)細(xì)胞MD0044.02目前三十七頁\總數(shù)四十八頁\編于三點(diǎn)MSCResearchToolBox-CD271(LNGFR)new成分:分選:CD271(LNGFR)-APCAnti-APCMicroBeadsFcRBlocking培養(yǎng):NHExpansionMedium(2x500mL)CytoMix-CD271(LNGFR)

質(zhì)量控制:NHAdipoDiffMedium(12x8mL)NHOsteoDiffMedium(12x5mL)Introductoryoffer目前三十八頁\總數(shù)四十八頁\編于三點(diǎn)AdsinBlood(April&Mai)MSCResearchToolBox-CD271(LNGFR)人類MSC的標(biāo)準(zhǔn)化研究CD271又叫做低親和力神經(jīng)生長因子受體(LNGFR),是迄今為止發(fā)現(xiàn)的最佳MSC分選標(biāo)志，可用于直接從人類骨髓中分選MSC。分選后CD271(LNGFR)+MSCs是一群均一的MSC細(xì)胞群，而CD271陰性細(xì)胞成分中沒有成纖維細(xì)胞克隆形成單位(CFU-F)活性。與貼壁培養(yǎng)的MSC相比，CD271分選的MSC增殖能力增強(qiáng)10－1000倍。CD271分選和擴(kuò)增的MSC保留了多系分化潛能，具有分化為脂肪細(xì)胞和成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞的可塑性。cumulativepopulationdoubling(CPD)

目前三十九頁\總數(shù)四十八頁\編于三點(diǎn)AdsinBlood(April&Mai)MSCResearchToolBox-CD271(LNGFR)人類MSC的標(biāo)準(zhǔn)化研究NadiaQuirici等，ExperimentalHematology30(2002)783–791目前四十頁\總數(shù)四十八頁\編于三點(diǎn)MACS小鼠干細(xì)胞分選試劑盒：LineageCellDepletionKit:去除成熟和分化的造血細(xì)胞，預(yù)富集造血干祖細(xì)胞。CD117MicroBeads：分選早期和晚期干祖細(xì)胞。Anti-Sca-1MicroBeads：分選造血干細(xì)胞和早期造血祖細(xì)胞。CD117+Sca-1+lin–細(xì)胞也有非造血分化潛能，如分化為肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、肝細(xì)胞、神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞。CD45/Ter119微珠去除分選骨髓細(xì)胞，可以得到MAPCs,也有體外分化為多種細(xì)胞的潛能。小鼠骨髓造血干細(xì)胞(HSC)定義為Sca-1+、CD117+(c-kit)、Thy-1low

和lin-細(xì)胞.目前四十一頁\總數(shù)四十八頁\編于三點(diǎn)MACS?

技術(shù)分選人類腫瘤細(xì)胞NewMD0044.02上皮腫瘤細(xì)胞

根據(jù)表面抗原進(jìn)行分選與分析：Anti-HEA(EpCAM)MicroBeadsAnti-ErbB-2(HER-2/neu)MicroBeads根據(jù)細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞角蛋白分選與分析：cytokeratin黑色素瘤細(xì)胞分選：Anti-melanomaMicroBeads其它非造血系統(tǒng)腫瘤細(xì)胞:CD45MicroBeads去除白細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞：CD138MicroBeads霍奇金氏淋巴瘤/RS細(xì)胞：CD30MicroBeads目前四十二頁\總數(shù)四十八頁\編于三點(diǎn)MACS?

技術(shù)分選凋亡細(xì)胞NewMD0044.02刺激、分化、凋亡、脫顆粒、壞死PS暴露PS暴露細(xì)胞被AnnexinV微珠磁性標(biāo)記磁性標(biāo)記細(xì)胞滯留在分選柱上PS暴露細(xì)胞被洗脫下來目前四十三頁\總數(shù)四十八頁\編于三點(diǎn)MACS?

技術(shù)分選轉(zhuǎn)染細(xì)胞NewMD0044.02應(yīng)用于功能基因、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)研究、藥物篩選和標(biāo)記技術(shù)。MACSelect4轉(zhuǎn)染細(xì)胞分選試劑盒使用pMACS4.1和自己的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞用MACSelect4微珠標(biāo)記轉(zhuǎn)染細(xì)胞MACS分選轉(zhuǎn)染細(xì)胞分選后細(xì)胞可用于培養(yǎng)或者分析目前四十四頁\總數(shù)四十八頁\編于三點(diǎn)MACS?技術(shù)分選轉(zhuǎn)染細(xì)胞NewMD0044.02優(yōu)點(diǎn)：

省時(shí)：只需2-3小時(shí)（建立一個(gè)穩(wěn)定的細(xì)胞系需數(shù)周）