間接紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)診斷血吸蟲(chóng)病

間接紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)診斷血吸蟲(chóng)病間接紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)

（Indirecthaemagglutinationtest,IHA）

以紅細(xì)胞為載體吸附預(yù)先制備的特異性抗原或抗體作為試劑檢測(cè)標(biāo)本中的相應(yīng)抗體或抗原血清學(xué)方法特點(diǎn)：抗原與其抗體之間的特異性反應(yīng)紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象國(guó)外最早于1955年應(yīng)用于檢測(cè)馬抗血清國(guó)內(nèi)陶義訓(xùn)等（1958）首先應(yīng)用于診斷日本血吸蟲(chóng)病楊贊元等（1976）應(yīng)用冰凍干燥方法制備試劑一、基本概念

（一）凝集反應(yīng)

是指細(xì)菌、細(xì)胞等顆粒性抗原加入相應(yīng)抗體，并在適量電解質(zhì)存在的條件下，兩者特異性結(jié)合且進(jìn)一步凝聚成肉眼可見(jiàn)的小塊。

凝集反應(yīng)分為直接凝集和間接凝集反應(yīng)。（二）間接紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)

原理日本血吸蟲(chóng)可溶性蟲(chóng)卵抗原載體顆粒綿羊、家兔、雞的紅細(xì)胞及O型人紅細(xì)胞致敏的新鮮紅細(xì)胞保存時(shí)間短，且易變脆、溶血和污染，只能使用2～3天致敏前將紅細(xì)胞醛化，可長(zhǎng)期保存而不溶血常用的醛類有甲醛、戊二醛、丙酮醛（三）間接血凝的類型

IHA：用抗原致敏紅細(xì)胞檢測(cè)標(biāo)本中抗體反向間接血凝試驗(yàn)：用特異性抗體致敏紅細(xì)胞檢測(cè)標(biāo)本中的相應(yīng)抗原間接血凝抑制試驗(yàn)反向間接血凝抑制試驗(yàn)（正向）間接凝集反應(yīng)反向間接凝集反應(yīng)間接凝集抑制反應(yīng)（一）血吸蟲(chóng)蟲(chóng)卵抗原制備

分離蟲(chóng)卵→脫水、脫酯干燥→研磨成細(xì)粉→凍融→超聲粉碎→普通離心→高速離心。經(jīng)離心后的上清液，即為蟲(chóng)卵抗原原液，保存于-20℃中備用。二、凍干致敏紅細(xì)胞的制備理想抗原敏感性高，特異性強(qiáng)，能區(qū)別不同感染度，能區(qū)別現(xiàn)在感染還是過(guò)去感染，價(jià)廉。但目前還沒(méi)有，今后可能依靠雜交瘤技術(shù)、DNA技術(shù)而獲得理想的抗原。取人“O”型血紅細(xì)胞3份（不同個(gè)體）混合，用生理鹽水洗滌。置冰浴內(nèi)，將戊二醛溶液慢慢滴入紅細(xì)胞懸液中，邊加邊搖，醛化1h。用1/10000的柳硫汞蒸餾水配成10%的紅細(xì)胞懸液，置于4℃?zhèn)溆?。（二）紅細(xì)胞醛化醛化紅細(xì)胞優(yōu)點(diǎn)克服了個(gè)體差異，保證實(shí)驗(yàn)重復(fù)性延長(zhǎng)紅細(xì)胞的保存時(shí)間，在4℃可保存1年避免操作過(guò)程中因振蕩、低滲、凍融使紅細(xì)胞破裂、溶血取1/10000鞣酸溶液與等量2.5%紅細(xì)胞懸液混勻，置于37℃中15min，并不斷搖動(dòng)。洗滌，去除多余的鞣酸。（三）紅細(xì)胞鞣化鞣化紅細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn)鞣化后紅細(xì)胞易吸附蛋白抗原。取蟲(chóng)乏卵抗偽原原妨液1:波10飾0稀釋悅，與2.掙5%的鞣乒化紅脈細(xì)胞安等量獵混合搭，置燭于37瓶℃水浴潛中30專mi哭n，并不殲斷搖瘋動(dòng)，孤然后蔽離心櫻，洗倚滌，遷去除院多余初抗原黃。用含尾有5%蔗糖脫及1%正常院兔血蠢清（56釘℃滅活勉）的pH終7.等2P衰BS保護(hù)矩液，畝配成10光%濃度葬的致歇敏紅下細(xì)胞牽懸液糠。致敏際效果標(biāo)與抗丑原的賊活性償及純嘉度有賀關(guān)。（四筑）紅島細(xì)胞抓致敏將上他述致縫敏紅兇細(xì)胞須懸液哪搖勻汗，分竄裝于2m椅l安瓿翠內(nèi)。愛(ài)每支0.柴4m仍l，立即協(xié)放入-4往0℃冰箱削冰凍戰(zhàn)，待館全部殺分裝想完畢犁后，譯移入屢冰凍挺干燥煎機(jī)內(nèi)寬，冰雄凍干土燥約24孕h，干燥顛后封怨口，落保存沾于4℃中備爽用。冰凍個(gè)干燥史具有智高科免技含播量不顫是單遇純干晃燥，撥在冰掉凍狀愈態(tài)下舉使水繭分子鹿升華劈燕，不或使紅結(jié)細(xì)胞匹破裂物，不抽影響認(rèn)抗原密活性絹。（五英）致夫敏紅趨細(xì)胞遲的冰端凍干悼燥三、麗操作跡步驟（一歐）取響生理捉鹽水2m潑l，加鳥(niǎo)入裝險(xiǎn)有冰假凍干筐燥紅標(biāo)細(xì)胞準(zhǔn)的安尖瓿中祖，配貢成2.蓬0%的紅襯細(xì)胞類懸液握，搖萌勻。（二煎）在劇“V”型微梯量血緞凝反遇應(yīng)板饅的第1孔中己加生橫理鹽咳水10紀(jì)0μ漫l,第2、3孔中熱各加25時(shí)μl。（三裁）第1孔中壺加待吹檢血亂清25具μl，混陶勻后焰吸出25躺μl加于腫第2孔中同，在港第2孔中計(jì)混勻宴后，洪吸出25喚μl加于膛第3孔中緞，混停勻后弓棄去25妄μl。此得時(shí)第1、2、3孔中壟的血女清稀緣瑞釋度伴依次砌為1:扎5、1:憂10、1:隱20。（四遞）在擴(kuò)第2、第3孔中鉛各加女致敏覆紅細(xì)雹胞懸銜液25懷μl，將次反應(yīng)塘板放駛在振備蕩器斬上振冠蕩1m磨in，室班溫下?lián)ъo置45線mi任n，觀紅察反靈應(yīng)結(jié)無(wú)果。四、賴反應(yīng)值標(biāo)準(zhǔn)（一例）陰狂性反同應(yīng)：瞧紅細(xì)巴胞全卻部下蘭沉在杏凹底罪部，旦形成毒緊密錄的圓沾點(diǎn)，貧周圍驗(yàn)整齊食清晰任。（二妄）陽(yáng)德性反拒應(yīng)：君待檢奪者血經(jīng)清以1:膝10稀釋伍度出湊現(xiàn)凝秘集反悠應(yīng)為放陽(yáng)性猴起點(diǎn)（三惠）反謹(jǐn)應(yīng)強(qiáng)漲度“-”：紅塘細(xì)胞泄全部矩下沉湖在凹宴底部拔，形均成緊壇密的牽圓帳點(diǎn)，卡周圍譽(yù)整齊撒清晰“+”：多超數(shù)紅植細(xì)胞做下沉賢在凹讀底部堆形成蓬圓點(diǎn)介，周德圍可摸見(jiàn)少罪量凝獄集紅閘細(xì)胞“++肢”：凹牧底部烘可見(jiàn)跑明顯浪的紅批點(diǎn)，蠻凝集貌紅細(xì)統(tǒng)胞在字底部鐘形成期小薄姜層“++切+”：凹帝底部拋可見(jiàn)驅(qū)很弱河的紅扶點(diǎn)，錢(qián)紅細(xì)荒胞呈疏松坐的顆拐粒凝樸集“++僑++炕”：紅斜細(xì)胞品呈明蜘顯的卸顆粒槽凝集繁，均療勻散布鑼于凹勒底部臟周圍紙形成舒薄層憤，有遠(yuǎn)時(shí)呈輪皺褶泄?fàn)钚r(jià)(滴度)：發(fā)生醋凝集激現(xiàn)象咳最高即的血永清稀庫(kù)釋度虹。五、池影響僅因素箏及注竹意事（一訴）試埋劑：碗保存番、對(duì)采照、攔效價(jià)濤、搖往勻。（二井）反織應(yīng)板指：“V”型，幕底角仍應(yīng)為90忘°。反險(xiǎn)復(fù)沖喘洗。（三江）毛腐細(xì)吸氏管：爪校正印、垂膚直。（四旬）血時(shí)清樣糕本：巖新鮮回為宜損，保壟存在爪冰盒女內(nèi)。靜溶血劫樣本勸將影趣響測(cè)襖定結(jié)楊果的擱準(zhǔn)確東性。（五購(gòu)）生蜓理鹽賢水：該用于討稀釋IH諒A試劑探、陽(yáng)死參、才陰參破、血祝清樣蜂本的姥生理猜鹽水最必須匪保持譯無(wú)菌緊。（六預(yù)）判讀斷反肯應(yīng)結(jié)蠻果：絨在判倘斷反違應(yīng)結(jié)研果時(shí)室應(yīng)在炭反應(yīng)咬板下炕面襯叢一張宏白紙?jiān)?，使央反?yīng)透結(jié)果掛更加書(shū)清晰胞。先倚觀察紅空白網(wǎng)對(duì)照拾、陰烘參、堂陽(yáng)參炮，再刑觀察休樣本層。六、漠評(píng)價(jià)IH貪A的優(yōu)停點(diǎn)：敏感福性高浙，陽(yáng)辯性符停合率建在90粗%以上具，對(duì)嘆糞檢物陽(yáng)性印者可昌高達(dá)95僵%，假估陽(yáng)性催率一暖般不協(xié)超過(guò)4%。操作笛方便穗，用燙血量械少，毛便于吩現(xiàn)場(chǎng)冊(cè)使用階。試劑羽生產(chǎn)莊方便火，成司本低婆，符詠合國(guó)暗情。IH奇A的缺集點(diǎn)：特異煩性欠捕強(qiáng)、片與其侍它吸摩蟲(chóng)有型較高納的交紹叉反厭應(yīng)。逝交叉朋反應(yīng)都主要堪在肺扯吸蟲(chóng)杠感染焰，可傲達(dá)50軋%以上做。七、斗實(shí)用雷價(jià)值（一柄）可也作為澇血吸待蟲(chóng)病僻的輔定助診