DB35T 916-2009豬瘟抗體金標(biāo)試紙檢測方法

DB35福建省地方標(biāo)準(zhǔn)DB35/T916—2009豬瘟抗體金標(biāo)試紙檢測方法2009-05-30實(shí)施2009-04-242009-05-30實(shí)施福建省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布DB35/T916—2009為開展豬瘟免疫監(jiān)測，了解生豬豬瘟抗體水平，指導(dǎo)豬瘟免疫工作，特制定本標(biāo)準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)由福建省農(nóng)業(yè)廳提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)由福建省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局批準(zhǔn)發(fā)布。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：福建省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心、福建省標(biāo)準(zhǔn)化研究所。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：金顏輝、林臻毅、吳波平、林芬、梁靜、許先明、黃雁、洪英、王海瀛。本標(biāo)準(zhǔn)為首次發(fā)布。DB35/T916—2009DB35/T916—200911豬瘟抗體金標(biāo)試紙檢測方法1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了豬瘟抗體的免疫金標(biāo)試紙法的檢測方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于豬血液或血清中豬瘟抗體水平的測定。2試驗(yàn)原理應(yīng)用酶聯(lián)免疫原理和膠體金層析技術(shù)制成快速檢測豬瘟抗體的免疫金標(biāo)試紙。試紙由加樣區(qū)，檢測區(qū)和吸水區(qū)三個(gè)部分組成。將豬瘟抗原和兔抗豬瘟抗體分別包被在檢測區(qū)的檢測線（T）和對(duì)照線上（C），并在加樣區(qū)包被膠體金標(biāo)記的豬瘟抗原，組成免疫金標(biāo)試紙。檢測時(shí)，在加樣孔（S）內(nèi)加入待檢的豬血液或血清樣品，由于層析的作用，血清向檢測試紙的上部移動(dòng)，首先將遇到干燥的豬瘟金標(biāo)抗原并將其溶解，帶著豬瘟膠體金標(biāo)記的抗原繼續(xù)往檢測區(qū)移動(dòng)至檢測線（T）。如果樣品中有豬瘟抗體存在，包被在檢測線（T）上豬瘟抗原和豬瘟金標(biāo)抗原與樣品中的豬瘟抗體反應(yīng)，形成免疫復(fù)合物，則出現(xiàn)一條紫紅色色帶。如果待檢樣品中沒有豬瘟抗體，金標(biāo)抗原將不會(huì)與包被在檢測線（T）上的豬瘟抗原結(jié)合，檢測線（T）不岀現(xiàn)色帶，樣品與金標(biāo)豬瘟抗原繼續(xù)往檢測區(qū)移動(dòng)至對(duì)照線上（C），就與兔抗豬瘟抗體相結(jié)合形成一條紫紅色的色帶，以此證明該檢測試紙有效。根據(jù)檢測線（T）色帶深淺，判定樣品中豬瘟抗體的水平高低，即當(dāng)抗體水平高時(shí)，結(jié)合的膠體金抗原多，檢測線（T）會(huì)出現(xiàn)紫紅色帶，色帶顏色的深淺與豬瘟抗體水平成正相關(guān)。3測試卡豬瘟抗體免疫金標(biāo)試紙裝在塑料卡中制成測試卡，鋁箔密封，內(nèi)裝干燥劑，謹(jǐn)防破口吸濕。室溫或冷藏保存。測試卡結(jié)構(gòu)及測試部位如下圖所示。加樣孔（S）檢測區(qū)加樣孔（S）檢測區(qū)檢測線（T）對(duì)照線（C）

豬瘟抗體免疫金標(biāo)測試卡示意圖4試驗(yàn)儀器及材料微量加樣器或滴管。5試驗(yàn)步驟5.1將測試卡平放在桌面上，在測試卡的隋圓形加樣孔內(nèi)加入50UriOO卩L或用滴管滴入2滴~3滴待檢樣品（待檢樣品不能腐敗變質(zhì)）。5.2常溫靜置20min~30min判定結(jié)果。DB35/T916—20096結(jié)果判定6.1陽性在對(duì)照線（C）和檢測線（T）各出現(xiàn)一條紫紅色帶，判定為被檢樣品中含有豬瘟抗體。抗體水平越高，色帶顏色越深。6.2陰性對(duì)照線（C）出現(xiàn)一條紫紅色帶，檢測線（T）不出現(xiàn)色帶，判定為被檢樣品中的豬瘟抗體陰性。6.3無效對(duì)照線（C）不岀現(xiàn)色帶，試驗(yàn)無效。DB35/T916-2009DB35/T916-2009福建省