實(shí)驗(yàn)五二土壤中微生物的分離純化及觀察

實(shí)驗(yàn)五土壤中微生物的分離純化

目的要求1.掌握倒平板的方法和幾種常用的分離純化微生物的基本操作技術(shù)。2.觀察并識別微生物的菌落特征（群體形態(tài)）。（一）微生物的分離純化及觀察基本原理

從混雜的微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過程稱為微生物的分離與純化。

1.簡易單細(xì)胞挑取法（簡易單孢子分離法）2.平板分離法

選擇適宜的培養(yǎng)基，微生物在固體培養(yǎng)基上生長形成的單個(gè)菌落可以是由一個(gè)或幾個(gè)細(xì)胞繁殖而成的集合體。挑取單菌落可獲得一種純培養(yǎng)。方法：稀釋涂布平板法、平板劃線分離法器材分離源：自采集土壤樣品培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，高氏Ⅰ號培養(yǎng)基、馬丁氏（孟加拉紅）培養(yǎng)基溶液或試劑盛4.5ml無菌水的試管，盛90ml無菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶。儀器或其他用具振蕩器，無菌培養(yǎng)皿，無菌吸管，接種環(huán)，電磁爐，培養(yǎng)箱，吸耳球等。1、編號：取無菌平皿１８個(gè)。另取無菌水４支，依次標(biāo)明10-2、10－3、10-4、10-5。2、倒平板：分別將三種培養(yǎng)基溶化后，冷卻至55～60℃時(shí)，每種培養(yǎng)基各倒６皿，標(biāo)注培養(yǎng)基名稱。其中，高氏Ⅰ號培養(yǎng)基在倒入前需先添加１０滴10%的苯酚。一、稀釋涂布平板法（全組完成）3、制備土壤稀釋液

0.5ml各4.5ml無菌水各取稀釋樣0.１ml涂布放菌液時(shí)吸管尖不要碰到液面，即每一支吸管只接觸一個(gè)稀釋度。牛肉膏平板馬丁氏平板10－210-310-410-510-110-210-310-410-5

0.5ml0.5ml0.5ml高氏Ⅰ號平板

４、涂布

５、培養(yǎng)

將高氏Ⅰ號平板、馬丁氏平板倒置于28℃培養(yǎng)３～５d，牛肉膏蛋白胨平板倒置于37℃培養(yǎng)培養(yǎng)1～2d。

６、菌落觀察

觀察并描述土壤樣品中分離到的細(xì)菌、放線菌、霉菌的菌落特征。

二、平板劃線分離法（個(gè)人完成）1、倒平板：將３種培養(yǎng)基溶化后，各倒一皿。并用記號筆標(biāo)明培養(yǎng)基名稱、樣品編號、個(gè)人學(xué)號等。2、劃線：分別挑取土壤樣品中10－1的土壤懸液一環(huán)，在三種平板上劃線，以分離細(xì)菌、放線菌、霉菌。

分區(qū)劃線、連續(xù)劃線分區(qū)劃線（適用于濃度較大的樣品）連續(xù)劃線（適用于濃度較小的樣品）3、培養(yǎng)將高氏Ⅰ號平板、馬丁氏平板倒置于28℃培養(yǎng)３～５d，牛肉膏蛋白胨平板倒置于37℃培養(yǎng)培養(yǎng)1～2d。4、菌落觀察５、挑菌

挑取單個(gè)菌落接種到斜面上培養(yǎng)，此后鏡檢是否為單一微生物。若有雜菌，繼續(xù)分離純化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果

(P３4五、１.(２、３)

你所做的涂布平板法和劃線法是否較好地得到了單菌落？如果不是，請分析其原因。在不同的平板上你分離得到了哪些類群的微生物？簡述它們的菌落特征。思考題如何確定平板上某個(gè)單菌落是否為純培養(yǎng)？請寫出實(shí)驗(yàn)的主要步驟。(P３4五.2.(1))如果一項(xiàng)科學(xué)研究內(nèi)容需從自然界中篩選到能產(chǎn)