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抗原—抗體之間的雜交詳細(xì)步驟抗原—抗體之間的雜交詳細(xì)步驟/NUMPAGES3抗原—抗體之間的雜交詳細(xì)步驟抗原—抗體之間的雜交詳細(xì)步驟Western雜交(抗原—抗體雜交)
2010-04-1518:05:10|
分類:\o"生物資料"生物資料|
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檢測目的基因是否進(jìn)入到受體細(xì)胞的方法,一般包括分子水平檢測和個體水平檢測。其中分子檢測有3個層次:1目的基因是否整合到受體細(xì)胞染色體DNA上,2目的基因是否轉(zhuǎn)錄出MRNA,3目的基因是否翻譯出蛋白質(zhì)。1和2都可以用DNA分子雜交技術(shù)檢測,3可以用抗體-抗原的方法檢測。個體水平的檢測包括抗蟲、抗病的接種實驗,以確定是否具有抗性及抗性的程度;基因工程產(chǎn)品需要與天然產(chǎn)品的功能進(jìn)行活性比較等。
stern雜交──蛋白質(zhì)分子(抗原—抗體)之間的雜交。它是檢測目的基因是否表達(dá)出蛋白質(zhì)的一種方法。具體做法是:第一步,將目的基因在大腸桿菌中表達(dá)出蛋白質(zhì);第二步,將表達(dá)出的蛋白質(zhì)注射動物進(jìn)行免疫,產(chǎn)生相應(yīng)的抗體,并提取出抗體(一抗);第三步,從轉(zhuǎn)基因生物中提取蛋白質(zhì),走凝膠電泳;第四步,將凝膠中的蛋白轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上;第五步,將抗體(一抗)與硝酸纖維素膜上的蛋白雜交,這時抗體(一抗)與目的基因表達(dá)的蛋白(抗原)會特異結(jié)合。由于這種抗原—抗體的結(jié)合顯示不出條帶,所以加入一種稱為二抗的抗體,它可以與一抗結(jié)
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