第七八九章酶

第七章酶通論酶的概念酶的分類與命名酶的化學(xué)本質(zhì)酶作用的專一性酶的制備與酶活力的測定提要一、酶的概念酶是生物細(xì)胞產(chǎn)生的、具有催化能力的蛋白質(zhì)。定義：酶是生物體內(nèi)進(jìn)行新陳代謝不可缺少的受多種因素調(diào)節(jié)控制的具有催化能力的生物催化劑。酶具有一般催化劑的特征：1.只能進(jìn)行熱力學(xué)上允許進(jìn)行的反應(yīng)；2.可以縮短化學(xué)反應(yīng)到達(dá)平衡的時間，而不改變反應(yīng)的平衡點；3.通過降低活化能加快化學(xué)反應(yīng)速度。2.專一性：酶對底物和催化的反應(yīng)都具有嚴(yán)格的選擇性。3.酶易失活性：對環(huán)境條件極為敏感。4.可調(diào)性：酶活性的調(diào)節(jié)和酶合成速度的調(diào)節(jié)。濃度；活性酶作為生物催化劑的特點：1.高效性：通常要高出非生物催化劑催化活性的106~1013倍。2H2O22H2O+O21mol過氧化氫酶5×106molH2O21mol離子鐵6×10-4molH2O2二、酶的化學(xué)本質(zhì)（一）大多數(shù)酶是蛋白質(zhì)(1)酶是蛋白質(zhì):1926年,JamesSummer由刀豆制出脲酶結(jié)晶確立酶是蛋白質(zhì)的觀念，其具有蛋白質(zhì)的一切性質(zhì)。(2)核酶的發(fā)現(xiàn)：1981～1982年，ThomasR.Cech實驗發(fā)現(xiàn)有催化活性的天然RNA—Ribozyme。L19RNA和核糖核酸酶P的RNA組分具有酶活性是兩個最著名的例子。1955年，發(fā)現(xiàn)DNA的催化活性。(3)抗體酶（abzyme）：1986年，RichardLerrur和PeterSchaltz運用單克隆抗體技術(shù)制備了具有酶活性的抗體（catalyticantibody）。ribozyme核酶（具有催化功能的RNA）

1980以前，已知所有的生物催化劑，其化學(xué)本質(zhì)都是蛋白質(zhì)。80年代初，美國科羅拉多大學(xué)博爾德分校的ThomasCech和美國耶魯大學(xué)SidneyAltman各自獨立發(fā)現(xiàn)RNA具有生物催化功能，此發(fā)現(xiàn)被認(rèn)為是近十年生化領(lǐng)域最令人鼓舞的發(fā)現(xiàn)，此二人分亨1989諾貝爾化學(xué)獎。ribozyme種類：自我剪接ribozyme自我剪切ribozyme催化分子間反應(yīng)ribozyme抗體酶abzyme(antibodyenzyme)又稱催化性抗體（catalyticantibody）

是一種具有催化功能的抗體分子。過渡態(tài)理論：酶與底物在過渡態(tài)結(jié)構(gòu)互補，親和力最強(qiáng)，釋放出的結(jié)合能使過渡態(tài)結(jié)合物能級降低，利于反應(yīng)物分子越過能壘，加速反應(yīng)?？贵w與抗原是基態(tài)結(jié)合。（二）酶的輔因子酶單純酶結(jié)合酶（全酶）=酶蛋白+輔因子輔因子輔酶：與酶蛋白結(jié)合得比較松的小分子有機(jī)物。輔基：與酶蛋白結(jié)合得緊密的小分子有機(jī)物。金屬激活劑：金屬離子作為輔助因子。酶的催化專一性主要決定于酶蛋白部分，輔因子通常是作為電子、原子或某些化學(xué)基團(tuán)的載體。酶的輔因子

酶的輔因子是酶的對熱穩(wěn)定的非蛋白小分子物質(zhì)部分，其主要作用是作為電子、原子或某些基團(tuán)的載體參與反應(yīng)并促進(jìn)整個催化過程。(1)傳遞電子體：如卟啉鐵、鐵硫簇；(2)傳遞氫（遞氫體）：如FMN/FAD、NAD/NADP、C0Q、硫辛酸；(3)傳遞?；w：如C0A、TPP、硫辛酸；(4)傳遞一碳基團(tuán)：如四氫葉酸；(5)傳遞磷酸基：如ATP，GTP；(6)其它作用：

轉(zhuǎn)氨基，如VB6；傳遞CO2，如生物素。（三）單體酶、寡聚酶和多酶復(fù)合物1.單體酶（monomericenzyme)：僅有一條具有活性部位的多肽鏈，全部參與水解反應(yīng)。

牛胰RNase124aa單鏈雞卵清溶菌酶129aa單鏈胰凝乳蛋白酶三條肽鏈單體酶種類較少，一般多催化水解反應(yīng)。2.寡聚酶(oligomericenzyme)：由幾個或多個亞基組成，亞基牢固地聯(lián)在一起，單個亞基沒有催化活性。亞基之間以非共價鍵結(jié)合。A.含相同亞基的寡聚酶

蘋果酸脫氫酶（鼠肝），2個相同的亞基。B.含不同亞基的寡聚酶

琥珀酸脫氫酶（牛心），αβ2個亞基。

寡聚酶中亞基的聚合，有的與酶的專一性有關(guān)，有的與酶活性中心形成有關(guān)，有的與酶的調(diào)節(jié)性能有關(guān)。大多數(shù)寡聚酶是胞內(nèi)酶，而胞外酶一般是單體酶。丙酮酸脫氫酶系（E.coli）：丙酮酸脫氫酶（EⅠ）、硫辛酰轉(zhuǎn)乙酰酶（EⅡ）和二氫硫辛酰脫氫酶（EⅢ）。EⅠEⅡEⅢ堿性EⅠEⅡEⅢ+EⅡEⅢ+脲3.多酶復(fù)合物(multienzymesystem)：幾個酶鑲嵌而成的復(fù)合物。這些酶催化將底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物的一系列順序反應(yīng)。大腸桿菌丙酮酸脫氫酶復(fù)合體由三種酶組成：丙酮酸脫氫酶（E1）以二聚體存在2×96000二氫硫辛酸轉(zhuǎn)乙酰基酶（E2）70000二氫硫辛酸脫氫酶（E3）以二聚體存在2×56000

12個E1二聚體24×9600024個E2單體24×700006個E3二聚體12×56000總分子量：560萬4.多酶融合體

一條多肽鏈上含有兩種或兩種以上催化活性的酶，往往是基因融合的產(chǎn)物。

例如：天冬氨酸激酶I-高絲氨酸脫氫酶I融合體（雙頭酶）該酶是四聚體α4，每條肽鏈含兩個活性區(qū)域：N-端區(qū)域是Asp激酶，C端區(qū)域是高Ser脫氫酶。三、酶的分類與命名1961年國際酶學(xué)委員會（EnzymeCommittee,EC）根據(jù)酶所催化的反應(yīng)類型和機(jī)理，把酶分成6大類：1.氧化還原酶類：主要是催化氫的轉(zhuǎn)移或電子傳遞的氧化還原反應(yīng)。AH2+B（O2）A+BH2（H2O2，H2O）（1）脫氫酶類：催化直接從底物上脫氫的反應(yīng)。AH2+BA+BH2（需輔酶Ⅰ或輔酶Ⅱ）（2）氧輝化酶妹類①催化堪底物被脫氫盞，氧刃化生產(chǎn)成H2O2：AH2+填O2A菜+H2O2（需蜘FA趴D或艘FM枝N）②催化陶底物森脫氫玩，氧摘化生季成H2O：2A煩H2+恐O22A萬+呢2H2O（3）過念氧化管物酶RO帖O跨+折H2O2RO著+框H2O手+圖O2（4）加影氧酶寺（雙厲加氧災(zāi)酶和鋤單加蜓氧酶尼）O2+OHOHC=OC=OOHOH（順，震順-已二榜烯二適酸）RH+O2+還原挖型輔舍助因因子ROH+低H2O+氧化蚊型輔杠助因榨子（又表稱羥化柔酶）2.轉(zhuǎn)移添酶類：催化淚化合弱物中斜某些景基團(tuán)斗的轉(zhuǎn)鞋移。A·X+豪BA英+B曾·X根據(jù)X分成8個亞裝類：階轉(zhuǎn)移耀碳基雹、酮抄基或厘醛基載、酰龍基、蔥糖基沉、烴標(biāo)基、皺含氮就基、陶含磷例基和麗含硫乖基的戀酶。3.水解灑酶類：催牙化加蒼水分愧解作借用。AB撇+H2OAOH+土BH4.裂解越酶類?。捍呋诜撬o解性饅地除狗去基倒團(tuán)而滾形成武雙鍵繭的反屢應(yīng)或秘逆反夏應(yīng)。CH3C=OCOOHC—祥C鍵CH3C=OH+CO2C—殼O鍵CH2COOHHO—CH—COOHHCCOOHHOOCCH+H2OC—賴N鍵COOHCH—NH2CH2COOHCOOHCHHCCOOH+NH35.異構(gòu)域酶：催要化訂各種土異構(gòu)歇體之家間的醬互變診。AB常見隔的有湊消旋朗和變蛋旋、銹醛酮正異構(gòu)仰、順碼反異優(yōu)構(gòu)和發(fā)變位萄酶類。6.合成位酶類：催群化有AT孔P參加賺的合挺成反散應(yīng)。A+B+ATPA·B+ADP+Pi乳酸脫氫酶EC1.1.1.27第1大類，氧化還原酶第1亞類，氧化基團(tuán)CHOH第1亞亞類，H受體為NAD+該酶在亞亞類中的流水編號酶的鏟命名隆有兩毀種方從法：系統(tǒng)喪名、慣用窄名。系統(tǒng)技名：包能括所虜有底億物的腸名稱撈和反飯應(yīng)類礎(chǔ)型。乳酸+NA透D+丙酮海酸+NA蠟DH帖+興H+乳酸積：NA脹D+氧化就還原鋒酶系統(tǒng)到名稱但包括咸底物壺名稱閃、構(gòu)秋型、變反應(yīng)貝性質(zhì)遷，最袋后加嫁一個管酶字安。習(xí)慣限命名姿法:根據(jù)陣其催胸化底申物來季命名,蛋白歉酶、愛淀粉全酶；根據(jù)擊所催裙化反旺應(yīng)的躍性質(zhì)錄來命溉名,水解抖酶、槐轉(zhuǎn)氨序酶;結(jié)合梨上述白兩個周原則膚來命應(yīng)名,琥珀氧酸脫揮氫酶；有時暖在這察些命感名基堪礎(chǔ)上滑加上候酶的繭來源總或其潑它特?fù)觞c,胃蛋冒白酶秋、牛之胰凝洞乳蛋飼白酶。乳酸貝：NA少D+氧化慶還原母酶乳酸接脫氫扒酶對于汽催化忠水解絹反應(yīng)禮的酶風(fēng)一般敢在酶地的名將稱上胸省去羨反應(yīng)朵類型譜。國際焦分類預(yù)的盲燈區(qū)：忽略披了酶壯的物班種差尺異和陰組織石差異望。SO矩D：上E籮C1君.1路5.楊1.點1，只有剃一個捏名稱毛和編箏號2O2-+2狼H+→H2O2+O2三類瞞不同束的SO勿D：Cu存Zn-S林OD真核膝生物甲細(xì)胞橡質(zhì)中Mn-S煩OD真核惰生物旦線粒序體中Fe床-S史OD同是Cu厲Zn-S浪OD悔，來自徹牛紅耍細(xì)胞走與豬蒼紅細(xì)市胞的家，其裹一級然結(jié)構(gòu)言也有肝很大孫不同纏。在討?zhàn)囌撘桓珎€具駐體的辟酶時藍(lán)，應(yīng)困對它波的來贈源與浮名稱相一并愛加以芹說明課。四、暴酶作薯用的陶專一情性酶作用竹的專數(shù)一性結(jié)構(gòu)翁專一啟性立體糠異構(gòu)骨專一鑒性族（少基團(tuán)婆）專御一性絕對槐專一結(jié)性族專一舅性：慮可作薄用于拒一類牢或一辛些結(jié)繡構(gòu)很揮相似逐的底漆物。RCOO-+ROH+H+′酯酶：R—C—O—R′+H2OOOCH2OHOHOHOH15α-葡萄糖苷酶OR+H2OOCH2OHOHOHOHOH15+ROH絕對依專一產(chǎn)性：亞只能狡作用四于某棗一底經(jīng)物。脲酶：H2N—C—NH2+H2OO2N謎H3+隆CO2五、揪酶的累分離佳提純胸及活陷力測擇定（一鑒）酶暢的分脆離提捷純（二優(yōu)）酶灶的量吉度二、扁酶的禮量度用酶謹(jǐn)?shù)幕钅懔谓?jīng)位表隆示1.酶活互力與嫁酶促僅反應(yīng)推速度酶活憶力：在一狠定條呈件下頁，酶顛催化解某一忙反應(yīng)桿的反叛應(yīng)速籠度。酶促籃反應(yīng)飲速度焦：單位瓶時間隊、單抗位體掃積中智底物米的減測少量或針產(chǎn)物嗚的增數(shù)加量社。單位飽：濃度/單位摩時間研究慣酶促飯反應(yīng)筋速度最，以婦酶促競反應(yīng)日的初音速度躬為準(zhǔn)準(zhǔn)。2.酶的壯活力原單位佳（U）標(biāo)準(zhǔn)突單位五：在特犁定條鏈件下達(dá)，1分鐘銳內(nèi)轉(zhuǎn)救化1μmo沈l底物遭的酶帝量，盞稱一額個國偷際單描位（IU品）。特定揀條件文：25岸℃絕，pH及底縮慧物濃技度采佩用最絨適條明件。實際蹤蝶工作徒中，蜓每一資種酶告的測統(tǒng)活方影法不穿同，絮對酶赴單位擇分別增有一暴個明舌確的蛇定義類。酶活廈力單蕉位酶活屢力可全用單沫位時匠間內(nèi)斷單位護(hù)體積賄中底輩物的駕減少譯量或透產(chǎn)物尿的增咽加量兇表示險，單贊位為mo杰l/啦mi虎n等。酶活厚力單釀位的羨基本儀定義為：烤規(guī)定第條件晉（最氧適條幸件）妙下一削定時守間內(nèi)療催化勸完成炎一定凍化學(xué)京反應(yīng)杜量所屬需的蟻酶量沙。據(jù)不鵲同情姐況有策幾種責(zé)酶活腎力單胸位（ac粘ti樣vi磚ty流u養(yǎng)ni何t）或又綁稱酶單碗位（en陷zy炸me析u爺ni潑t）紗。國際并單位：一般這用活貝力單矩位U（按Un斬it些）表示趣，許掩多酶饑活力賠單位偏都是盟以最撈佳條滲件或舅某一癢固定撤條件庭下每鏡分鐘碎催化賺生成趁1μmo俱l產(chǎn)物柔所需征要的妖酶量陷為一鞠個酶軌活力繁單位一個碧“Ka論ta渣l”單位繩是指策在一柏定條艱件下1秒鐘減內(nèi)轉(zhuǎn)逼化1mo唐l底物澡所需按的酶愚量。Ka滿t和U的換炭算關(guān)囑系：1Ka勞t=內(nèi)6×箱107U，扶1U獻(xiàn)=1呆60板67nKa愚t以上展的酶管單位謠定義監(jiān)中，果如果仗底物繭（S）有一求個以葛上可概被作理用的室化學(xué)迅鍵，款則一口個酶躲單位燦表示1分鐘泡使1μm扭ol有關(guān)領(lǐng)基團(tuán)近轉(zhuǎn)化飲的酶捧量。露如果脅是兩催個相怒同的需分子丘參加果反應(yīng)普，則繭每分且鐘催俯化2μm趴ol底物浩轉(zhuǎn)化哨的酶耐量稱證為一辭個酶照單位撞。在“U”和“ka窄t”酶活駐力單劣位的娛定義比和應(yīng)具用中欺，酶霞催化停底物鍬的分出子量歲必須蘿是已晚知的傅，否鉤則將依無法偷計算。習(xí)慣輕單位：在實株際使確用中蒸，結(jié)糖果測利定和累應(yīng)用勇都比床較方擇便、張直觀偵，規(guī)砌定的洞酶活偽力單共位，隙不同洋酶有孔各自申的規(guī)效定，晝?nèi)纾禾脾佴?淀粉擾酶活公力單趴位：每汁小時逃分解1g可溶級性淀粘粉的羽酶量隸為一盒個酶刻單位搭。（QB倡54繭6-甜80于），也有飽規(guī)定闖每小忽時分桂解1mL互2%可溶竟性淀耳粉溶猛液為良無色地糊精頭的酶演量為罷一個當(dāng)酶單亞位。刺顯然擇后者優(yōu)比前若一個鑄單位但小。艷②糖化花酶活蹤蝶力單但位：在損規(guī)定賊條件驗下，怨每小院時轉(zhuǎn)濁化可濾溶性姑淀粉規(guī)產(chǎn)生1mg還原災(zāi)糖（濟(jì)以葡策萄糖營計）鞠所需倡的酶帆量為故一個戰(zhàn)酶單倒位。廉③蛋白菌酶：規(guī)嚼定條突件下潤，每江分鐘端分解氏底物青酪蛋慣白產(chǎn)綁生1μg酪氨慈酸所稻需的拿酶量蹈。④DN營A限制區(qū)性內(nèi)洗切酶：推憐薦反加應(yīng)條侮件下抄，一覆小時祝內(nèi)可陶完全童消化1μg純化誘的DN娘A所需掃的酶核量。攏限制拘性核淘酸內(nèi)機(jī)切酶圖的3種定攻義：用粘淹度法殿測活勝性：30恥℃，敗1分鐘浪，使姑底物DN種A溶液垮的比限粘度氣下降25潑%的酶據(jù)量為1個酶艱單位鈔。轉(zhuǎn)化步率法木：5分鐘線使1μg供體DN添A殘留37堂%的轉(zhuǎn)陡化活瞧性所便需的援酶量葡為1個酶暮單位損。凝膠距電泳終法測襖活：37換℃，瘦1小時遲，使1μgλ拒DN爺A完全柱水解否的酶取量為1個酶屋單位父。淀粉禍酶兩找種定山義：A：猛1g可溶皇性st養(yǎng)ar降ch怠，在1h內(nèi)液被化所頸需的en嘗zy川me量。B：lm訊l2%可溶謀性st輪ar顆ch煌，在1h內(nèi)液姓化所妹需的en匯zy貌me量。3.酶的剃比活侮力Sp擦ec理if果ic腥ac男ti河vi吉ty每毫襖克酶恐蛋白泛所具宇有的匯酶活宜力。單位狐：U/族mg蛋白悲質(zhì)。酶的仙比活蹄力是剩分析息酶的侄純度竭的重伐要指而標(biāo)。一個某酶的蠟分離績純化吵分為4步：步驟1煉2熊3繪4總活球力（U）讀6臥4吃3速2總蛋拉白質(zhì)插（mg互）樓2替0艷10歉5節(jié)2比活棗力（U/咐m(xù)g挽）碌6/癥20逮4/爆10嚇3宋/5色2/車2酶的車提純斗過程統(tǒng)中，原總蛋密白減鋼少，差總活日力減濫少，紛比活宮力增禮高。酶的撕純化慰倍數(shù)和：酶的研回收衡率：×1含00置%一個韻酶的陣分離永純化沒分為4步：步驟1鳴2爽3糧4總活握力（U）捧6越4潮3垮2總蛋翼白質(zhì)漢（mg牧）丈2繼0君10許5腰2比活基力（U/劍mg混）均6/麻20是4/鑼10仍3趕/5根2/辨2酶的添提純樣過程梯中，階總蛋閃白減隆少，濃總活霞力減夕少，辜比活秘力增黃高。酶的旬純化扯倍數(shù)伐：酶的捉回收謙率：×1份00調(diào)%4.酶的亡轉(zhuǎn)換肌數(shù)和坡催化本周期每秒單鐘每妖個酶斃分子煌轉(zhuǎn)換墾底物漏的微飲摩爾叔數(shù)稱勝為轉(zhuǎn)練換數(shù)Kca設(shè)t，。P2議44表4犁—4某些克酶的憲最大撈轉(zhuǎn)換紅數(shù)每秒識鐘每班個酶船分子叫轉(zhuǎn)換努底物燦的分覺子數(shù)吸。轉(zhuǎn)換枝數(shù)的食倒數(shù)律即為禽催化疫周期犁：一個新酶分煎子每耍催化枯一個鑄底物摟分子爪所需想的時胞間。乳糖蛙脫氫籃酶轉(zhuǎn)五換數(shù)徐為10咸00稻/秒，定則它稈的催蔬化周雖期為10-3秒。例題蕩：某無細(xì)胞膽的粗貫提液定，每ml含2啟0mg蛋白勤質(zhì)。上在0.餃5ml的標(biāo)州準(zhǔn)總照反應(yīng)倉體積鮮中，勁含有10l這中提取臣液。牽在最灘適宜妻條件教下，塘一分丘鐘內(nèi)捆生成30ng的產(chǎn)玩物。抱求：用下乘述單于位表臘示反木應(yīng)速聚度v燦:nm蕉ol/m劑l向/m樂in悼,nm妨ol/L狼/m卡in扮,mo芽l/閑L/振mi圓n,辛m啄ol貧/L腐/m須in若1位0l該提中取液稀，在1ml總反勢應(yīng)體藥積中孫進(jìn)行六實驗廳，其韻反應(yīng)砍速度嫩是多包少？反應(yīng)陪混合憐液和候提取幫液中聞酶活捕性濃色度各氣是多閉少？酶制滅劑的妨比活丙力是險多少烤？解：V=腎30袖/0插.5鐮=6希0nm校ol/m農(nóng)l/座mi據(jù)n=6哲01主03nm星ol/L按/m熔in=6是0裳m濃ol偏/L且/m孫in=6蠟范1腹0-5mo桂l/策L/叉mi羊nV=貼30說/1唇=閱30nm紀(jì)ol/m耀l/勢mi光n=3適稼1橡0-5mo路l/詢L/臨mi厚n反應(yīng)立液酶廟活性盟濃度=60nm慢ol/m這l/核mi佩n=0債.0丑6負(fù)mo荒l/并ml雹/m墓in=0寄.0勇6單位/ml0.文5森ml的反葵應(yīng)液浪內(nèi)含0.杏03單位挎酶，危即10重l堅(0命.0駛1壩ml互)提取趕液含0.素03單位外酶，艘所以蔥：提取斗液酶伍活性辭濃度=0暗.0篩3/農(nóng)0.射01捐=3單位/ml酶比唇活=3團(tuán)/2太0=纏0.妻05單位/mg蛋白酶的愉制備潛與活剛力的灰測定——酶活訂力是廳指酶傭催化似某一萍化學(xué)云反應(yīng)繁的能司力。酶（敵活力金）單聚位：在暖一定厚條件乎下，決一定母時間荒內(nèi)將方一定宿量的走底物貴轉(zhuǎn)化該為產(chǎn)價物所掠需的駐酶量劉。（U/繳g，壞U/港ml遭）在最址適的蟲反應(yīng)釘條件煤（25影℃）下稅，每評分鐘濃內(nèi)催豎化一塞微摩堆爾底像物轉(zhuǎn)刷化為謠產(chǎn)物副的酶柜量定基為一游個酶鍬活力嗚單位價，即1IU怎=1有μm蹈ol礦/m被in在最適帥條件閉下，桑每秒知鐘內(nèi)萌使一川摩爾喬底物蕉轉(zhuǎn)化爛為產(chǎn)諒物所聯(lián)需的姜酶量務(wù)定為1ka伶t單位周，即1ka舌t=逆1m嘴ol市/s1k睜at占=紋6聞×1哨07IU工業(yè)擦上大住多采查用微生掀物發(fā)立酵的方根法來氏獲得迫大量銷酶制翻劑。優(yōu)點叼：不撞受氣手候、對地理視條件逼的限光制，現(xiàn)動、辭植物籃體內(nèi)無的酶耍大多黑可從冷微生匯物體出內(nèi)找端到，愁微生煙物繁呆殖快助，產(chǎn)腎酶量沾由豐滋富。尊還可華以通倆過選枝育菌踐種來割提高擁酶的刑產(chǎn)量爸和用失廉價貿(mào)原料傻大量屋生產(chǎn)豪。酶分稀離純想化的悄三個個基本敬步驟頃：抽叔提，燭純化虛，結(jié)脖晶或幣制劑頸。方法輕：1.根據(jù)紀(jì)溶解賊度不崗?fù)}堅析法取、有糧機(jī)溶須劑沉銷淀法清、等櫻電點天沉淀戀法、拍選擇肆性沉膚淀法辟）；2.根據(jù)稀酶與咬雜蛋勸白分臨子大卷小的歡差別（凝泥膠過輸濾法疫、超齒離心贏法）溫；3.根據(jù)乒酶和茶雜蛋趣白與嬌吸附甚劑之翠間吸盲附與根解吸建附性妙質(zhì)的惹不同（吸相附分反離法馳）；4.根據(jù)溜帶電盟性質(zhì)（離絡(luò)子交督換層植析法與、電周泳分撈離法地、等厚電聚腿焦層寨析法竊）；5.根據(jù)排酶與兼雜蛋把白的旋穩(wěn)定老性差唱別（選寬擇性閣變性大法）盈；6.根據(jù)斃酶與趨底物元、輔銀因子擔(dān)或抑洗制劑劍之間目的專構(gòu)一性沒親和水作用（親揪和層功析法櫻）。酶的答純度：比活么力=活力紀(jì)單位韻數(shù)/毫克觀蛋白孕（氮周）純化倍數(shù)=——————每次比活力第一次比活力產(chǎn)率%（回收率）=——————×100每次總活力第一次總活力酶的輛純化肝鑒定：聚法丙烯犯酰胺逝凝膠樸電泳黑法、株等電擁聚焦趴電泳洪法酶的治保存：1.低溫恐（0~偏4℃處，-屋20需℃）；2.高濃勤度較射穩(wěn)定贏；3.加入歉穩(wěn)定道劑；4.固定落化。酶的咱固定測化就振是把臂水溶推性酶軋經(jīng)物理鉤（吸脖附法見與包鑒埋法泛）或化學(xué)月方法償（共負(fù)價偶蓋聯(lián)法婆與交茄聯(lián)法囑）處理教后，壁使酶素與惰瀉性載欲體結(jié)尊合或刷將酶炮包埋情起來聯(lián)成為趟一種狗不溶振于水突的狀掛態(tài)。吸附嫁法：使階酶被攻吸附臺于惰創(chuàng)性固墓體的搭表面苦，或摟吸附盯于離最子交值換劑首上。包埋保法：使賓酶包守埋在奪凝膠璃的格啄子中瞞或聚礎(chǔ)合物陸半透蔬膜小份膠囊甲中。偶聯(lián)禾法：使淺酶通殘過共碰價鍵黑連接型于適病當(dāng)?shù)膮柌蝗軈^(qū)于水賞的載糾體上癢。交聯(lián)養(yǎng)法：使須酶分構(gòu)子依飛靠雙仗功能濫基團(tuán)鵝試劑鋼交聯(lián)彼聚合井成“錘網(wǎng)狀羽”結(jié)初構(gòu)。第八羊章酶促雄反應(yīng)在動力穩(wěn)學(xué)酶促筍反應(yīng)鋸的速況度和翠影響陽酶促反應(yīng)沉速度省的因典素一、便酶反莖應(yīng)速賊度的坑測量用一定捏時間珠內(nèi)底政物減桶少或個產(chǎn)物謝生成派的量智來表禁示酶出促反新應(yīng)速弄度。椒測定傻反應(yīng)川的初速化度。102030405060min產(chǎn)物生成量酶反應(yīng)進(jìn)程曲線二、谷酶濃娃度對葵酶作姐用的亭影響在有足夠發(fā)底物和其炮他條蟻件不失變的莊情況簽下：v蓄=裙k喂[E男]三、盜底物鍵濃度芝對酶歡作用奇的影扣響1.底物僵濃度紙對酶父反應(yīng)堪速度倒的影甲響[S]vVmax一級懇反應(yīng)v采=壟k[S唐]零級期反應(yīng)v搬=北k[E疊]在酶擔(dān)濃度塘，pH丸，溫度抄等條薦件不曬變的練情況忌下研登究底編物濃瓜度和版反應(yīng)柄速度癥的關(guān)能系。盼如右攝圖所激示：在低戰(zhàn)底物口濃度鐘時,反應(yīng)湊速度階與底當(dāng)物濃敢度成燙正比城，表劫現(xiàn)為一級蹦反應(yīng)勺特征。當(dāng)?shù)捉佄餄獠级冗_(dá)尤到一朝定值抄，幾押乎所贏有的冷酶都事與底穗物結(jié)蹦合后噸，反濃應(yīng)速石度達(dá)振到最嚇大值革（Vma牽x），此時虛再增兇加底年物濃獻(xiàn)度，健反應(yīng)薯速度過不再克增加怠，表訪現(xiàn)為零級暈反應(yīng)。用中間積產(chǎn)物敬學(xué)說解釋胸底物炸濃度愚與反痰應(yīng)速王度關(guān)位系曲產(chǎn)線的二相廚現(xiàn)象：S+EESE+P當(dāng)?shù)孜锖鯘舛腮o很低蠻時，丟有多仁余的訊酶沒病與底配物結(jié)章合，如隨著千底物多濃度剝的增依加，動中間靈絡(luò)合燦物的罰濃度某不斷互增高茅。當(dāng)?shù)孜锎疂舛葮爿^高渡時，四溶液燃中的碑酶全禮部與竄底物進(jìn)結(jié)合息成中怪間產(chǎn)趨物，堵雖增雅加底晴物濃訪度也夸不會尼有更描多的翻中間爬產(chǎn)物職生成重。2.米氏問方程中式（Mi該ch熔ae輸li寄s-Me刪nt累eneq凝ua踐ti驚on我）k1k2k3設(shè)km=———k2+k3k1v=——————Vmax·[S]km+[S]（km＞＞[S脫]，v=k[S笨]；km＜＜[S蟻]，v=Vma桂x）米氏須方程耽的推質(zhì)導(dǎo)：3.米氏營常數(shù)版的意吸義及場測定v=克Vma躍x/2文，則：km=柄[S傘]意義：（1）km是酶記的一驗個基舅本的宵特征揀常數(shù)。其覺大小門與酶拘的濃羊度無飲關(guān)，立而與射具體煮的底氣物有閃關(guān)，停且隨坡著溫偶度、pH和離鑰子強(qiáng)侄度而屠改變京。（2）從km可判柏斷酶鑰的專朽一性駱和天杏然底垃物。Km最小誼的底鍛物，樹通常欄就是錫該酶盞的最贏適底葉物，毯也就處是天千然底番物。（3）當(dāng)k2＞＞k3時，km的大小宮可以郊表示美酶與杠底物覺的親勝和性?！遦m=歇（k2+k3)/k1Km≈k2/k1S+EESE+P∴km可以躬看作ES的解雀離常夠數(shù)ks：km=ks=————[S][E][ES]當(dāng)km大，再說明ES容易倘解離仙，酶廚與底忙物結(jié)興合的染親和遣力小霜。（4）從km的大佛小，暑可以飛知道唐正確諷測定襯酶活塔力時旨所需耽的底疼物濃榮度。[S]v1000km0.999V100km0.99V10km0.91V3km0.75V1km0.50V0.33km0.25V0.10km0.091V從米氏獅方程休中求鏟得：當(dāng)反嘗應(yīng)速科度達(dá)主到最蒙大反摩應(yīng)速信度的90躁%，則90答%V悄=刊10泛0%獻(xiàn)V[憐S]哭/(km+[椒S]紀(jì))v=——————Vmax·[S]km+[S]即[S]菜=夸9km在進(jìn)行騾酶活尊力測槽定時任，通茶常用4km的底羊物濃鮮度即羨可。（5批）km還可過以推霜斷某侍一代淹謝物嗓在體津內(nèi)可指能的癢代謝剝途徑。丙酮慕酸乳酸乙酰Co青A乙醛乳酸光脫氫嫁酶（1.舟7×厘10-5）丙酮挑酸脫呼氫酶涼（1.心3×泳10-3）丙酮季酸脫濟(jì)羧酶授（1.霧0×扭10-3）當(dāng)丙酮武酸濃臨度較布低時運，代圖謝走幻玉哪條奴途徑棄決定酷于km最小籃的酶減。米氏從常數(shù)孝可根比據(jù)實擾驗數(shù)鍛據(jù)作尸圖法頸直接完求得?。合榷銣y定然不同合底物爬濃度勻的反贈應(yīng)初茂速度僚，從v與[S]的關(guān)敏系曲明線求放得V，然后少再從1/透2V求得步相應(yīng)舊的[S]即為km（近似狠值）厚。通常境用Li城ne犬we涼av盼er-B悅ur嫁k作圖交法（壩雙倒床數(shù)作壓圖法翅）——1v=——kmV·——[S]1+——V1（y=夏ax+量b）斜率=km/Vma由x1/[S]1/v1/Vma嘗x-1剛/km四、pH對酶香作用損的影斯響pHv最適pH（optimumpH）1.最適pH2.pH穩(wěn)定性表現(xiàn)出酶最大活力的pH值在一定的pH范圍內(nèi)酶是穩(wěn)定的pH對酶作用的影響機(jī)制：1.環(huán)境過酸、過堿使酶變性失活；2.影響酶活性基團(tuán)的解離；3.影響底物的解離。五、攪溫度橫對酶貓作用因的影鑼響兩種禾不同色影響斗：1.溫度喘升高逐，反貴應(yīng)速極度加倚快；2.溫度帥升高革，熱輪變性班速度宅加快。Tv最適途溫度六、久激活章劑對融酶作肯用的潛影響——抹凡能提高全酶活備力的藍(lán)物質(zhì)坊都是幫酶的鵲激活糾劑。內(nèi)如Cl-是唾中液淀斷粉酶毅的激綠活劑匯。（ac宵ti侵va絨to辜r)娃。其中耕大部梢分是貌一些碎無機(jī)泰離子吳和小錘分子撲簡單癥有機(jī)夾物。如：Na+、K+、C冊a2+、M幻玉g2+、C拌u2+、Z埋n2+、C液o2+、C皆r2+、F阿e2+、Cl-、B己r-、I-、C福N-、N稀O3-、P僵O4-等；這些撐離子慶可與可酶分忘子上哀的氨慘基酸震側(cè)鏈敢基團(tuán)探結(jié)合糊，可悉能是童酶活賠性部蛇位的鼠組成持部分惹，也當(dāng)可能偵作為機(jī)輔酶豪或輔變基的祝一個編組成龜部分舅起作栽用；一般秧情況趕下，瓶一種岸激活哥劑對情某種喂酶是忍激活舞劑，矛而對飾另一塑種酶油則起獎抑制攤作用著；對于終同一州種酶碎，不弦同激踢活劑繭濃度長會產(chǎn)煮生不剃同的滔作用義。抑制膜劑對酶浸反應(yīng)嫌的影垂響有些況物質(zhì)稿能與氣酶分鳥子上回某些童必須歉基團(tuán)倦結(jié)合惑（作止用),使酶聯(lián)的活長性中伸心的冒化學(xué)尿性質(zhì)聲發(fā)生鴨改變理，導(dǎo)郊致酶么活力悠下降泛或喪莫失，燭這種太現(xiàn)象輪稱為酶的特抑制永作用。能夠弦引起墊酶的即抑制枕作用蠢的化鍛合物捉則稱夠為抑制師劑（in亂hi曾bi睛to少r)角。酶的婚抑制騙劑一態(tài)般具間備兩往個方唯面的特點：a.在化纏學(xué)結(jié)晝構(gòu)上復(fù)與被抵抑制水的底己物分錫子或恒底物矮的過渴渡狀身態(tài)相用似。b.能夠貪與酶合的活鑰性中貢心以級非共陷價或呈共價滾的方暈式形同成比恩較穩(wěn)直定的頑復(fù)合音體或難結(jié)合而物。七、剩抑制喜劑對么酶作欣用的駕影響——使酶姻的必連需基姐團(tuán)或懶活性慢部位杜中的霜基團(tuán)鴨的化繡學(xué)性螺質(zhì)改晶變而腹降低謠酶活養(yǎng)力甚到至使尤酶失燭活的泉物質(zhì)這，稱動為抑嘉制劑策（I）俊。(一）趨抑制背作用胡類型1.不可望逆抑類制作收用：抑腐制劑椒與酶掉的結(jié)鐘合（岸共價夕鍵）巖是不貌可逆菜的。S+EESE+P+I↓EIE—隆SH脂+鞠IC塘H2CO煤OH子→情E—絕S—喚CH2CO日OH區(qū)+頓H鋒I不可收逆抑支制作約用：抑制漏劑與旺酶反疼應(yīng)中國心的陷活性告基團(tuán)撐以共獅價形桃式結(jié)河合，棒引起物酶的居永久翻性失供活。膝如有慘機(jī)磷酷毒劑巴二異刪丙基接氟磷奶酸酯嗎。（2）可嚷逆抑潮制作做用：抑濱制劑預(yù)與酶槍的結(jié)耍合是沉可逆霸的。抑制元程度扮是由船酶與慌抑制捧劑之民間的杜親和煤力大狼小、電抑制湖劑的返濃度帳以及婚底物母的濃謹(jǐn)度決頁定。[E]v1231.反應(yīng)憐體系己中不杜加I。2.反應(yīng)葉體系閉中加去入一爽定量季的不螺可逆拐抑制做劑。3.反應(yīng)捐體系葛中加評入一邁定量盒的可訴逆抑捏制劑手。[E]v不可逆抑制劑的作用[E]v可逆抑制劑的作用[I]→[I]①競爭源性抑閉制作待用：抑掀制劑氣和底采物競共爭與四酶結(jié)蔬合。特點：1）抑朵制劑擠和底萌物競咸爭酶條的結(jié)菠合部優(yōu)位S+EESE+P+I↑↓EIv=———————V[S]km(1+[I]/ki)+[S]ki=競[E][I]/合[EI][S]vV/2km2）抑燃制程對度取注決于I和S的濃變度以捷及與窄酶結(jié)衛(wèi)合的領(lǐng)親和廚力大閱小。km′無I有I3）競禮爭性李抑制嚴(yán)劑的靈結(jié)構(gòu)量與底癥物結(jié)蛇構(gòu)十康分相沉似。某些豆抑制揉劑的削化學(xué)松結(jié)構(gòu)厚與底療物相箭似，我因而盡能與擁底物杜竟?fàn)幟放c酶煮活性恰中心晌結(jié)合特。當(dāng)浴抑制撕劑與相活性亡中心駝結(jié)合準(zhǔn)后，渴底物歲被排凈斥在若反應(yīng)慚中心餓之外相，其舅結(jié)果低是酶則促反戀應(yīng)被憑抑制映了。竟?fàn)幈砸趾Y制通本?？芍抟酝ǘㄟ^增收大底旱物濃要度，賤即提穿高底暗物的鄉(xiāng)豐競爭倆能力悲來消追除。有競尼爭性奧抑制候劑存挽在時攜，Km值增兆大(1偷+[I]長/K武i)倍，滔且Km值隨[I]的增殃高而猶增大項；在[E]固定搭時，覽當(dāng)[S]家﹥漲﹥餐Km販(該1+以[I劫]/雨Ki容),漿K眾m雨(1遮+[陪I]茂/K綱i)項可咸忽略夜不計扮，則v=Vm清ax，即最鑄大反紛應(yīng)速摩度不鹽變。競爭拔性抑飯制作廈用的艷速度訂方程沉：競爭昂性抑稀制作陷用的Li逗ne遇we翠av逢er–Bu英rk圖孕：②非競爭坐性抑陣制作爭用：底償物和貼抑制乳劑同但時與攜酶結(jié)戴合，肌但形釣成的EI槍S不能胡進(jìn)一婚步轉(zhuǎn)附變?yōu)橄鳟a(chǎn)物從。S+EESE+P+I↑↓EI+I↑EIS+[S]E+Pv=———————————V1+[I]/ki·[S]km+[S][S]v無IV/2km有I(′)非競副爭性口抑制房誠：酶可顯同時先與底劈燕物及篩抑制熟劑結(jié)渴合，因引起勞酶分角子構(gòu)贊象變童化，繁并導(dǎo)左至酶執(zhí)活性滅下降泡。由柏于這肺類物轉(zhuǎn)質(zhì)并冒不是攀與底矩物競鳴爭與餐活性緊中心炸的結(jié)群合，糕所以開稱為超非競鬼爭性胞抑制瞇劑。如某抓些金歐屬離旅子（Cu2+、A載g+、H累g2+）以及ED益TA等，扇通常皂能與禾酶分暑子的矛調(diào)控嶺部位您中的-SH基團(tuán)淘作用驢，改役變酶驕的空練間構(gòu)熄象，慶引起協(xié)非競堡爭性棋抑制疏。非竟許爭性誰抑制目不能榆通過百增大廉底物膏濃度帳的方褲法來橡消除。③反競狀爭性搜抑制形作用：抑宣制劑厲必須類在酶堪與底呀物結(jié)攪合后頁才能孤進(jìn)一觸步形懼成ES俗I復(fù)合由物。S+EESE+P+I↑↓ESIE+Pv=———————V1+——[I]ki·[S]km1+——[I]ki+[S][S]vkm′km有反互競爭太性抑太制劑扔存在踏時，Km和V值均逆減小(1基+[I]墻/K腳i)倍，廉且都四隨[I]的增捏高而鍋降低。反競臣爭性勒抑制：酶只預(yù)有在術(shù)與底照物結(jié)廊合后葬，才桌能與泉抑制繁劑結(jié)行合，志引起略酶活植性下襲降。反競裝爭性模抑制享可用撇下式徒表示鴿：反競女爭性嘴抑制朋作用齡的速讀度方惡程：反競紋爭性皆抑制市作用謠的Li毯ne蜜we千av片er–Bu肚rk圖思：失活固作用停：抑制停作用之：使酶蕩活力向下降舌但并框不引膚起酶端蛋白前變性。研究憐抑制習(xí)劑對自酶的捧作用頌有重福大的愛意義嬌：A.藥物徑作用秘機(jī)理席和抑塘制劑節(jié)型藥蘆物的押設(shè)計約與開瓣發(fā)：剖抗癌王藥B.對生情物體亮的代讓謝途忌徑進(jìn)燒行人悠為調(diào)懲控，鄉(xiāng)豐代謝傘控制托發(fā)酵顯。C.研究店酶的馬活性招中心動的構(gòu)砌象及顏其化賴學(xué)功雅能基色團(tuán)，另不僅約可以照設(shè)計惱藥物筒，而爺且也舞是酶除工程乏和化霧學(xué)修桿飾酶撈、酶盼工業(yè)招的基櫻礎(chǔ)。（二）罵一些威重要塊的抑掛制劑1.非專摘一性常不可槐逆抑捷制劑A.?；邉┒悢?shù)丙基津磷酰焦氟酯閣（DF嗽P，神經(jīng)制毒氣添）和鐵許多璃有機(jī)信磷農(nóng)探藥。與酶閱活性右中心Se戒r的—OH結(jié)合，抑制渾某些尺蛋白攔酶及拆酯酶謹(jǐn)。作用次機(jī)理崇：強(qiáng)勝烈地岔抑制澆與中奴樞神蝕經(jīng)系潛統(tǒng)有退關(guān)的反乙酰蜻膽堿酯留酶。-Ser-OH-Ser-OPO-RO-ROPO-RO-ROX解磷血定對有宏機(jī)磷根農(nóng)藥跌抑制怎作用饑的研拉究，犧已知脆道一肢些肟衫類或追羥肟林酸化篩合物堵能將叼有機(jī)希磷化攔合物盤從酶趨分吧子上陪取代臟下來何，使哥已被射有機(jī)屠磷農(nóng)聰藥抑蜘制的護(hù)膽堿銀酯酶松有顯仙著的漲活力寶恢復(fù)棟作用癢，這痰些化蜓合物漿稱為重有機(jī)姥磷農(nóng)法藥解債毒劑弊或叫則膽堿您酯酶英復(fù)能刻劑，葡例如妨解磷雜定（茄碘化稱醛肟矮吡啶賓）和寬氯磷取定（拒氯化碎醛肟碼吡啶僑）都掠是當(dāng)油前搶劇救有號機(jī)磷性農(nóng)藥難中毒鬧病人報較好齒的解例毒藥閣物。B.有機(jī)炭汞、曠有機(jī)孔砷化挪合物許多鵲有機(jī)侵汞、琴有機(jī)我砷化毫合物塑，可做與酶壞的巰膠基作極用。路易皆斯毒槽氣解毒箏劑：原二巰揭基丙閘醇C.氰化棄物與含產(chǎn)鐵卟城啉的吃酶中猛的Fe2+結(jié)合蘆，阻袋抑細(xì)偽胞呼柏吸。D.重金彎屬Ag滑、C槍u、提Hg文、Cd、Pb能使丟大多啞數(shù)酶饑失活軋，ED消TA可解嚷除。E.還原剛劑巰基賠乙醇視、二炎硫蘇渡糖醇奮等巰嬌基試消劑還糠原酶我的二私硫鍵F.烷化挺劑使-SH烷化G.親電嘩試劑四硝荒基甲瞎烷，紐奉可使Ty粗r硝基訪化。類型：非專芳一性等不可礎(chǔ)逆抑曉制劑2.專一戲性不滋可逆俊抑制劉劑此類渡抑制屯劑僅惕僅和鳳活性們部位雹的有見關(guān)基括團(tuán)反悄應(yīng)。A.胰凝顯乳蛋婚白酶購的最銷佳底驚物：亞對-甲苯喘磺酰-L-苯丙捧氨酸紫甲酯抑制鬼劑：撒對-甲苯培磺酰-L-苯丙蝴氨酰血氯甲功烷（TP概CK培）-C刮H2-c月l與酶顏活性傻部位吩的一的個Hi鄉(xiāng)豐s-咪唑兼基距泰離很元近，添很易辱使之慣烷基膝化。B.自殺排性底婦物與底堅物類基似，糖既能起與酶印結(jié)合樂，也俱能被究催化振發(fā)生找反應(yīng)床。潛伏波反應(yīng)偷基團(tuán)猴（la雕te曲nt寬re洪ac炸ti廟ve墳gr但ou羅p）被酶礙催化么而活背化，密并立裕即與掏酶活社性中核心某纖基團(tuán)磨進(jìn)行旺不可凝逆結(jié)姿合，古使酶她受抑熱制。例：炔類賠化合渣物是少以FM疾N、界FA痰D為輔贏基的溜單胺躍氧化收酶的煩不可弱逆抑手制劑隙。單胺包氧化渴酶能華氧化冰某些麻血管貨舒張棄劑（撞如組玻胺）謝。由于是迫降爹靈是宴一種商單胺怒氧化既酶的滋自殺暗性底劇物，青因而旁抑制鄭一些筋血管側(cè)舒張棒劑（分如組搬胺）危的氧凈化，妨降低環(huán)血壓桿的作忽用，柏是治門療高魄血壓弓的良亦藥。專一徐性不艇可逆近抑制瀉劑的泰專一恐性很谷強(qiáng)，傭近來做已設(shè)宣計出扁多種束酶的癢專一拔性逆相制劑止，在附醫(yī)療張方面嗽起到招很大耐作用勸。例：云以FM紡N或FA燥D為輔笛酶的螞單胺征氧化桌酶的Kc筍at型不?？赡嬲Q抑制艦劑迫降斷靈Kc艷at型不慎可逆扎抑制靈劑特塌點與底貓物結(jié)吼構(gòu)類榮似，希但分連子中模還有脆潛伏富的反寫應(yīng)基莖團(tuán)。優(yōu)當(dāng)它喊與底速物結(jié)潑合后窩，其懇潛伏吧的反剖應(yīng)基窯團(tuán)被椒酶催薯化而紐奉活化形，并博立即俗與酶準(zhǔn)活性緩中心殊某基率團(tuán)呈效不可蜻逆結(jié)深合，茄使酶曲遭受名抑制援。此謙類抑速制劑六亦稱夸酶的霧自殺謙性底猶物。3、可患逆抑化制劑抗代奸謝物糾：許多道和酶果的底淚物在秩結(jié)構(gòu)盈上類崗似的道化合謎物，異往往欣具有斯抗菌找抗癌種的作蓬用，峽如磺返胺藥法、磺鉗胺藥翅中的孫對氨笛基苯屬磺胺料，它做的結(jié)鐘構(gòu)與零對氨滔基苯斃磺酸慘十分剃相似當(dāng)，是栽對氨謝基苯罰甲酸屠的競克爭性偽抑制盒劑，站而對樓氨基黨苯甲鞏酸是至葉酸它的一珠部分茶，葉輪酸是冷催化去一碳等化合籃物轉(zhuǎn)愛移的晴（如靜甲酸朽、甲霞醛）啄、磺掘胺藥芝物代控替了齒對氨醫(yī)基苯丈甲酸讀以后更，就戒失去牧了轉(zhuǎn)川移一匯碳化禿合物汁的功捧能、艘細(xì)菌鴿生長桌繁殖顧就受懸到影憲響。例：磺胺間類藥蹦物及慌其作攜用機(jī)賴?yán)韺Π蹦蚧角锘酋Ｎ冒坊驕?zhǔn)其衍吐生物對氨沃基苯農(nóng)甲酸寒的結(jié)獻(xiàn)構(gòu)類寸似物輛，競廟爭性疾抑制組二氫幫葉酸促合成餓酶活產(chǎn)性蝶呤對氨今基苯頁甲酸Gl損u二氫添葉酸污合成采酶二氫掀葉酸四氫梁葉酸嘌呤標(biāo)核苷粘酸一碳截單位一碳寫單位磺胺固類藥腳物磺胺蟻類藥保物的鏡抗菌訴機(jī)理勺：磺胺纖藥通希式：對氨麥基苯啟甲酸訊：又如擔(dān)：丙熔二酸溝、蘋婆果酸地、草茄酰乙不酸等壺與琥建珀酸估脫氫呢酶的洗底物婚很相丘似，掉都可或以與儀琥珀猛酸競拼爭琥資珀酸譯脫氫機(jī)酸，構(gòu)從而刷影響貪到琥辱珀酸仙的脫紗氫反幣應(yīng)，賢如果鴿反應(yīng)德中增卻加底蝴物琥辣珀酸五濃度量，就策可把易與琥職珀酸產(chǎn)結(jié)合籠的酶掘取代士出來蛾，解蒙除或做減輕哲抑制拒作用愁，從筆而保椒證琥馳珀酸塑脫氫攀酶的講正常暈進(jìn)行榆。1、毒鄭害金傍屬酶感的抑允制劑潮：氰化悠物，割硫化蜓物和快一氧路化碳疏等能鹽和金甲屬形已成較拐為穩(wěn)餡定的蝕絡(luò)合鵲物，軌因而掛使金亡屬的膊酶活閘性受傭到睡抑制啦，例槳如：且細(xì)胞班色素敲氧化予酶中拉的Fe2+易被應(yīng)氰化憐物、鄭硫化潑物和月一氧星化碳糞結(jié)合怠，使塌酶失哪活，勿阻抑周細(xì)胞豈的呼疲吸。另一種嫌表述慣：2、巰怒基酶惜的抑叫制劑睬：很多造酶分概子中獸的巰規(guī)基是甲表現(xiàn)見其功址能所孔必須希的基斯團(tuán)，誼當(dāng)巰翅基發(fā)宏生改軋變酶掛活力讓就喪翠失，眼這類鄙酶就挺稱為貝疏基倒酶，隔例如里脲酶緣瑞、3-磷酸秧甘油漿醛脫訊氫炮酶、污蛋白帶酶、α-淀粉析酶等央都屬柜巰基龍酶。巰基正酶的鬧抑制庫劑有摘：過兆氧化何氫、泉碘化溝物、療砷化毅物、求有機(jī)呈汞等填。如對疫氯汞需苯甲靠酸可殺以與腔疏基湖作用這類脅酶抑抵制劑腳可因封加入烘過量次的巰裝基化均合物餓，如偶半胱aa或還曾原型岔谷胱畝甘肽余（G-螺SH征）而解森除。解毒近作用腰。3、重低金屬恩鹽毒熄物：重金灑屬鹽截的Ag+、稅Cu當(dāng)2+傭、H壤g秧2+發(fā)Pb閘2+剖F渾e3軋+等在伙高濃臘度時只能作訪為蛋腹白質(zhì)油沉淀閥劑而著使酶筋變性銅失活奔。可用ED攏TACy婆s、焦磷商酸鹽原等解訓(xùn)毒。4、有歐機(jī)磷屋農(nóng)藥峽：主要桶含-OH酶的德抑制或劑，宇如二守異丙議基氟粥磷酸鹿，農(nóng)服藥中鼻的敵僅百蟲澡、滴恥滴畏上、樂祥果等常，它荒們能瞧高度花地抑慨制酯鑄酶類牌的活域力。對有隸機(jī)磷幕農(nóng)藥悶抑制芒作用鬼的研芹究，紋已知揀道一編些肟脈類繼或扣羥肟紀(jì)酸化樂合物翁能將現(xiàn)有機(jī)忙磷化名合物厘從酶準(zhǔn)分蝦子上謎取代寧下來攻，使蕉已被凡有機(jī)飄磷農(nóng)圣藥抑鴉制的祖膽堿訂酯酶早有顯呀著的蔽活力雙恢復(fù)度作用本，這狐些化欺合物靈稱為療有機(jī)父磷農(nóng)奸藥解紀(jì)毒劑惑或叫劣膽堿盼酯酶摘復(fù)能為劑，婆例如朱解磷濤定（旅碘化化醛肟念吡啶扇）和禍氯磷甘定（沖氯化牲醛肟卵吡啶陣）都編是當(dāng)妖前搶南救有濟(jì)機(jī)磷盟農(nóng)藥快中毒中病人出較好呀的解晶毒藥郊物。第九柴章酶作野用的面機(jī)制猴及調(diào)斃節(jié)一、軟酶的其活性慶部位（一）商酶活笨性部鮮位的團(tuán)特征1、只伍占酶選分子靠的一氧小部腰分（1%互-2逝%）；2、是靜一個獻(xiàn)三維泥實體漂；3、酶煙和底工物分餐子的屈識別張過程配是誘哲導(dǎo)契膝合；4、位垃于酶帽分子邊表面宰的裂找縫內(nèi)沿；5、通燭過次劣級鍵前與底潛物結(jié)旗合；6、具威有柔銳性和柱運動想性。酶結(jié)準(zhǔn)構(gòu)與斥功能秘特點蛋白糊質(zhì)的蓋結(jié)構(gòu)胞特點樸：一級拋、二哄級、淚三級染、四驕級結(jié)唐構(gòu)根據(jù)捕結(jié)構(gòu)咬不同裳酶可匠分為交：單體裙酶：只仁有單栽一的污三級州結(jié)構(gòu)半蛋白扁質(zhì)構(gòu)外成。寡聚望酶：由催多個坡（兩打個以灑上）煮具有愈三級色結(jié)構(gòu)狠的亞飾基聚屯合而砍成。多酶稅復(fù)合律體：由幼幾個皺功能送相關(guān)怨的酶樓嵌合騾而成銅的復(fù)援合體虜。與催槐化作炒用相蘇關(guān)的慚結(jié)構(gòu)壯特點(1企)活性嚇中心籠：酶周分子引中直廈接和線底物壩結(jié)合嘉并起嫂催化佳反應(yīng)執(zhí)的空性間局足限（奴部位拖）。結(jié)合弟部位(Bi縣nd梳in躬g棵si憤te殃)：酶分尚子中著與底融物結(jié)弊合的駛部位且或區(qū)尖域一魄般稱千為結(jié)采合部完位。催化族部位(Ca罰ta倆ly早ti傘c說si袍te):酶分刻子中瓶促使增底物哀發(fā)生分化學(xué)鍛變化諒的部普位稱幻玉為催胸化部文位。通常惡將酶摸的結(jié)侍合部犯位和保催化坑部位互總稱俯為酶厚的活羊性部凳位或麥活性防中心撈。結(jié)合食部位荒決定柴酶的桌專一補性，催化顛部位濕決定合酶所拴催化厘反應(yīng)臘的性膀質(zhì)。調(diào)控矩部位(Re糞gu礎(chǔ)la餐to迷ry腹s茅it申e)項:酶分趁子中羊存在雄著一吸些可敲以與頭其他命分子很發(fā)生疏某種圣程度化的結(jié)環(huán)合的鏡部位右，從東而引據(jù)起酶鉛分子腦空間原構(gòu)象馬的變嶺化，殿對酶林起激錫活或湖抑制晃作用胰凝語乳蛋畝白酶片的活部性中捷心活性揀中心津重要泳基團(tuán):Hi涌s57,揚As灣p10光2,禮Se杠r19丟5為Ty賢r24勢8為Ar赴g14杰5為Gl促u27誼0為底愧物ZnZn羧肽酶活性中心示意圖

(2劈燕)必須基團(tuán)度：酶述表現(xiàn)取催化黎活性沃不可達(dá)缺少欣的基之團(tuán)。親核纖性基省團(tuán)：桂絲氨盆酸的究羥基蕉，半種胱氨券酸的氏巰基腹和組庸氨酸藍(lán)的咪異唑基斗。酸堿勝性基稻團(tuán)：狐門冬夜氨酸翁和谷翻氨酸筍的羧樸基，嘗賴氨令酸的辜氨基魚，酪網(wǎng)氨酸貝的酚昨羥基或，組宮氨酸哀的咪戀唑基效和半間胱氨飛酸的傷巰基朗等。親核彩性基爽團(tuán)酸堿饑性基愈團(tuán)誘導(dǎo)構(gòu)嵌合歌學(xué)說“鎖澤鑰學(xué)扇說”（Fi矩sc絹he蠶r，治18姿90溉）：酶的插活性叫中心敘結(jié)構(gòu)戚與底枝物的愉結(jié)構(gòu)殃互相丈吻合鴉，緊膏密結(jié)叢合成淚中間鉛絡(luò)合壩物。誘導(dǎo)虛嵌合乒學(xué)說（Ko攪sh投la疲nd，1鉆95搏8）畢：酶活異性中強(qiáng)心的百結(jié)構(gòu)壞有一材定的照靈活薯性，沾當(dāng)?shù)姿铮ù导せ顔釀┗虮灰种凄l(xiāng)豐劑）宴與酶晨分子融結(jié)合逃時，易酶蛋括白的翼構(gòu)象斗發(fā)生叛了有化利于跑與底婦物結(jié)琴合的騎變化震，使哥反應(yīng)臥所需茄的催啦化基女團(tuán)和被結(jié)合云基團(tuán)紫正確希地排訴列和袋定向聯(lián)，轉(zhuǎn)著入有檢效的撥作用智位置樹，這湯樣才吉能使孩酶與忠底物徹完全梢吻合皆，結(jié)務(wù)合成歉中間火產(chǎn)物誼。酶的趕結(jié)構(gòu)望與功汪能的蠅關(guān)系活性琴部位延和必午需基爭團(tuán)必需顏基團(tuán)：這細(xì)些基伏團(tuán)若貢經(jīng)化瞎學(xué)修勵飾使誼其改閣變，凳則酶賊的活條性喪猛失。活性凝部位：酶沖分子免中直繩接與貼底物遷結(jié)合友，并遞和酶游催化魯作用叛直接暫有關(guān)遠(yuǎn)的部聲位。必需給基團(tuán)活性掙部位維持梁酶的魚空間搶結(jié)構(gòu)結(jié)合主基團(tuán)催化耕基團(tuán)專一答性催化令性質(zhì)二、判斷摔和研膏究活克性中榨心的動主要鏟方法（1）通座過酶全的專打一性（2）酶惠的化央學(xué)修蕩飾法（3）親免合標(biāo)改記法（4）X射線柿晶體真衍射諒法三、授酶催濃化作撫用的謀機(jī)理（一）妥酶的暴催化造作用蠶與分特子活擦化能化學(xué)繭反應(yīng)佳自由巡壽能方桶程式ΔG=ΔH-TΔ見S（ΔG是總自由骨能的脅變化紐奉，ΔH是總熱能籃的變喚化，ΔS是熵正的變彎化）當(dāng)ΔG＞0仆，反應(yīng)策不能熄自發(fā)倘進(jìn)行近。當(dāng)ΔG＜0呀，反應(yīng)卸能自敏發(fā)進(jìn)懲行?；罨_(dá)能：分觀子由謹(jǐn)常態(tài)掠轉(zhuǎn)變粗為活蠟化狀初態(tài)所透需的帽能量狼。是揚指在慘一定消溫度榮下，1mo肉l反應(yīng)投物全藥部進(jìn)芽入活腹化狀翻態(tài)所角需的瞇自由滲能。促使嶼化學(xué)撐反應(yīng)逃進(jìn)行留的途袖徑：用加援熱或省光照久給反金應(yīng)體憤系提莊供能略量。使用投催化貪劑降廟低反麗應(yīng)活氏化能發(fā)。酶催男化作地用的本質(zhì)：就是堡降低活化學(xué)臉反應(yīng)啦所需屠的活澆化能悅，從聾而使老活化溉分子逗數(shù)增顛多，伯反應(yīng)礎(chǔ)速度栗加快有。（二）酶催次化作雹用的盜中間筑產(chǎn)（微絡(luò)合亂）物濫學(xué)說E+SESE+P在酶嶄催化彼的反域應(yīng)中旗，第廉一步煉是酶曾與底偵物形血成酶堤－底輸物中窄間復(fù)博合物拆。當(dāng)樓底物樂分子勤在酶沒作用捷下發(fā)距生化墊學(xué)變桌化后登，中浮間復(fù)妻合物戴再分慎解成乓產(chǎn)物足和酶暗。中間艱產(chǎn)物簡存在宣的證冶據(jù)：1.同位扶素32P標(biāo)記息底物舊法（佩磷酸裂化酶惹與葡吐萄糖順結(jié)合紐奉）；2.吸收晨光譜舞法（提過氧情化物于酶與途過氧已化氫舌結(jié)合奴）。1、中吃間產(chǎn)寧物學(xué)挎說2.酶與異底物滲結(jié)合桿形成快中間役絡(luò)合恭物的泄方式蘭（理其論）(1法)鎖鑰翻假說(lo鮮ck臥a問nd國k貨ey西h路yp雹ot犯he堆si則s)碗：認(rèn)為勿整個罩酶分吃子的塊天然蓄構(gòu)象之是具鋪有剛踏性結(jié)終構(gòu)的泉，酶