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文檔簡介
一、色譜分析法:1、簡介:基于混合物各組分在體系中兩相的物理、化學性能差異(如吸附、分配差異等)而進行分離和分析的方法。國際公認俄國M.C.茨維特為色譜法的創(chuàng)始人。菠菜的葉綠體中色素的提取和分離
2、色譜法的應用展示:(1)按流動相和固定相的不同,色譜法分為氣相色譜法和液相色譜法。氣相色譜法的流動相是氣體,液相色譜法的流動相是液體(2)按吸附劑及其使用形式可分為柱色譜、紙色譜和薄層色譜。(3)按吸附力可分為吸附色譜、離子交換色譜、分配色譜(4)按色譜操作終止的方法可分為展開色譜和洗脫色譜。(5)按進樣方法可分為區(qū)帶色譜、迎頭色譜和頂替色譜。3、色譜法的分類:紙色譜,以濾紙為載體,是以濾紙纖維及其結合水作為固定相,以有機溶劑作為流動相的分配色譜分離。紙上色譜分離具有設備簡單、操作方便、分離效率高、所需樣品量少等優(yōu)點,但分離量少、回收困難,分離速度慢等;柱色譜,具有進樣量大,回收容易等優(yōu)點,但其分辨率不如紙上色譜和薄層色譜高;薄層色譜分離,將固定相在玻璃平板上鋪成薄層而進行分離的一種分離技術。薄層色譜是柱色譜和紙上色譜兩者的結合。二、實驗原理
含有Cu2+和Fe3+的溶液涂在濾紙一端,丙酮作展開劑,在濾紙的毛細作用下,展開劑攜帶Cu2+和Fe3+沿濾紙纖維向上移動因為速度不同(吸附和溶解能力的不同),一段時間后,Cu2+和Fe3+距起點的距離會不同,從而達到分離的目的。三、實驗操作要點及主要實驗現(xiàn)象
1.操作要點(1)裁紙(2)點樣(3)展開(4)顯色(5)
分離四:實驗方案設計裝置制作點層析試樣配展開劑層析操作顯色反應操作步驟:操作要點:濾紙剪成約1cm寬,10cm長(保證下端能浸入展開劑中1cm)的濾紙條,一端固定在橡膠塞上,在距濾紙條一端2cm處用鉛筆畫一小圓點。配試樣后,用毛細管蘸取試樣在“原點”處點直徑0.3-0.5cm的斑點,晾干后再點。重復3-5次。也在濾紙下方距離底邊2cm處畫出混合液細線代替點樣。用丙酮9mL,6mol/L鹽酸1mL配成展開劑。展開劑不可沾到試管壁,點樣后的濾紙條不可接觸試管內(nèi)壁,濾紙條下端浸入展開劑中1cm,注意不要讓試樣點觸及展開劑。注意觀察濾紙條上色帶的變化,濾紙條取下后用氨氣熏,觀察顏色變化;氨熏應在通風櫥中進行(1)層析過程中的實驗現(xiàn)象(2)氨熏后的實驗現(xiàn)象五、實驗操作要點及主要實驗現(xiàn)象
用小燒杯代替大試管。用鐵絲橫穿過濾紙,架在燒杯上方(如圖)。調(diào)節(jié)完濾紙高度后,蓋上培養(yǎng)皿形成氣室。
氯化鐵層,顏色較深硫酸銅層,顏色稍淺用紙層析法分離鐵離子和銅離子六、實驗注意事項1、為防止水解,飽和FeCl3和CuSO4可加少量HCl或H2SO4酸化,不影響實驗效果。2、氨熏需在通風實驗室內(nèi)進行。3、層析速度開始較快,后逐漸減慢,大約10分鐘即可分離完全。1、藥品準備:菠菜葉4-5克;石英砂1克(可用細砂代替);丙酮;層析液按石油醚9份、丙酮1份(體積比)配制,也可用20份石油醚、2份丙酮、1份苯配制,或用汽油代替2、實驗現(xiàn)象3、
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