基因工程第二章基因克隆所需的工具酶

基因工程第二章基因克隆所需的工具酶第一頁(yè)，共四十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五2023/5/26蘇州科技學(xué)院生物系葉亞新天然DNA的來(lái)源染色體DNA、病毒和噬菌體DNA、質(zhì)粒DNA、線粒體和葉綠體DNA天然DNA的提取準(zhǔn)備生物材料裂解細(xì)胞分離和抽提DNA第二節(jié)天然DNA的制備第二頁(yè)，共四十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五2023/5/26蘇州科技學(xué)院生物系葉亞新限制性核酸內(nèi)切酶（restrictionendonuclease）是一類能識(shí)別雙鏈DNA中特殊核苷酸序列．并使每條鏈的一個(gè)磷酸二酯鍵斷開的內(nèi)脫氧核糖核酸酶一

.限制性內(nèi)切酶的發(fā)現(xiàn)

1.

細(xì)菌限制修飾系統(tǒng)的發(fā)現(xiàn)

WernerArber于1962-1968年發(fā)現(xiàn)，1968年分離到I型限制酶。

2.限制酶HindII的發(fā)現(xiàn)

H．O．Smith和Wilox于1970年首次從流感嗜血桿菌（H.influenzae）中發(fā)現(xiàn)并分離到HindII限制酶。

3.SV40限制圖譜和轉(zhuǎn)錄圖譜的繪制

D.Nathans（1971年）用HindII繪制SV40的限制酶譜。第三節(jié)限制性核酸內(nèi)切酶和DNA片斷化第三頁(yè)，共四十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五2023/5/26蘇州科技學(xué)院生物系葉亞新1.

I型：由三個(gè)基因構(gòu)成，hsdR；hsdM；hsdS（hostspecificityforDNArestrictionmodificationandspecificity）位于染色體上，三個(gè)基因構(gòu)成一個(gè)復(fù)合體，限制酶需要ATP、Mg2+、SAM（５—腺苷甲硫氨酸）。2.

II型：限制與修飾基因產(chǎn)物獨(dú)立起作用，在Ｅ.coli中這兩種基因位于質(zhì)粒上。3.

III型：修飾酶與Ｉ型酶相同，hsdＭ與hsdＳ基因產(chǎn)物結(jié)合成一亞單位，限制酶是獨(dú)立存在的。上述三個(gè)系統(tǒng)中，只有II型限制酶與甲基化酶具有相當(dāng)高的核苷酸識(shí)別特異性，因而被廣泛用于基因工程中。

二、限制修飾系統(tǒng)的種類第四頁(yè)，共四十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五2023/5/26蘇州科技學(xué)院生物系葉亞新1.定義：廣義指上述三個(gè)系統(tǒng)中的限制酶；狹義指II型限制酶。

2.命名：限制酶由三部分構(gòu)成，即細(xì)菌種屬名、菌系編號(hào)、分離順序。例如：HindⅢ前三個(gè)字母來(lái)自于菌種名稱H.influenzae，“ｄ”表示菌系為ｄ型血清型；“Ⅲ”表示分離到的第三個(gè)限制酶。EcoRI—EscherichiacoliRIHindⅢ—Haemophilus

influensaedⅢSacI(II)—Streptomyces

achromagenesI(Ⅱ)三.限制性內(nèi)切酶的定義、命名第五頁(yè)，共四十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五2023/5/26蘇州科技學(xué)院生物系葉亞新1.識(shí)別順序和酶切位點(diǎn)１）識(shí)別４-8個(gè)相連的核苷酸

MboINGATCN；AvaIIGG(A/T)CCBamHIGGATCC；PpuMIPuGG(A/T)CCPyNotIGCGGCCGC；

SfiIGGCCNNNNNGGCCCCGGN’N’N’N’N’CCGGFokI5’-ＧＧＡＴＧ(Ｎ)9-3’3’-ＣＣＴＡＣ(Ｎ)13-5’

外側(cè)，產(chǎn)生５’-端突起２）富含ＧＣ四．限制酶的特點(diǎn)第六頁(yè)，共四十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五2023/5/26蘇州科技學(xué)院生物系葉亞新３）對(duì)稱性—雙對(duì)稱

EcoRI5’-GAATTC-3’3’-CTTAAG-5’

４）切點(diǎn)大多數(shù)在識(shí)別順序之內(nèi)，也有例外５）限制酶切后產(chǎn)生兩個(gè)末端，末端結(jié)構(gòu)是５’-Ｐ和３’-ＯＨ

2.

末端種類１）３’-端突起，個(gè)數(shù)為２或４個(gè)核苷酸

PstI5’-CTGCAG-3’5’-CTGCAG-3’3’-GACGTC-5’3’-GACGTC-5’

２）５’-端突起，個(gè)數(shù)為２或４個(gè)核苷酸

EcoRI5’-GAATTC-3’5’-GOHPAATTC-3’

3’-CTTAAG-5’3’-CTTAAPHOG-5’四．限制酶的特點(diǎn)第七頁(yè)，共四十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五2023/5/26蘇州科技學(xué)院生物系葉亞新３）

平齊末端

SmaI5’-CCCGGG-3’5’-CCCGGG-3’3’-GGGCCC-5’3’-GGGCCC-5’

４）非互補(bǔ)的粘性末端ａ）切點(diǎn)在識(shí)別順序之外的，如：FokIFokI5’-GGATG(Ｎ)9-3’5’-GGATG(N)93’-CCTAC(Ｎ)13-5’3’-CCTAC(N)13

ｂ）能識(shí)別簡(jiǎn)并順序的，如：AvaI

AvaI5’-CPyCGPuG-3’

CCCGGG;CTCGGG;CCCGAG;CTCGAG四．限制酶的特點(diǎn)第八頁(yè)，共四十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五2023/5/26蘇州科技學(xué)院生物系葉亞新

1.定義：能識(shí)別相同序列但來(lái)源不同的兩種或多種限制酶

2.特點(diǎn)：1）識(shí)別相同順序

2）切割位點(diǎn)的異同

KpnIGGTACCAsp718GGTACCSstICCGCGGSacICCGCGG五.異源同序酶（isoschizomer，同裂酶）第九頁(yè)，共四十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五2023/5/26蘇州科技學(xué)院生物系葉亞新6、限制性內(nèi)切酶的星號(hào)活性在某些反應(yīng)條件下，限制酶識(shí)別順序的特異性可能發(fā)生變化，結(jié)果一種限制酶酶切同一種DNA片斷會(huì)產(chǎn)生新的酶切位點(diǎn)，得到不同的酶切片斷，這就是限制酶的星號(hào)活性（staractivity）EcoR1GAATTC----AATT第十頁(yè)，共四十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五2023/5/26蘇州科技學(xué)院生物系葉亞新6、限制性內(nèi)切酶的星號(hào)活性引起星號(hào)活性的可能因素甘油濃度過(guò)高離子強(qiáng)度不合適陽(yáng)離子的變化溶液中PH值的變化在基因工程操作中，應(yīng)避免星號(hào)反應(yīng)的出現(xiàn)第十一頁(yè)，共四十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五2023/5/26蘇州科技學(xué)院生物系葉亞新二、限制酶的使用方法用限制酶消化DNA（酶切）是基因工程最基本的實(shí)驗(yàn)技術(shù)最常用的消化條件：反應(yīng)體積：20ul10xBuffer：2ulDNA濃度：0.5—1.0ul第十二頁(yè)，共四十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五2023/5/26蘇州科技學(xué)院生物系葉亞新二、限制酶的使用方法1、影響限制酶消化DNA的若干因素DNA的純度的影響DNA濃度的影響酶濃度的影響酶反應(yīng)條件的影響雙酶消化第十三頁(yè)，共四十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五2023/5/26蘇州科技學(xué)院生物系葉亞新影響限制酶消化DNA的若干因素DNA的純度的影響限制酶作用于純度不高的DNA時(shí)，會(huì)進(jìn)行不完全酶解（部分酶切）RNA或其他DNA的污染影響小蛋白質(zhì)污染并與DNA結(jié)合后，可能降低或終止酶切反應(yīng)解決辦法：用酚和氯仿抽提除去蛋白質(zhì)第十四頁(yè)，共四十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五2023/5/26蘇州科技學(xué)院生物系葉亞新影響限制酶消化DNA的若干因素DNA的濃度的影響DNA濃度過(guò)高帶進(jìn)更多的雜酶和雜質(zhì)如限制酶量不足，可能引起部分酶切底物濃度過(guò)高，可能引起底物抑制第十五頁(yè)，共四十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五2023/5/26蘇州科技學(xué)院生物系葉亞新影響限制酶消化DNA的若干因素酶濃度的影響1酶單位：是指在最適條件下完全消化1ugdsDNA所需要的酶量

用酶量過(guò)多，帶進(jìn)的雜質(zhì)愈多，有可能增加Dnase1的危險(xiǎn)酶切設(shè)計(jì)時(shí)，甘油濃度不要超過(guò)5％第十六頁(yè)，共四十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五2023/5/26蘇州科技學(xué)院生物系葉亞新影響限制酶消化DNA的若干因素酶反應(yīng)條件的影響一般酶的反應(yīng)條件：溫度：37℃PH：7.2時(shí)間：2小時(shí)DNA酶切反應(yīng)（控制反應(yīng)時(shí)間）完全消化部分消化第十七頁(yè)，共四十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五2023/5/26蘇州科技學(xué)院生物系葉亞新影響限制酶消化DNA的若干因素雙酶消化反應(yīng)條件相同：同時(shí)加到反應(yīng)管，同時(shí)反應(yīng)對(duì)溫度要求不同：先低溫消化，再高溫消化對(duì)鹽濃度要求不同：先低鹽酶消化，再高鹽酶消化第十八頁(yè)，共四十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五2023/5/26蘇州科技學(xué)院生物系葉亞新二、限制酶的使用方法2、單一限制酶酶切位點(diǎn)的創(chuàng)立利用甲基化酶的修飾作用改變酶的識(shí)別序列，創(chuàng)造新的識(shí)別位點(diǎn)消除反應(yīng)：某一種限制酶存在兩種識(shí)別序列，如將其中一個(gè)序列中的某個(gè)堿基甲基化，使其不能被限制酶識(shí)別，從而使另一序列成為單一酶切位點(diǎn)鄰近反應(yīng)：與限制酶識(shí)別序列鄰近的堿基有時(shí)作為某個(gè)甲基化酶的識(shí)別序列，而使其不再被限制酶所識(shí)別如BamH1：GGATCC>GGATCCGG第十九頁(yè)，共四十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五2023/5/26蘇州科技學(xué)院生物系葉亞新構(gòu)建DNA的物理圖譜DNA物理圖譜：標(biāo)明限制性內(nèi)切酶在DNA分子上的限制位點(diǎn)數(shù)目、限制片段大小及其排列順序的圖譜。又稱限制性圖譜。構(gòu)建物理圖譜的常用方法部分消化法雙酶消化法第二十頁(yè)，共四十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五2023/5/26蘇州科技學(xué)院生物系葉亞新構(gòu)建DNA的物理圖譜構(gòu)建物理圖譜的常用方法部分消化法基本原理：首先以某個(gè)酶對(duì)DNA進(jìn)行完全消化，再進(jìn)行部分消化：

部分消化的DNA大片段必定等于完全消化中相應(yīng)部位的2個(gè)以上小片段之和。根據(jù)兩類消化中片段大小的關(guān)系和交錯(cuò)重疊現(xiàn)象．找出各片段的鄰近位置，排出它們的順序。

第二十一頁(yè)，共四十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五2023/5/26蘇州科技學(xué)院生物系葉亞新某限制酶在一線型DNA分子上有三個(gè)切點(diǎn)：完全消化：A,B,C,D部分消化：BC,AD,ABC,D,ACD,B,AC,A,C推測(cè)其物理圖譜。提示：從部分消化的結(jié)果中排除與完全消化相同的單一片段，然后根據(jù)剩余片段，推測(cè)其物理圖譜從部分消化的結(jié)果中排除與完全消化相同的單一片段剩余：BC,AD,ABC,ACD,AC推測(cè)其物理圖譜為：BCAD第二十二頁(yè)，共四十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五2023/5/26蘇州科技學(xué)院生物系葉亞新從細(xì)菌中分離了一個(gè)18.1Kb的線形DNA，用AvaⅡ完全消化得到8個(gè)片段，部分消化產(chǎn)生14個(gè)片段，求其物理圖譜。完全消化片段：A(4.6),B(4.0),C(3.3),D(2.5),E(2.0),F(1.0),G(0.5),H(0.2)從部分消化的結(jié)果中排除與完全消化相同的單一片段剩余：6.6，6.5，5.3，4.2，3.8，3.5，0.7部分消化片段：6.6，6.5，5.3，4.6，4.2，4.0，3.8，3.5，3.3，2.5，1.0，0.7，0.5，0.2第二十三頁(yè)，共四十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五2023/5/26蘇州科技學(xué)院生物系葉亞新構(gòu)建DNA的物理圖譜構(gòu)建物理圖譜的常用方法雙酶消化法兩個(gè)限制性內(nèi)切酶先分別單獨(dú)消化DNA的基礎(chǔ)上，然后再同時(shí)或先后消化此DNA基本原理：?jiǎn)蚊赶瘯r(shí)的某些片段在雙酶消化時(shí)可能仍然保留，另一些片斷可能消失而出現(xiàn)新的片段，說(shuō)明一個(gè)酶的切點(diǎn)可能正好在另一個(gè)酶的片段之內(nèi)。那么，新出現(xiàn)的2或3個(gè)片段的分子量之和必然等于那個(gè)消失的大片段：根據(jù)片段的大小找出消失片段與新生片段的關(guān)系，通過(guò)它們的交錯(cuò)重疊現(xiàn)象．確定各片段間的鄰近位置，組建出此DNA的物理圖譜。

第二十四頁(yè)，共四十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五2023/5/26蘇州科技學(xué)院生物系葉亞新用雙酶消化法組建某線型DNA的物理圖譜用甲酶單獨(dú)消化產(chǎn)生兩個(gè)片段a,b用乙酶單獨(dú)消化得到三個(gè)片段A,B,C用甲酶、乙酶混合消化得到四個(gè)片段：A,1,2,C試分析其相互關(guān)系。ab甲酶ABC乙酶A12C乙酶乙酶甲酶第二十五頁(yè)，共四十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五2023/5/26蘇州科技學(xué)院生物系葉亞新從大腸桿菌分離到一個(gè)質(zhì)粒DNA，用EcoRI，HincⅡ，HpaI，SmaI進(jìn)行單一和雙酶消化，組建它們的物理圖譜

第二十六頁(yè)，共四十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五2023/5/26蘇州科技學(xué)院生物系葉亞新

根據(jù)片段的大小，將每一對(duì)酶的結(jié)果分別清理，除去在單酶和雙酶消化時(shí)共同產(chǎn)生的片段，再按照分子量大小，找出新生小片段和一個(gè)消失大片段之間的關(guān)系

第二十七頁(yè)，共四十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五2023/5/26蘇州科技學(xué)院生物系葉亞新第四節(jié)其他工具酶一、E.coliDNA聚合酶（DNApolⅠ）E.coli

的DNA聚合酶系統(tǒng)PolI參與DNA修復(fù),具3’→5’和5’→3’外切酶活性polII同上具3’→5’外切酶活性polIII參與DNA復(fù)制,具3’→5’和5’→3’外切酶活性E.colipolI的特點(diǎn)具兩種外切酶活性和DNA聚合酶活性，在蛋白酶作用下，該酶分裂成兩個(gè)大小不同的片段，其中小片段具5’→3’外切酶活性，大片段具3’→5’外切酶活性(大片段亦稱為Klenow片段,polIK)聚合酶活性，5’→3’,要求3’-OH引物和模板DNA，其延續(xù)性受反應(yīng)條件的影響（表6）外切酶活性第二十八頁(yè)，共四十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五2023/5/26蘇州科技學(xué)院生物系葉亞新一、E.coliDNA聚合酶（DNApolⅠ）5’-->3’聚合酶活性催化單核甘酸結(jié)合到DNA模板的3‘－OH末端5‘CCGOHDNApolⅠ5’CCGATAGCCTGGCTATCGGA

Mg2+GGCTATCGGA第二十九頁(yè)，共四十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五2023/5/26蘇州科技學(xué)院生物系葉亞新一、E.coliDNA聚合酶（DNApolⅠ）3’-->5’外切酶活性從游離的3‘－OH末端降解dsDNA成為單核甘酸，但是它解離掉的部分主要是未配對(duì)的ssDNA.(其對(duì)dsDNA的外切活性可被5’3‘多聚活性所抑制)5‘CCGTATCGGAOHDNApol15’CCGGGCMg2+GGC第三十頁(yè)，共四十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五2023/5/26蘇州科技學(xué)院生物系葉亞新一、E.coliDNA聚合酶（DNApolⅠ）5’-->3’外切酶活性從5‘末端降解dsDNA成為單核甘酸，

5‘

GATAGCCTDNApol15’

TAGCCT3’GGCTATCGGAMg2+3’GGCTATCGGA第三十一頁(yè)，共四十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五2023/5/26蘇州科技學(xué)院生物系葉亞新E.coliDNApolⅠ在基因工程中的作用制備高比活的DNA探針（采用缺口平移技術(shù)）用于分子克隆DNA序列分析第三十二頁(yè)，共四十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五2023/5/26蘇州科技學(xué)院生物系葉亞新二、DNA聚合酶Ⅰ大片斷（Klenow酶）5’-->3’聚合酶活性催化單核甘酸結(jié)合到DNA模板的3‘－OH末端5‘CCGOHDNApol15’CCGATAGCCTGGCTATCGGA

Mg2+GGCTATCGGA第三十三頁(yè)，共四十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五2023/5/26蘇州科技學(xué)院生物系葉亞新二、DNA聚合酶Ⅰ大片斷（Klenow酶）3’-->5’外切酶活性作用底物主要是ssDNA.(其對(duì)dsDNA的外切活性由于受到聚合酶作用的阻礙大大降低)第三十四頁(yè)，共四十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五2023/5/26蘇州科技學(xué)院生物系葉亞新二、DNA聚合酶Ⅰ大片斷（Klenow酶）在基因工程中的作用用同位素標(biāo)記DNA片斷的3‘末端

當(dāng)DNA經(jīng)限制酶酶切產(chǎn)生5‘端伸出的末端時(shí)，可用Klenow酶催化，在3’端標(biāo)記上與5‘端伸出的堿基順序互補(bǔ)的核甘酸，在此反應(yīng)中應(yīng)用的同位素必須是α－32P-dNTP第三十五頁(yè)，共四十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五2023/5/26蘇州科技學(xué)院生物系葉亞新CTTAA5’Gα－32P-dATPCTTAA5’GA*A*Klenow酶CTTAA5’Gα－32P-dATPα－32P-dTTPCTTAA5’GA*A*T*T*

Klenow酶第三十六頁(yè)，共四十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五2023/5/26蘇州科技學(xué)院生物系葉亞新二、DNA聚合酶Ⅰ大片斷（Klenow酶）在基因工程中的作用用同位素標(biāo)記DNA片斷的3‘末端用Klenow酶可將5‘端伸出的末端填平為平末端在反向轉(zhuǎn)錄合成cDNA的實(shí)驗(yàn)中，用Klenow酶合成雙鏈cDNA,除去3‘端的單鏈末端

第三十七頁(yè)，共四十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五2023/5/26蘇州科技學(xué)院生物系葉亞新三、T4DNA連接酶缺口(gap)切口(nick)斷口(cut)3'HOP5'3'HOP5'ds-DNA結(jié)構(gòu):切口,缺口,斷口第三十八頁(yè)，共四十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五2023/5/26蘇州科技學(xué)院生物系葉亞新三、T4DNA連接酶1.特點(diǎn)：只連接ds-DNA分子，要求3’-羥基和5’-磷酸基

2.用途：

1)

相同或相容粘性末端的連接

2)平整末端的相連

DNA平端來(lái)源：限制酶作用結(jié)果;限制酶與其它酶共同作用結(jié)果。平端的連接比粘性末端的連接要困難得多，所需的酶量也多3.抑制劑：

PO43->5mM,NaCl>25mM,Ca++>0.1mM第三十九頁(yè)，共四十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五2023/5/26蘇州科技學(xué)院生物系葉亞新5’-AAGCTT-3’5’-AOH

PAGCTT-3’PAGCTTAOH3’-TTCGAA-5’3’-TTCGAP

HOA-5’HOATTCGAP

退火

5’-AHOPAGCTTAHOPAGCTT-3’3’-TTCGAPOHATTCGAPOHA-5’

或

5’-AHOPAGCTTAHOPAGCTT-3’3’-TTCGAPOHATTCGAPOHA-5’

T4DNA連接酶

5’-AAGCTTAAGCTT-3’3’-TTCGAATTCGAA-5’

或

5’-AAGCTTAAGCTT-3’3’-TTCGAATTCGAA-5’T4DNA連接酶的連接反應(yīng)(兩種插入方向)

+第四十頁(yè)，共四十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五2023/5/26蘇州科技學(xué)院生物系葉亞新四、逆轉(zhuǎn)錄酶(依賴RNA的DNA聚合酶)

一種有效轉(zhuǎn)錄RNA成為DNA的酶，產(chǎn)物為cDNA,（互補(bǔ)DNA）由兩種亞基組成，帶有聚合酶活性和外切酶活性。聚合酶作用以RNA和DNA為模板，合成DNA

mRNA－cDNA，

sscDNAdscDNA.第四十一頁(yè)，共四十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五2023/5/26蘇州科技學(xué)院生物系葉亞新四、逆轉(zhuǎn)錄酶(依賴RNA的DNA聚合酶)3‘外切核酸酶作用（RNaseH）從DNA.RNA的雜交鏈中特異性地降解RNA鏈，進(jìn)而保留新合成的DNA鏈在基因工程中的作用用mRNA為模板合成單鏈cDNA，或以單鏈cDNA合成雙鏈cDNA（制備cDNA庫(kù)的常用方法）制備各種分子雜交的探針，用于檢測(cè)DNA或RNA第四十二頁(yè)，共四十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五2023/5/26蘇州科技學(xué)院生物系葉亞新五、核酸酶SI（單鏈特異的核酸酶）降解ssDNA或ssRNA形成5‘－磷酸末端的單核甘酸或寡核甘酸片斷。在基因工程中的作用證明基因內(nèi)部的間隔順序在cDNA合成中切開cDNA雙鏈的發(fā)夾構(gòu)建新的質(zhì)粒使用注意事項(xiàng)

1)避免長(zhǎng)時(shí)間反應(yīng)，因最適酸性pH將導(dǎo)致DNA斷裂或降解

2)避免使用高濃度酶量，以免DNA被降解(因產(chǎn)生切口)第四十三頁(yè)，共四十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五2023/5/26蘇州科技學(xué)院生物系葉亞新六、甲基化酶一.甲基化酶的種類與識(shí)別順序

1.

限制修飾系統(tǒng)I、II、III型中的甲基化酶三個(gè)系統(tǒng)中的甲基化酶可使細(xì)菌DNA分子中的胞嘧啶和腺嘌呤發(fā)生甲基化，形成5’-甲基胞嘧啶和6’-甲基腺嘌呤：在DNA重組實(shí)驗(yàn)中，常用的甲基化酶屬于II型，它與相應(yīng)的限制酶的識(shí)別順序相同，其甲基化位點(diǎn)與限制酶作用位點(diǎn)可同可不同。如：M.EcoRIGAmATTCCEcoRIGAATTC不同

M．HpaICmCGGHpaICCGG相同第四十四頁(yè)，共四十八頁(yè)，編輯于2023年，星期五2023/5/26蘇州科技學(xué)院生