組培實驗室設(shè)計及設(shè)備配制（植物組織培養(yǎng)）

學習終極目標能設(shè)計組培實驗室和組培苗生產(chǎn)小型工廠能熟練運用植物組培尤其是“無菌”概念設(shè)計組培室能運用組培生產(chǎn)工藝流程配置組培“四室”和相應(yīng)儀器設(shè)備能使用主要設(shè)備，并運用原理進行維護和修理促成目標教學目標學習目標項目介紹

自20世紀60年代以來，植物組織培養(yǎng)已經(jīng)從實驗室研究階段發(fā)展成為一種大規(guī)模成批量的工廠生產(chǎn)方法，在植物快速繁殖和種質(zhì)保存等方面作出了巨大的貢獻。因此設(shè)計建設(shè)能滿足工藝要求、保證產(chǎn)品質(zhì)量、降低能耗，提高經(jīng)濟效益的組培工廠就顯得十分重要，本項目將從組培工廠的設(shè)計、組培工廠需配備的儀器設(shè)備以及設(shè)備的使用方法等方面進行闡述。工作任務(wù)工作任務(wù)

設(shè)計組培實驗室和組培苗生產(chǎn)小型工廠

任務(wù)1使用超凈工作臺和滅菌鍋等儀器設(shè)備任務(wù)2列出組培室常用儀器設(shè)備的名稱和作用清單任務(wù)3寫一份組織培養(yǎng)室注意事項任務(wù)4相關(guān)實踐知識一、設(shè)計準備室溫室馴化室培養(yǎng)室無菌操作室緩沖室組培室組培室設(shè)計及其基本設(shè)備（一）準備室作用：材料、培養(yǎng)器械的清洗、培養(yǎng)基準備、滅菌及組織學細胞學觀察等的準備工作。準備室普通化學實驗室（培養(yǎng)基配制室）細胞學實驗室（根據(jù)需要設(shè)置）洗滌室滅菌室

普通化學實驗室：儀器及設(shè)備、化學藥品。純水儀、冰箱、移液槍、過濾滅菌器、電爐、微波爐、磁力攪拌器、低速臺式離心機、電腦等。作用：配制培養(yǎng)基。細胞學實驗室：作用：細胞學和組織學觀察。需備有高倍顯微鏡、體視顯微鏡、倒置顯微鏡、各種相機、恒溫箱、切片機、恒溫水浴、滴瓶、染色缸、載玻片、蓋玻片等。洗滌室：玻璃器皿、用具和培養(yǎng)材料的洗滌。設(shè)備：鼓風干燥箱等。

滅菌室：用于培養(yǎng)基、器械等材料滅菌。高壓蒸氣滅菌裝置：如立式、臥式和手提式滅菌。作用：培養(yǎng)基、器械、棉塞、無菌紙等滅菌消毒。細菌過濾滅菌裝置

：（二）緩沖室主要功能：用于無菌操作人員更換滅菌工作服、拖鞋，戴口罩。設(shè)施裝備：紫外燈緩沖室作用：進行植物材料分離接種的重要場所，需長時間的無菌操作，對組織培養(yǎng)成功起關(guān)鍵作用。試驗設(shè)施超凈工作臺

紫外燈

固定式和移動式載物臺廣口瓶、酒精燈、酒精棉、機械支架手術(shù)剪、解剖刀、解剖針、鑷子等三、無菌操作室（四）培養(yǎng)室

作用：進行材料的培養(yǎng)的場所。其大小、規(guī)?？筛鶕?jù)工作性質(zhì)設(shè)定。以充分利用空間和節(jié)能為原則。設(shè)備：可調(diào)控光、溫、濕度等設(shè)備。還有固定式培養(yǎng)架、轉(zhuǎn)床、搖床。（五）馴化室主要功能：用于試管苗出瓶后的馴化。設(shè)施裝備：空調(diào)機、加濕器、恒溫恒濕控制儀、光照調(diào)節(jié)裝置、通風口及殺菌劑。馴化室（六）溫室

作用：培育組織與細胞培養(yǎng)出來的材料。組培工廠設(shè)計圖9、天平10、顯微鏡11、水浴鍋12、搖床或轉(zhuǎn)床13、蒸餾水發(fā)生器14、酸度計15、離心機二、儀器設(shè)備和器皿用具1、超凈工作臺2、無菌箱3、空調(diào)4、除濕機5、恒溫箱6、烘箱7、高壓滅菌器8、冰箱（一）儀器設(shè)備超凈工作臺(alaminarflowhood)

超凈工作臺HolmesHAP-240HEPA空氣凈化器高壓蒸汽滅菌器臥式滅菌鍋立式滅菌鍋手提式滅菌鍋過濾滅菌器

滾動搖床空氣浴搖床紙制品，干熱滅菌烘箱（二）各類器皿1、培養(yǎng)器皿：試管、三角瓶、L和T形管、培養(yǎng)器皿、果醬瓶等2、分注器3、離心管4、刻度移液管5、細菌過濾器6、實驗器皿：量筒、量杯、燒杯、吸管、滴管、容量瓶、稱量瓶、試劑瓶等（三）器皿的洗滌洗滌方法：1、重鉻酸鉀洗液：飽和的重鉻酸鉀洗液：43克重鉻酸鉀溶于1000毫升餾水中（飽和溶液）。按1：1體積比將濃硫酸緩慢地倒入飽和重鉻酸鉀水溶液中。

流程：

（12h）

水洗晾干重鉻酸鉀洗液自來水沖凈

蒸餾水洗兩次干燥

2、洗滌劑：洗衣粉、洗液3、超聲波洗凈器：小型玻璃器皿，頑固性污漬。新的玻璃器皿：0.1﹪HCl浸泡12小時，洗衣粉、自來水洗、蒸餾水沖。污染的玻璃器皿：要先高壓滅菌后，然后再刷洗。要避免交叉污染。1、鑷子2、剪刀3、解剖刀4、接種環(huán)5、打孔器6、其他：酒精燈、電爐、磁力攪拌器、微波爐、蒸餾水瓶等。（四）器械用具常用工具酒精燈消毒工具問題探究一、組培工廠設(shè)計的原則及總體要求設(shè)計原則根據(jù)培養(yǎng)目的和規(guī)模來設(shè)計。流水線式設(shè)計布局合理。防止污染。降低成本、節(jié)能、安全。選址要求排灌水方便，遠離污染源，水電供應(yīng)充足，交通便利，周邊環(huán)境清潔，地下水位在1.5m以下。各車間的大小與相對比例合理，在車間設(shè)計和設(shè)施設(shè)備的配置、擺放上與其功能相適應(yīng)。建筑與裝修材料要經(jīng)得起消毒、清潔和沖洗總體要求二、高壓滅菌鍋的使用方法高壓滅菌鍋是一種密閉良好又可承受高壓的金屬鍋分為兩種：全自動高壓滅菌鍋和手提式高壓滅菌鍋。滅菌鍋上有排氣閥和安全閥。使用方法：全自動高壓滅菌鍋：1）加水淹沒加熱絲；2）放入需滅菌包扎好的器皿；3）在控制面板上設(shè)置好滅菌溫度和時間。手提式高壓滅菌鍋：1）加水淹沒加熱絲；2）放入需滅菌包扎好的器皿；3）加熱，當壓力升至0.05MPa時，打開放氣閥放氣兩次；4）繼續(xù)加熱并維持鍋內(nèi)壓力在0.1—0.15MPa之間20分鐘；5）降溫，當壓力降至0.05MPa時，打開放氣閥，待壓力降至0時，取出器皿。使用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌時應(yīng)注意哪些事項?答:(1)加足水(2)滅菌開始排凈冷空氣;(3)滅菌終了,緩慢降壓回零;(4)滅菌結(jié)束,趁熱取出物品。高壓滅菌的原理：在密閉的蒸鍋內(nèi)，其中的蒸氣不能外溢，壓力不斷上升，使水的沸點不斷提高，從而鍋內(nèi)溫度也隨之增加。在108kPa的壓力下，鍋內(nèi)溫度達121℃。在此蒸氣溫度下，可以很快殺死各種細菌及其高度耐熱的芽孢。臥式滅菌鍋知識拓展超凈工作臺的工作原理超凈工作臺將空氣通過由特制的微孔泡沫塑料涂層疊合組成的“超級濾清器”后除去大于0.3um的塵埃、真菌和細菌孢子等吹送出來，形成連續(xù)不斷的無塵無菌的超凈空氣層流，已達到臺內(nèi)無菌的狀態(tài)。（1）每次使用超凈工作臺時，實驗人員應(yīng)先開啟超凈工作臺上的紫外燈，紫外照射20min后使用。（2）開啟超凈工作臺風機工作電源，關(guān)閉紫外燈，并用75%的酒精噴灑擦拭消毒工作臺面。（3）整個實驗過程過程中，實驗人員應(yīng)按照無菌操作規(guī)程操作。

紫外燈超凈工作臺使用管理

（4）實驗結(jié)束后，用消毒液擦拭工作臺面，關(guān)閉工作電源，重新開啟紫外燈照射15分鐘。

（5）如遇機組發(fā)生故障，應(yīng)立即通知實驗員，由專業(yè)人員檢修合格后繼續(xù)使用。

（6）實驗人員應(yīng)注意保持室內(nèi)整潔。

（7）超凈工作臺的濾材每2-3年更換一次，并作好更換記錄。項目小結(jié)

1.組培工廠應(yīng)包括組培苗生產(chǎn)車間和馴化栽培區(qū)。其中組培苗生產(chǎn)車間主要包括洗滌車間、培養(yǎng)基配制車間、滅菌車間、接種車間、培養(yǎng)車間；馴