AKTA簡(jiǎn)要操作說(shuō)明

v1.0可編輯可修改v1.0可編輯可修改1AKTApurifier〔CU9503示燈完全點(diǎn)亮并不閃耀UNICORNMethodEditSystemControl把握、Evalution4ManualManualrunsManualrun1~Manualrun10111〔最多保存10個(gè)默認(rèn)的文件名。假設(shè)手動(dòng)結(jié)果需要長(zhǎng)期保存，可以remove到指定文件夾rename?？梢岳肕anual-other-record-on〔off〕來(lái)選擇文件夾，制定文件名保存手動(dòng)結(jié)果。手動(dòng)命令(Manual)見(jiàn)《 KTA系統(tǒng)手動(dòng)命令指南》利用脫鹽試驗(yàn)生疏手動(dòng)操作(SystemControl→Manual)按分子大小分別混合分子的技術(shù)。蛋白質(zhì)是生物大分子，分子量比鹽等小分子大很多倍，用凝膠過(guò)濾方法為生物產(chǎn)品脫鹽格外簡(jiǎn)潔、牢靠。由于層析方法可透過(guò)紫外和電導(dǎo)檢測(cè)器監(jiān)控整個(gè)層析脫鹽的過(guò)程。SephadexG-25介質(zhì)用帶3-氯-12-(epichlorohydrin)5000以下的生物分子的脫鹽及緩沖液置換工作。在該試驗(yàn)中，蛋白質(zhì)是大分子，鹽離子是小分子，因此蛋白質(zhì)先出來(lái)〔280nm有特征吸取，鹽離子后出來(lái)〔電導(dǎo)值顯示〕10mLobindingbuffero層析柱：HiTrapDesalting5mL流速：5mL/min,樣品體積：200ul/1mL。操作：全部的工作溶液和樣品必需經(jīng)過(guò)µm10min。2〕清洗及管道預(yù)備SystemControlwashpurifier，A1ON，Execute。3〕安裝層析柱：讀取系統(tǒng)空壓XMp〔沒(méi)有安裝層析柱的系統(tǒng)壓力Alarm&mon→alarmpressur，設(shè)置highalarmX〔ExecuteFlow1mL/mL，Execute，InjectionValve1Flowrate，5mL/mL，Execute4)開(kāi)頭純化：選擇檢測(cè)波長(zhǎng)，Alarm&mon→Wavelength→UV1,UV2,UV3(可以只翻開(kāi)一個(gè)波長(zhǎng)COND，pH〕就預(yù)備上樣Alarm&mon→autozero，Execute。InjectionValve3ManualFlowpath→InjectionValve→Inject，Execute。設(shè)定收集：固定體積收集〔假設(shè)有出口閥→選擇Frac→Man_fractionation，輸入每管收集體積，insert，exectue。完畢Frac→fractionation_stop，exectue。峰收集：選擇FracPeak_fracParametersUV_Level,insert，選擇Frac→Peak_Man_fractionation設(shè)定峰收集每管收集的體積，。完畢峰收集選擇Frac→Peak_frac_stop，Execute。5〕清洗泵及卸下層析柱：A1PumpwashpurifierABFlowrate，alarmpressure，cond~cm，UVA1B120％乙醇中，同樣操作將乙醇沖滿整個(gè)管止氣泡進(jìn)入。6〕關(guān)閉電源：manager閉。然后關(guān)閉KTA結(jié)果處理Evaluation圖形或數(shù)據(jù)拷貝、導(dǎo)出UnicornEvaluationOpen圖形拷貝：空白處→右鍵→copytoclipboard→openword→paste得到結(jié)果的圖形EvaluationFile→Export→Curves206nm→Select→Export→Excelfiles→OK積分工具和柱效測(cè)定積分：IntegratePeakintegrate→選擇待積分曲線，如：UV1_280nm→Peakwindow(調(diào)整積分區(qū)域，使其包含主峰)→RejectPeaks(Peaksmustbeoneof1orlargest)Correlatedbaseline)→Columnheight：輸入實(shí)際柱高，如90cm→OKChromatogramLayout→PeakTable→Plateheight(HETP)→Asymmrtey→OK可得到柱效HETP，對(duì)稱性〔As〕Tip：假設(shè)峰之間沒(méi)有到達(dá)基線分別，則Baseline→選擇Calculatebaseline計(jì)算的基線→Baselinesettings→Morphological形態(tài)學(xué)→Structurewidth〕建柱子具體軟件操作如下：UnicornMethodEditorEdit→ColumnList②建一根自己的柱子：NewHeight，diameter；輸入其他相關(guān)參數(shù)：Vt，Vo，MaxPressure，DefaultFlowrate，MaxFlowrate等，然后SaveAs建方法：UnicornMethodEditorFile→New→Wizard→OKexclusion→Column：Any〔或者預(yù)裝柱〕→FlexibleFlowRate在不同階段用不同流速→NextWavelength波長(zhǎng)選擇UV：280nm→PumpInlet→NextEqualibration：StartConcentration%B起始濃度選擇→Equalibration：Equlibration就跳入下一步。ManualEmptyLoopWith：1mL；或者SystemPumpDirectLoading系統(tǒng)泵直接上樣→InjectionVolume上樣5體積〔>10mLA2(HIB2)→NextWashOutUnboundSample2CV〔最終參數(shù)表可以修改〕〔Frac-900、OFF、OutletF3F3〕→Next→Frac-900OFF、OutletFractionationPeakFractionationFractionationFractionVolumeNext→PeakIdentification→UVLevelPeakWidth最小峰寬〔排解氣泡峰〕→PeakFractionationVolume→NextElution①I(mǎi)socratic〔凝膠過(guò)濾〕→LengthofElution洗脫體積→Finish②IsocraticwithDelayedFrationation延遲峰收集的等度洗脫→Lengthof從開(kāi)頭采進(jìn)展峰收集→LengthofElutionwithFractionation→FinishLinearGradient線性洗脫→TargetConcentration目標(biāo)變化濃度→GradientLength〔10~20CV〕→UsecondorconcBtostartandB%開(kāi)頭或者停頓收集→CleanafterElutionat100B%(5CV)清洗→ReequilibrationafterElution(5CV)再平衡→FinishAdvancedGradientSegments96v1.0可編輯可修改v1.0可編輯可修改ElutionSegment1(1)-1(2)→Step階段梯度\Gradient線性→PumpInletA→ConcentrationB→LengthofStep梯度長(zhǎng)度PeakFractionVolume峰收集設(shè)定→設(shè)定剩下的梯度后→FinishVariab