基因治療技術(shù)與應(yīng)用演示文稿

基因治療技術(shù)與應(yīng)用演示文稿當前第1頁\共有84頁\編于星期三\2點基因治療技術(shù)與應(yīng)用當前第2頁\共有84頁\編于星期三\2點1.基因缺陷病基因是具有遺傳效應(yīng)的DNA分子片段。位于染色體上，呈線性排列?；虿粌H可以通過復制把遺傳信息傳遞給下一代，還可以使遺傳信息得到表達。人類只有一個基因組，大約有5～10萬個基因。當正常單個基因的DNA堿基對排列出現(xiàn)異常時，如堿基對置換、增添或缺失而引起基因結(jié)構(gòu)變化，稱作點突變。功能基因也可能部分片段或整個丟失，從而導致基因病。

基因病主要分為單基因病和多基因病兩大類。當前第3頁\共有84頁\編于星期三\2點1.1單基因病如果一種遺傳病的發(fā)病僅涉及一對基因，它所導致的疾病就是單基因病。包括以下幾類：常染色體顯性遺傳病常染色體隱性遺傳病

X連鎖顯性遺傳病

X連鎖隱性遺傳病

Y連鎖遺傳病當前第4頁\共有84頁\編于星期三\2點1.1.1常染色體顯性遺傳病

常染色體顯性遺傳病只要有一個致病基因便會表現(xiàn)癥狀,患者的子代有50%也是患者，而且世代相傳。

多指并指原發(fā)性青光眼當前第5頁\共有84頁\編于星期三\2點1.1.2常染色體隱性遺傳病

常染色體隱性遺傳病要有兩個等位致病基因才會發(fā)病，患兒的父母往往都是致病基因攜帶者，凡是代謝性遺傳病均屬于常染色體隱性遺傳病。苯丙酮尿癥當前第6頁\共有84頁\編于星期三\2點1.1.3X連鎖顯性遺傳病X連鎖顯性遺傳病的致病基因位于X染色體上，男性只有一條X染色體，表現(xiàn)癥狀較重，女性有兩條X染色體表現(xiàn)癥狀較輕，但女性受累者是男性的兩倍。抗維生素D佝僂病當前第7頁\共有84頁\編于星期三\2點X連鎖隱性遺傳病X連鎖隱性遺傳病傳男不傳女，往往母親是攜帶者兒子為患者。血友病A當前第8頁\共有84頁\編于星期三\2點1.1.5Y連鎖遺傳病Y連鎖遺傳病的特點是父親傳遞給兒子，女兒不發(fā)病。因Y染色體上主要有男性決定因子方面的基因，其他基因很少，故Y連鎖遺傳病極少見。毛耳性狀當前第9頁\共有84頁\編于星期三\2點1.2

單基因遺傳病血紅蛋白病血漿蛋白病結(jié)構(gòu)蛋白缺陷病受體蛋白病膜轉(zhuǎn)運蛋白病當前第10頁\共有84頁\編于星期三\2點1.2.1血紅蛋白病——鐮狀細胞貧血癥當前第11頁\共有84頁\編于星期三\2點1.2.2血漿蛋白病——血友病血友病A（血友病甲），即因子Ⅷ促凝成分（Ⅷ：C）缺乏癥，也稱AGH缺乏癥，是一種性聯(lián)隱性遺傳疾病，女性傳遞，男性發(fā)病。血友病B（血友病乙），即因子Ⅸ缺乏癥，又稱PTC缺乏癥、凝血活酶成分缺乏癥，亦為性聯(lián)隱性遺傳，其發(fā)病數(shù)量較血友病A少。但本型中有出血癥狀的女性傳遞者比血友病A多見。血友病C（血友病丙），即因子Ⅺ（FⅪ）缺乏癥，又稱PTA缺乏癥、凝血活酶前質(zhì)缺乏癥。為常染色體不完全隱性遺傳，男女均可患病，是一種罕見的血友病。

15～20/10萬男孩中有發(fā)病，此發(fā)病率在所調(diào)查的不同的種族和地域之間沒有差異。發(fā)病率以血友病A最多占85%，血友病B占15%，血友病C較少見。當前第12頁\共有84頁\編于星期三\2點結(jié)構(gòu)蛋白缺陷病——Ehlers-Danlos綜合癥COL5A1基因的22號內(nèi)含子發(fā)生剪切突變當前第13頁\共有84頁\編于星期三\2點1.2.4受體蛋白病——家族性高膽固醇血癥家族性高膽固醇血癥是低密度脂蛋白（ＬＤＬ）受體基因突變所致的常染色體顯性遺傳性疾病，目前已發(fā)現(xiàn)的ＬＤＬ受體基因突變達１５０多個。

黃色瘤角膜弓當前第14頁\共有84頁\編于星期三\2點1.2.5膜轉(zhuǎn)運蛋白病——先天性半乳糖吸收不良癥小腸上皮細胞轉(zhuǎn)運葡萄糖、半乳糖的膜載體蛋白異常，致使葡萄糖和半乳糖吸收障礙，患者腸道內(nèi)滲透壓改變而使腸液增加，患者出現(xiàn)水樣腹瀉。當前第15頁\共有84頁\編于星期三\2點1.3多基因病如果一種遺傳病的發(fā)病涉及多個基因，由多個微效的基因累加作用共同影響下造成的疾病稱作多基因病。多基因遺傳病發(fā)病也受環(huán)境因素的影響，患者同胞的發(fā)病率大約僅1%～10%。常見的多基因遺傳病有消化性潰瘍、原發(fā)性高血壓、先天性心臟病、哮喘、精神分裂癥、無腦兒、糖尿病等，以及先天畸形（唇腭裂、脊柱裂、無腦兒等）。當前第16頁\共有84頁\編于星期三\2點1.3.1先天性心臟病心室間隔缺損（VSD）心房間隔缺損（ASD）法洛四聯(lián)癥當前第17頁\共有84頁\編于星期三\2點1.3.2基因缺陷病先天性幽門狹窄先天性髖脫臼先天性巨結(jié)腸癥當前第18頁\共有84頁\編于星期三\2點

1.4治療方法傳統(tǒng)治療方法藥物治療手術(shù)治療放射治療理療新的生物治療：基因治療(genetherapy)基因缺陷病的產(chǎn)前診斷當前第19頁\共有84頁\編于星期三\2點內(nèi)容基因治療基因治療的應(yīng)用基因缺陷病當前第20頁\共有84頁\編于星期三\2點2基因治療基因治療（genetherapy）是指將外源正?；?qū)氚屑毎?，以糾正或補償因基因缺陷和異常引起的疾病，以達到治療目的。狹義的基因治療是指用完整的基因進行基因替代治療，而廣義的基因治療還包括利用基因藥物或核酸藥物的治療。當前第21頁\共有84頁\編于星期三\2點2.1基因治療的策略直接策略針對致病基因間接策略導入與致病基因無直接聯(lián)系的治療基因當前第22頁\共有84頁\編于星期三\2點直接策略針對致病基因基因修正（genecorrection）基因替代（genereplacement）基因增強（geneaugmentation）基因干預（geneinterference）當前第23頁\共有84頁\編于星期三\2點2.1.1.1基因修正基因修正（genecorrection）指將致病基因的突變堿基加以糾正，而保留正常部分。當前第24頁\共有84頁\編于星期三\2點2.1.1.2基因替代基因替代（genereplacement）

指通過同源重組（基因打靶）技術(shù)，將正?；蚨c整合到靶細胞基因組內(nèi)，以原位替換致病基因。（不涉及基因組整體改變的情況下對缺陷基因進行精確的原位修復，是最理想的治療方式。）基因打靶當前第25頁\共有84頁\編于星期三\2點2.1.1.3基因增強基因增強（geneaugmentation）又稱基因修飾，是指不去除異?；?，將有功能的正?；?qū)氩∽兗毎蚱渌毎蟀l(fā)生非定點整合，表達正常產(chǎn)物以補償缺陷基因的功能，或使原有的功能得以加強。目前基因治療多采用這種方式。如將組織型纖溶酶原激活劑的基因?qū)胙軆?nèi)皮細胞并得以表達后，防止經(jīng)皮冠狀動脈成形術(shù)誘發(fā)的血檢形成?；蛟鰪妸W運當前第26頁\共有84頁\編于星期三\2點2.1.1.4基因干預基因干預（geneinterference）

是采用特定的方法，導入外源基因選擇性地阻斷、干擾、抑制和封閉有害基因在DNA、RNA和蛋白質(zhì)水平的表達及其生物合成。導入抑癌基因反義核酸技術(shù)(antisensetechnology)：①反義RNA；②反基因技術(shù)；③核酶RNA干擾（RNAinterference)當前第27頁\共有84頁\編于星期三\2點2.1.1.4.1抑癌基因療法抑癌基因：是正常細胞內(nèi)正常存在的，能抑制細胞轉(zhuǎn)化和腫瘤生的一類基因群。

Rb基因，p53基因，MTS基因，nm23基因當前第28頁\共有84頁\編于星期三\2點2.1.1.4.2反義核酸技術(shù)反義RNA（antisenseRNA）

與mRNA互補的RNA，抑制mRNA的加工與翻譯。核酶（ribozyme）

具有催化功能的RNA，其與相應(yīng)mRNA結(jié)合后能發(fā)揮酶活性，將mRNA降解。反義脫氧寡核苷酸，ODN核酶當前第29頁\共有84頁\編于星期三\2點2.1.1.4.3RNA干擾概念：短的雙鏈RNA(dsRNA)導入細胞，可以使同源mRNA發(fā)生特異性的降解，從而阻斷相應(yīng)基因的表達。特點高度的序列專一性高效性易操作性當前第30頁\共有84頁\編于星期三\2點

間接策略導入與致病基因無直接聯(lián)系的治療基因免疫基因治療分子化療特異性細胞殺傷當前第31頁\共有84頁\編于星期三\2點免疫基因治療將抗體、抗原或細胞因子的基因?qū)爰踩梭w內(nèi)，改變病人免疫狀態(tài)，達到預防和治療疾病的目的。細胞因子基因治療IL-2、IL-4、IL-1、IL-6、IL-7、IL-12、INF-γ、TNF-α、G-CSF、GM-CSF免疫增強基因療法MHCI類抗原、共刺激分子腫瘤DNA疫苗療法癌胚抗原（CEA）制備的腫瘤DNA疫苗當前第32頁\共有84頁\編于星期三\2點

分子化療自殺基因療法：

TK基因、CD基因化療保護性基因治療：MDR基因藥物增敏基因治療：鈣調(diào)素基因當前第33頁\共有84頁\編于星期三\2點自殺基因+病毒載體

轉(zhuǎn)染

重組載體

藥物前體無毒Gene→酶→↓

藥物復合物有毒

細胞死亡2.1.2.2.1自殺基因療法自殺基因（suicidegene)，前體藥物酶轉(zhuǎn)化基因。自殺基因

藥物前體無毒Gene→酶→↓

藥物復合物有毒

細胞死亡當前第34頁\共有84頁\編于星期三\2點2.1.2.2.2化療保護性基因治療指將編碼抗細胞毒性藥物蛋白的基因?qū)肴梭w細胞，以提高機體耐受腫瘤化療藥物的能力。如將多藥抗性（multipledrugresistance,MDR）基因MDR-1導入骨髓造血干細胞，減少骨髓受抑制的程度，以加大化療劑量，提高化療效果。當前第35頁\共有84頁\編于星期三\2點2.1.2.2.3藥物增敏基因治療將外源基因插入腫瘤細胞后，改變腫瘤細胞對藥物的敏感性。如將鈣調(diào)素基因轉(zhuǎn)入癌細胞，其表達產(chǎn)物作為細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導系統(tǒng)的重要物質(zhì)，明顯增強腫瘤細胞對化療藥物的吸收量而相應(yīng)減少了排出量，使癌細胞對化療藥物的敏感性明顯提高。當前第36頁\共有84頁\編于星期三\2點

特異性細胞殺傷指利用重組DNA技術(shù)將生物來源的細胞毒素基因與一些特異受體的配體基因融合，構(gòu)建融合基因，導入高度表達該受體的腫瘤細胞，以特異性殺傷該腫瘤細胞。PEDT當前第37頁\共有84頁\編于星期三\2點2.2基因治療的種類基因?qū)氲姆绞?/p>

exvivo途徑

invivo途徑按靶細胞生殖細胞基因治療體細胞基因治療

當前第38頁\共有84頁\編于星期三\2點2.2.1基因?qū)敕绞街苯芋w內(nèi)療法（invivo）

是指將目的基因直接導入體內(nèi)有關(guān)的組織器官，使其進入相應(yīng)的細胞并進行表達。間接體內(nèi)療法（exvivo）

是指在體外將目的基因?qū)氚屑毎?，?jīng)過篩選和增殖后將細胞回輸給患者，使該基因在體內(nèi)有效地表達相應(yīng)產(chǎn)物，以達到治療的目的。當前第39頁\共有84頁\編于星期三\2點當前第40頁\共有84頁\編于星期三\2點2.2.1.1直接體內(nèi)療法是一種簡單易行的方法，如肌肉注射、靜脈注射、器官內(nèi)灌輸、皮下包埋等，但其缺點是轉(zhuǎn)染率較低。當前第41頁\共有84頁\編于星期三\2點2.2.1.2間接體內(nèi)療法間接體內(nèi)療法最常用的技術(shù)有3種體外處理療法：將有基因缺陷的體細胞取出后，引入正常的基因拷貝后再送回體內(nèi)；原位療法：使用載體將目的基因直接導入靶細胞；體內(nèi)療法：將基因載體注入血液，定向?qū)ふ野屑毎⒒虬踩行У貙?。當前?2頁\共有84頁\編于星期三\2點2.2.2靶細胞類型生殖細胞基因治療(germcellgenetherapy)

以生殖細胞為對象的基因治療稱為生殖細胞基因治療，廣義的生殖細胞基因治療以精子、卵子和早期胚胎細胞作為治療對象。

體細胞基因治療(somaticcellgenetherapy)

治療將遺傳物質(zhì)引入人的體細胞進行基因治療的方法稱為體細胞基因治療。當前第43頁\共有84頁\編于星期三\2點3.2基因治療的基本程序外源基因的選擇與制備載體的選擇與構(gòu)建靶細胞的選擇基因轉(zhuǎn)移基因轉(zhuǎn)染細胞的篩選與鑒定回輸體內(nèi)

當前第44頁\共有84頁\編于星期三\2點3.2.1外源基因的選擇與制備外源基因

目的基因：與致病基因相對應(yīng)的有功能的正常基因與致病基因無關(guān)、有治療作用的基因

標記基因:新霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶（Neo）基因外源基因的獲得

基因克隆人工合成

PCR擴增外源基因選擇規(guī)則當前第45頁\共有84頁\編于星期三\2點3.2.2載體的選擇與構(gòu)建病毒載體：

逆轉(zhuǎn)錄病毒（RV)腺病毒（AV)腺相關(guān)病毒（AAV)單純皰疹病毒（HSV)痘苗病毒（VV)非病毒載體：脂質(zhì)體法直接注射法受體介導基因轉(zhuǎn)移

DNA-磷酸鈣共沉淀電穿孔目前用于基因治療的載體可分為病毒載體（利用治病基因取代天然病毒某些基因）和非病毒載體（基于DNA的人工復合物或微粒）兩種。當前第46頁\共有84頁\編于星期三\2點3.2.2.1逆轉(zhuǎn)錄病毒結(jié)構(gòu)基因gag(groupantigen)：編碼核心蛋白和屬特異性抗原pol(polymerase)：編碼逆轉(zhuǎn)錄酶env(envelop)：編碼病毒外殼蛋白和包膜蛋白LTR調(diào)控序列含增強子、啟動子、轉(zhuǎn)錄所需起始和終止信號5’LTRgagpolenv3’LTR構(gòu)建、包裝特點、問題當前第47頁\共有84頁\編于星期三\2點3.2.2.2腺病毒載體基因組：雙鏈無包膜DNA病毒，36kb通過受體介導內(nèi)吞作用進入細胞，基因?qū)胄矢?。不整合宿主基因組，安全。宿主細胞范圍廣泛。可口服、噴霧吸入或氣管內(nèi)滴注。載體容量大。體外容易培養(yǎng)制備，病毒滴度較高。當前第48頁\共有84頁\編于星期三\2點

常用的病毒載體

及其基因轉(zhuǎn)移的特點逆轉(zhuǎn)錄病毒腺病毒腺相關(guān)病毒單純皰疹病毒

基因組正鏈RNA線性dsDNA線性ssDNAdsDNA8～11kb36kb4.7kb152kb外源基因容量<8kb2～7kb<3.5kb30kb重組病毒滴度中高較低高靶細胞狀態(tài)分裂細胞，表面分裂細胞或分裂細胞或分裂細胞或須有特殊受體非分裂細胞非分裂細胞非分裂細胞基因轉(zhuǎn)移效率高高高高基因整合隨機整合不整合定點整合于不整合染色體19q外源基因表達狀況短暫/穩(wěn)定表達短暫表達穩(wěn)定表達短暫/穩(wěn)定表達安全性及其它相對較安全可引起炎癥無病原性可能出現(xiàn)毒性反應(yīng)宿主范圍廣和免疫反應(yīng)神經(jīng)細胞嗜向性當前第49頁\共有84頁\編于星期三\2點3.2.2.4脂質(zhì)體脂質(zhì)體介導的基因轉(zhuǎn)移技術(shù)使用方便、成本低廉。其基本原理是利用陽離子脂質(zhì)體單體與DNA混合后，可以自動形成包埋外源DNA的脂質(zhì)體，然后與細胞一起溫育，即可通過細胞內(nèi)吞作用將外源DNA轉(zhuǎn)移到細胞內(nèi)。當前第50頁\共有84頁\編于星期三\2點3.2.3靶細胞的選擇生殖細胞:

禁止體細胞：淋巴細胞、造血細胞、內(nèi)皮細胞、肌肉細胞、肝細胞、成纖維細胞、腫瘤細胞等選擇原則當前第51頁\共有84頁\編于星期三\2點3.2.4基因轉(zhuǎn)移病毒法：主要通過攜帶有外源基因的病毒載體感染靶細胞來實現(xiàn)基因的轉(zhuǎn)移。非病毒法：物理方法——顯微注射、電穿孔、微粒轟擊及DNA直接注射、基因槍技術(shù)等；化學方法——磷酸鈣沉淀法、DEAE-葡聚糖法、脂質(zhì)體融合法等。受體介導的內(nèi)吞作用當前第52頁\共有84頁\編于星期三\2點3.2.4基因轉(zhuǎn)染細胞的篩選與鑒定抗性篩選方法：

重組載體上插入有標記基因Neo，導入受體細胞后可使其產(chǎn)生對G418（Geneticin）藥物的抗性。應(yīng)用標記基因作為探針進行分子雜交法篩選。外源基因表達的鑒定：采用Northern印跡雜交：檢測mRNA的表達，測定其表達產(chǎn)物即蛋白質(zhì)的含量等方法。當前第53頁\共有84頁\編于星期三\2點3.2.5回輸體內(nèi)方式：

靜脈注射、肌注、皮下注射、滴鼻等

基因修飾的淋巴細胞以靜脈注射的方式回輸?shù)窖褐?；將皮膚成纖維細胞以細胞膠原懸液注射至患者皮下組織；采用自體骨髓移植的方法輸入造血細胞；或以導管技術(shù)將血管內(nèi)皮細胞定位輸入血管等。當前第54頁\共有84頁\編于星期三\2點內(nèi)容基因治療基因治療的應(yīng)用當前第55頁\共有84頁\編于星期三\2點3基因治療的應(yīng)用遺傳病替補法，導入正?；蚰[瘤基因的補充和修復，免疫療法，細胞毒基因療法病毒性疾病阻斷病毒基因在體內(nèi)的轉(zhuǎn)錄和翻譯當前第56頁\共有84頁\編于星期三\2點3.1.1遺傳病的基因治療在DNA水平明確其發(fā)病原因及機制；隱性遺傳的單基因遺傳??；該基因的表達不需要精確調(diào)控；該基因能在一種便于臨床操作的組織細胞中表達并發(fā)揮生理作用；該遺傳病不經(jīng)治療將有嚴重后果。當前第57頁\共有84頁\編于星期三\2點遺傳病基因治療的臨床研究腺苷脫氨酶（ADA）缺乏癥家族性高膽固醇血癥（FH）囊性纖維變性（CF）粘多糖沉積癥血友病B（凝血因子IX缺乏）當前第58頁\共有84頁\編于星期三\2點ADA缺陷病的分子機制腺苷脫氨酶（ADA）催化腺嘌呤核苷（A）和脫氧腺嘌呤核苷（dA）脫氨，生成次黃嘌呤核苷和脫氧次黃嘌呤核苷。ADA缺陷→脫氧腺嘌呤核苷酸代謝受阻→dATP↑→抑制核糖核苷還原酶活性→阻止DNA復制和修復→導致細胞死亡，對淋巴細胞毒性最強當前第59頁\共有84頁\編于星期三\2點當前第60頁\共有84頁\編于星期三\2點3.1.2惡性腫瘤的基因治療一、抑制和殺傷腫瘤細胞自殺基因療法（TK、CD基因）抑制癌基因的表達（反義RNA、核酶、細胞內(nèi)抗體）恢復抑癌基因的功能（p53、Rb基因）抗腫瘤血管形成當前第61頁\共有84頁\編于星期三\2點二、腫瘤細胞的基因“修飾”導入細胞因子基因?qū)隡HC基因和共刺激分子基因三、調(diào)節(jié)和增強機體的免疫功能細胞因子基因?qū)朊庖呒毎蛐揎椀臉渫粻罴毎置诿庖叨舅氐腡淋巴細胞腫瘤DNA疫苗當前第62頁\共有84頁\編于星期三\2點3.1.3病毒性疾病的基因治療針對病毒:誘導對病毒RNA的降解抑制病毒與宿主細胞結(jié)合干擾病毒基因組的轉(zhuǎn)錄起始和調(diào)控抑制病毒基因組的復制和蛋白質(zhì)合成RNA干擾技術(shù)當前第63頁\共有84頁\編于星期三\2點3.2.1中國的基因治療1991.12血友病B，凝血因子IX，逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，導入患者自身皮膚成纖維細胞。惡性腦膠質(zhì)瘤，TK基因非小細胞肺癌，逆轉(zhuǎn)錄病毒，IL-2當前第64頁\共有84頁\編于星期三\2點血友病B的基因治療逆轉(zhuǎn)錄病毒載體+FⅨcDNA重組體

5`LTRFⅨneoSVPSOLTR3`①導入倉鼠細胞（CHO）→FⅨ表達；②導入乙型血友病患者皮膚成纖維細胞（體外培養(yǎng)）→FⅨ表達；③91年，導入乙型血友病患者皮膚成纖維細胞（體外培養(yǎng)）→回植病人皮下→FⅨ基因表達，F(xiàn)Ⅸ基表達水平達正常人的5%。當前第65頁\共有84頁\編于星期三\2點3.2.2基因治療藥物2003年10月16日，擁有自主知識產(chǎn)權(quán)的重組人p53腺病毒注射液(Gendicine)獲得國家食品藥品監(jiān)督管理局批準的新藥證書。這是世界上第一個獲得正式批準的基因治療藥物。當前第66頁\共有84頁\編于星期三\2點3.3基因治療存在的問題1999年“杰辛格”基因療法失敗.18歲的澤西·杰辛格患有鳥氨酸氨甲?；D(zhuǎn)移酶(OTC)缺失癥，接受基因療法后意外死亡。合理性、困難性安全性當前第67頁\共有84頁\編于星期三\2點3.4現(xiàn)狀及展望基因治療現(xiàn)階段僅僅是實驗性地運用于經(jīng)過其他治療無效的“絕癥”；酶及藥物性的化學療法，以及骨髓、器官移植仍然是當前治療多種遺傳病的最有效手段；癌癥的治療仍以手術(shù)切除及化療為主。道路曲折，前途光明當前第68頁\共有84頁\編于星期三\2點內(nèi)容基因治療的方法當前第69頁\共有84頁\編于星期三\2點Thankyouforyourattention當前第70頁\共有84頁\編于星期三\2點基因缺陷病單的產(chǎn)前診斷基因病的出生干預在于產(chǎn)前診斷，產(chǎn)前基因診斷是采集胎兒羊水或絨毛細胞檢測胎兒DNA的技術(shù)，但目前臨床僅適用于某些單基因病。檢測的時候，先把受檢者的基因從羊水或絨毛細胞中提取出來。然后用可以識別可能存在突變的基因引物和PCR技術(shù)將這部份基因復制許多倍。復制后，有許多方法可以判斷這部分基因是否存在突變。方法有：有特殊標記物的突變基因探針方法、酶切方法、基因芯片和基因序列檢測等方法。目前已知單基因病有5000多種,

但我國目前可孕前診斷的僅有其中的20幾種,

如

魚鱗病、進行性肌營養(yǎng)不良、脆性X綜合癥、地中海貧血、脊髓性肌萎縮、雄激素受體基因異常所致疾病、Ⅱ型粘多糖貯積癥、馬凡氏病、血友病、視網(wǎng)膜母細胞瘤、成骨發(fā)育不全、亨廷頓舞蹈癥、軟骨發(fā)育不全、苯丙酮尿癥、Wilson氏病、白化癥、結(jié)節(jié)性硬化癥等。當前第71頁\共有84頁\編于星期三\2點基因打靶技術(shù)指目的基因?qū)氚屑毎?，通過目的基因與靶細胞內(nèi)染色體上同源DNA序列間的交換，將目的基因定點整合到靶細胞基因組上某一確定位點的技術(shù)。當前第72頁\共有84頁\編于星期三\2點基因增強奧運基因增強可以有效避免一些缺陷基因，給人類的疾病治療帶來革命，但是同時也會有一些不可控的因素，比如對于運動員，基因增強很可能導致比賽公平的喪失。隨著奧運會官員開始奮力應(yīng)對遺傳數(shù)據(jù)和運動員通過基因療法“升級”所帶來的影響，我們將可能看到，官員們會制定一套嚴苛的針對基因修改的規(guī)則。

當前第73頁\共有84頁\編于星期三\2點核酶1981年，Cetch和Alfman首次發(fā)現(xiàn)了一類具有特異性剪切RNA活性的RNA分子。核酶具有穩(wěn)定的空間結(jié)構(gòu)，不易受到RNA酶的攻擊。核酶在切斷mRNA后，又可從雜交鏈上解脫下來，重新結(jié)合并切割其他的mRNA，效率高于反義RNA。當前第74頁\共有84頁\編于星期三\2點單純皰疹病毒胸苷激酶（HSV-TK）基因

編碼胸苷激酶（TK）催化丙氧鳥苷（ganciclovir,GCV）成為磷酸化的核苷酸類似物，阻斷DNA的合成而使細胞死亡。大腸桿菌胞嘧啶脫氨酶（CD）基因

將5’-氟胞嘧啶（5’-FC）轉(zhuǎn)化為5’-氟尿嘧啶（5’-FU）而發(fā)揮細胞毒性作用。自殺基因當前第75頁\共有84頁\編于星期三\2點如將綠膿桿菌外毒素（PE）或白喉毒素（DT）基因與TGFα基因組成融合基因TGFα-PE，或TGFα-DT。由于TGFα與表皮生長因子EGF結(jié)構(gòu)類似，也能與表皮生長因子受體（EGFR）結(jié)合；故該融合基因可特異性進入并殺死高度表達EGFR的膀胱癌、腎癌、肺癌、乳腺癌等腫瘤細胞。特異性細胞殺傷當前第76頁\共有84頁\編于星期三\2點外源基因的選擇原則體內(nèi)少量表達就可顯著改善癥狀；過高表達不會對機體造成危害；在抗病毒和病原體的基因治療中，所選擇的靶基因應(yīng)在病毒和病原體的生活史中起重要的作用，并且該序列是特異的；腫瘤病人多有免疫缺陷，可選用免疫因子基因轉(zhuǎn)入人體；可采用反義技術(shù)封閉細胞內(nèi)活化的癌基因或向細胞內(nèi)轉(zhuǎn)入野生型抑癌基因，抑制腫瘤生長，所針對的癌基因或抑癌基因應(yīng)與該腫瘤的發(fā)生和發(fā)展有明確的相關(guān)性。當前第77頁\共有84頁\編于星期三\2點逆轉(zhuǎn)錄病毒載體構(gòu)建去除病毒致病性結(jié)構(gòu)的基因序列如逆轉(zhuǎn)錄病毒的gag、pol、env基因，從結(jié)構(gòu)上保證病