漿膜腔積液脫落細(xì)胞學(xué)檢查

漿膜腔積液細(xì)胞學(xué)檢查當(dāng)前第1頁\共有47頁\編于星期三\6點主要內(nèi)容漿膜腔積液概述漿膜腔積液的采集、申請單的填寫漿膜腔積液脫落細(xì)胞的分類及意義免疫組化染色當(dāng)前第2頁\共有47頁\編于星期三\6點漿膜腔積液概述當(dāng)前第3頁\共有47頁\編于星期三\6點漿膜－襯在體腔壁和轉(zhuǎn)折包于內(nèi)臟器官表面的薄膜漿膜壁層－貼于體腔壁表面的部分漿膜臟層－壁層從腔壁移行折轉(zhuǎn)覆蓋于內(nèi)臟器官表面漿膜臟層和臟層之間的間隙－－漿膜腔－－胸膜腔、腹膜腔、心包腔漿膜腔概述當(dāng)前第4頁\共有47頁\編于星期三\6點▲正常漿膜腔少量液體來自壁層漿膜毛細(xì)血管內(nèi)的血漿濾出，通過臟層漿膜的淋巴管和小靜脈回吸收－潤滑作用▲漿膜腔積液：病理狀態(tài)下，漿膜腔內(nèi)液體增多概述當(dāng)前第5頁\共有47頁\編于星期三\6點漿膜腔積液分類和發(fā)生機制當(dāng)液體的產(chǎn)生和回吸收不平衡時，引起積液根據(jù)積液產(chǎn)生原因及性質(zhì)不同，分為

漏出液（transudate)和滲出液(exudate)

漏出液(transudate)－為非炎性積液血漿膠體滲透壓降低毛細(xì)血管內(nèi)流體靜脈壓升高淋巴管阻塞

滲出液

(exudate)－為炎性積液感染性：如化膿性細(xì)菌、結(jié)核非感染性：外傷、化學(xué)性刺激、惡性腫瘤概述當(dāng)前第6頁\共有47頁\編于星期三\6點漿膜腔積液的采集當(dāng)前第7頁\共有47頁\編于星期三\6點在胸腔積液采集中可將先抽入注射器的積液再快速推向胸腔底部，反復(fù)數(shù)次后抽取送檢，可使腫瘤細(xì)胞檢出率由50%左右提高為80.3%。標(biāo)本采集方式當(dāng)前第8頁\共有47頁\編于星期三\6點漿膜腔積液中常見的脫落細(xì)胞及其臨床意義當(dāng)前第9頁\共有47頁\編于星期三\6點間皮細(xì)胞形態(tài)：細(xì)胞圓形或橢圓形，核大，位于中心或偏位，核仁較大，有1-3個，均為紫色，含有少數(shù)空泡，滲出液中形態(tài)可能不規(guī)則，有時與癌細(xì)胞難于區(qū)分，見于惡性腫瘤，淤血等。免疫組化：間皮細(xì)胞表達CR、CK5/6、WT-1、MC，腺癌細(xì)胞表達CEA、CK7、CK19等等當(dāng)前第10頁\共有47頁\編于星期三\6點形態(tài)：比白細(xì)胞大，細(xì)胞染色較淡，核呈腎形，偏位，染色質(zhì)致密，胞漿多呈泡沫狀。見于淤血或惡性腫瘤等。免疫組化：CD68（+）組織（單核）細(xì)胞當(dāng)前第11頁\共有47頁\編于星期三\6點淋巴細(xì)胞數(shù)量增多提示存在慢性炎癥、病毒、結(jié)核菌感染或結(jié)締組織病所致滲出液，少量淋巴細(xì)胞亦見于漏出液。淋巴細(xì)胞當(dāng)前第12頁\共有47頁\編于星期三\6點中性粒細(xì)胞增多常見于化膿性炎癥和結(jié)核性積液早期，以化膿性滲出液中性粒細(xì)胞增多最明顯。中性粒細(xì)胞當(dāng)前第13頁\共有47頁\編于星期三\6點漿細(xì)胞明顯增多可能為多發(fā)性骨髓瘤浸潤漿膜所引起。漿細(xì)胞當(dāng)前第14頁\共有47頁\編于星期三\6點免疫組織化學(xué)染色當(dāng)前第15頁\共有47頁\編于星期三\6點免疫組化原理

免疫組織化學(xué)是指帶顯色劑標(biāo)記的特異性抗體在組織細(xì)胞原位通過抗原抗體反應(yīng)和組織化學(xué)的呈色反應(yīng)，對某些化學(xué)成分進行定性、定位、定量測定的一項技術(shù)。當(dāng)前第16頁\共有47頁\編于星期三\6點組織或細(xì)胞內(nèi)的某種化學(xué)物質(zhì)（待檢測物）抗原

免疫動物

抗體檢測（免疫組織化學(xué)）

熒光素酶金、銀顆粒原理：抗原和抗體之間的高度特異性結(jié)合鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)（SP）法免疫組化原理流程介紹當(dāng)前第17頁\共有47頁\編于星期三\6點免疫組化在病理學(xué)中的作用1、確定細(xì)胞類型2、辨認(rèn)細(xì)胞產(chǎn)物3、了解分化程度4、鑒定病變性質(zhì)5、發(fā)現(xiàn)微小轉(zhuǎn)移灶、脈管內(nèi)瘤栓6、探討腫瘤起源或分化表型7、指導(dǎo)治療和預(yù)后8、輔助疾病診斷和分類當(dāng)前第18頁\共有47頁\編于星期三\6點胸水中常見腫瘤及免疫組化當(dāng)前第19頁\共有47頁\編于星期三\6點鱗狀細(xì)胞癌常用免疫組化：CK、CK5/6、P63、P40當(dāng)前第20頁\共有47頁\編于星期三\6點細(xì)胞角蛋白（cytokeratin，CK）低分子角蛋白，對腺癌、移行細(xì)胞部及低分化鱗癌標(biāo)記。一般用廣譜型角蛋白抗體為好，常用。有20個亞型CK1----CK20鱗狀上皮當(dāng)前第21頁\共有47頁\編于星期三\6點細(xì)胞角蛋白5/6（CK5/6）陽性部位：細(xì)胞漿在正常組織中，鱗狀上皮和導(dǎo)管上皮的基底細(xì)胞以及部分的鱗狀上皮生發(fā)層細(xì)胞、肌上皮細(xì)胞和間皮細(xì)胞陽性，腺上皮細(xì)胞陰性。因此，可用于鱗癌和腺癌、間皮瘤和腺癌的鑒別診斷。支氣管上皮基底細(xì)胞、間皮、鱗癌、大細(xì)胞癌、移行細(xì)胞癌、間皮瘤陽性。大多數(shù)腺癌為陰性。

當(dāng)前第22頁\共有47頁\編于星期三\6點常用免疫組化標(biāo)記CK7、CK20、Villin、CEA、CDX-2、PASTTF-1（肺的標(biāo)記）腺癌當(dāng)前第23頁\共有47頁\編于星期三\6點CK7：

肺、卵巢、乳腺、膽管陽性常常在(胃)腸道的癌為陰性

CK20

：只有胃腸道癌和Merkel細(xì)胞癌陽性

20當(dāng)前第24頁\共有47頁\編于星期三\6點

CK7是許多腺上皮及移行上皮中的一種堿性角蛋白。CK7通常在下列腺癌中表達：肺、乳腺、卵巢（漿液性和粘液性腫瘤）+子宮頸腫瘤、膽管上皮和膽管癌、膀胱移行細(xì)胞癌+在下列腫瘤中缺乏：鱗狀細(xì)胞癌、結(jié)腸腺癌、卵巢粘液腺癌、肝細(xì)胞和肝-細(xì)胞癌、前列腺和前列腺腺癌、腎上皮腫瘤CK7當(dāng)前第25頁\共有47頁\編于星期三\6點CK20免疫組化表達：用于胃腸道腺癌、卵巢黏液性腫瘤、皮膚Merkel細(xì)胞癌診斷。泌尿系統(tǒng)和移行細(xì)胞癌（通常CK7+/CK20+）鱗癌、乳腺癌、肺癌、子宮內(nèi)膜和卵巢非黏液性腫瘤常陰性。CK7和CK20的共同表達對于癌的原發(fā)部位的診斷尤其有用當(dāng)前第26頁\共有47頁\編于星期三\6點CK7和CK20的共同表達單獨CK7+或CK20+均不能可靠區(qū)分肺癌和結(jié)腸癌，CK7和CK20共表達如CK7+/CK20+或CK-/CK20-有助于診斷開始較模糊的腫瘤。聯(lián)合TTF-1檢測有助于診斷肺腺癌。當(dāng)前第27頁\共有47頁\編于星期三\6點CDX2：是一種腸特異的轉(zhuǎn)錄因子。大約95%以上的浸潤性結(jié)、直腸癌可檢出CDX2陽性表達，胃癌和卵巢黏液性腺癌也可表達CDX2與CK7、CK20配合有助于尋找轉(zhuǎn)移癌的原發(fā)部位。CDX2當(dāng)前第28頁\共有47頁\編于星期三\6點CEACEA癌胚抗原：是從結(jié)腸癌中分離而得的一種球蛋白，定位于細(xì)胞膜上，對胃、腸、肺、胰、肝等幾乎所有的腺癌為陽性顯示涎腺或汗腺腫瘤中的腺體成分

用于鑒別腺癌和間皮瘤

當(dāng)前第29頁\共有47頁\編于星期三\6點神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤常用免疫組化標(biāo)記NSESynCgACD56包括神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤、胰島、垂體瘤、甲狀腺髓樣癌、皮膚Merkel細(xì)胞癌、原始神經(jīng)外胚層瘤（PNET）等，目前應(yīng)用NSE、嗜鉻蛋白顆粒A（CgA）及觸突素（Syn）三種抗體同時或兩種一起用，因NSE不夠特異。當(dāng)前第30頁\共有47頁\編于星期三\6點NSE（神經(jīng)元特異性烯醇化酶）

一種糖酵解酶神經(jīng)元和神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞及相應(yīng)腫瘤的標(biāo)記物。敏強感性，特異性較差。當(dāng)前第31頁\共有47頁\編于星期三\6點嗜鉻素ACgA（chromogranin）腎上腺髓質(zhì)細(xì)胞（+）神經(jīng)細(xì)胞、神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞及其腫瘤均（+）主要用于神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞腫瘤的診斷（胰島細(xì)胞瘤、嗜鉻細(xì)胞瘤、皮膚Merkel細(xì)胞瘤）當(dāng)前第32頁\共有47頁\編于星期三\6點Syn突觸素

神經(jīng)組織標(biāo)志當(dāng)前第33頁\共有47頁\編于星期三\6點CD56

神經(jīng)細(xì)胞黏附分子，主要分布于大多數(shù)神經(jīng)外胚層來源細(xì)胞，常用于星型細(xì)胞瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤診斷，也是NK細(xì)胞瘤的重要標(biāo)志，也標(biāo)記小細(xì)胞肺癌當(dāng)前第34頁\共有47頁\編于星期三\6點1.B細(xì)胞標(biāo)記抗體：CD20、CD79α、PAX-52.T細(xì)胞標(biāo)記抗體：CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、CD45RO淋巴瘤當(dāng)前第35頁\共有47頁\編于星期三\6點B細(xì)胞及其腫瘤主要標(biāo)記物CD20

主要分布在B細(xì)胞、前B細(xì)胞后期和漿細(xì)胞之前的B細(xì)胞，在漿細(xì)胞和T細(xì)胞淋巴瘤中不表達。是非?？煽康腂細(xì)胞淋巴瘤的標(biāo)記抗體。CD79a是非常重要的B細(xì)胞淋巴瘤的標(biāo)記物，前B細(xì)胞開始到成熟的漿細(xì)胞都可以標(biāo)記，常作為CD20的補充，表達于大部分的B細(xì)胞淋巴瘤。PAX-5

PAX-5是B細(xì)胞特異性激活蛋白，是B細(xì)胞及B細(xì)胞淋巴瘤的標(biāo)記物。表達于非霍奇金淋巴瘤的成熟及前體B細(xì)胞和經(jīng)典霍奇金淋巴瘤的R-S細(xì)胞。當(dāng)前第36頁\共有47頁\編于星期三\6點Ｔ細(xì)胞及其腫瘤主要標(biāo)記物CD3是目前認(rèn)為最能代表T細(xì)胞的標(biāo)記抗體，CD3是T細(xì)胞和NK細(xì)胞的標(biāo)記物，常用于此類淋巴瘤的分類，在B淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、髓細(xì)胞中不表達。

CD5

主要標(biāo)記T細(xì)胞，少數(shù)B細(xì)胞（套細(xì)胞）可表達。用于慢性淋巴細(xì)胞性白血病（B-CLL）和Mantle（套細(xì)胞）淋巴瘤。CD45(LCA)：白細(xì)胞共同抗原存在于前體細(xì)胞、成熟的T和B淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、濾泡樹突狀細(xì)胞和粒細(xì)胞等白細(xì)胞中，是造血細(xì)胞的重要標(biāo)記物，不存在非造血組織。主要用于淋巴瘤、白血病和非造血組織腫瘤的鑒別診斷。陽性部位：細(xì)胞膜當(dāng)前第37頁\共有47頁\編于星期三\6點CD21CD21是補體C3d的受體免疫組化表達:濾泡樹突狀細(xì)胞（FDC）診斷應(yīng)用:證明濾泡樹突狀細(xì)胞的篩狀網(wǎng)結(jié)構(gòu)，用以協(xié)助淋巴瘤的診斷Castleman’s?。ㄑ転V泡性增生）FDC腫瘤當(dāng)前第38頁\共有47頁\編于星期三\6點肝細(xì)胞肝癌和膽管細(xì)胞癌當(dāng)前第39頁\共有47頁\編于星期三\6點肝細(xì)胞肝癌：AFP、CD34、CEA、CK8/18、CK19、Ki-67、P53、HbsAg、Hepatocyte肝膽管細(xì)胞癌：CK7、CK20、Villin、AFP、CD34、CEA、CK8/18、CK19、Ki-67、Hepatocyte、HbsAg當(dāng)前第40頁\共有47頁\編于星期三\6點Hepatocyte：肝細(xì)胞癌多為陽性表達AFP甲胎蛋白：由胎肝細(xì)胞提取的一種酸性糖蛋白，細(xì)胞漿和細(xì)胞膜上表達。它是肝細(xì)胞癌、卵黃囊癌的特異性標(biāo)記。肝細(xì)胞肝癌和膽管細(xì)胞癌當(dāng)前第41頁\共有47頁\編于星期三\6點CK19：分布于單層上皮和間皮,常用于腺癌診斷,肝細(xì)胞不表達,而膽管為陽性反應(yīng)。CK8/18：主要標(biāo)記非角化復(fù)層鱗狀上皮，用于鱗狀細(xì)胞癌和腺癌的鑒別，腫瘤細(xì)胞、肝細(xì)胞和膽管上皮細(xì)胞胞漿陽性。Villin絨毛蛋白：正常組織中，villin通常只表達于有刷狀緣的細(xì)胞上，如胃腸道上皮細(xì)胞、胰腺和膽管上皮細(xì)胞以及腎實質(zhì)的上皮細(xì)胞中（特別是近曲小管）。Villin在胃腸道癌、胰腺癌、膽囊癌和膽管癌組織中有很高的表達率，具有明顯腺樣結(jié)構(gòu)的腫瘤上沒有Villin表達，則這個腫瘤為胃腸道、胰腺、膽囊或膽管來源的可能性極低。

肝細(xì)胞肝癌和膽管細(xì)胞癌當(dāng)前第42頁\共有47頁\編于星期三\6點CD34：表達于早期淋巴造血干細(xì)胞、祖細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、胚胎纖維母細(xì)胞和某些神經(jīng)組織細(xì)胞,多用于標(biāo)記血管內(nèi)皮細(xì)胞，血管源性腫瘤的診斷，GIST80-90%。

肝細(xì)胞肝癌和膽管細(xì)胞癌當(dāng)前第43頁\共有47頁\編于星期三\6點免疫組化應(yīng)注意的問題1.對某一種腫瘤的診斷，可同時選用幾種特異性較高的標(biāo)志，互相補充。2.要正確區(qū)分假陽性、假陰性。3.要運用“反證法”，既要有陽性標(biāo)記物的結(jié)果，也要有陰性標(biāo)記物的結(jié)果，才能確保診斷的可靠性。當(dāng)前第44頁\共有47頁\編于星期三\6點免疫組化常用套餐鑒別間皮細(xì)胞、腺癌細(xì)胞

CK7、CEA、TTF-1、CK5/6、CR、WT-1鑒別肺腺癌、鱗癌、神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤

CK7、TTF-1、NapsinA、CK5/6、P63、P40、syn、CgA、CD56是否淋巴瘤

基本項目：CD2、CD3、CD20