微波輔助萃取-分光光度法測定細梗胡枝子葉中總黃酮的含量

微波輔助萃?。止夤舛确y定細梗胡枝子葉中總黃酮的含量【摘要】目的采用微波輔助萃取法提取，以分光光度法測定細梗胡枝子葉中的總黃酮含量。方法單因素法優(yōu)化微波提取條件為：使用75%乙醇，在液固比70ml/g下，加熱至75℃后持續(xù)輻射15min。結果與傳統(tǒng)的乙醇浸提法和超聲法相比，微波法具有操作簡便，可靠，重現(xiàn)性好等特點。結論微波法適合推廣于各類中草藥中總黃酮含量測定的樣品前處理。

【關鍵詞】微波輔助萃取分光光度法細梗胡枝子總黃酮

Abstract：ObjectiveToextracttotalflavonesfromLespedezavirgata(Thunb.)DC.bymicrowave-assistedextractionanddetermineitscontentbyabsorptionspectroscopy.MethodsTheextractedconditionsofflavoneswereoptimizedas70ml/gof75%ethanoltoleaveswghtratioandsolutiontemperatureof75℃for15min.ResultsComparedwithmocerationandultrasonic-assistedextraction,microwave-assistedextractionwassimpleandaccuratewithgoodreproducibility.ConclusionItissuitableforthedeterminationofflavoneinmanykindsoftraditionalChinesemedicines.

Keywords：Microwave-assistedextraction(MAE);Absorptionspectroscopy;Lespedezavirgata(Thunb.)DC.;Flavones

胡枝子屬植物含黃酮、生物堿、萜類、甾醇、有機酸、鞣質等多種化學成分［1～6］，有抗炎、抗過敏、抗早孕、鎮(zhèn)痛等藥理活性，特別是黃酮類化合物對腎功能不全的治療作用尤為顯著。細梗胡枝子為豆科植物細梗胡枝子Lespedezavirgata(Thunb.)DC.的干燥全草，可用于治療慢性腎小球腎炎、腎盂腎炎、腎結核及腎萎縮等疾病。藥研究表明，該藥所含的多種黃酮類化合物能降低血中殘余氮，改善腎功能，影響離體子宮的作用，此外還具有抗炎、抗早孕、抗過敏及止痛等作用［6］。

自Ganzler［7］首次將微波輔助技術應用于植物樣品提取以來，MAE在天然植物提取中的應用越來越受到重視［8～14］。本文僅就該項技術應用于細梗胡枝子中黃酮類化合物的提取進行研究，并用分光光度法對總黃酮含量進行測定，建立了細梗胡枝子葉中總黃酮的微波輔助萃?。止夤舛葴y定法?，F(xiàn)報道如下。

1儀器與試劑

XH-100A型祥鵠電腦微波催化合成/萃取儀，具有溫度控制部件，設計溫度±1℃。U-3010/3310分光光度計。

細梗胡枝子；蘆丁標樣；乙醇、氫氧化鈉、硝酸鋁、亞硝酸鈉等試劑均為分析純。

2方法

樣品的處理

先將細梗胡枝子葉粉碎后過60目的篩子，之后用烘箱烘至恒重保存。準確稱取g細梗胡枝子粉于圓底燒瓶中，按要求加入一定量的乙醇，控制一定溫度，在一定的微波功率下微波萃取一定時間，過濾，定容，取一定量試液進行顯色、測定。

總黃酮含量的測定

在10ml容量瓶中，取少量樣品溶液，依次加入若干毫升的NaNO2溶液，Al(NO3)3溶液和NaOH溶液，然后用乙醇溶液定容至10ml，于室溫下放置10min，用1cm比色皿，以試劑空白為參比，在選定波長下測定其吸光度［15，16］。根據(jù)標準曲線求得總黃酮的提取率，其計算公式為：提取率(mg/g)＝X×V/m，其中X是從標準曲線上查得的濃度值，V為萃取液體積，m為細梗胡枝子葉的質量。

3結果

測定波長的選擇取適量總黃酮萃取液進行顯色反應，用分光光度計對其紅色產(chǎn)物在400～700nm之間掃描，在510nm處有最大吸收，所以確定510nm為測定波長。

顯色反應時間的確定準確吸取一定量樣品溶液，按照實驗方法在0～60min范圍內(nèi)，每隔5min測定其吸光度考察反應體系的穩(wěn)定性。由實驗結果可以看出，黃酮顯色產(chǎn)物在前30min內(nèi)吸光度基本不變，但在30min后，吸光度開始略有下降，因此其吸光度應控制在定容后前30min內(nèi)測定。

標準曲線的建立精確稱取蘆丁標準品10mg，用75%乙醇水溶液定容至100ml容量瓶中，配好冷藏放置于冰箱中。分別取，，，，，ml標準液于10ml容量瓶中，分別加入一定量的75%乙醇水溶液稀釋成ml。加入5%NaNO2溶液ml，搖勻，放置6min；再加入10%的Al(NO3)3溶液ml，搖勻，再放置6min；加4%的NaOH溶液ml，用水稀釋至刻度，放置10min，在分光光度計上，以試劑空白為參比于510nm處測其吸光度，得到回歸方程為：A=7(r=7)，式中A為吸光度，C為溶液中蘆丁的濃度(g/ml)。該方程在所測范圍內(nèi)(5～25g/ml)線性關系良好。

微波輔助萃取法的單因素實驗

乙醇濃度對黃酮提取率的影響

本文用乙醇溶液作為提取體系，考察了乙醇濃度對微波萃取細梗胡枝子葉中黃酮類物質的影響，結果見1。由圖1可見，總黃酮提取率隨乙醇濃度的增大先呈上升趨勢，在乙醇濃度為75%時達到最大，之后乙醇濃度再增大時，提取率呈下降趨勢，因此考慮選75%乙醇作提取劑為宜。

液固比對黃酮提取率的影響

在其他條件相同下，不同溶劑用量對黃酮提取率的關系如2所示。從圖2可知，提取率隨著液固比的增大而呈上升趨勢，但增大到70ml/g后就趨于下降，之后實驗中選擇液固比為70ml/g。

溶液溫度對黃酮提取率的影響

在其他條件相同下，得黃酮提取率與溶液溫度的關系，見圖3。由圖3可知，75℃以前總黃酮提取率隨功率增加呈現(xiàn)上升，75℃后開始下降。因此實驗中溶液溫度最好控制在75℃。

微波輔助提取時間對黃酮提取率的影響

在其他條件相同下，考察了黃酮提取率與微波輔助提取時間的關系，見圖4。由圖4可知，提取率隨微波輻射時間的增加而呈現(xiàn)先增加后下降的趨勢。從時間效益考慮，微波時間應控制在15min。

最佳條件下的重復性和回收率實驗

重復性實驗

取同一批細梗胡枝子葉樣品5份，在最佳條件下進行萃取，分別測定各自的總黃酮含量，結果表明其相對標準偏差為%。

加樣回收率實驗

準確稱取一定量樣品9份，加入不同量的蘆丁對照品溶液在相同微波條件下進行萃取，萃取物按實驗方法進行顯色，測定吸光度，計算回收率，結果表明回收率在99%～102%之間，說明此方法有較好的準確度。

微波法與乙醇浸提法及超聲波萃取法的比較

本實驗了乙醇浸提法和超聲波萃取法進行對比實驗。乙醇浸提法：溫度75℃，乙醇濃度75%，液固比35ml/g，連續(xù)提取2次，第1次3h，第2次3h，平均提取率為mg/g。超聲波提取法：100W微波功率，超聲波萃取30min，乙醇濃度75%，液固比70ml/g，平均提取率為mg/g。以上各種萃取方法結果對比列于表1中。由表1可以看出，微波法僅用15min卻比乙醇浸提6h的提取率高出倍，比超聲波提取法高出倍。從節(jié)能、省時和試劑消耗等多方面角度來看，微波法優(yōu)于乙醇浸提法和超聲波提取法。表1樣品分析結果

4結論

本文主要對微波輔助萃取法萃取細梗胡枝子葉中總黃酮進行了初步研究，由重現(xiàn)性實驗和加樣回收實驗的結果可以看出，本文建立的萃取方法和測定方法可靠，準確，簡便。微波輔助萃取與乙醇浸提法的比較表明，微波輔助萃取法具有快速、提取率高、溶劑用量少等特點。本法操作簡便，結果可靠，重復性好，穩(wěn)定性好，可廣泛用于各種中草藥中黃酮類物質含量的測定。

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