幾種常見微生物培養(yǎng)標(biāo)本的采集

當(dāng)前第1頁\共有43頁\編于星期五\3點Aproperclinicalassessmentisessentialforoptimaluseoflaboratoryservices!當(dāng)前第2頁\共有43頁\編于星期五\3點正確獲取臨床微生物檢查標(biāo)本是保證檢查質(zhì)量與提高病原分離陽性率最基本也是最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)，這包括適宜的取材時間、適當(dāng)?shù)娜〔牟课慌c適當(dāng)?shù)姆绞将@取檢查標(biāo)本。當(dāng)前第3頁\共有43頁\編于星期五\3點當(dāng)前第4頁\共有43頁\編于星期五\3點1.標(biāo)本采集的一般原則（1）采集部位標(biāo)本的采集部位以能夠反映活動的病程為標(biāo)準(zhǔn)。如傷寒患者，發(fā)病第1周應(yīng)采集血液，第2周應(yīng)采集糞便和尿液，否則影響細(xì)菌的檢出率。（2）采集時機(jī)采集時間最好是病程早期、急性期，且必須在使用抗菌藥物之前采集，確保病原菌的檢出。（3）患者的準(zhǔn)備痰標(biāo)本采集前，患者應(yīng)該進(jìn)行口腔清潔（包括摘假牙、刷牙、漱口等）；尿液采集前，患者應(yīng)有足夠的憋尿時間（不低于2h）。當(dāng)前第5頁\共有43頁\編于星期五\3點4）采集方法用于厭氧菌培養(yǎng)的臨床標(biāo)本，應(yīng)盡量用注射器采集抽吸物，一般不要用拭子采集標(biāo)本（除非是在床邊采樣并立刻接種）；膿腫部位采集最好不要直接采集膿汁部位，應(yīng)采集膿腔底部或腔壁組織送檢；自然排尿應(yīng)采集中段尿；皮疹穿刺應(yīng)采集第一滴血作培用；血液標(biāo)本采集應(yīng)遵循兩側(cè)部位、兩瓶、兩套的原則。當(dāng)前第6頁\共有43頁\編于星期五\3點（5）適量采集標(biāo)本為避免因標(biāo)本量少引起的假陰性結(jié)果，標(biāo)本最小采集量固體標(biāo)本不少于1g，液體標(biāo)本通常不少于1ml（分枝桿菌及真菌檢查不少于10ml）。（6）無菌操作采集標(biāo)本時嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作程序。（7）標(biāo)本收集采集的標(biāo)本均應(yīng)盛于惰性、廣口、帶螺旋帽、容積不小于50ml的無菌容器內(nèi)送檢。當(dāng)前第7頁\共有43頁\編于星期五\3點2.標(biāo)本運送的一般原則標(biāo)本采集后應(yīng)在15～30min內(nèi)送至實驗室，若有延遲也應(yīng)在2h內(nèi)送至實驗室，否則會影響病原菌的檢出。厭氧培養(yǎng)標(biāo)本原則上應(yīng)在床邊接種。標(biāo)本如延遲送檢，需保存在相應(yīng)的運送培養(yǎng)基中。懷疑標(biāo)本中有理化因素敏感的微生物（包括淋病奈瑟菌、腦膜炎奈瑟菌和流感嗜血桿菌等苛養(yǎng)型細(xì)菌）應(yīng)立即運送和處理。通常血液、腦脊液、生殖道、眼或內(nèi)耳標(biāo)本不要冷藏保存。當(dāng)前第8頁\共有43頁\編于星期五\3點3.標(biāo)本接收與處理的一般原則有時送到實驗室的標(biāo)本沒有按要求選材、采集或運送，檢驗這些未受控制標(biāo)本得出的結(jié)果，可能會給臨床醫(yī)生提供錯誤的信息，誤導(dǎo)診斷和治療。因此，實驗室必須建立嚴(yán)格的接收或拒收標(biāo)準(zhǔn)，以杜絕沒有按要求選材、采集或運送的標(biāo)本進(jìn)入檢驗程序。當(dāng)前第9頁\共有43頁\編于星期五\3點不合格標(biāo)本的拒收標(biāo)準(zhǔn)如下：（1）不正確的運送溫度；（2）不正確的運送工具；（3）延長送檢時間；（4）標(biāo)本容器上未貼標(biāo)簽或錯貼標(biāo)簽；（5）標(biāo)本有泄漏；（6）盛標(biāo)本的容器被壓碎或有破裂；（7）標(biāo)本有明顯污染；（8）標(biāo)本量不足或已干涸；（9）24h內(nèi)重復(fù)送檢的標(biāo)本（血培養(yǎng)除外）；（10）對某種試驗不適合的標(biāo)本（如尿液做支原體培養(yǎng)等）。當(dāng)前第10頁\共有43頁\編于星期五\3點我科現(xiàn)在使用的進(jìn)口血培養(yǎng)瓶當(dāng)前第11頁\共有43頁\編于星期五\3點我科現(xiàn)在使用的國產(chǎn)血培養(yǎng)瓶當(dāng)前第12頁\共有43頁\編于星期五\3點我科現(xiàn)用的無菌拭子管當(dāng)前第13頁\共有43頁\編于星期五\3點我科現(xiàn)用的無菌杯當(dāng)前第14頁\共有43頁\編于星期五\3點一、血液及骨髓培養(yǎng)嚴(yán)格的無菌操作：1.標(biāo)準(zhǔn)的皮膚消毒程序：a70%乙醇擦拭靜脈穿刺部位等待30S以上。b1%-2%碘酊作用30S或10%碘伏60S,從穿刺點向外畫圈消毒，至消毒區(qū)域直徑3cm以上。c70%乙醇脫碘：對碘過敏的患者，用70%乙醇消毒60S，待乙醇揮發(fā)干燥后采血。當(dāng)前第15頁\共有43頁\編于星期五\3點一、血液及骨髓培養(yǎng)2.采血部位通常為肘靜脈。疑似細(xì)菌性心內(nèi)膜炎時以肘動脈或股動脈采血為宜。對疑為細(xì)菌性骨髓炎或傷寒病人，在病灶或髂前（后）上棘處嚴(yán)格消毒后抽取骨髓1ml作培養(yǎng)。當(dāng)前第16頁\共有43頁\編于星期五\3點一、血液及骨髓培養(yǎng)3.采血量與接種培養(yǎng)瓶程序成人通常是8~10ml/瓶，兒童1~5ml/瓶。對于血培養(yǎng)瓶的接種程序：a用蝶形針：穿刺后→需氧瓶→厭氧瓶→拔去瓶子→再拔蝶形針。b用注射器：厭氧瓶→需氧瓶→拔去注射器然后輕輕顛倒混勻數(shù)次，以防止血液凝固。當(dāng)前第17頁\共有43頁\編于星期五\3點一、血液及骨髓培養(yǎng)4.采血時間、血培養(yǎng)頻率、培養(yǎng)瓶的選擇實際操作中采血的原則是盡量在使用抗菌藥物之前采集。一般的病人不同部位采集2套。一般2周內(nèi)沒有用過抗菌藥物的門診或住院病人用普通瓶，2周內(nèi)用過抗菌藥物的門診或住院病人用抗生素中和瓶。需要特別注意的是抽好血后要注明抽血的時間。當(dāng)前第18頁\共有43頁\編于星期五\3點一、血液及骨髓培養(yǎng)采血后該立即常溫送檢，如不能及時送檢請常溫下保存不超過24h，切勿冷藏。當(dāng)前第19頁\共有43頁\編于星期五\3點二、各種閉鎖性的無菌體液培養(yǎng)閉鎖性的穿刺液包括腦脊液、胸水、腹水、心包液、膽汁、關(guān)節(jié)液及鞘膜液等。一般可以按血培養(yǎng)操作。需要特別注意的是：血培養(yǎng)瓶中的抗凝物質(zhì)SPS（聚茴香腦磺酸鈉）可能抑制個別細(xì)菌的生長，如腦膜炎、淋病奈瑟菌。當(dāng)前第20頁\共有43頁\編于星期五\3點三、尿液培養(yǎng)原則：標(biāo)本采集應(yīng)力爭在未使用抗生素之

前，注意避免消毒劑污染標(biāo)本。

當(dāng)前第21頁\共有43頁\編于星期五\3點三、尿液培養(yǎng)1.清潔中段尿：

最好留取早晨清潔中段尿標(biāo)本，囑咐患者睡前少飲水，清晨起床后用肥皂水清洗會陰部，女性應(yīng)用手分開大陰唇，男性應(yīng)翻上包皮，仔細(xì)清洗，再用清沖洗尿道口周圍；開始排尿，將前段尿排去，中段尿約10～20ml直接排入專用的無菌容器中，立即送檢，2h內(nèi)接種。該方法簡單易行，是最常用的尿培養(yǎng)標(biāo)本收集方法，但很容易受到會陰部細(xì)菌污染，應(yīng)由醫(yī)務(wù)人員采集或在醫(yī)務(wù)人員指導(dǎo)下由患者正確留取。當(dāng)前第22頁\共有43頁\編于星期五\3點三、尿液培養(yǎng)2.恥骨上膀胱穿刺：

使用無菌注射器直接從恥骨上經(jīng)皮膚消毒穿入膀胱吸取尿液，是評估膀胱內(nèi)細(xì)菌感染的“金標(biāo)準(zhǔn)”方法，但有一定的痛苦，患者難以接受。主要用于厭氧菌培養(yǎng)或留取標(biāo)本困難的嬰兒尿標(biāo)本的采集。當(dāng)前第23頁\共有43頁\編于星期五\3點三、尿液培養(yǎng)3.直接導(dǎo)尿：

按常規(guī)方法對會陰部進(jìn)行消毒后，用導(dǎo)尿管直接經(jīng)尿道插入膀胱，獲取膀胱尿液，可減少尿液標(biāo)本污染，準(zhǔn)確地反映膀胱感染情況。但有可能將下尿道細(xì)菌引入膀胱，導(dǎo)致繼發(fā)感染，一般不提倡使用。當(dāng)前第24頁\共有43頁\編于星期五\3點三、尿液培養(yǎng)4.留置導(dǎo)尿管收集尿液：

利用留置導(dǎo)尿管采集標(biāo)本時，應(yīng)先消毒導(dǎo)尿管外部，按無菌操作方法用注射器穿刺導(dǎo)尿管吸取尿液，操作時應(yīng)防止混入消毒劑，注意不能從尿液收集袋中采集尿液。長期留置導(dǎo)尿管者，應(yīng)在更換新導(dǎo)尿管24h內(nèi)留取。當(dāng)前第25頁\共有43頁\編于星期五\3點三、尿液培養(yǎng)采集容器1.應(yīng)由不與尿液成份發(fā)生反應(yīng)的惰性材料制成；2.潔凈、無菌、加蓋、密封、防滲漏；不含防腐劑和抑菌劑；3.廣口、具有較寬的底部、容積應(yīng)大于50ml、盒蓋易于開啟。當(dāng)前第26頁\共有43頁\編于星期五\3點三、尿液培養(yǎng)標(biāo)本運送

標(biāo)本采集后應(yīng)及時送檢、及時接種，室溫下保存時間不得超過2h（夏季保存時間應(yīng)適當(dāng)縮短或冷藏保存），4°C冷藏保存時間不得超過8h，但應(yīng)注意冷藏保存的標(biāo)本不能用于淋病奈瑟菌培養(yǎng)。當(dāng)前第27頁\共有43頁\編于星期五\3點四、糞便培養(yǎng)

腹瀉、大便每日≥3次，性狀異常，可為稀便、水樣便、粘液便、膿血便伴有惡心、嘔吐、發(fā)熱、腹痛等全身不適癥；糞便涂片WBC≥5個/HP。來自疫區(qū)的患者等。當(dāng)前第28頁\共有43頁\編于星期五\3點四、糞便培養(yǎng)用藥前自然排便后挑取有膿血或黏液部位的糞便2~3g,液狀糞便取絮狀物1~2ml盛于無菌容器內(nèi)送檢（不超過2小時）。如不能及時送檢，應(yīng)按1:10比例與PH7.0磷酸鹽甘油緩沖液混合保存。當(dāng)前第29頁\共有43頁\編于星期五\3點四、糞便培養(yǎng)對于排便困難或嬰幼兒可用直腸拭子采集法（Cary-Blair運送培養(yǎng)基）送檢（4℃冰箱保存不超過24小時）。需要強(qiáng)調(diào)的是糞便培養(yǎng)要在抗生素使用之前或抗生素使用3天內(nèi)采集。當(dāng)前第30頁\共有43頁\編于星期五\3點五、呼吸道標(biāo)本培養(yǎng)一、上呼吸道標(biāo)本采集培養(yǎng)上呼吸道標(biāo)本包括鼻、鼻咽、口咽拭子標(biāo)本。在用抗生素之前（最好是晨起）患者用清水漱口后，選無菌、不含抑制劑的預(yù)先用生理鹽水或營養(yǎng)肉湯蘸濕的拭子直接在感染部位擦拭取樣（有假膜或膿液存在的最好從膜底下擦拭）。采集后立即送檢，≤2h。轉(zhuǎn)運拭子不超過24h。當(dāng)前第31頁\共有43頁\編于星期五\3點五、呼吸道標(biāo)本培養(yǎng)二、下呼吸道標(biāo)本采集培養(yǎng)1.痰2.氣管吸出物3.氣管鏡標(biāo)本當(dāng)前第32頁\共有43頁\編于星期五\3點五、呼吸道標(biāo)本培養(yǎng)（一）自然咳痰：1.以晨痰為好，咳痰前，患者用無菌生理鹽水或涼開水漱口；2.指導(dǎo)患者用力咳出深部痰，勿留取唾液和鼻咽腔分泌物。3.對于自然咳痰有困難的患者，可用霧化吸入45℃的100g/LNaCl水溶液誘痰或無菌吸痰管抽取氣管深部分泌物。當(dāng)前第33頁\共有43頁\編于星期五\3點五、呼吸道標(biāo)本培養(yǎng)用無菌防漏容器收集標(biāo)本，貼好標(biāo)本信息（條碼）后，在1h～2h內(nèi)（室溫）送至微生物實驗室。注1：若送檢標(biāo)本超過2h，將導(dǎo)致有臨床意義的致病菌數(shù)量減少，非苛養(yǎng)的口咽部定植菌過度生長。為防止口咽部正常菌群的過度生長，可將標(biāo)本放置2℃～8℃環(huán)境，但培養(yǎng)分離到肺炎鏈球菌等苛養(yǎng)菌的機(jī)會和數(shù)量會減少。注2：若標(biāo)本延遲送檢超過2h后未冷藏（超過2h～24h，2℃～8℃），應(yīng)在報告中說明因延誤送檢標(biāo)本，可能對培養(yǎng)結(jié)果造成的影響。當(dāng)前第34頁\共有43頁\編于星期五\3點六、尿道、生殖道標(biāo)本培養(yǎng)一、尿道標(biāo)本：患者排尿1h以后采集。先用無菌生理鹽水或潔凈清水局部清洗，采取從尿道口溢出的膿性分泌物。無膿性分泌物溢出者，男性通過按摩，女性從陰道內(nèi)壓迫尿道或向前按摩使分泌物溢出采集標(biāo)本?；蛘邿o菌拭子尿道內(nèi)2~4cm旋轉(zhuǎn)停留20s后取出分泌物送檢。當(dāng)前第35頁\共有43頁\編于星期五\3點六、尿道、生殖道標(biāo)本培養(yǎng)二、生殖道潰瘍標(biāo)本無菌生理鹽水和手術(shù)刀清除潰瘍面露出潰瘍基底，滲出物集聚較明顯時用拭子或吸管采集。當(dāng)前第36頁\共有43頁\編于星期五\3點六、尿道、生殖道標(biāo)本培養(yǎng)三、宮頸、陰道、子宮內(nèi)膜、輸卵管、羊水、組織標(biāo)本。四、前列腺、精液標(biāo)本。需要注意B群鏈球菌篩查的陰道口和/或直腸拭子標(biāo)本。當(dāng)前第37頁\共有43頁\編于星期五\3點七、開放性膿液及創(chuàng)傷分泌物培養(yǎng)在使用抗生素之前1.先用生理鹽水沖洗2.揭去表面的結(jié)痂或表皮，有膿液的去除表

面的膿液。3.用沾濕生理鹽水的無菌微生物拭子旋轉(zhuǎn)的去傷口底部肉芽組織處的膿液或分泌物于30分鐘內(nèi)送檢。最長不能超過2小時。當(dāng)前第38頁\共有43頁\編于星期五\3點總結(jié)微生物標(biāo)本的采集：1、盡量在使用抗生素之前采集標(biāo)本