生物工程的一般技術(shù)

生物工程的一般技術(shù)第一頁，共二十七頁，編輯于2023年，星期日細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境動植物細(xì)胞的培養(yǎng)是在人工環(huán)境下進(jìn)行的。這種人工環(huán)境除了要能滿足培養(yǎng)的生物有機(jī)體正常生長和分裂所需營養(yǎng)物質(zhì)以外，還要保證清潔，沒有其他微生物的污染和有害因素的影響，換句話說，細(xì)胞培養(yǎng)過程是在無菌條件下進(jìn)行的。第二頁，共二十七頁，編輯于2023年，星期日細(xì)胞培養(yǎng)中常見的污染物及危害一、細(xì)菌a革蘭氏陽性菌：常見有枯草芽孢桿菌等；大多數(shù)化膿性球菌都屬于革蘭氏陽性菌，它們能產(chǎn)生外毒素使人致病，常見的革蘭氏陽性菌有：葡萄球菌、鏈球菌、肺炎雙球菌、炭疽桿菌、白喉?xiàng)U菌、破傷風(fēng)桿菌等?？梢赃x擇青霉素族，頭孢曲松鈉等。第三頁，共二十七頁，編輯于2023年，星期日

b革蘭氏陰性菌：大腸桿菌、假單胞菌等。

大多數(shù)腸道菌多屬于革蘭氏陰性菌，它們產(chǎn)生內(nèi)毒素，靠內(nèi)毒素使人致病.常見的革蘭氏陰性菌有痢疾桿菌、傷寒桿菌、大腸桿菌、變形桿菌、綠膿桿菌、百日咳桿菌、霍亂弧菌及腦膜炎雙球菌等。革蘭氏陰性菌則對青霉素不敏感,可以選擇氟喹諾酮類藥物如諾氟沙星，左氧氟沙星等，也可以選擇大環(huán)內(nèi)酯類比如克拉霉素、羅紅霉素等。第四頁，共二十七頁，編輯于2023年，星期日革蘭氏染色法用結(jié)晶紫液加碘液染色，再用95%酒精脫色，然后用稀復(fù)紅液染色。經(jīng)過這樣的處理，有的細(xì)菌被染成紫色，是革蘭氏陽性菌，有的被染成紅色，是革蘭氏陰性菌。第五頁，共二十七頁，編輯于2023年，星期日

受到細(xì)菌污染后，培養(yǎng)液會變渾濁，ph會發(fā)生變化，細(xì)胞的正常生命活動受到影響，發(fā)生生理病變，最終死亡。第六頁，共二十七頁，編輯于2023年，星期日二、真菌真菌，是一種真核生物。生活中最常見的真菌是各類蕈類，另外真菌也包括霉菌和酵母。第七頁，共二十七頁，編輯于2023年，星期日受真菌污染的危害收到真菌污染后，培養(yǎng)液一般不渾濁，但在培養(yǎng)液中可見白色或黃色的小點(diǎn)或小球，在顯微鏡下觀察這些點(diǎn)，可見絲狀、管狀或樹枝狀的菌絲密集交錯而成。培養(yǎng)液中的真菌會利用培養(yǎng)基中的養(yǎng)分迅速成長，因而使培養(yǎng)細(xì)胞的生長變慢，最終因缺乏營養(yǎng)與毒害作用而死亡。第八頁，共二十七頁，編輯于2023年，星期日三、其他污染因素支原體病毒非同種細(xì)胞第九頁，共二十七頁，編輯于2023年，星期日因此控制污染是細(xì)胞培養(yǎng)的關(guān)鍵！第十頁，共二十七頁，編輯于2023年，星期日第一節(jié)細(xì)胞培養(yǎng)無菌操作與常用設(shè)備定義：用于培養(yǎng)系統(tǒng)的無菌狀態(tài)和防止微生物進(jìn)入無菌范圍的一系列操作技術(shù)一、細(xì)胞培養(yǎng)無菌操作要點(diǎn)簡介：1、進(jìn)行無菌操作前，必須帶好帽子、口罩，用洗滌劑洗凈雙手并擦干。2、進(jìn)行無菌操作時首先將雙手和手臂用70%酒精消毒。第十一頁，共二十七頁，編輯于2023年，星期日3、操作動作要輕。無菌鑷子夾取物品?；鹧嬷車蜷_蓋子，并在火焰周圍消毒。4、操作時不要說話，打噴嚏等；5、每次操作時要注意注意酒精燈火焰上灼燒接種針、手術(shù)刀等。注意移液器的吸頭是一次性的，每次必須更換。不小心接觸手或其他物品時，應(yīng)丟棄。第十二頁，共二十七頁，編輯于2023年，星期日第十三頁，共二十七頁，編輯于2023年，星期日第十四頁，共二十七頁，編輯于2023年，星期日6、每次操作結(jié)束時都要將接種針等在火焰上灼燒。清潔操作臺并用消毒水泡紗布擦凈臺面。7、細(xì)胞培養(yǎng)所用物品必須清洗、消毒徹底，溶液必須高壓滅菌或過濾除菌。吳俊物品必須保存在無菌包內(nèi)或滅菌容器中，不可暴露在空氣中。無菌與有菌分開放置。無菌包一旦打開即不能視為絕對無菌，盡早使用。凡已經(jīng)取出的無菌物品雖未使用也不可在放回?zé)o菌容器內(nèi)。第十五頁，共二十七頁，編輯于2023年，星期日8、無菌包應(yīng)按消毒日期順序放置在固定的柜櫥內(nèi)，并保持清潔干燥，與非滅菌包分開放置，并檢查無菌包或容器是否過期。9、無菌鹽水及酒精、新潔爾滅棉球罐每周消毒一次，容器內(nèi)敷料如干棉球、紗布塊等，不可裝的過滿，以免取用時碰到容器外面被污染。10、保持無菌操作室的潔凈干燥、空氣清新。定期對操作室及剩余的無菌器皿進(jìn)行消毒。第十六頁，共二十七頁，編輯于2023年，星期日二、細(xì)胞培養(yǎng)常用器材及滅菌方法1、玻璃器材。首次使用的玻璃器材：自來水---1%稀鹽酸浸泡過夜---自來水。重復(fù)使用的玻璃器材：軟刷子和中性洗滌劑刷洗---放入洗液（K2Cr2O7和濃H2SO4配成）12-24小時，----自來水沖洗10次以上---單蒸水3次------雙蒸水1次，晾干----包裝----121度高壓蒸汽滅菌20min第十七頁，共二十七頁，編輯于2023年，星期日2、塑料器材培養(yǎng)皿吸頭多孔培養(yǎng)板等初次可直接使用重復(fù)使用的塑料器材自來水，晾干-------3%Hcl或者2%Naoh浸泡過夜--------自來水----雙蒸水3次----晾干---紫外燈照射。第十八頁，共二十七頁，編輯于2023年，星期日3、橡膠器材塞子、蓋子1新橡膠器材自來水-----5%NaOH煮沸15min---自來水8次----4%hcl煮沸15min—自來水8次----單蒸水3次---雙蒸水1次。2舊橡膠制品自來水-----洗衣粉煮沸10min---自來水洗攪—蒸餾水煮沸2次每次15min---單蒸水2次----雙蒸水1次。3包好或至于鋁盒內(nèi)高壓蒸汽滅菌20min第十九頁，共二十七頁，編輯于2023年，星期日4金屬器材鑷子、剪刀針頭新金屬器材

紙擦油---洗衣粉煮沸（或1%碳酸氫鈉）煮沸15min，----95%酒精紗布擦干---包裝或者鋁盒----高壓蒸汽滅菌20min舊金屬器材酒精---包于鋁盒內(nèi)---高壓蒸汽滅菌20min第二十頁，共二十七頁，編輯于2023年，星期日5、其他用品注射器自來水?dāng)?shù)次---單蒸水2、3次----95%酒精沖洗3次---包裝后高壓蒸汽滅菌20min紗布自來水-----單蒸水----單蒸水煮沸2次，每次15min，鑷子翻動----單蒸水洗2次---晾干后整成八層包裝---高壓滅菌20min培養(yǎng)基等液體的滅菌一般的高壓蒸汽滅菌

血清56度水浴滅活30min

敏感成分如iaa細(xì)菌過濾器除菌第二十一頁，共二十七頁，編輯于2023年，星期日細(xì)胞培養(yǎng)及無菌操作需要的設(shè)備無菌操作室更衣間-------緩沖間--------操作間第二十二頁，共二十七頁，編