微生物學實驗普通光學顯微鏡的使用及細菌形態(tài)的觀察

實驗一

普通光學顯微鏡的使用及細菌形態(tài)的觀察主講:文晴生命科學學院當前第1頁\共有18頁\編于星期四\17點實驗課要求作圖要求：實驗報告要求用藍色或黑色鋼筆、圓珠筆或簽字筆撰寫，要求用鉛筆作圖（包括視野、觀察結(jié)果、放大倍數(shù)等；值日要求：每四人一組，包括物品歸位、黑板、地面、臺面等，值日結(jié)束后經(jīng)老師同意方可離開。6/2/2023當前第2頁\共有18頁\編于星期四\17點一、實驗目的了解顯微鏡的構(gòu)造和各部分的作用，掌握顯微鏡的使用方法學習并掌握油鏡的原理和使用方法了解并觀察細菌的三種基本形態(tài)當前第3頁\共有18頁\編于星期四\17點目鏡鏡筒轉(zhuǎn)換器物鏡通光孔聚光器壓片夾反光鏡鏡座粗準焦螺旋細準焦螺旋鏡臂鏡柱載物臺機械部分和光學部分普通光學顯微鏡的構(gòu)造可分為兩部分：一、普通光學顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)當前第4頁\共有18頁\編于星期四\17點二、實驗原理：顯微鏡的工作原理◆物鏡上的標識

顯微鏡的總放大倍數(shù)=物鏡放大倍數(shù)X目鏡放大倍數(shù)當前第5頁\共有18頁\編于星期四\17點油鏡的放大倍數(shù)可達100×，放大倍數(shù)這樣大的鏡頭，焦距很短，直徑很小，但所需要的光照強度卻最大。由低倍鏡轉(zhuǎn)為高倍鏡時，通過增加照明強度和開大虹彩光圈，以增大高倍鏡及油鏡下視野的亮度。當前第6頁\共有18頁\編于星期四\17點

從標本玻片透過來的光線，因介質(zhì)密度不同（從玻片進入空氣，再進入鏡頭），有些光線會因折射或全反射，不能進入鏡頭，致使在使用油鏡時會因射入的光線較少，物像顯現(xiàn)不清。為了不使通過的光線有所損失，在使用油鏡時需在油鏡和玻片之間加入與玻璃的折射率相仿的鏡油（通常使用香柏油，其折射率n=1.52）。增加了視野的進光量，從而使物象更加清晰。當前第7頁\共有18頁\編于星期四\17點顯微鏡的分辨率或分辨力（resolutionorresolvingpower）是指顯微鏡能辨別兩點之間最小距離的能力。從物理學角度看，光學顯微鏡的分辨率受光的干涉現(xiàn)象及所用物鏡性能的限制，可表示為：式中：D=顯微鏡分辨兩點間的最短距離λ=光波波長（平均0.55m)

NA=物鏡的數(shù)值孔徑值?！麸@微鏡的性能當前第8頁\共有18頁\編于星期四\17點

數(shù)值孔徑則取決于物鏡的鏡口角和玻片與鏡頭間介質(zhì)的折射率，可表示為：NA=n·sin(α/2）

n:物鏡和被檢標本間介質(zhì)的折射率：鏡口角。物質(zhì)折射率物質(zhì)折射率空氣1亞麻油1.47水1.33石蠟油1.487甘油1.487香柏油1.515玻璃1.52丁香油1.535冬青油1.536濃松節(jié)油1.542以香柏油為介質(zhì)的油鏡所能達到的數(shù)值孔徑（NA一般在1.2～1.4）要高于低倍鏡、高倍鏡等物鏡（NA都低于1.0）。數(shù)值孔徑通常在0.65左右的高倍鏡只能分辨距離不小于0.4μm的物體，而油鏡的分辨率卻可達到0.2μm左右。當前第9頁\共有18頁\編于星期四\17點三、實驗器材1、標本片：四聯(lián)球菌、枯草芽孢桿菌2、試劑：香柏油、二甲苯3、儀器及其它用具：顯微鏡、擦鏡紙等當前第10頁\共有18頁\編于星期四\17點四、實驗步驟

1、顯微觀察步驟

1）低倍鏡觀察（10×）：

2）高倍鏡觀察（40×）：

3）油鏡觀察（100×）：2、顯微鏡用畢后的處理當前第11頁\共有18頁\編于星期四\17點低倍鏡的操作右手握住鏡臂，左手拖住鏡座，將顯微鏡放在自己身體的前方，離實驗臺邊緣10cm左右處；接通電源，打開顯微鏡電源開關(guān)；3.旋動轉(zhuǎn)換器，將低倍鏡移到鏡筒正下方；4.調(diào)節(jié)光源強度，同時用眼對準目鏡，仔細觀察，視野亮度均勻；5.將標本放在載物臺上，旋轉(zhuǎn)推動器，使觀察的目的物置于圓孔的正中央；6.轉(zhuǎn)動粗準焦螺旋，上升載物臺至距離物鏡約0.5cm（注意：眼睛注視物鏡，以防物鏡和載玻片相碰）；7.左眼觀察目鏡，調(diào)節(jié)粗、細準焦螺旋直至目的物清晰為止。當前第12頁\共有18頁\編于星期四\17點高倍鏡的操作轉(zhuǎn)換物鏡。旋動轉(zhuǎn)換器將低倍鏡換成高倍鏡（注意：在轉(zhuǎn)換物鏡時要從側(cè)面觀察，以防鏡頭與標本片相撞，如果高倍鏡觸及標本片，應(yīng)立即停止旋轉(zhuǎn)，并重新用低倍鏡調(diào)焦）；調(diào)焦。調(diào)節(jié)光圈，使光線亮度合適，再調(diào)節(jié)細準焦螺旋直至目的物清晰；觀察。移動推動器，找到合適的目的物，并移至視野的中心進行觀察。（如果用高倍鏡未能看清目的物，則可換用油鏡觀察）當前第13頁\共有18頁\編于星期四\17點油鏡的操作1.轉(zhuǎn)換油鏡。調(diào)節(jié)粗準焦螺旋，下降載物臺約2cm，轉(zhuǎn)換油鏡鏡頭；2.加香柏油。在標本片的鏡檢部位滴一滴香柏油；從側(cè)面注視，用粗準焦螺旋緩慢上升載物臺，使油鏡頭浸沒在油中，剛好貼近載玻片；3.調(diào)焦。上升聚光器，將虹彩光圈開大，使光線充分照明；緩慢調(diào)節(jié)細準焦螺旋，直至物像清晰。4.觀察。多觀察幾個視野，選取菌體分布均勻的視野進行菌體形態(tài)和排列方式觀察。當前第14頁\共有18頁\編于星期四\17點2、顯微鏡用畢后的處理將光強調(diào)節(jié)至最弱關(guān)閉電源開關(guān)拔掉電源插頭下降載物臺

取干凈擦鏡紙拭去鏡頭上的香柏油

取干凈擦鏡紙蘸少許二甲苯擦去鏡頭上的殘留油跡

取干凈擦鏡紙擦去殘留的二甲苯

將顯微鏡的各部位還原，物鏡轉(zhuǎn)成“八”字形，擦干凈鏡體，罩上防塵罩。當前第15頁\共有18頁\編于星期四\17點五、實驗數(shù)據(jù)及處理結(jié)果

繪出你在油鏡下觀察到的兩種細菌的形態(tài)及其不同細菌細胞的排列方式。四聯(lián)球菌（10×100）

桿菌120（10×100）當前第16頁\共有18頁\編于星期四\17點六、思考與討論

用油鏡觀察時應(yīng)注意哪些問題？在載玻片和鏡頭之間加滴什么油？