臨床醫(yī)學(xué)細(xì)菌培養(yǎng)-課件

國(guó)家醫(yī)療衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)與

細(xì)菌培養(yǎng)采樣方法第一部分

國(guó)家醫(yī)療衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)無菌技術(shù)操作的重要性無菌技術(shù)操作是每個(gè)醫(yī)務(wù)工作者憑良心做事的準(zhǔn)則，無菌技術(shù)的管理，在醫(yī)療護(hù)理技術(shù)操作中,對(duì)于預(yù)防感染或交叉感染,提高疾病治愈率，起著重要的作用。無菌技術(shù)管理質(zhì)量的優(yōu)劣，直接影響著醫(yī)療質(zhì)量的高低，這是保障病人順利康復(fù)的一個(gè)較為重要的環(huán)節(jié)。因而，醫(yī)務(wù)工作者必須注重加強(qiáng)細(xì)菌形態(tài)學(xué)和細(xì)菌生理學(xué)知識(shí)的學(xué)習(xí)，增強(qiáng)無菌觀念；在工作中嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作原則和規(guī)程，并對(duì)外來人員（包括進(jìn)修、實(shí)習(xí)生、參觀訪問者）進(jìn)行無菌要求的指導(dǎo)和監(jiān)督，防止菌塵增落，減少被污染的機(jī)會(huì)。同時(shí)，要以對(duì)工作、對(duì)病人負(fù)責(zé)的精神，一絲不茍、不怕麻煩地做好清潔、消毒、滅菌等一系列瑣碎工作，每月進(jìn)行空氣及各種消毒物品的細(xì)菌培養(yǎng)，以確定菌落數(shù)量，鑒別細(xì)菌種類；確定病源，協(xié)助臨床診斷傳染??；有效控制室內(nèi)細(xì)菌繁殖、感染，達(dá)到以下衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。表1各類環(huán)境空氣物體表面醫(yī)護(hù)人員手細(xì)菌菌落總數(shù)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)表1各類環(huán)境空氣、物體表面、醫(yī)護(hù)人員手細(xì)菌菌落總數(shù)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)

1.2各類環(huán)境空氣、物體表面、醫(yī)護(hù)人員手不得檢出致病性微生物不得檢出乙型溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌及其他致病性微生物。在可疑污染情況下進(jìn)行相應(yīng)指標(biāo)的檢測(cè)。母嬰同室、早產(chǎn)兒室、嬰兒室、新生兒及兒科病房的物體表面和醫(yī)護(hù)人員手上，不得檢出沙門氏菌。

國(guó)家醫(yī)療用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)

2.1進(jìn)入人體無菌組織、器官或接觸破損皮膚、粘膜的醫(yī)療用品必須無菌。

2.2接觸粘膜的醫(yī)療用品細(xì)菌菌落總數(shù)應(yīng)≤20cfu/g或100cm2:：致病性微生物不得檢出。

使用中消毒劑與無菌器械保存液衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)

3.1使用中消毒劑細(xì)菌菌落總數(shù)應(yīng)≤100cfu/ml，致病性微生物不得檢出。

3.2、無菌器械保存液必須無菌4、污物處理衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)污染物品無論是回收再使用的物品，或是廢棄的物品，必須進(jìn)行無害化處理。不得檢出致病性微生物。在可疑污染情況下，進(jìn)行相應(yīng)指標(biāo)的檢測(cè)。

第二部分

采樣方法

采樣及檢查原則

1.1操作者必須服裝整齊，戴好口罩、帽子，剪短指甲；洗凈雙手；操作時(shí)做到三輕，即走路輕、開門輕、放置或取器皿動(dòng)作輕。

1.2采樣前，先將培養(yǎng)器皿分別用紅筆標(biāo)明取樣標(biāo)本序號(hào)。

采樣后必須盡快對(duì)樣品進(jìn)行相應(yīng)指標(biāo)的檢測(cè)，送檢時(shí)間不得超過6h。若樣品保存0—4℃條件時(shí)，送檢時(shí)間不得超過24h?？諝獠蓸臃椒?.1采樣時(shí)間選擇消毒處理后與進(jìn)行醫(yī)療活動(dòng)之前期間采樣。2.2采樣高度與地面垂直高度80—150cm。2.3布點(diǎn)方法室內(nèi)面積≤30m2，設(shè)一條對(duì)角線上取3點(diǎn)，既中心一點(diǎn)、兩端各距墻1m處各取一點(diǎn)：室內(nèi)面積＞30m2，設(shè)東、西、南、北、中5點(diǎn)，其中東、西、南、北點(diǎn)均距墻1m。2.4采樣方法用9cm直徑普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板在采樣點(diǎn)暴露5min后送檢培養(yǎng)。空氣采樣方法2.5操作時(shí)，前臂不能越過已打開的培養(yǎng)皿；放培養(yǎng)器皿時(shí)，要從內(nèi)往外放，取時(shí)要從外往內(nèi)，動(dòng)作不能粗重，以免影響培養(yǎng)效果。2.6按照平開平放法或平開扣放法放置5分鐘，即送檢驗(yàn)室化驗(yàn)結(jié)果。物體表面采樣方法

3.1采樣時(shí)間選擇消毒處理后4h內(nèi)進(jìn)行采樣。

3.2采樣面積被采表面＜100cm2，取全部表面：被采表面≥100cm2，取100cm2

3.3采樣方法用5×5cm2的標(biāo)準(zhǔn)滅菌規(guī)格板，放在被檢物體表面，用浸有無菌生理鹽水采樣液的棉拭紙1支，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返各涂抹5次，并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)棉拭紙，連續(xù)采樣1—4個(gè)規(guī)格板面積，用無菌剪剪去手接觸部分，將棉拭紙放入裝10ml采樣液的試管中送檢。門把手等小型物體則采用棉拭紙直接涂抹物體的方法采樣。放入物品前后，瓶口必須按常規(guī)在酒精燈上烘烤，然后蓋好蓋塞送細(xì)菌培養(yǎng)。

實(shí)物采樣（液體培養(yǎng)試管)

進(jìn)行實(shí)物培養(yǎng)的目的，主要是確定使用中實(shí)物是否有細(xì)菌污染。培養(yǎng)實(shí)物有：器械、針線、膠片、硬外導(dǎo)管、手套、敷料、凡士林紗等。1、進(jìn)行實(shí)物采樣時(shí)，從細(xì)菌室取來的液體培養(yǎng)試管不能倒立，以免受污染。同時(shí)，標(biāo)明培養(yǎng)物品。2、無菌持物鉗（鑷子）和培養(yǎng)的物品，應(yīng)同時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)，以便確定細(xì)菌來源是持物鉗或是物品。3、由兩人操作，在無菌操作下，一人打開無菌試管，將瓶口和瓶蓋在酒精燈上烘烤片刻；另一人用無菌持物鉗夾持準(zhǔn)備培養(yǎng)的無菌物品。如是化學(xué)浸泡物品，必須注意避免液體滴入試管內(nèi)；將物品放入試管中，應(yīng)注意不能碰及試管口，以免影響培養(yǎng)效果。4、放入物品后，瓶口必須按常規(guī)在酒精燈上烘烤，然后蓋好塞蓋送細(xì)菌培養(yǎng)。5、或用培養(yǎng)試管采樣液的棉拭紙進(jìn)行采樣，方法同上。創(chuàng)傷傷口、手術(shù)傷口分泌物細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本采樣1、同前采樣及檢查原則2、標(biāo)本采集：采取標(biāo)本時(shí)，先用無菌生理鹽水清洗病灶表面的污染雜菌，然后用無菌拭子提取病灶分泌物送檢。3、細(xì)菌培養(yǎng)及病原分離鑒定：標(biāo)本無菌采集后立即送檢，按實(shí)物采樣方法采樣。4、標(biāo)本處理完畢，送細(xì)菌室作細(xì)菌培養(yǎng)和鑒定。

醫(yī)護(hù)人員手采樣方法（試管法）醫(yī)務(wù)人員手采樣目的：是為了檢測(cè)醫(yī)務(wù)人員的責(zé)任感，防止將帶有細(xì)菌的手污染無菌傷口。1、按無菌操作要求，進(jìn)行手細(xì)菌采樣。2、選定抽查對(duì)象，（手術(shù)室參加手術(shù)者事先不能通知被抽查對(duì)象）。

4.1采樣時(shí)間在接觸病人、從事醫(yī)療活動(dòng)前進(jìn)行采樣。

4.2采樣面積及方法被檢人五指并攏，將浸有無菌生理鹽水采樣液的棉拭紙一支在雙手指曲面從指根到指端來回涂擦各兩次（一只手涂擦面30cm2）并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)采樣棉拭紙，用無菌剪剪去手接觸部位，將棉拭紙放入裝有10ml采樣液的試管內(nèi)送檢。采樣面積按平方厘米計(jì)算。

醫(yī)護(hù)人員手采樣方法

(營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板采樣法）

進(jìn)行手劃痕采樣按常規(guī)洗手后，待消毒液稍干，即由其用食指在培養(yǎng)基上劃“十”字痕。操作完畢，即送細(xì)菌室培養(yǎng)。如有細(xì)菌生長(zhǎng)，應(yīng)告知被抽查者，并追蹤污染源。

醫(yī)療用品采樣方法

5.1采樣時(shí)間在消毒或滅菌處理后，存放有效期內(nèi)采樣。

5.2采樣量及采樣方法可用破壞性方法取樣的醫(yī)療用品，如輸液（血）器、注射器和注射針等均參照《中華人民共和國(guó)藥典》1990年版一部附錄中《無菌檢查法》規(guī)定執(zhí)行。對(duì)不能用破壞性方法取樣的特殊醫(yī)療用品，可用浸有無菌生理鹽水采樣液的棉拭子在被檢物體表面涂抹采樣，被采表面＜100cm2，取全部表面；被采表面≥100cm2，取100cm2。使用中消毒劑與無菌器械保存液

6.1采樣時(shí)間

采取更換或使用中的消毒劑與無菌器械保存液。

使用中消毒劑與無菌器械保存液

6.2采樣量及方法

在無菌條件下，用無菌吸管吸取1ml被檢樣液，加入9ml稀釋液中混均，對(duì)于醇類與酚類消毒劑，稀釋液用普通營(yíng)養(yǎng)肉湯即可；對(duì)于含氯消毒劑、含碘